技术领域
本发明涉及一种中药制剂组合物，特别涉及一种治疗高尿酸血症的中药组合物
背景技术
高尿酸血症属于嘌呤代谢紊乱性疾病，由于体内尿酸合成增加或排出减少，导致血尿酸浓度升高，尿酸进一步以钠盐形式沉积在关节、软骨和肾脏中，引起组织炎性反应，临床表现为急性关节炎、痛风石形成、痛风石性慢性关节炎，并可发生尿酸性肾病、尿酸性尿路结石等。从传统医学辨证角度，血尿酸升高是由膏人中满，气血运行不畅，积聚成浊，或进一步流注经络而成，属“尿酸浊”范畴。
近年来,国内外文献报道高尿酸血症与高血压、高脂血症、冠心病、脑卒中、糖尿病等发生率有相关性,而且随着人民生活水平的提高,高尿酸血症的患病率也在上升。为此,重视对高尿酸血症的治疗已引起临床的关注。目前高尿酸血症治疗仍以化学合成药物为主，如苯溴马隆(立加利仙)、丙磺舒、磺吡酮等，但这些药物长期服用副作用均比较大。
现代药理研究显示，威灵仙具有以下作用
1.对心脏和血压的作用狭叶铁线莲(即山蓼，棉团铁线莲)对离体蟾蜍心脏有先抑制后兴奋的作用,浸剂的药效比煎剂大3～5倍.50％的浸剂(1ml/kg)可使麻醉犬的血压下降，肾容积缩小，浸剂的药效为煎剂的2倍.其降压作用似与对心脏的抑制有关.
2.降血糖作用威灵仙浸剂对正常大鼠有显著增强葡萄糖同化的作用(即给予大鼠以大量葡萄糖后，尿糖试验仍为阴性),因此可能有降血糖作用.
3.抗利尿作用狭叶铁线莲制剂对小鼠、大鼠、豚鼠有显著的抗利尿作用.浸剂与煎剂的效果无明显差别.50％煎剂0.2ml与脑垂体后叶素0.1u的抗利尿效果相当，但其作用时间似比脑垂体后叶素为长.
4.对平滑肌的作用狭叶铁线莲煎剂对小鼠、大鼠及家兔的离体肠管有明 显的兴奋作用；但对小鼠离体子宫作用不明显.
5.其他作用在试管内，水浸剂对皮肤真菌有抑制作用.水浸剂对奥杜盎小孢子菌也有抑制作用；煎剂对金黄色葡萄球菌、志贺痢疾杆菌有抑制作用.煎剂腹腔注射能轻度提高小鼠痛阈，提示其有镇痛作用.煎剂对疟原虫有抑制作用.醇提取液对小鼠中期妊娠有引产作用.
秦皮具有以下作用
1.消炎、镇痛作用大鼠腹腔注射马栗树皮甙10mg/kg，对角义菜胶性、右旋糖酐性、5-羟色胺性及组织胺性关节炎有抑制作用，抑制的强度分别为35，28，20，8％。也有报告，马栗树皮甙对甲醛
性关节炎亦有抑制作用，但弱于对角义菜胶性者，而对右旋糖酐性关节炎的抑制不明显。马栗树皮素在大剂量时对角义菜胶性关节炎亦有抑制作用。马栗树皮甙能抑制大鼠的肉芽肿形成(棉球法)，对豚鼠紫外线照射背部引起的红斑反应，也有抑制作用，马栗树皮素之作用较马栗树皮甙更显著，两者都有显著抑制组织胺引起的毛细血管通透性的作用(对Bradykinin引起的，不起作用)，马栗树皮甙还有微弱的镇痛作用(小鼠热板法)，如以吗啡皮下注射5mg/kg的效力作为100％，则马栗树皮甙口服10mg/kg之效价为l4.8％。
2.对尿量及尿酸排泄的影响早年报告秦皮甙有利尿作用，能促进家兔及风湿病患者尿酸的排泄。马栗树皮甙在大鼠及兔的试验中，各种给药途径均可增进尿酸的排泄。在家兔静脉注射马栗树皮甙后，最初半小时内尿量增加，此后血中尿酸浓度即见上升，半小时后尿量即逐渐减少，而尿中尿酸的排泄却不断增加。尿量之增加，仅指给药后短期而言(可能系肾小管重吸收减少所致)，给药3-4小时后，尿量仅为给药前的1/2。尿酸排泄增进之作用原理，据分析，系兴奋了交感神经系统；而且马栗树皮甙对肾脏也有直接作用，即抑制了对尿酸的重吸收所致。血中尿酸浓度之增高为肝中尿酸生成增加的结果。也有报告，马栗树皮甙对正常大鼠并无利尿作用，而对小鼠却有较显著的利尿作用
3.其他作用马栗树皮甙对其他器官的作用一般皆不显著。对兔的血压、呼吸、肠管皆无作用。对豚鼠离体小肠、子宫、膀胱、胆囊及离体蛙心以及对兔在位子宫、兔耳血管、蟾蜍下肢血管亦无作用；亦不影响兔颈动脉、股动脉的血流量。马栗树皮素对兔有轻度升压作用，还能抑制离体蟾蜍心脏及离体兔肠， 轻度收缩蟾蜍下肢血管，离体蟾蜍腓肠肌之兴奋性亦略有降低。秦皮煎剂还有某些抗菌、治疗慢性气管炎的作用。马栗树皮甙的化学结构与双香豆素相似，故有某些抗血凝作用，其4％溶液能吸收紫外线，故能保护皮肤，免受日光照射之损伤。
4.镇咳、祛痰和平喘作用腹腔注射秦皮乙素悬浊液和马栗树皮甙水溶液，对氨水喷雾引咳的小鼠有明显的镇咳作用；秦皮乙素和马栗树皮甙还有明显的祛痰作用.实验证明：秦皮乙素对豚鼠有明显的平喘作用；对豚鼠离体气管有松弛气管平滑肌及对抗组胺的作用.
5.对心血管系统的作用秦皮乙素对离体蟾蜍心脏有抑制作用，而马栗树皮甙则使离体蟾蜍心脏略显兴奋.秦皮乙素和马栗树皮甙给麻醉猫和兔静脉注射，能使之血压轻微上升，升压时对呼吸无明显影响.秦皮乙素对离体兔耳灌流无明显作用，但对蟾蜍下肢血管灌流有血管收缩作用.有报道指出，秦皮乙素对过敏反应释放白三烯(LTS)引起的血管收缩有保护作用.
6.抗病原微生物作用实验表明：秦皮煎剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、福氏痢疾杆菌、宋内痢疾杆菌均有抑制作用.苦枥白蜡树皮的抑菌作用最强，抑菌力和黄连相近.马栗树皮甙对金黄色葡萄球菌、卡他球菌、链球菌、奈瑟双球菌有抑制作用.马栗树皮素对链球菌、奈瑟菌亦能抑制.
秦皮对病毒亦有一定的抑制作用，如抗流感病毒、疱疹病毒等.
7.对尿量和尿酸排泄的影响秦皮甙有利尿作用，能促进兔及风湿病患者尿酸的排泄.大鼠、家兔酚红排泄试验表明：马栗树皮甙和马栗树皮素均有促进尿酸排泄的作用，该作用可能是兴奋了交感神经系统以及对肾脏直接作用，即抑制了肾小管对尿酸的重吸收所致.
8.其他作用秦皮乙素对大鼠肝微粒体过氧化有抑制作用.秦皮乙素(1:2500)对兔离体肠肌和大鼠的离体子宫均有抑制作用，表现为收缩幅度减小，弛缓期延长，频率减少.而七叶树甙对平滑肌的作用不明显.
大黄具有以下作用
对消化系统的影响
(1)泻下作用：
作用表现：一般在服药后6～10小时排出稀便。
泻下有效成分：认为主要是番泻甙类。
泻下作用机理：番泻甙在肠道细菌酶的作用下分解产生大黄酸蒽酮，大黄酸蒽酮可刺激大肠粘膜，使肠蠕动增加而泻下。另外还可抑制肠细胞膜上Na+、K+—ATP酶，阻碍Na+转运，使肠内渗透压升高，保留大量水分，促进肠蠕动而泻下。
(2)利胆、保肝
(3)促进胰液分泌、抑制胰酶活性
(4)抗胃及十二指肠溃疡
对血液系统的影响
(1)止血作用：
特点：作用确切、见效快。
止血有效成分：α-儿茶素、没食子酸。
止血作用机理：促进血小板的粘附和聚集功能；增加血小板数和纤维蛋白原含量；降低抗凝血酶Ⅲ活性；使受伤局部的血管收缩
(2)降血脂：
降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及过氧化脂质。
抗感染作用
(1)抗病原微生物作用：
抗菌谱：
敏感的细菌有葡萄球菌、溶血性链球菌、淋病球菌、白喉杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌等。
敏感的病毒有流感病毒、孤儿病毒、乙肝病毒、脊髓灰质炎病毒等。
其他敏感微生物有阿米巴原虫、阴道滴虫、血吸虫及钩端螺旋体等。
抗菌有效成分：大黄酸、大黄素、芦荟大黄素。
抗菌作用机理：影响叶酸的酶系统；抑制细菌核酸和蛋白质合成；抑制细菌生物氧化酶系统；诱生干扰素。
(2)抗炎、解热作用
(3)免疫调节：蒽醌衍生物可抑制非特异性免疫功能。
(4)抗衰老抗氧化作用，国内外越来越多学者证明，大黄所含鞣质有很 好的抗氧化作用！
黄连具有以下作用
抗病原微生物
抗菌作用金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、脑膜炎双球菌、痢疾杆菌、炭疽杆菌等。
抗病毒作用抑制流感病毒、乙肝病毒等。
抗原虫作用体外抑制阿米巴原虫、阴道滴虫、锥虫。
对心血管系统的影响
一、影响
1、抗心律失常
有效成分 小檗碱。
黄连-中药材饮片作用机理
①延长动作电位时程和有效不应期。
②抑制钠通道，减慢传导，消除折返。
③抑制钙离子内流。
④抗自由基损伤，保护细胞膜。
2、降压作用
有效成分 小檗碱。
作用特点
①舒张压下降明显，脉压差加大。
②无快速耐受现象。
③降压时肢体和内脏容积增加。
作用机理 竞争性阻断α-受体，降低外周阻力，减慢心率。
3、正性肌力作用
有效成分：小檗碱。
作用表现：心脏兴奋、心肌收缩力增强，且强心作用不受利血平、心得安、酚妥拉明和切断迷走神经的影响。
二、作用机理：
1、阻止K+外流。
2、增加细胞内Ca2+浓度。
3、抑制自由基的产生，减少脂质过氧化物对心肌细胞的损伤。
4、降低心肌耗氧量。
解毒作用
对抗细菌毒素，降低金黄色葡萄球菌凝固酶、溶血素效价，降低大肠杆菌的毒力。
抗炎、解热
1、抑制多种实验性炎症，有效成分为小檗碱，抗炎机理与刺激促皮质激素释放有关。
2、解热作用与抑制中枢PO/AH区神经元cAMP的生成有关。
抑制血小板聚集
一、有效成分：小檗碱。
二、作用机理
1、抑制血小板内TXA2的生成。
2、抑制血小板膜释放花生四烯酸，并影响其代谢。
3、抑制外钙内流。
上述各味药物所公开的内容均未包括抗尿酸作用。为此，本发明对上述药物的抗尿酸作用进行了研究，取得了意想不到的技术效果。
目前市场上也出现一些治疗高尿酸血症的中药制剂，但现有药物有些属于治标不治本，有些使用价格昂贵的成分，有些在应用过程中由于疗效不确切而中断使用。而本发明的研究克服了上述缺陷。
发明内容
为了解决上述存在的问题，本发明的目的是提供一种治疗高尿酸血症的中药组合物。
本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法。
本发明的另一个目的是提供该中药组合物在制备治疗高尿酸血症药物上的应用。
本发明的另一个目的是提供一种中药组合物在制备改善或治疗肾脏水液代谢紊乱药物中的应用。
本发明的中药组合物，是用以下重量配比的中药为原料药制备而成：
威灵仙15～60份、秦皮10～50份、大黄4～20份、黄连2～10份。
优选的，本发明所述的中药组合物，是用以下重量配比的中药为原料药制备而成：
威灵仙30～50份、秦皮20～40份、大黄5～10份、黄连3～5份。
最优选的，本发明所述的中药组合物，是用以下重量配比的中药为原料药制备而成：
威灵仙45份、秦皮30份、大黄6份、黄连3份。
以上组成中，各味药的重量是以生药计算的，上述配方组成如果以克为单位可制成的药物制剂为1-3次的服用剂量。
以上组成是按重量作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少，如大规模生产可以以kg为单位，或以t(吨)为单位；小规模制剂也可以以g为单位。重量可以增大或者减小，但各组成之间的生药材重量配比的比例不变。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，如重症或轻症，肥胖或瘦小的病人，可以相应调整组成的量的配比，增加或减少不超过10％，药效基本不变。
本发明的中药组合物，是通过将上述配方组成的中药原料药材经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成的。所述活性物质可以通过分别粉碎或提取中药原料得到，也可以通过共同粉碎或提取中药原料药材得到，也可以通过其他方式得到，如：通过粉碎、压榨、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、层析等方法得到、这些活性物质可以是粉末形式或浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。
本发明的中药组合物，优选的是单位剂量的药物制剂形式，在制成药物制剂时可以制成任何可药用的剂型，这些剂型选自：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、贴剂。优选的是口服制剂形式，最佳优选的是片剂，胶囊剂，颗粒剂。
本发明的中药组合物，根据需要可以加入一些药物可接受的载体，可以采用制剂学常规技术制备该药物制剂，如将药物活性物质与药物可接受的载体混合。所述药物可接受的的载体选自：甘露醇、山梨醇、山梨酸或钾盐、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素A、维生素C、维生素E、维生素D、氮酮、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、土温60-80、司班-80、蜂蜡、羊毛脂、液体石蜡、十六醇、没食子酸酯类、琼脂、三乙醇胺、碱性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β－环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的中药组合物，在制成药剂时，单位剂量的药剂可含有本发明的药物活性物质0.1-1000mg，其余为药学上可接受的载体。药学上可接受的载体以重量计可以是制剂总重量的0.1-99.9％。
本发明的中药组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量。
本发明的中药组合物可以采用以下方法制备：
全方水提法：将药材威灵仙、秦皮、大黄和黄连加5～15倍其重量的水，回流提取1～3次，每次0.5～2小时；合并提取液，静置，滤过，减压，干燥，得药物活性物质；
或
水提醇沉法：将药材威灵仙、秦皮、大黄和黄连加5～15倍其重量的水，回流提取1～3次，每次0.5～2小时；合并提取液，加入70～95％乙醇醇沉至50～70％，静置8-24小时，上清液浓缩成稠浸膏，干燥得药物活性物质；
或
全方醇提法：将威灵仙、秦皮、酒大黄、黄连四味药材加入70～95％乙醇6-10倍量，加热回流提取1～3次,每次1～3小时，合并提取液，减压浓缩成稠浸膏，干燥得药物活性物质。
优选包括如下步骤：
全方水提法：将药材威灵仙、秦皮、大黄和黄连加8倍重量的水，回流提取2，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，即为药物活性物质；
或水提醇沉法：将药材威灵仙、秦皮、大黄和黄连加8倍重量的水，回流提取2次，每次1小时，合并提取液，提取液浓缩至1.15～1.20，加入95％乙醇醇沉至60％，静置12小时，吸取上清液，上清液浓缩成稠浸膏，干燥得药物活性物质；
或全方醇提法：将威灵仙、秦皮、酒大黄、黄连四味药材加入70％乙醇8倍量，加热回流提取3次,每次1小时，合并提取液，70℃以下真空减压浓缩成稠浸膏，干燥得药物活性物质。
为了有更好的药效，本发明的药物活性物质的制备方法优选全方水提法或水提醇沉法。
以下通过实验数据说明本发明的有益效果：
一、对高嘌呤饲料饲喂致高尿酸血症模型大鼠的作用
1、材料和仪器
1.1 动物：SD大鼠80只，雄性，体重180‐220g，由浙江省医学科学院提供，实验动物饲养许可证号：SCXK(浙)20080033。
1.2 药物及配制
1.2.1 高尿酸血症方及药物
(1)高尿酸血症方：威灵仙45kg、秦皮30kg、酒大黄6kg、黄连3kg备用。
全方水提物(2.2g/kg)：威灵仙、秦皮、酒大黄、黄连四味药材加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣再加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，合并三次提取液，70℃以下真空减压浓缩成稠浸膏，减压真空干燥得提取物。水提醇沉物(1.1g/kg)：威灵仙、秦皮、酒大黄、黄连四味药材加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，合并三次提取液，70℃以下真空减压浓缩至药液比重为1.20，加95％乙醇醇沉至60％，静置12小时，吸取取上清液，上清液70℃以下真空减压浓缩成稠浸膏，真空减压干燥得提取物。
全方醇提物(1.5g/kg)：威灵仙、秦皮、酒大黄、黄连四味药材加70％乙醇8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣再加70％乙醇8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣加70％乙醇8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，合并三次提取液，70℃以下真空减压浓缩成稠浸膏，浸膏减压真空干燥得提取物。
拆方试验物(1.3g/kg)：威灵仙加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，备用，药渣加水8倍量，加热回流提取1小时，提取液过滤，合并三次提取液，70℃以下真空减压浓缩成稠浸膏，真空减压干燥得提取物。
(2)药物
酵母膏：批号120628，上海源聚生物科技有限公司。
腺嘌呤：批号12063，上海源聚生物科技有限公司。
别嘌醇片：批号20120907，江苏方强制药厂有限责任公司。
苯溴马隆片：批号1108867，德国赫曼大药厂。
羧甲基纤维素钠：批号20090222，成都市科龙化工试剂厂。
氯化钠：批号081001，上海试四赫维化工有限公司。
1.2.2 受试药的配制
取全方水提物、水提醇沉物、全方醇提物、拆方试验物原液，加水分别配制为浓度0.224g/ml、0.112g/ml、0.154g/ml、0.134g/ml的药液。
1.2.3 造模药的配制
将酵母膏、腺嘌呤分别以10％和0.1％的含量均匀拌入粉碎的大鼠颗粒饲料中，重新压粒成型即为高嘌呤饲料。
1.2.4 阳性药配制
准确称取羧甲基纤维素钠(CMC‐Na)粉末，用生理盐水配成8g/L混悬液。取苯溴马隆片，准确称取重量，研钵细研，用8g/L CMC‐Na配制成浓度0.5mg/ml的混悬液备用。取别嘌醇片，准确称取重量，研钵细研，用8g/L CMC‐Na配制成浓度1.0mg/ml的混悬液备用。
1.3 试剂及仪器
1.3.1 试剂
尿酸(UA)试剂盒，批号20120912、20121026；尿素氮(BUN)试剂盒， 批号20120829、20121024；肌酐(Cr)试剂盒，批号20121022；以上试剂盒由宁波美康生物科技股份有限公司提供。
肌酐(Cr)试剂盒，批号D1101063；总蛋白(TP)试剂盒，批号L1105013；白蛋白(ALB)试剂盒，批号L1107023；黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒，批号20120922、20121019、20121123；腺苷脱氨酶(ADA)试剂盒，批号20120828、20121105、20121112、20121123，以上试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.3.2 仪器
JY10001型电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；TBA‐40FR全自动生化分析仪；PowerWave340酶标仪，美国Bio‐TEK公司；Microc117离心机：Thermo；H‐11041170电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；WH‐861混合器，太仓市科教器材厂；KQ‐500DE型数控超声波清洁器，昆山市超声仪器有限公司；
CM‐230纯水系统，杭州市洁达净化科技有限公司。
2、试验方法
2.1 动物及分组
SD大鼠，体重180g～220g。适应性喂养7天后，眼眶取血，离心取上清液，测定血清中UA，按UA分为8组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组(苯溴马隆片、别嘌醇片)、全方水提组(2.2g/kg)、水提醇沉组(1.1g/kg)、全方醇提组(1.5g/kg)、拆方试验组(1.3g/kg)。
2.2 造模
除正常组外，其余各组每天给予含酵母膏和腺嘌呤的饲料，连续饲喂11周。2.3 给药
高尿酸血症方样品均按1ml/100g灌胃给药，正常对照组、模型对照组均灌胃给予相应体积的水，阳性对照药按人体规定剂量的6倍灌胃给药，每日一次，连续给药11周。
2.4 统计学处理
计量资料数据结果以表示，组间差异采用t‐test。
3、指标
3.1 行为学指标
日常观察大鼠一般体征(毛色、精神状态)，每3天称重一次，记录体重变化情况。
3.2 生化指标
给药第3、6、9、11周，眼眶取血，分离血清，3500转/min离心10min；全自动生化分析仪测定血清UA、Cr、TP、ALB、BUN。试剂盒测定血清XOD、ADA；给药第3、11周，所有动物上代谢笼，收集24h尿液，测定尿量和UA含量，并计算24h尿酸排泄总量及尿酸清除率。
4、结果
4.1 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清UA水平的影响
与正常对照组相比，模型组大鼠在造模第6周血清UA开始显著升高(p<0.01)，第9、11周血清UA持续显著升高(p<0.01)；与模型对照组相比，全方水提组(2.2g/kg)大鼠、水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠、全方醇提组(1.5g/kg)大鼠在给药第9周血清UA显著降低(p<0.01)，在给药第11周全方水提组(2.2g/kg)大鼠、水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠、全方醇提组(1.5g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠血清UA显著降低(p<0.05)。结果见表1。
表1 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清UA(μmol/l)水平的影响(ˉn＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.2 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠Cr的影响
统计学上，各组间没有显著性差异。结果见表2。
表2 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清Cr(μmol/l)的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.3 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠BUN的影响
与正常对照组相比，模型组大鼠在造模第6周血清BUN显著升高(p<0.05)；与模型对照组相比，全方醇提组(1.5g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠在给药第3、9周血清BUN显著降低(p<0.05)。结果见表3。
表3 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清BUN(mmol/L)的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.4 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠ALB的影响
与正常对照组相比，模型组大鼠在造模第6周血清ALB开始显著降低 (p<0.05)；与模型对照组相比，全方水提组(2.2g/kg)大鼠、水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠、全方醇提组(1.5g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠在给药第3周血清ALB显著升高(p<0.05)；水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠、全方醇提组(1.5g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠在给药第6周血清ALB显著升高(p<0.05)。结果见表4。
表4 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清ALB(g/l)的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.5 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠TP的影响
与正常对照组相比，模型组大鼠在造模第6、11周血清TP开始显著降低(p<0.05)；与模型对照组相比，水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠在给药第6、11周血清TP显著升高(p<0.05)。结果见表5。
表5 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清TP(g/l)的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.6 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠XOD的影响
与正常对照组相比，模型组大鼠在造模第3、6、9、11周血清XOD开始显著升高(p<0.01)；与模型对照组相比，全方醇提组(1.5g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠在给药第6周血清XOD显著降低(p<0.05)；全方水提组(2.2g/kg)大鼠、水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠在给药第9周血清XOD显著降低(p<0.05)；全方水提组(2.2g/kg)大鼠、水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠、全方醇提组(1.5g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠在给药第11周血清XOD显著降低(p<0.01)。结果见表6。
表6 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清XOD(U/L)的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.7 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠ADA的影响
与正常对照组相比，模型组大鼠在造模第3、6、9、11周血清ADA开始显 著升高(p<0.01)；与模型对照组相比，全方水提组(2.2g/kg)大鼠、水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠、全方醇提组(1.5g/kg)大鼠、拆方试验组(1.3g/kg)大鼠在给药第9、11周血清ADA显著降低(p<0.05)。结果见表7。
表7 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清ADA(U/ml)的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.8 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠尿酸清除率的影响
与模型对照组相比，全方水提组(2.2g/kg)大鼠、水提醇沉组(1.1g/kg)大鼠在给药第11周尿酸清除率显著升高(p<0.05)。结果见表8。
表8 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠尿酸清除率(ml/min)的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
5、分析与讨论
5.1 血清UA
尿酸作为嘌呤代谢的最终产物，是高尿酸血症的主要指标。本实验研究结果显示，全方水提组(2.2g/kg)、水提醇沉组(1.1g/kg)、全方醇提组(1.5g/kg)、拆方试验组(1.3g/kg)均有一定的降低高嘌呤饲料喂养致高尿酸血症模型大鼠血尿酸含量，提示全方水提物(2.2g/kg)、水提醇沉物(1.1g/kg)、全方醇提物(1.5g/kg)、拆方试验物(1.3g/kg)均有降尿酸作用，且全方水提物起效快，降尿酸作用优于其他。
5.2 血清Cr、BUN
高尿酸血症标志着肾脏水液代谢紊乱。本实验研究结果显示，虽然血肌酐在统计学上无明显差异，但从数值上可以看出全方水提组(2.2g/kg)、水提醇沉组(1.1g/kg)有一定的升高血清肌酐含量作用，全方醇提组(1.5g/kg)、拆方试验组(1.3g/kg)有一定的降低血清肌酐含量作用，血肌酐的微幅上升可能与全方水提物、水提醇沉物促进肌酸通过不可逆的非酶脱水反应缓缓形成肌酐，再释放到血液，部分最终随尿排出体外有关；全方醇提组(2.2g/kg)、拆方试验组(1.3g/kg)均有不同程度的降低血清BUN含量，虽然全方水提组(2.2g/kg)、水提醇沉组(1.1g/kg)在统计学上无明显差异，但从结果中可以看出有一定的降低血清BUN含量的作用，提示全方水提物(2.2g/kg)、水提醇沉物(1.1g/kg)、全方醇提物(1.5g/kg)、拆方试验物(1.3g/kg)在降低模型大鼠血清UA水平时，能有一定的改善肾脏水液代谢紊乱，对肾功能具有一定的保护作用。
5.3 血清XOD、ADA：XOD(黄嘌呤氧化酶)是一种专一性不高，既能催化次黄嘌呤生产黄嘌呤，进而生成尿酸，又能直接催化黄嘌呤生成尿酸的酶。ADA(腺苷脱氨酶)是嘌呤核苷酸代谢中重要的酶类，属于巯基酶，能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。本实验研究结果显示，全方水提组(2.2g/kg)、水提醇沉组(1.1g/kg)、全方醇提组(1.5g/kg)、拆方试验组(1.3g/kg)均能一定程度的降低血清XOD、ADA水平，提示全方水提物(8.4g/kg)、水提醇沉物(1.1g/kg)、全方醇提物(1.5 g/kg)、拆方试验物(1.3g/kg)的降尿酸机制可能与抑制血清XOD、ADA活性有关。
5.4 尿酸清除率
本实验结果显示，全方水提组(2.2g/kg)、水提醇沉组(1.1g/kg)能显著升高尿酸清除率，提示全方水提物(2.2g/kg)、水提醇沉物(1.1g/kg)的降尿酸机制可能与促进尿酸排泄有关。
6、小结
本实验结果表明，全方水提物(2.2g/kg)、水提醇沉物(1.1g/kg)、全方醇提物(1.5g/kg)、拆方试验物(1.3g/kg)对高嘌呤饲料饲喂致高尿酸血症模型大鼠均有一定的降尿酸作用，且全方水提物和水提醇沉组起效快，降尿酸作用优于其他。在降低模型大鼠血清UA水平同时，能有一定的改善肾脏水液代谢紊乱，对肾功能具有一定的保护作用。其降尿酸机制可能与抑制血清XOD、ADA活性和促进尿酸排泄有关。
二、对饮酒后灌胃脂肪乳剂致高尿酸血症模型大鼠的作用
1、材料和仪器
1.1 动物
SD大鼠100只，雄性，体重180‐220g，由浙江省医学科学院提供，实验动物饲养许可证号：SCXK(浙)20080033。
1.2 药物及配制
1.2.1 造模药的配制
把(红星二锅头、北京二锅头)白酒配成酒精浓度为5％、10％、12％、14％、16％、18％、19％、20％、21％、22％。
脂肪乳剂的配制：将250g猪油置于1L烧杯中并在电炉上加热融化，加入40g胆固醇并使之溶化，再加入100g胆固醇和10g丙基硫氧嘧啶片，充分搅匀，然后放入250mL吐温‐80制成油相；同时在另一烧杯中加入300mL蒸馏水和200mL丙二醇，放在电炉上加热至60℃，然后加入20g去氧胆酸钠，充分搅拌直至完全溶解至水相，然后水相加入油相，充分混匀后用蒸馏水稀释至2L制成。
1.2.2 高尿酸血症方
全方水提物(2.2g/kg)、水提醇沉物(1.1g/kg)、全方醇提物(1.5g/kg)、 拆方试验物(1.3g/kg)，以上药物由天津天士力制药股份有限公司提供。取全方水提物、水提醇沉物、全方醇提物、拆方试验物原液，加水分别配制为浓度0.224g/ml、0.112g/ml、0.154g/ml、0.134g/ml的药液。
1.2.3 阳性药配制
别嘌醇片：批号20120907，江苏方强制药厂有限责任公司。苯溴马隆片：批号1202498，德国赫曼大药厂。羧甲基纤维素钠：批号20090222，成都市科龙化工试剂厂。准确称取羧甲基纤维素钠(CMC‐Na)粉末，用蒸馏水配成3g/L混悬液。取苯溴马隆片，准确称取重量，研钵细研，用3g/L CMC‐Na配制成浓度0.5mg/ml的混悬液备用。取别嘌醇片，准确称取重量，研钵细研，用3g/L CMC‐Na配制成浓度1.0mg/ml的混悬液备用。
1.3 试剂及仪器
1.3.1 试剂
尿酸(UA)试剂盒，批号20121126、20130222、20130415、20130423、20130424、20130510、20130608、；尿素氮(BUN)试剂盒，批号20121212、20130122、20130321、20130508、20130613、20130712、20130805；肌酐(Cr)试剂盒，批号20121022、20130402、20130418；丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒，批号20121101、20130423、20130517、20130710、20130712；天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒，批号20121120、20121212、20130412、20130514、20130608、20130710以上试剂盒由宁波美康生物科技股份有限公司提供。
黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒，批号20121123、20130304、20130401、20130607、20130810；腺苷脱氨酶(ADA)试剂盒，批号20121112、20121123、20130305、20130401、20130614，以上试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.3.2 仪器
JY10001型电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；TBA‐40FR全自动生化分析仪；PowerWave340酶标仪，美国Bio‐TEK公司；Microc117离心机：Thermo；H‐11041170电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；WH‐861混合器，太仓市科教器材厂；KQ‐500DE型数控超声波清洁器，昆山市超声仪器有限公司；CM‐230纯水系统，杭州市洁达净化科技有限公司。
2、试验方法
2.1 动物及分组
SD大鼠，体重180g～220g。适应性喂养7天后，眼眶取血，离心取上清液，测定血清中UA，按UA分为8组：正常对照组、造模组(7组)；第27周眼眶取血，离心取上清液，测定血清中UA，按UA分为8组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组(苯溴马隆片、别嘌醇片)、全方水提组(2.2g/kg)、水提醇沉组(1.1g/kg)、全方醇提组(1.5g/kg)、拆方试验组(1.3g/kg)。
2.2 造模
除正常组外，其余各组每天先随意饮酒体积浓度为5％的酒精3d，第4d换成10％，每隔1周增加2％，直到18％；然后每周增加1％，直到22％酒精；从饮用22％酒精开始，持续饮用；共造模23周。第24周开始，正常饲料饲喂，自由饮水；除正常组外，其余各组灌予脂肪乳剂(1mL/100g)。
2.3 统计学处理
计量资料数据结果以表示，组间差异采用t‐test。
3、指标
3.1 行为学指标
日常观察大鼠一般体征(毛色、精神状态)，造模期间每7天称重一次，给药时每3天称重一次，记录体重变化情况。
3.2 生化指标
造模0、9、11、14、16、18、20、23、27、31、33周后，眼眶取血，分离血清，3500转/min离心10min；全自动生化分析仪测定血清UA、Cr、BUN、AST、ALT。试剂盒测定血清XOD、ADA。
4、结果
4.1 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清UA水平的影响
前27周，与正常组相比，造模组血清UA值没有显著差异。第27周，与正常组相比，造模组血清UA值显著升高(P<0.01)。第31周，与正常组相比，模型组血清UA值显著升高(P<0.01)；与模型组相比，全方水提组血清UA值显著降低(P<0.05)。第33周，与正常组相比，模型组血清UA值显著升高(P<0.01)；与模型组相比，全方水提组、水提醇沉组血清UA值显著降低(P<0.01)。结果见表9。
表12 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清XOD的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.5 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠ADA的影响
前27周，与正常组相比，造模组血清ADA值没有显著差异。第27周，与正常组相比，造模组血清ADA值显著升高(P<0.05～0.01)。第33周，与正常组相比，模型组血清ADA值显著升高(P<0.01)；与模型组相比，全方水提组、水提醇沉组血清ADA值显著降低(P<0.05～0.01)。结果见表13。
表13 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清ADA的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.6 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠ALT的影响
与正常组相比，第16周，造模组血清ALT显著升高(P<0.05～0.01)；第27周，全方水提组血清ALT显著升高(P<0.05)。其他无显著差异。结果见表14。
表14 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清ALT的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
4.7 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠AST的影响
与正常组相比，造模组无显著差异。结果见表15。
表15 高尿酸血症方对高尿酸血症大鼠血清AST的影响(n＝10)
与正常对照组比较：△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较：*P<0.05，**P<0.01
5、讨论与分析
前23周，酒饮造模，造模组血尿酸变化不稳定，造模未成功。Cr和BUN、ALT升高显著，表明肝肾功能开始有所损伤。
第24周开始脂肪乳剂灌胃造模(除正常组外)，第27周发现加灌脂肪乳剂可以使模型组大鼠血清UA、CR、BUN显著升高，高尿酸血症模型造模成功；第27周开始给药，给药4周，全方水提物能显著降低血清UA水平，对CR、BUN无显著差异。给药6周，全方水提物能显著降低血清UA、CR水平和XOD、ADA活性，有降低BUN的趋势；水提醇沉物能显著降低血清UA、CR、BUN水平和XOD、ADA活性；全方醇提物能显著降低血清XOD活性；拆方试验物能显著降低血清BUN水平和XOD活性。
6、小结
本实验结果表明，全方水提物(2.2g/kg)、水提醇沉物(1.1g/kg)对酒饮加脂肪乳剂灌胃给药致高尿酸血症模型大鼠均有一定的降尿酸作用，其降尿酸机制可能与抑制血清XOD、ADA活性有关。
本试验例仅是阐述本发明的组合物的药效作用，并不具有限制作用。本发明权利要求范围内的中药组合物都具有同试验例中药组合物相同的药效结果。
具体实施方式
实施例1 本发明颗粒剂的制备
威灵仙45重量份 秦皮30重量份 酒大黄6重量份 黄连3重量份
上述药材加8倍其重量的水，回流提取2次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取上述提取物干粉，混合均匀，加入糊精、矫味剂等辅料制成颗粒剂。
实施例2 本发明片剂的制备
威灵仙45重量份 秦皮30重量份 酒大黄6重量份 黄连3重量份
上述药材加10倍其重量的水，回流提取2次，每次0.5小时；合并提取液，静 置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取上述提取物干粉，混合均匀，加入淀粉及羧甲基淀粉钠或其它崩解剂制成片剂。
实施例3 本发明药物浓缩丸的制备
威灵仙45重量份 秦皮30重量份 酒大黄6重量份 黄连3重量份
上述药材加8倍其重量的水，回流提取2次，每次2小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取上述提取物干粉，混合均匀，加入微晶纤维素制成浓缩丸。
实施例4 本发明胶囊剂的制备
威灵仙45重量份 秦皮30重量份 酒大黄6重量份 黄连3重量份
上述药材加8倍其重量的水，回流提取3次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取上述提取物干粉，混合均匀，加入微晶纤维素、崩解剂制粒，将颗粒装入胶囊。
实施例5 本发明胶囊剂的制备
威灵仙15重量份 秦皮10重量份/酒大黄4重量份 黄连2重量份
上述药材加12倍其重量的水，回流提取2次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，取上述提取物浓缩浸膏，将微晶纤维素作为底料，浓缩液浸膏为浆料，流化床一步制粒，整粒，将颗粒装入胶囊。
实施例6 本发明药物片剂的制备
威灵仙22.5重量份 秦皮15重量份 酒大黄10重量份 黄连5重量份
上述药材加10倍其重量的水，回流提取2次，每次2小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，取上述提取物浓缩浸膏，将可压式淀粉作为底料，浓缩液浸膏为浆料，流化床一步制粒，整粒，加入崩解剂、娇味剂混合均匀，制成片剂。
实施例7 本发明药物浓缩丸的制备
威灵仙45重量份 秦皮30重量份 酒大黄6重量份 黄连3重量份
上述药材加15倍其重量的水，回流提取2次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取提取物干粉，混合均匀，加入微晶纤维素制成浓缩丸。
实施例8 本发明颗粒剂的制备
威灵仙60重量份 秦皮50重量份 酒大黄20重量份 黄连10重量份
上述药材加5倍其重量的水，回流提取3次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取提取物干粉，加入糊精适量，混合均匀，制成颗粒剂。
实施例9 本发明颗粒剂的制备
威灵仙28重量份 秦皮14重量份 酒大黄18重量份黄连8重量份
上述药材加8倍其重量的水，回流提取3次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩至相对密度1.15～1.20，加入95％乙醇，醇沉至50％，静置12小时以上，吸取上清液，减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取提取物干粉，加入糊精适量，混合均匀，制成颗粒剂。
实施例10 本发明颗粒剂的制备
威灵仙30重量份 秦皮40重量份 酒大黄5重量份 黄连6重量份
上述药材加5倍其重量的水，回流提取3次，每次0.5小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩至相对密度1.15～1.20，加入95％乙醇，醇沉至60％，静置12小时以上，吸取上清液，减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取提取物干粉，加入糊精适量，混合均匀，制成颗粒剂。
实施例11 本发明胶囊剂的制备
威灵仙20重量份 秦皮20重量份 酒大黄10重量份 黄连2重量份
上述药材加12倍其重量的水，回流提取2次，每次2小时；合并提取液，滤过，真空减压浓缩至相对密度1.15～1.20，加入95％乙醇，醇沉至60％，静置12 小时以上，吸取上清液，减压浓缩得提取物浸膏，加入微晶适量，流化床一步制粒，整粒，将颗粒装入胶囊，制成胶囊。
实施例12 本发明颗粒剂的制备
威灵仙45重量份 秦皮10重量份 酒大黄14重量份 黄连10重量份
上述药材加15倍其重量的水，回流提取2次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取提取物干粉，加入糊精适量，混合均匀，制成颗粒剂。
实施例13 本发明颗粒剂的制备
威灵仙45重量份 秦皮30重量份 酒大黄6重量份 黄连3重量份
上述药材加15倍其重量的水，回流提取2次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取提取物干粉，加入糊精适量，混合均匀，制成颗粒剂。
实施例14 本发明颗粒剂的制备
威灵仙50重量份 秦皮40重量份 酒大黄10重量份 黄连5重量份
上述药材加8倍其重量的水，回流提取3次，每次1小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩至相对密度1.15-1.20，加入95％乙醇，醇沉至50％，静置12小时以上，吸取上清液，减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。
取上述提取物干粉，混合均匀，加入糊精、矫味剂等辅料制成颗粒剂。
实施例15 本发明颗粒剂的制备
威灵仙30份、秦皮20份、大黄5份、黄连3份。
上述药材加5倍其重量的水，回流提取3次，每次0.5小时；合并提取液，静置，滤过，真空减压浓缩至相对密度1.15～1.20，加入95％乙醇，醇沉至60％，静置12小时以上，吸取上清液，减压浓缩，干燥，干膏粉碎过80目筛，得提取物。