《一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌4的医用几丁糖纳米微球及其制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌4的医用几丁糖纳米微球及其制备方法.pdf（12页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811144924.3 (22)申请日 2018.09.29 (71)申请人 南通市第一人民医院 地址 226001 江苏省南通市崇川区孩儿巷 北路6号 (72)发明人 徐大伟 王成牛 盛美红 韩云 崔志明 (74)专利代理机构 北京科家知识产权代理事务 所(普通合伙) 11427 代理人 梁金娟 (51)Int.Cl. A61K 9/52(2006.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61K 47/10(2006.01)。
2、 A61K 31/122(2006.01) A61P 25/00(2006.01) (54)发明名称 一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几 丁糖纳米微球及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种治疗脊髓损伤载甲基萘 醌-4的医用几丁糖纳米微球及其制备方法， 涉及 医用材料领域， 由以下组分制成， 2%Span-80石蜡 油为120mL、 5%医用几丁糖生理平衡液为0.1 5mL、 甲基萘醌-4为120mg和10%聚乙二醇2000 溶液为10100L。 制备方法包括以下步骤， 制 备油相； 制备水相， 以1ml的5%医用几丁糖生理平 衡液溶液作为水相， 取10mg甲基萘醌-4加入到水 相中，。
3、 使用超声搅拌器搅拌1h； 混合， 用1mL移液 器吸取水相缓慢地加入到油相中， 使用超声搅拌 器搅拌； 搅拌； 离心； 初次清洗； 二次清洗； 三次清 洗； 保存。 该治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用 几丁糖纳米微球及其制备方法， 解决了目前还没 有有效的外科手术以及药物可以治疗脊髓继发 性损伤的问题。 权利要求书2页 说明书6页 附图3页 CN 109223732 A 2019.01.18 CN 109223732 A 1.一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球， 其特征在于， 由以下组分 制成， 2%Span-80石蜡油为120mL、 5%医用几丁糖生理平衡液为0.15mL、。
4、 甲基萘醌-4为1 20mg和10%聚乙二醇2000溶液为10100 L。 2.根据权利要求1所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球， 其 特征在于， 由以下组分制成， 2%Span-80石蜡油为515mL、 5%医用几丁糖生理平衡液为0.5 3mL、 甲基萘醌-4为515mg和10%聚乙二醇2000溶液为3080 L。 3.根据权利要求1所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球， 其 特征在于， 由以下组分制成， 2%Span-80石蜡油为10mL、 5%医用几丁糖生理平衡液为1mL、 甲 基萘醌-4为10mg和10%聚乙二醇2000溶液为50 L。 4.根。
5、据权利要求1所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的制 备方法， 其特征在于， 包括以下步骤， （1） 制备油相， 量取9.8mL医用石蜡油， 缓慢加入圆底烧瓶中， 然后加入0.2ml的Span- 80， 搅拌直至混匀圆底烧瓶中的液体， 形成10ml的油相体系； （2） 制备水相， 以1ml的5%医用几丁糖生理平衡液溶液作为水相， 取10mg甲基萘醌-4加 入到水相中， 使用超声搅拌器搅拌1h； （3） ， 混合， 用1mL移液器吸取水相缓慢地加入到油相中， 使用超声搅拌器搅拌， 直至充 分混匀形成乳浊液； （4） 搅拌， 在乳浊液中缓慢100ul加入10%聚乙二醇2000溶。
6、液， 用超声搅拌器充分搅拌 1h； （5） 离心， 搅拌停止后， 将圆底烧瓶中所有混合液倒入50mL离心管中， 离心条件为 1200rpm， 离心20min； （6） 初次清洗， 向离心管中加入20mL正己烷洗涤3次， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静 置， 吸掉上清液； （7） 二次清洗， 加入20mL异丙醇洗涤3次， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清 液； （8） 三次清洗， 加入20 mL丙酮洗涤3次， 每次充分振荡该离心管， 直至丙酮与管中的混 合液充分接触， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清液； （9） 保存， 室。
7、温条件下自然干燥医用几丁糖纳米微球， 最后收集， 于室温、 干燥处保存备 用。 5.根据权利要求4所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的制 备方法， 其特征在于， 所述医用石蜡油使用玻璃棒引流至圆底烧瓶中。 6.根据权利要求4所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的制 备方法， 其特征在于， 所述医用石蜡油和Span-80使用超声充分搅拌， 搅拌条件为2h。 7.根据权利要求4所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的制 备方法， 其特征在于， 所述圆底烧瓶中的混合液离心后静置， 去除上清液。 8.根据权利要求4所述的一种治疗脊髓损伤载甲基。
8、萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的制 备方法， 其特征在于， 所述离心管中加入正己烷和异丙醇后应充分振荡该离心管， 直至正己 烷和异丙醇与管中的混合液充分接触。 9.根据权利要求4所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的制 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 109223732 A 2 备方法， 其特征在于， 所述水相加入到油相中后超声波搅拌器的搅拌条件为600rpm， 30min。 10.根据权利要求4所述的一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的 制备方法， 其特征在于， 所述医用石蜡油、 Span-80和5%医用几丁糖生理平衡液溶液取液时 使用取液器 （1。
9、） ， 所述取液器 （1） 包括盛液管 （2） ， 所述的外侧顶部滑动连接有测量管 （3） ， 所 述测量管 （3） 的内壁开设有螺纹槽 （4） ， 所述螺纹槽 （4） 的内壁螺纹连接有升降块 （5） ， 所述 升降块 （5） 的顶部固定连接有电机 （6） ， 所述电机 （6） 的顶部固定连接有移动块 （7） ， 所述移 动块 （7） 的两端均固定连接有滑块 （8） ， 所述测量管 （3） 的内壁两侧开设有与滑块 （8） 相适配 的滑槽 （9） ， 所述升降块 （5） 的底部固定连接有与盛液管 （2） 相适配的密封块 （10） ， 所述测量 管 （3） 的一侧顶端连通有外接管 （11） ， 所。
10、述外接管 （11） 的外侧螺纹连接有输液管 （12） ， 所述 测量管 （3） 的一侧开设有与外接管 （11） 相适配的竖槽 （13） ， 所述测量管 （3） 远离竖槽 （13） 的 一侧固定连接有刻度尺 （14） ， 所述盛液管 （2） 的底部开设有出液口 （15） 。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 109223732 A 3 一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球及其 制备方法 技术领域 0001 本发明涉及医用材料领域， 具体为一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖 纳米微球及其制备方法。 背景技术 0002 聚合物制备微球体的技术已经被广泛地用于控制蛋白质药。
11、物释放系统。 研究发现 微球体能够保护脂质类药物， 增加其稳定性， 使其在给药过程中避免被氧化， 同时增加其水 溶性， 提高生物利用度， 能够延长脂质类药物的释放时间， 保护其活性。 进而增加药效， 降低 代谢产物对肾脏的毒性。 0003 几丁糖是一种广泛存在于自然界天然高分子聚糖， 一般从甲壳类动物如虾、 蟹的 外壳中提取制得， 故又称甲壳质。 医用几丁糖是目前活跃在生物医药领域的一颗明星， 现代 医学和生命科学认为几丁聚糖是人体的一种重要物质， 还被誉为 “第六生命要素” 。 医用几 丁糖所具有的优越性：（1） 促进组织再生、 抑制瘢痕形成 （具有促进上皮细胞、 血管内皮细胞 生长， 而抑。
12、制成纤维细胞生长的生物学特性） ；（2） 减少伤口渗出液；（3） 可形成湿润的隐形 膜， 加快伤口愈合；（4） 具有镇痛止血功能；（5） 具有消炎的作用。 目前， 医用几丁糖在皮肤烧 伤的治疗、 手术后防粘连、 眼睛术后康复、 滴眼液、 新型敷料等领域被广泛使用。 0004 聚乙二醇(PEG)是一种用途极为广泛的聚醚高分子化合物， 它可应用于医药、 卫 生、 食品、 化工等众多领域。 它具有亲水性、 无毒性和免疫学惰性， 被FDA批准成为体内注射 用高分子。 利用含聚乙二醇的两亲性共聚物在医用高分子材料表面吸附、 截留和接枝， 可改 善与血液接触的医用高分子材料的生物相容性。 0005 维生素。
13、K， 作为一种脂溶性的维生素， 最早是在血液凝固作用中被发现的， 现在很 多研究表明维生素K在神经系统中有重要的作用。 维生素K类化合物在肝外组织中广泛发 布， 可能来源于消化道细菌对K1的转化， 在临床应用方面除了能够用于治疗一些缺乏性出 血症， 主要用于治疗和预防骨质疏松症， 防止钙在动脉上的沉积， 以及预防肝硬化进展为肝 癌等疾病。 对帕金森氏症患者也可能有一定的保护作用。 维生素K在脑中主要活性形式为甲 基萘醌-4。 甲基萘醌-4具有抗凝血、 抗氧化应激、 抗炎性反应、 促进髓鞘再生以及在神经系 统中其他的功能。 很多研究表明， 甲基萘醌-4的抗炎活性是通过抑制NFkB信号通路介导的。。
14、 甲基萘醌-4在胚胎后期在不同类型的神经元细胞 （皮层， 海马和纹状体） 中都有促进细胞存 活的作用。 急性脊髓损伤的基础研究是解决脊髓损伤问题的根本， 目前主要集中在脊髓损 伤后继发性损害的机制与脊髓神经修复和再生的研究。 鉴于目前还没有有效的外科手术以 及药物可以治疗脊髓继发性损伤， 而甲基萘醌-4的上述作用以及在动物体内各种反应机制 正好为急性脊髓损伤后修复提供了非常有力的理论基础。 然而甲基萘醌-4的溶解性不好， 微溶于水， 不易被吸收， 生物利用度低。 因此如何制备一种生物纳米材料， 能够为甲基萘醌- 4提供长时程缓释， 同时最大程度上保证甲基萘醌-4的活性， 是医学上的一个难点。 。
15、说 明 书 1/6 页 4 CN 109223732 A 4 发明内容 0006 （一） 解决的技术问题 针对现有技术的不足， 本发明提供了一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳 米微球及其制备方法， 解决了目前还没有有效的外科手术以及药物可以治疗脊髓继发性损 伤的问题。 0007 （二） 技术方案 为实现以上目的， 本发明通过以下技术方案予以实现： 一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌- 4的医用几丁糖纳米微球， 由以下组分制成， 2%Span-80石蜡油为120mL、 5%医用几丁糖生 理平衡液为0.15mL、 甲基萘醌-4为120mg和10%聚乙二醇2000溶液为10100 L。 0008 。
16、优选的， 所述一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球， 由以下组 分制成， 2%Span-80石蜡油为515mL、 5%医用几丁糖生理平衡液为0.53mL、 甲基萘醌-4为 515mg和10%聚乙二醇2000溶液为3080 L。 0009 优选的， 所述一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球， 由以下组 分制成， 2%Span-80石蜡油为10mL、 5%医用几丁糖生理平衡液为1mL、 甲基萘醌-4为10mg和 10%聚乙二醇2000溶液为50 L。 0010 优选的， 所述一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球的制备方 法， 包括以下步骤， （1） 制备油。
17、相， 量取9.8mL医用石蜡油， 缓慢加入圆底烧瓶中， 然后加入0.2ml的Span- 80， 搅拌直至混匀圆底烧瓶中的液体， 形成10ml的油相体系； （2） 制备水相， 以1ml的5%医用几丁糖生理平衡液溶液作为水相， 取10mg甲基萘醌-4加 入到水相中， 使用超声搅拌器搅拌1h； （3） 混合， 用1mL移液器吸取水相缓慢地加入到油相中， 使用超声搅拌器搅拌， 直至充分 混匀形成乳浊液； （4） 搅拌， 在乳浊液中缓慢100ul加入10%聚乙二醇2000溶液， 用超声搅拌器充分搅拌 1h； （5） 离心， 搅拌停止后， 将圆底烧瓶中所有混合液倒入50mL离心管中， 离心条件为 1200。
18、rpm， 离心20min； （6） 初次清洗， 向离心管中加入20mL正己烷洗涤3次， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静 置， 吸掉上清液； （7） 二次清洗， 加入20mL异丙醇洗涤3次， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清 液； （8） 三次清洗， 加入20 mL丙酮洗涤3次， 每次充分振荡该离心管， 直至丙酮与管中的混 合液充分接触， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清液； （9） 保存， 室温条件下自然干燥医用几丁糖纳米微球， 最后收集， 于室温、 干燥处保存备 用。 0011 优选的， 所述医用石蜡油使用玻璃棒引流至圆。
19、底烧瓶中。 0012 优选的， 所述医用石蜡油和Span-80使用超声充分搅拌， 搅拌条件为2h。 0013 优选的， 所述圆底烧瓶中的混合液离心后静置， 去除上清液。 0014 优选的， 所述离心管中加入正己烷和异丙醇后应充分振荡该离心管， 直至正己烷 说 明 书 2/6 页 5 CN 109223732 A 5 和异丙醇与管中的混合液充分接触。 0015 优选的， 所述水相加入到油相中后超声波搅拌器的搅拌条件为600rpm， 30min。 0016 优选的， 所述医用石蜡油、 Span-80和5%医用几丁糖生理平衡液溶液取液时使用取 液器， 所述取液器包括盛液管， 所述的外侧顶部滑动连接有。
20、测量管， 所述测量管的内壁开设 有螺纹槽， 所述螺纹槽的内壁螺纹连接有升降块， 所述升降块的顶部固定连接有电机， 所述 电机的顶部固定连接有移动块， 所述移动块的两端均固定连接有滑块， 所述测量管的内壁 两侧开设有与滑块相适配的滑槽， 所述升降块的底部固定连接有与盛液管相适配的密封 块， 所述测量管的一侧顶端连通有外接管， 所述外接管的外侧螺纹连接有输液管， 所述测量 管的一侧开设有与外接管相适配的竖槽， 所述测量管远离竖槽的一侧固定连接有刻度尺， 所述盛液管的底部开设有出液口。 0017 （三） 有益效果 本发明提供了一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用几丁糖纳米微球及其制备方法， 通过聚乙。
21、二醇具有亲水性、 无毒性和免疫学惰性， 利用含聚乙二醇的两亲性共聚物在医用 高分子材料表面吸附、 截留和接枝， 可改善与血液接触的医用高分子材料的生物相容性， 同 时甲基萘醌-4具有抗凝血、 抗氧化应激、 抗炎性反应、 促进髓鞘再生以及在神经系统中其他 的功能， 在胚胎后期在不同类型的神经元细胞 （皮层， 海马和纹状体） 中都有促进细胞存活 的作用， 为急性脊髓损伤后修复提供了非常有力的理论基础， 将甲基萘醌-4制备成生物纳 米材料， 能够为甲基萘醌-4提供长时程缓释， 同时最大程度上保证甲基萘醌-4的活性。 附图说明 0018 图1为本发明微球释放率示意图； 图2为本发明微球粒径示意图； 图。
22、3为本发明取液器结构示意图； 图4为本发明测量管结构示意图。 0019 图中： 1-取液器、 2-盛液管、 3-测量管、 4-螺纹槽、 5-升降块、 6-电机、 7-移动块、 8- 滑块、 9-滑槽、 10-密封块、 11-外接管、 12-输液管、 13-竖槽、 14-刻度尺、 15-出液口。 具体实施方式 0020 下面将结合本发明实施例中的附图， 对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完 整地描述， 显然， 所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例， 而不是全部的实施例。 基于 本发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例， 都属于本发明保护的范围。
23、。 0021 请参阅图1-4， 本发明提供一种技术方案： 一种治疗脊髓损伤载甲基萘醌-4的医用 几丁糖纳米微球及其制备方法， 包括以下步骤， 1.量取9.8mL医用石蜡油， 玻璃棒引流， 缓慢加入圆底烧瓶中， 然后加入0.2ml的Span- 80， 超声充分搅拌条件为2h， 以混匀圆底烧瓶中的液体， 形成10ml的油相体系； 2.以1ml5%医用几丁糖生理平衡液溶液作为水相， 取10mg甲基萘醌-4加入到水相中， 超 声1h。 0022 3.然后用1mL移液器吸取水相缓慢地加入到油相中， 搅拌条件为600rpm， 30min， 充 说 明 书 3/6 页 6 CN 109223732 A 6 。
24、分混匀形成乳浊液； 4.在乳浊液中缓慢100ul加入10%聚乙二醇2000溶液， 用超声搅拌器充分搅拌1h； 5.搅拌停止后， 将圆底烧瓶中所有混合液倒入50mL无菌离心管中， 1200rpm， 离心 20min， 静置， 去除上清液； 6.向离心管中加入20mL正己烷洗涤3次， 每次充分振荡该离心管， 使石油乙醚与管中的 混合液充分接触， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清液； 7.加入20mL异丙醇洗涤3次， 每次充分振荡该离心管， 使异丙醇与管中的混合液充分接 触， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清液； 8.加入20mL丙酮洗涤3次，。
25、 每次充分振荡该离心管， 使丙酮与管中的混合液充分接触， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清液； 9.室温条件下自然干燥医用几丁糖纳米微球， 最后收集， 于室温、 干燥处保存备用。 0023 样品Y1的制备溶液配方表一 样品Y2和Y3除部分组分含量不同外， 其余实施过程同样品Y1， 样品Y2和Y3的组方含量 如下表二。 0024 分别对样品Y1、 Y2、 Y3进行包封率和载药率检测并计算效率， 结果如表三。 说 明 书 4/6 页 7 CN 109223732 A 7 0025 医用石蜡油、 Span-80和5%医用几丁糖生理平衡液溶液取液时使用取液器1， 取液 器1。
26、包括盛液管2， 的外侧顶部滑动连接有测量管3， 测量管3的内壁开设有螺纹槽4， 螺纹槽4 的内壁螺纹连接有升降块5， 升降块5的顶部固定连接有电机6， 电机6的顶部固定连接有移 动块7， 移动块7的两端均固定连接有滑块8， 测量管3的内壁两侧开设有与滑块8相适配的滑 槽9， 升降块5的底部固定连接有与盛液管2相适配的密封块10， 测量管3的一侧顶端连通有 外接管11， 外接管11的外侧螺纹连接有输液管12， 测量管3的一侧开设有与外接管11相适配 的竖槽13， 测量管3远离竖槽13的一侧固定连接有刻度尺14， 盛液管 2的底部开设有出液口 15， 通过外接管11将需要测量的溶液输入到盛液管2中。
27、， 电机6转动后带动升降块5沿螺纹槽 4向下移动， 移动块7限制电机6只能做上下方向的移动， 密封块10在向下移动的过程中将盛 液管2中的液体逐渐从出液口15处挤出， 从刻度尺14观察盛液管2内部液体的体积， 达到要 求后电机6停止工作， 盛液管2内剩余需要体积的液体， 由于升降块5沿着螺纹槽4上下移动， 升降块5上升和下降的幅度较小， 量取的液体精度更高。 0026 工作时， 量取9.8mL医用石蜡油， 缓慢加入圆底烧瓶中， 然后加入0.2ml的Span-80， 搅拌直至混匀圆底烧瓶中的液体， 形成10ml的油相体系， 以1ml的5%医用几丁糖生理平衡液 溶液作为水相， 取10mg甲基萘醌-。
28、4加入到水相中， 使用超声搅拌器搅拌1h， 用1mL移液器吸 取水相缓慢地加入到油相中， 使用超声搅拌器搅拌， 直至充分混匀形成乳浊液， 在乳浊液中 缓慢100ul加入10%聚乙二醇2000溶液， 用超声搅拌器充分搅拌1h， 搅拌停止后， 将圆底烧瓶 中所有混合液倒入50mL离心管中， 离心条件为1200rpm， 离心20min， 向离心管中加入20mL正 己烷洗涤3次， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清液， 加入20mL异丙醇洗涤3次， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清液， 加入20 mL丙酮洗涤3次， 每次充分振荡该 离心管， 直至丙。
29、酮与管中的混合液充分接触， 然后1200rpm， 室温离心20min， 静置， 吸掉上清 液， 室温条件下自然干燥医用几丁糖纳米微球， 最后收集， 于室温、 干燥处保存备用即可。 0027 需要说明的是， 在本文中， 诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实 体或者操作与另一个实体或操作区分开来， 而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存 在任何这种实际的关系或者顺序。 而且， 术语 “包括” 、“包含” 或者其任何其他变体意在涵盖 非排他性的包含， 从而使得包括一系列要素的过程、 方法、 物品或者设备不仅包括那些要 说 明 书 5/6 页 8 CN 109223732 A 8 素， 而。
30、且还包括没有明确列出的其他要素， 或者是还包括为这种过程、 方法、 物品或者设备 所固有的要素。 在没有更多限制的情况下。 由语句 “包括一个限定的要素， 并不排除 在包括所述要素的过程、 方法、 物品或者设备中还存在另外的相同要素” 。 0028 尽管已经示出和描述了本发明的实施例， 对于本领域的普通技术人员而言， 可以 理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、 修改、 替换 和变型， 本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。 说 明 书 6/6 页 9 CN 109223732 A 9 图1 图2 说 明 书 附 图 1/3 页 10 CN 109223732 A 10 图3 说 明 书 附 图 2/3 页 11 CN 109223732 A 11 图4 说 明 书 附 图 3/3 页 12 CN 109223732 A 12 。