技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种豆芋叶乙醇提取物的减肥用途。
背景技术
豆芋(ApiosamericanaMedikus)原产于北美洲东部的加拿大至美国佛罗里达州的南部地区，属多年生豆科植物(蝶形花科亚科)。其可食用部分为地下块茎，且其蛋白质含量高于其他植物块茎，是一种既营养又有经济价值的作物，因而常被印第安人作为主食。豆芋自2009年国内引种成功，并被逐渐在富阳、金华、龙游、温州等地推广种植。研究表明豆芋不同部位(花、藤、叶、块茎)均含有丰富的游离氨基酸、可溶性蛋白、多糖、皂苷、黄酮、异黄酮、维生素C、维生素E和矿物质等成分。其中，豆芋叶的维生素E含量最高，同时还含有较高含量多糖、总皂苷和异黄酮，具有极大的开发潜力。
随着现代社会经济的高速发展，人民的生活水平显著提高，肥胖成为全球普遍流行的健康问题。据世界卫生组织在2011年3月报道表明，2008年全球有超过15亿成年人处于超重水平，其中至少5亿是肥胖。预计到2030年，美国42％的人口将存在肥胖问题。将超出美国现在人口3000万。与此相关的医疗成本增加将达近5500亿美元。而在国内据2010年发表的研究报告称，中国目前肥胖人口达3.25亿人，增幅超过美国、英国和澳大利亚。7岁以下儿童中有近五分之一超重，7％是肥胖儿童，比例远超欧洲国家。这个数字在未来20年还可能增加一倍。脂质代谢紊乱的常见并发症有脂肪肝、高血压、糖尿病、冠心病、脑卒中等。由此可见，脂质代谢紊乱已成为全球普遍的健康问题，预防和治疗脂质代谢紊乱已经成为21世纪的重要健康问题,如何预防与治疗脂质代谢紊乱及其相关并发症的发生已引起全世界学者的关注。因此，目前很多营养与保健食品的研究人员都非常关注有关肥胖和慢性疾病发生及预防的研究与话题，但对于豆芋叶乙醇提取物的减肥活性鲜有报道。
发明内容
本发明目的在于提供一种豆芋叶乙醇提取物的减肥用途，为医学、食品科学等领域开发天然减肥产品提供新资源。
为解决上述技术问题，本发明提供一种豆芋叶乙醇提取物的减肥用途：
用于制备减肥食品或药物；
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的改进：
所述减肥食品或药物为降低高脂饮食导致肥胖的体重的食品或药物。
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的进一步改进：
所述减肥食品或药物为降低脂肪组织重量的食品或药物。
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的进一步改进：
所述减肥食品或药物为降低血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量的食品或药物。
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的进一步改进：
所述减肥食品或药物为降低肝脏中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量的食品或药物。
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的进一步改进：
所述减肥食品或药物为降低血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量的食品或药物。
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的进一步改进：
所述减肥食品或药物为调节肝脏中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量的食品或药物。
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的进一步改进：
所述豆芋叶乙醇提取物的制备方法包括以下步骤：
①、按照1g:5～10ml(较佳为1g:8ml)的料液比将豆芋叶和含0.1mol/L盐酸的85％乙醇混合后打浆，所得浆液于45±5℃超声(40，000Hz的超声波频率)浸提240±10min后，提取液离心(4000转/min离心30min)，得上清液；
②、将步骤①离心所得的滤渣代替豆芋叶按步骤①重复提取两次，合并三次滤液，旋蒸浓缩直至为原体积的5～10％，得到浓缩液；
③、将步骤②所得的浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化；以体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂，以含有0.05％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂，收集洗脱液；
④、将步骤③所得洗脱液旋转蒸发浓缩成至为原体积的5～10％，得浆状浓缩液；
⑤、将步骤④所得浆状浓缩液在-70～-90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机(真空冷冻干燥机设定的工艺参数为-40℃，1.2Pa)将其干燥(含水率≤0.1％)成粉末状，得到豆芋叶乙醇提取物。
作为本发明豆芋叶乙醇提取物的减肥用途的进一步改进：
所述步骤③的具体步骤为：
首先用两倍柱体积的甲醇活化大孔树脂，三倍柱体积的双蒸水进行平衡；
然后以0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)的流速上样，待提取液被充分吸附后，用体积浓度1％甲酸水溶液作为淋洗剂进行淋洗(淋洗的目的是为了除去蛋白质、糖、酸等物质)，所述淋洗剂的用量为两倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)；最后用含有0.05％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂进行洗脱，所述洗脱剂的用量三倍柱体积，流速为0.4～0.6mL/min(较佳为0.5mL/min)；收集洗脱液。
注：含有0.05％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度90％甲醇水溶液中加入0.05ml的甲酸。上述旋转蒸发设定的工艺参数为温度38℃，真空度-0.09MPa。所采用的大孔树脂为大孔树脂AB-8(天津兴南允能高分子技术有限公司)。
本发明公开了一种豆芋叶乙醇提取物的制备方法及其减肥用途，为医学、食品科学等领域开发天然减肥产品提供新资源。本发明中的豆芋叶乙醇提取物经高脂饮食诱导肥胖小鼠实验评价证明，可以显著降低肥胖小鼠体重，降低血清及肝脏中甘油三酯和总胆固醇含量，作用效果全面且显著。因此，本发明的豆芋叶乙醇提取物应用于制备减肥食品或药品，以治疗和预防肥胖及其相关慢性疾病发生。
本发明的豆芋叶乙醇提取物的用法为口服，用量每次约150～250mg，每日三次。
本发明同现有技术相比，具有以下优点：
1.本发明首次发现豆芋叶乙醇提取物能够缓解高脂饮食诱导肥胖小鼠体重的增加，降低肥胖小鼠血清和肝脏中甘油三酯和总胆固醇含量，表现出显著的减肥降脂效果，具有良好的开发前景。
2.本发明为豆芋叶乙醇提取物提供了新的医疗用途，拓展了一个新的应用领域。
附图说明
图1为本发明中不同浓度豆芋叶乙醇提取物对小鼠体重的影响。
图2为本发明中不同浓度豆芋叶乙醇提取物对小鼠肝脏中谷丙转氨酶(ALT)含量的影响。
图3为本发明中不同浓度豆芋叶乙醇提取物对小鼠肝脏中谷草转氨酶(AST)含量的影响。
图4为本发明中不同浓度豆芋叶乙醇提取物对小鼠肝脏中甘油三酯(TG)含量的影响。
图5为本发明中不同浓度豆芋叶乙醇提取物对小鼠肝脏中总胆固醇(TC)含量的影响。
注：本发明图1～图5，表1～表2中：
LFD代表低脂对照组(饲喂含10％脂肪的低脂饲料)；
HFD代表高脂对照组(饲喂含45％脂肪的高脂饲料)；
HFD+L代表低剂量组(饲喂含45％脂肪的高脂饲料+灌胃100mg/(kg·d)豆芋叶乙醇提取物)；
HFD+H代表高剂量组(饲喂含45％脂肪的高脂饲料+灌胃300mg/(kg·d)豆芋叶乙醇提取物)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1、豆芋叶乙醇提取物的减肥用途，如图1-图5所示，豆芋叶乙醇提取物具有显著的减肥降脂效果。
豆芋叶乙醇提取物具体制备步骤如下：
(1)、按照1g：8ml的料液比将豆芋叶和含0.1mol/L盐酸的85％乙醇混合后，经榨汁机处理打浆。所得浆液在45℃条件下，超声(40，000Hz的超声波频率)浸提240min后，提取液4000转离心30min，提取液离心，得上清液。
(2)、将步骤(1)离心所得的滤渣代替步骤(1)中豆芋叶，重复提取2次，合并三次滤液，将所得的上清液在旋转蒸发仪(旋转蒸发设定的工艺参数为温度38℃，真空度-0.09MPa)进行旋转蒸发浓缩直至为原体积的10％。
(3)、将旋蒸所得浓缩液采用大孔树脂进行分离纯化，所采用的大孔树脂为大孔树脂AB-8(天津兴南允能高分子技术有限公司)，依次进行以下步骤：
然后以0.5mL/min的流速上样，上样量为200ml(为柱体积的10％)；提取液充分吸附后，1％甲酸(即，体积浓度1％甲酸水溶液)淋洗除去蛋白质、糖、酸等物质，该淋洗剂的用量为两倍柱体积，流速为0.5mL/min；最后用含有0.05％甲酸的甲醇水溶液作为洗脱剂充分洗脱，该洗脱剂的用量三倍柱体积，流速为0.5mL/min；收集洗脱液。含有0.05％甲酸的甲醇水溶液的制备方法为：在100ml体积浓度90％甲醇水溶液中加入0.05ml的甲酸；
(4)、将步骤(3)大孔树脂分离纯化所得洗脱液旋转蒸发(旋转蒸发设定的工艺参数为温度38℃，真空度-0.09MPa)直至为原体积的10％，得浆状浓缩液；
(5)、将步骤(4)所得的浆状浓缩液在-80℃预冻6h，然后用真空冷冻干燥机干燥48h(真空冷冻干燥机设定的工艺参数为-40℃，1.2Pa)将其干燥成粉末状(含水率≤0.1％)，得到豆芋叶乙醇提取物。
用上述方法制备获得的豆芋叶乙醇提取物进行干预由高脂饮食诱导的C57BL/6肥胖小鼠，观察其体重变化并检测血清和肝脏中甘油三脂和胆固醇含量变化，具体步骤为：
1、实验动物分组与处理；
50只雄性C57BL/6小鼠放入动物房内喂养，饲养环境为12h光暗交替，温度为23±3℃，相对湿度为50％。适应性喂养1周后，将小鼠随机分为5组，每组10只。
组别设计分别为：低脂对照组(LFD)，饲喂含10％脂肪的低脂饲料；高脂对照组(HFD)，饲喂含45％脂肪的高脂饲料；低剂量豆芋叶乙醇提取物组(HFD+L)，饲喂含45％脂肪的高脂饲料并灌胃100mg/(kg·d)豆芋叶乙醇提取物；高剂量豆芋叶乙醇提取物组HFD+H)，饲喂含45％脂肪的高脂饲料并灌胃300mg/(kg·d)豆芋叶乙醇提取物。实验期间小鼠自由进食和饮水，实验持续12周。
2、记录豆芋叶乙醇提取物对肥胖小鼠体重的影响：
实验期间每周记录体重和摄食量。根据图1可以发现，豆芋叶乙醇提取物干预12周后，同高脂对照组相比，低剂量组和高剂量组均能缓解高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠体重增加。
实施例2、豆芋叶乙醇提取物对肥胖小鼠脂肪、肝脏等脏器指数的影响；
将实施例1中灌胃12周后的小鼠禁食24h，称量体重，眼眶取血后将小鼠颈椎脱臼处死，取肾周及附睾周围脂肪，快速摘取心、肝、脾、肾、棕色脂肪等组织并记录重量，具体数据如表1所示。
表1豆芋叶乙醇提取物干预对小鼠脏器指数的影响
根据表1可知，不同剂量的豆芋叶乙醇提取物均可以显著降低肥胖小鼠体内睾周脂肪和肾周脂肪指数，同高脂对照组相比豆芋叶乙醇提取物干预对肝脏、棕色脂肪、心脏、肾脏、脾脏和胰腺指数均无显著影响。以上结果表明豆芋叶乙醇提取物能够显著改善高脂饮食诱导肥胖小鼠体内脂肪指数的变化。
实施例3、豆芋叶乙醇提取物对肥胖小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量的影响；
将实施例1中灌胃12周后的小鼠禁食24h，眼眶取血后将小鼠颈椎脱臼处死，血液样品1500转离心15min，取血清保存并采用东芝全自动生化分析仪对血清中甘油三酯和总胆固醇含量进行测定，具体数据如表2所示。
表2豆芋叶乙醇提取物干预对小鼠血清指标的影响
根据表2可知，高剂量组和低剂量组均可以显著降低肥胖小鼠血清中甘油三酯、胆固醇含量、谷丙转氨酶、谷草转氨酶的含量。以上结果表明豆芋叶乙醇提取物能够改善高脂饮食诱导肥胖小鼠血清中甘油三酯、总胆固醇、谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量的变化。
实施例4、豆芋叶乙醇提取物对肥胖小鼠肝脏谷丙转氨酶和谷草转氨酶含量的影响；
将实施例1中灌胃12周后的小鼠禁食24h，称量体重，眼眶取血后将小鼠颈椎脱臼处死，取小鼠肝脏按照谷丙转氨酶含量测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)和谷草转氨酶含量测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书进行测定。
根据图2和图3可知，同低脂对照组相比高脂组小鼠肝脏中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量显著增加，而低剂量的豆芋叶乙醇提取物干预后均能不能显著改善由高脂饮食造成的肝脏中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的增加，但高剂量的豆芋叶乙醇提取物干预后能够显著降低肝脏中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的积累。以上结果表明高剂量的豆芋叶乙醇提取物具有显著护肝功效。
实施例5、豆芋叶乙醇提取物对肥胖小鼠肝脏甘油三酯和总胆固醇含量的影响；
将实施例1中灌胃12周后的小鼠禁食24h，称量体重，眼眶取血后将小鼠颈椎脱臼处死，取小鼠肝脏按照甘油三脂含量测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)和总胆固醇含量测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书进行测定。
根据图4和图5可知，同低脂对照组相比高脂组小鼠肝脏中甘油三酯和总胆固醇含量均显著增加，而不同剂量的豆芋叶乙醇提取物干预后均能显著改善由高脂饮食造成的肝脏中总胆固醇和甘油三酯的增加。以上结果表明豆芋叶乙醇提取物能够有效的缓解肝脏中甘油三酯和总胆固醇的积累。
综上本发明提出一种豆芋叶乙醇提取物的制备方法及其减肥用途，为医学、食品科学等领域开发天然减肥产品提供新资源。同时涉及豆芋叶乙醇提取物在制备减肥产品中的应用。
以上列举的仅为本发明的实施的若干实例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。