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1、10申请公布号CN104131056A43申请公布日20141105CN104131056A21申请号201410271440022申请日20140618C12P21/06200601C07K1/34200601A61P9/1220060171申请人江苏大学地址212013江苏省镇江市京口区学府路301号72发明人王振斌梁秋芳马海乐王林王世清74专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司32200代理人楼高潮54发明名称基于微波超声波技术的芝麻饼粕ACE抑制肽的制备方法及用途57摘要本发明公开了基于微波超声波技术的芝麻饼粕ACE抑制肽的制备方法及用途，属于农产品加工领域。芝麻饼粕经过粉碎加水溶解。
2、，然后微波（超声波）预处理，再在所得芝麻饼粕溶液中加入碱性蛋白酶酶解，对酶解体系施加超声波辅助酶解、最后灭酶，离心，超滤，浓缩喷雾干燥得到粉末状产品。该方法可以提高芝麻饼粕中蛋白的水解效率，提高酶的利用率。利用该方法制备的芝麻饼粕ACE抑制肽的ACE抑制活性高，多肽纯度高。本发明实现了芝麻饼粕的深加工和综合利用，对于提高其附加值具有重要意义。51INTCL权利要求书1页说明书4页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书4页10申请公布号CN104131056ACN104131056A1/1页21基于超声波技术的芝麻饼粕的ACE抑制肽的制备方法，其特征在于按照下述步骤。
3、进行（1）对粉碎后的芝麻饼粕以与水155150的质量比加入水形成混悬液，采用频率30MHZ，功率为2060W的微波处理28MIN；使其中蛋白溶解到水中形成水溶液；（2）加入碱性蛋白酶进行酶解，在酶解开始后对酶解体系采用，频率为20KHZ，功率2080W的超声波处理，酶解时间为0150MIN，酶解结束，停止超声波处理；酶解结束后，酶解液90水浴15MIN灭酶，在自然冷却到室温；（3）离心取上清液真空抽滤9CM，选用截留分子量为1KDA的平板膜，超滤分离得到分子质量在3KDA以下的产物，收集浓缩后喷雾干燥得到芝麻饼粕ACE抑制肽产品。2根据权利要求1所述的基于超声波技术的芝麻饼粕的ACE抑制肽的制。
4、备方法，其特征在于步骤（1）中或者是采用工作/间歇时间为2S/4S，频率为20KHZ，功率2001000W,初始温度3070的超声波处理530MIN。3根据权利要求1所述的基于超声波技术的芝麻饼粕的ACE抑制肽的制备方法，其特征在于步骤（2）中酶的加入量为10005000U/G，酶解温度为3070，PH为711。权利要求书CN104131056A1/4页3基于微波超声波技术的芝麻饼粕ACE抑制肽的制备方法及用途技术领域0001本发明属于ACE抑制肽制备技术领域，涉及基于超声波技术的芝麻饼粕的ACE抑制肽的制备方法及用途。背景技术0002人体内的血压受许多因素调节，来源于食品蛋白的ACE抑制肽可。
5、以抑制ACE活性而达到降血压的作用，且安全性高，毒副作用小，成为了近几年的研究热点之一。芝麻是我国四大食用油料作物的佼佼者，在芝麻油制备过程中产生大量的芝麻饼粕下脚料。芝麻饼粕中含有丰富的蛋白质，多肽，氨基酸，矿物质，维生素，芝麻素等，营养价值丰富，其主要的用途是作为生产饲料的原料。应用单一。邵元龙等研究了芝麻多肽的水解工艺以及多肽的抗氧化活性。王连翠，唐张辉等利用酶法制备芝麻粕多肽研究得到了最佳水解工艺条件。然而，利用酶法制备芝麻饼粕ACE抑制肽，超滤得到分子量小于3KDA的小分子芝麻饼粕ACE抑制肽仅限于本课题组的报道。0003超声波技术，微波技术对于有效成分的提取，高分子的降解，酶解反应。
6、等都有很好的促进作用。并且具有高效、廉价、无污染、操作简单、技术易推广应用等特点。近年来，超声波辅助原料酶解技术已经得到了广泛的应用。微波技术的应用较多集中在有效成分的提取、合成方面，而应用到多肽制备及其功能特性的研究则较少。SAKAKLBARA等观察到，在三种不同的超声强度下蔗糖酶水解速度均高于对照。王猛等利用微波技术提取葡萄籽粕中的花青素，和常规工艺比，花青素的提取率高，提取时间短。然而利用超声波或者微波对芝麻饼粕预处理，同时将超声与芝麻饼粕的酶解过程相结合的研究仅限于本研究课题组的报告。0004基于该研究课题组的微波超声波技术制备芝麻饼粕ACE抑制肽，可以提高蛋白水解效率，酶的利用率，降。
7、低生产成本。从而得到一种活性较高，纯度高的ACE抑制肽。0005发明内容本发明的目的是将微波（超声波）技术预处理原料芝麻饼粕，并且将超声波技术应用到芝麻饼粕的酶解反应中，制备具有抑制体内ACE活性的芝麻饼粕ACE抑制肽的方法及用途。0006本发明上述目的是通过以下技术手段实现的先将芝麻饼粕粉碎，加微波（超声波）处理溶解，然后用碱性蛋白酶进行ACE抑制肽的制备，同时在水解过程中施加超声波，最后离心，超滤，浓缩并且喷雾干燥得到分子量小于3KDA的粉末产品。0007基于超声波技术的芝麻饼粕的ACE抑制肽的制备方法，按照下述步骤进行（1）对粉碎后的芝麻饼粕以与水155150的质量比加入水形成混悬液，采。
8、用频率30MHZ，功率为2060W的微波处理28MIN；或者是采用工作/间歇时间为2S/4S，频率为20KHZ，功率2001000W,初始温度3070的超声波处理530MIN。使其中蛋白溶解到水中形成水溶液；（2）加入碱性蛋白酶进行酶解，酶的加入量为10005000U/G（酶活和底物质量比），说明书CN104131056A2/4页4酶解温度为3070，PH为711，在酶解开始后对酶解体系采用，频率为20KHZ，功率2080W的超声波处理，酶解时间为0150MIN，酶解结束，停止超声波处理。酶解结束后，酶解液90水浴15MIN灭酶，在自然冷却到室温。0008（3）离心取上清液真空抽滤9CM，选用。
9、截留分子量为1KDA的平板膜，超滤分离得到分子质量在3KDA截留分子量为1KDA的超滤膜可以使最大分子量为3KDA的物质通过以下的产物，收集浓缩后喷雾干燥得到芝麻饼粕ACE抑制肽产品。0009本发明采用微波预处理芝麻饼粕，超声波辅助酶解，与经过同样的酶解过程但是不施加微波、超声波、不超滤的对照试验相比，可以使ACE抑制肽的得率显著提高，ACE抑制率从3095提高到了6834，IC50值从603MG/ML降到了262MG/ML；采用超声波预处理芝麻饼粕，超声波辅助酶解，与经过同样的酶解过程但是不施加超声波、不超滤的对照试验相比，可以使ACE抑制肽的得率显著提高的同时，ACE抑制率从3095提高到。
10、了6845，IC50值从603MG/ML降到了275MG/ML。大大提高了酶解效率和产品活性。0010具体实施方式0011本发明测定芝麻饼粕水解肽的ACE抑制率，IC50值（IC50值指的是对ACE抑制率达到50时的多肽水溶液的浓度，该值越小，则表示其对ACE的抑制活性就越高）来反映芝麻饼粕水解物对ACE的抑制活性。0012实施例1对粉碎后的芝麻饼粕以与水1119的比例加入水中形成混悬液，在机械搅拌的条件下，采用工作/间歇时间定为2S/4S、功率为400W,超声处理20MIN，使蛋白溶解于水中，形成芝麻饼粕蛋白水溶液；以酶活1700U/G（酶活和底物质量比）加入碱性蛋白酶（无锡杰能科生物工程有。
11、限公司，100000U/G），温度为46，PH值为888，功率为50W,其他条件和预处理的超声波一样，超声处理24MIN后停止酶解，酶解液90水浴15MIN灭酶。自然冷却至室温，离心取上清液真空抽滤9CM，选用截留分子质量为1KDA的平板膜，超滤分离得到分子量在3KDA下的产物，收集浓缩后喷雾干燥得到芝麻饼粕ACE抑制肽产品。测定ACE抑制率，IC50值，具体测定方法如下用6MLPH83、01MOL/L硼酸缓冲液溶解3MG酶解产物，25LACE1UACE溶于10ML的PH83、01MOL/L的硼酸缓冲液中，该缓冲液含03MOL/LNACL加入到含10L样品的离心管中，37保温5MIN，随后加入。
12、65MMOL/L的马尿酰组氨酰亮氨酸NHIPPURYLLHISTIDYLLLEUCINE,HHL40L，在37恒温反应30MIN，加入85L浓度为1MOL/L的HCL终止反应，同时用10L的PH83硼酸缓冲液作空白对照反应，所得反应液直接用于HPLC分析。0013HPLC条件ZORBAXC18柱46150MM，填料粒径5M；检测波长228NM；进样量8L；柱温25；流动相为超纯水乙腈8020，各含05三氟乙酸；流速10ML/MIN。计算公式如下RAB/A100式中RACE抑制率,；A空白对照组HIP的峰面积；B添加ACE抑制肽组HIP的峰面积。0014称取一定质量样品配成不同浓度的溶液，以浓度。
13、为横坐标，抑制率为纵坐标绘成说明书CN104131056A3/4页5圆滑的曲线，从曲线中计算IC50值。0015对照试验对粉碎后的芝麻饼粕以与水1119的比例加入水中形成混悬液，在机械搅拌的条件下，不施加超声，再按照上述相同酶解过程处理，但是不施加超声，酶解结束后的灭酶，离心，取上清液喷雾干燥以及测定方法均按照上述方法处理。0016经过测定，对照组的酶解产物多肽的ACE抑制率为3095，IC50值为603MG/ML,实验组的酶解产物多肽的ACE抑制率为725，IC50值为382MG/ML。可见，在同等过程条件下，伴随着多肽的纯度的提高，采用超声波的酶解产物多肽的ACE抑制率显著提高了，IC50。
14、值明显降低了。0017实例2对粉碎后的芝麻饼粕以与水1119的比例加入水中形成混悬液，在机械搅拌的条件下，功率为40W,微波处理55MIN，使蛋白溶解于水中，形成芝麻饼粕蛋白水溶液；以酶活1700U/G（酶活和底物质量比）加入碱性蛋白酶（无锡杰能科生物工程有限公司，100000U/G），温度为46，PH值为888，采用工作/间歇时间定为2S/4S、功率为40W,超声处理24MIN其他条件和预处理的超声波一样，超声处理24MIN后停止酶解，酶解液90水浴15MIN灭酶。自然冷却至室温，离心取上清液真空抽滤9CM，选用截留分子质量为1KDA的平板膜，超滤分离得到分子量在3KDA下的产物，收集浓缩后。
15、喷雾干燥得到芝麻饼粕ACE抑制肽产品。测定水解产物多肽得率和ACE抑制率，IC50值，具体测定方法参照实例1。0018对照试验对粉碎后的芝麻饼粕以与水1119的比例加入水中形成混悬液，在机械搅拌的条件下，不施加微波，再按照上述相同酶解过程处理，但是不施加超声，酶解结束后的灭酶，离心，超滤以及测定方法均按照上述方法处理。0019经过测定，对照组的酶解产物多肽的ACE抑制率为2825，IC50值为573MG/ML,实验组的酶解产物多肽的ACE抑制率为660，IC50值为385MG/ML。可见，在同等过程条件下，伴随着多肽的纯度的提高，采用超声波的酶解产物多肽的ACE抑制率显著提高了，IC50值明显。
16、降低了。0020实例3对粉碎后的芝麻饼粕以与水1119的比例加入水中形成混悬液，在机械搅拌的条件下，采用工作/间歇时间定为2S/4S、功率为800W,超声处理20MIN，使蛋白溶解于水中，形成芝麻饼粕蛋白水溶液；以酶活2500U/G（酶活和底物质量比）加入碱性蛋白酶（无锡杰能科生物工程有限公司，100000U/G），温度为46，PH值为888，功率为40W,其他条件和预处理的超声波一样，超声处理30MIN后停止酶解，酶解液90水浴15MIN灭酶。自然冷却至室温，离心取上清液真空抽滤9CM，选用截留分子质量为1KDA的平板膜，超滤分离得到分子量在3KDA下的产物，收集浓缩后喷雾干燥得到芝麻饼粕A。
17、CE抑制肽产品。测定水解产物多肽得率和ACE抑制率，IC50值。具体测定方法参照实例1。0021空白试验参照实例1。0022经过测定，对照组的酶解产物多肽的ACE抑制率为3125，IC50值为593MG/ML,实验组的酶解产物多肽的ACE抑制率为6670，IC50值为380MG/ML。可见，在同等过程条件下，伴随着多肽的纯度的提高，采用超声波的酶解产物多肽的ACE抑制率显著提高了，IC50值明显降低了。0023实例4说明书CN104131056A4/4页6对粉碎后的芝麻饼粕以与水1119的比例加入水中形成混悬液，在机械搅拌的条件下，功率为40W,微波处理5MIN，使蛋白溶解于水中，形成芝麻饼粕。
18、蛋白水溶液；以酶活1700U/G（酶活和底物质量比）加入碱性蛋白酶（无锡杰能科生物工程有限公司，100000U/G），温度为46，PH值为888，采用工作/间歇时间定为2S/4S、功率为50W,超声处理30MIN其他条件和预处理的超声波一样，超声处理24MIN后停止酶解，酶解液90水浴15MIN灭酶。自然冷却至室温，离心取上清液真空抽滤9CM，选用截留分子质量为1KDA的平板膜，超滤分离得到分子量在3KDA下的产物，收集浓缩后喷雾干燥得到芝麻饼粕ACE抑制肽产品。测定水解产物多肽得率和ACE抑制率，IC50值，具体测定方法参照实例1。0024空白试验参照实例2。0025经过测定，对照组的酶解产物多肽的ACE抑制率为3202，IC50值为673MG/ML,实验组的酶解产物多肽的ACE抑制率为6720，IC50值为267MG/ML。可见，在同等过程条件下，伴随着多肽的纯度的提高，采用超声波的酶解产物多肽的ACE抑制率显著提高了，IC50值明显降低了。说明书CN104131056A。