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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510244101.8 (22)申请日 2015.05.13 A61K 36/31(2006.01) A61P 25/28(2006.01) G01N 30/90(2006.01) (71)申请人 石河子大学 地址 832002 新疆维吾尔自治区石河子市北 二路 59 号 (72)发明人 王金辉 潘馨慧 李国玉 罗丽 黄健 姚大红 王丽萍 (54) 发明名称 芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及 其组合物的医药用途和制备方法 (57) 摘要 本发明属医药技术领域， 具体涉及一种芫菁 子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医 药用。
2、途和制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病 (AD) 等方面的医药用途。本发明提取物通过如下 方法获得 ： 芫菁子经溶剂超声提取， 提取液浓缩 后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用体积比 为 100 ： 10 的氯仿 - 甲醇混合溶剂洗脱， 继用体积 比为100 ： 50的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱， 用100 ： 50的氯仿-甲醇混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶 剂， 干燥， 即得该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书8页 附图1页 CN 106265826 A 2017.01.04 CN 1062。
3、65826 A 1/1 页 2 1.一种芫菁子提取物， 其特征为芫菁子经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分 离， 上样后的硅胶柱， 先用体积比为 100 ： 10 的氯仿 - 甲醇混合溶剂洗脱， 继用体积比为 100 ： 50 的氯仿 - 甲醇混合溶剂洗脱， 用 100 ： 50 的氯仿 - 甲醇混合溶剂洗脱的洗脱液经回 收溶剂， 干燥， 即为该提取物。 2.如权利要求 1 所述芫菁子提取物， 其特征为， 提取所用溶剂可以为甲醇、 石油醚、 水、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂， 最优条件为甲醇和 95% 乙醇。 3.如权利要求 1 所述芫菁子提取物， 其特。
4、征为芫菁子经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗 脱， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 2-50 倍柱体积用氯 仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为 该提取物。 4.如权利要求 1 所述维的维吾尔药芜菁子提取物， 其特征为， 洗脱液的用量为 2-50 倍 柱体积。 5.如权利要求 1 所述提取物的制备方法， 其特征为 ： 最优为先用 100 ； 10 的氯仿 -。
5、 甲醇 混合溶剂洗脱 10 倍柱体积， 继用 100 ： 50 的氯仿 - 甲醇混合溶剂洗脱 30 倍柱体积。 6.一种药物组合物， 其特征在于， 包含权利要求 1-5 任何一项所述的维吾尔药芜菁子 提取物和药学上可接受的载体。 7.一种药物制剂， 其特征在于， 包含权利要求 1-5 任何一项所述的芜菁子提取物或权 利要求 6 所述的药物组合物。 8.如权利要求 7 所述的药物制剂， 其特征在于， 所述的制剂为固体分散体、 环糊精包合 物、 分散片。 9.权利要求1-5任何一项所述提取物或权利要求6所述的组合物或权利要求7所述的 药物制剂在制备乙酰胆碱酯酶抑制活性药物中的应用。 10.如权利要。
6、求 9 所述的应用， 其特征在于， 所述的乙酰胆碱酯酶抑制活性， 可用于治 疗阿尔茨海默病 (AD) 等方面的医药用途。 11.如权利要求 1-5 任何一项所述的维吾尔药芜菁子提取物， 其特征在于， 用 TLC 法检 测， 其色谱条件为 ： GF254硅胶板， 展开系统 ： 氯仿 ： 乙酸乙酯 ： 甲醇 =3:1:1， 显色方法 ： 香 草醛浓硫酸显色。 权 利 要 求 书 CN 106265826 A 2 1/8 页 3 芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物及其组合物的医 药用途和制备方法 技术领域 0001 本发明属医药技术领域， 具体涉及一种芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其 组合物的。
7、制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病 (AD) 等方面的医药用途。 背景技术 0002 芫菁子生湿生热， 补身壮阳， 润肤生辉， 利尿止泻， 增强视力。 主治干寒性或黑胆质 性疾病。如体虚阳痿， 颜面黑斑， 闭尿腹泻， 视力下降。 0003 本发明通过大规模、 系统地活性筛选， 意外地发现维吾尔药芫菁子提取物及其部 分化学组分， 具有显著地乙酰胆碱酯酶抑制活性， 该活性提取物及其组合物有望应用于治 疗阿尔茨海默病 (AD) 等方面的医药用途。 发明内容 0004 本发明所解决的技术问题是提供一种芜菁子提取物。 0005 本发明还提供了以芜菁子提取物为主要活性成分的组合物。 0006 本发明同时提供。
8、了芜菁子提取物及其组合物的制备和在制备乙酰胆碱酯酶抑制 活性药物中的应用。 0007 本发明是通过如下技术方案实现的 ： 维吾尔药芫菁子经甲醇和水超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶 （SiO2） 柱分离， 上样后的 硅胶柱， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂梯度洗脱 （氯仿 - 甲醇， 比例见表 1） ， 各氯仿 - 甲醇比例混 合溶剂洗脱液， 浓缩， 干燥后， 利用体外筛选体系测试其乙酰胆碱酯酶抑制活性， 意外地发 现先用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱得到的氯仿 - 甲醇混合。
9、溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积 比） 洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱 部位， 没有乙酰胆碱酯酶抑制活性的作用。最优为先用 100 ； 10 的氯仿 - 甲醇混合溶剂洗脱 10 倍柱体积， 继用 100 ： 50 的氯仿 - 甲醇混合溶剂洗脱 30 倍柱体积的洗脱液干燥后即为本 发明乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。乙酰胆碱酯酶抑制活性的提取物， 可以通过以上方 法得到富集， 从而与其他杂质类成分分离开。该芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未 见文献报道， 其薄层谱色谱 （TLC） 分析表征如图 1， TLC 分析条件 ： GF254。
10、 硅胶板， 展开系统 ： 氯仿 ： 乙酸乙酯 ： 甲醇 （3:1:1） 显色方法 ： 香草醛 - 硫酸显色。 0008 具体， 发现过程如下 ： 1、 芫菁子经甲醇和水超声提取物的制备 取维吾尔药芫菁子 20 g， 经 100 mL 甲醇超声提取 15 min， 再经 100 mL 水超声提取 15 min， 提取液浓缩后， 得提取物 SN0066， 0.2726g， 拌样硅胶 0.3 g， 空白硅胶 5 g， 氯仿 - 甲醇 系统洗脱。 0009 2、 氯仿 - 甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果 说 明 书 CN 106265826 A 3 2/8 页 4 取维吾尔药芫菁子 20 g， 经 1。
11、00 mL 甲醇超声提取 15 min， 再经 100 mL 水超声提取 15 min 提取液浓缩后， 得提取物 SN0066， 0.2726g， 上柱， 甲醇溶解， 共用甲醇 15 mL。上硅胶柱 色谱， 拌样硅胶 0.3 g， 空白硅胶 5g， 玻璃柱内径 1.5 cm， 氯仿 - 甲醇系统梯度洗脱 （条件见 表 1） ， 柱体积 12.5 mL， 每个梯度洗脱 100mL， 得到， 各个浓度提取洗脱液的洗脱物， 回收溶 剂， 即得， 氯仿 ： 甲醇梯度洗脱提取物， TLC 分析结果见图 2， TLC 分析条件 ： GF254 硅胶板， 展开系统 ： 氯仿 ： 乙酸乙酯 ： 甲醇 （3:1。
12、:1） ， 显色方法 ： 香草醛 - 硫酸显色。 0010 表 1 3、 抑制乙酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果 1) 实验条件 a、 材料 ： DMSO( 二甲基亚砜 ) ( 科密欧公司 ) ； KH2PO4、 K2HPO4 3H2O( 广东汕头市西陇化 工厂 ) ； AchE 酶 ( 美国 Sigma 公司 ) ； PNPG( 美国 Sigma 公司 ) b、 实验仪器 ： 多功能酶标仪 Bio-Rad Model 680 型 (Bio-Rad Laboratories Inc.) 2) 实验方法和过程 样品处理 ： 将 1 mg 待测样品溶于 20 L 二甲基亚砜 (DMSO) 作为母液， 。
13、取 1 L 母液 加入 249 L 蒸馏水配成 200 gmL-1的溶液。 0011 乙酰胆碱酯酶抑制活性测定方法 ： 说 明 书 CN 106265826 A 4 3/8 页 5 在96孔酶标板上测定样品的AchE 抑制活性。 具体操作如下 ： 在96孔酶标板中依次加 入 20L PB (100mM， pH 8. 0)， 25L AChE (0. 033 U/mL， pH 8. 0 PB 溶解稀释 )， 25L 样品溶液 (40g mL 1)。 冰浴 5min 后， 加 15L ATCI （0.6mM） 及 15L DTNB （1.5mM） 。 37孵育 60min 后， 用酶标仪在 412。
14、 nm 下测定其吸光度值。根据下式计算抑制率 : 酶活性抑制率 % = A空白- (A样品- A背景) / A空白 100 式中 A空白： 不加样品反应后的吸收值 ； A样品： 加入样品反应后的吸收值 ； A背景： 只加样品的吸收值。 0012 3) 实验结果 表 2 结果发现 ： 本发明最优方案为 ： 维吾尔药芫菁子经有机溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分 离， 上样后的硅胶柱， 先用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:17， 体积比） 洗脱， 继用氯 仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 0:100， 体积比） 洗脱， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇。
15、， 0:100， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取 说 明 书 CN 106265826 A 5 4/8 页 6 物。该乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道， 其 TLC 分析表征如图 1。 0013 4、 乙酰胆碱酯酶抑制活性有效提取物的提取方法研究 1） 提取溶剂的种类研究 分别用甲醇、 丙酮、 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂等有机 溶剂提取， 并测试提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性， 实验结果如下 ： 表 3 研究结果表明 ： 提取用有机溶剂可以为甲醇、 石油醚、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混 合溶剂、。
16、 乙醇水混合溶剂。 0014 2） 提取溶剂的用量研究 分别用 1、 2、 5、 10、 20、 30、 40、 50 倍 （重量 / 体积比） 有机溶剂提取， 并测试提取物的乙酰 胆碱酯酶抑制活性， 结果如下 ： 表 4 活性提取物的提取所用有机溶剂用量为药材重量的 2-50 倍 （重量 / 体积比） 。 0015 3） 干燥方法的研究 分别用真空干燥法、 冷冻干燥法、 鼓风干燥、 离心干燥、 旋蒸干燥法等方法， 对得到的抑 制乙酰胆碱酯酶活性提取物进行干燥， 以含水量、 TLC、 活性测试为指标， 发现真空干燥法、 冷冻干燥法、 鼓风干燥、 离心干燥、 旋蒸干燥法适用于对乙酰胆碱酯酶抑制活。
17、性提取物进行 干燥， 其中， 最优为真空干燥法、 冷冻干燥法。 0016 表 5 说 明 书 CN 106265826 A 6 5/8 页 7 优选地， 芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物的制备方法为 ： 维吾尔药芫菁子经有机溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶 柱， 先用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 2-50 倍柱体积， 继用 氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 2-50 倍柱体积， 用氯仿 - 甲 醇混合溶剂 （氯仿-甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱液经回。
18、收有机溶剂， 干燥， 即为该活性 提取物。以上条件最优为先用石油醚 ： 乙酸乙酯混合溶剂 （石油醚 ： 乙酸乙酯， 100:10， 体积 比） 洗脱 10 倍柱体积， 继用石油醚 ： 乙酸乙酯混合溶剂 （石油醚 ： 乙酸乙酯， 100:50， 体积比） 洗脱 30 倍柱体积。其中， 1) 提取物提取用溶剂可以为甲醇、 石油醚、 水、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂， 最优条件为甲醇和 95% 乙醇。活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重 量的 2-50 倍 （重量 / 体积比） 。 0017 2) 提取物干燥方法可以为真空干燥法、 冷冻干燥法、 鼓风干燥、 离心干燥。
19、、 旋蒸干 燥法等， 最优为真空干燥法、 冷冻干燥法。 0018 5. 芫菁子抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物 （洗脱液为 100 ： 50 时干燥所得的提取物） 的医药用途研究 按优化的芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物制备方法制备的活性提取物， 经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=10.5 g/mL。 0019 由于乙酰胆碱酯酶抑制剂具有治疗阿尔茨海默病等方面的医药用途。因此， 我们 发现的芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。 0020 6、 芫菁子抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物的组合物及其制备方法研究 1） 固体分散体 处方 芫菁子提取物 20 g Vc 1 g 聚乙烯吡咯。
20、烷酮 79 g 固体分散 100g 制备方法 ： 称取芫菁子提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮 （PVP） 按比例 1:2、 1:4、 1:6 的质量比分别放 入烧杯中， 加入适量的无水乙醇和 Vc， 用磁力搅拌器搅拌至芫菁子提取物和载体完全溶解， 充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂， 干燥， 粉碎过 80 目筛， 即得芫菁子有效提取 物 PVP 包合物。 0021 2） 环糊精包合物 处方 ： 芫菁子提取物 20 g Vc 1 g - 环糊精 79 g 包合物 100g 制备方法 ： 将 - 环糊精与 1-5 倍水研匀 , 加芫菁子有效提取物 ( 水难溶性的应先溶于少量有 说 明 书 CN 10。
21、6265826 A 7 6/8 页 8 机溶剂中 ) 继续充分研磨至成糊状物 , 低温干燥即得环糊精包合物。 0022 3） 分散片处方 : 芫菁子提取物 100 十二烷基硫酸钠 1 Vc 1 预胶化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交联聚维酮 10 微晶纤维素 9 微分硅胶 0.3 滑石粉 1 100 片 制备方法 ： 1. 芫菁子有效提取物分散体的制备， 精密称取芫菁子提取物、 Vc， 加入处方量的十二烷 基硫酸钠， 用适量的浓度为 70% 乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后， 在 70 的温度下蒸干， 粉碎， 过 100 目筛 ； 2. 将第一步中的芫菁子有效提取物淀粉分散体与处方。
22、量的交联聚维酮， 预胶化淀粉， 用适量的浓度为 70% 乙醇做湿润剂， 边加入边搅拌， 制成湿颗粒过 14 目筛， 室温下放置 15min 后， 60烘箱烘干 45min， 16 目筛整粒， 加入处方量的滑石粉和微分硅胶， 混合均匀 后， 压片即得。 0023 7、 芫菁子抑制乙酰胆碱酯酶活性提取物的检测方法研究 我们发现， 可以用薄层色谱的方法， 很好地检测和标示芫菁子乙酰胆碱酯酶抑制活性 提取物的特征。见图 1 具体条件为 ： GF254硅胶板， 展开系统 ： 氯仿 ： 乙酸乙酯 ： 甲醇 （3:1:1） 显色方法 ： 香草 醛 - 硫酸显色。 0024 附图说明 ： 图 1 芫菁子乙酰胆。
23、碱酯酶抑制活性提取物的 TLC 色谱图 ； 图 2 芫菁子溶剂提取物的 TLC 色谱图。 0025 具体实施方式 : 以下实施例表示本发明的实用性， 本发明不受此限制。 0026 实施例 1 ： 取维吾尔药芫菁子 20 g， 经 100 mL 甲醇超声提取 15 min， 再经 100 mL 水超声提取 15 min 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿 - 甲醇混 合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯 仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 3。
24、0 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰 胆碱酯酶抑制活性为 IC50=86.0 g/mL。 0027 实施例 2 ： 取维吾尔药芜菁子 20 g， 经 100 mL 乙醇超声提取 15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分 说 明 书 CN 106265826 A 8 7/8 页 9 离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯。
25、仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱 液经回收有机溶剂， 性冷冻干燥， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=88.0 g/mL。 0028 实施例 3 ： 取维吾尔药芜菁子 20 g， 经 100 mL 石油醚超声提取 15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱 分离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿-甲醇混合溶剂 （氯仿-甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 。
26、- 甲醇， 100:50， 体积比） 洗 脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱液 经回收有机溶剂， 性旋蒸干燥法， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=78.0 g/mL。 0029 实施例 4 ： 取维吾尔药芜菁子 20 g， 经 100 mL 丙酮超声提取 15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分 离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （。
27、氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱 液经回收有机溶剂， 性鼓风干燥， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=79.0 g/mL。 0030 实施例 5 ： 取维吾尔药芜菁子 20 g， 经 100 mL 氯仿超声提取 15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分 离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 。
28、（氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱 液经回收有机溶剂， 性离心干燥， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=80.0 g/mL。 0031 实施例 6 ： 取维吾尔药芜菁子20 g， 经100 mL乙酸乙酯超声提取15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱 分离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿-甲醇混合溶剂 （氯仿-甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 -。
29、 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱 液经回收有机溶剂， 性冷冻干燥， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=67.0 g/mL。 0032 实施例 7 ： 取维吾尔药芜菁子20 g， 经100 mL甲醇水混合溶剂 （甲醇 ： 水=1 ： 1） 超声提取15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿 - 甲醇混合 溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继。
30、用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯 仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 性冷冻干燥， 即为该活性提取物。经测试， 说 明 书 CN 106265826 A 9 8/8 页 10 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=87.0 g/mL。 0033 实施例 8 ： 取维吾尔药芜菁子20 g， 经100 mL乙醇水混合溶剂 （乙醇 ： 水=1 ： 1） 超声提取15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿 。
31、- 甲醇混合 溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯 仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 性冷冻干燥， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=54.0 g/mL。 0034 实施例 9 ： 取维吾尔药芜菁子 20 g， 经 100 mL 乙醇 - 水混合溶剂 （乙醇 ： 水 =90 ： 10） 超声提取 15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上。
32、样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用氯仿-甲醇混 合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱 10 倍柱体积， 继用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯 仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱， 洗脱 30 倍柱体积， 用氯仿 - 甲醇混合溶剂 （氯仿 - 甲醇， 100:50， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 性冷冻干燥， 即为该活性提取物。经测试， 其乙酰胆碱酯酶抑制活性为 IC50=75.0 g/mL。 0035 实施例 10 ： 固体分散体 称取芫菁子提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮 （PVP） 按比例 1:2、 1:4、 1:6 的质量比分别放。
33、 入烧杯中， 加入适量的无水乙醇和 Vc， 用磁力搅拌器搅拌至芫菁子提取物和载体完全溶解， 充分混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂， 干燥， 粉碎过 80 目筛， 即得芫菁子有效提取 物 PVP 包合物。 0036 实施例 11 ： 环糊精包合物 将 - 环糊精与 1-5 倍水研匀 , 加芫菁子有效提取物 ( 水难溶性的应先溶于少量有 机溶剂中 ) 继续充分研磨至成糊状物 , 低温干燥即得环糊精包合物。 0037 实施例 12 ： 分散片 1. 芫菁子有效提取物分散体的制备， 精密称取芫菁子提取物、 Vc， 加入处方量的十二烷 基硫酸钠， 用适量的浓度为 70% 乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后， 在 70 的温度下蒸干， 粉碎， 过 100 目筛 ； 2. 将第一步中的芫菁子有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮， 预胶化淀粉， 用适量的浓度为 70% 乙醇做湿润剂， 边加入边搅拌， 制成湿颗粒过 14 目筛， 室温下放置 15min 后， 60烘箱烘干 45min， 16 目筛整粒， 加入处方量的滑石粉和微分硅胶， 混合均匀 后， 压片即得。 说 明 书 CN 106265826 A 10 1/1 页 11 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 106265826 A 11 。