《一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制备方法.pdf（6页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810100520.8 (22)申请日 2018.02.01 (71)申请人 江苏大学 地址 212013 江苏省镇江市京口区学府路 301号 (72)发明人 张海晖 段玉清 陈梦 张继贤 罗孝平 张迪 任晓锋 (51)Int.Cl. A61K 31/715(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A23L 33/125(2016.01) C08B 37/00(2006.01) (54)发明名称 一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物 及其制备方法 (57)摘。
2、要 本发明公开一种预防化学性肝损伤的慈姑 多糖组合物及其制备方法， 涉及医药和农产品加 工技术领域。 该组合物是由慈姑多糖和辅料成分 组成， 其中慈姑多糖质量分数10-50， 辅助成分的 质量分数分别为糊精5-10、 淀粉5-20、 蜂蜡1-5、 十二烷基硫酸1-5， 依照上述比例配制而成， 并根 据需要制成粉剂、 胶囊、 片剂和颗粒剂等口服制 剂。 本发明通过生物追踪法明确了慈姑预防化学 性肝损伤的有效部位和成分， 为慈姑资源精准开 发预防化学性肝损伤的药物或营养保健产品提 供新资源。 本发明提供了预防化学性肝损伤的慈 姑多糖组合物的制备方法， 该组合物以功能明确 的慈姑多糖为主， 加入部分。
3、辅料制备而成、 操作 过程简单、 易于工业化放大。 权利要求书1页 说明书4页 CN 108434171 A 2018.08.24 CN 108434171 A 1.一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物， 其特征在于其由下列质量份数的原料组 成： 2.根据权利要求1所述的一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法， 其特 征在于按照下述步骤进行： (1)慈姑多糖的制备 慈姑预处理： 将新鲜慈姑除杂、 清洗、 切片后， 备用； 打浆： 切片后立即加入质量体积比1:10(g:mL)的水打浆， 打浆液过60目工业滤布； 亚临界水萃取： 将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜， 控制磁耦合搅拌器300-。
4、600 转/min， 萃取压力1-12MPa， 温度100-180， 萃取10-30min， 结束后， 离心， 收集上清液， 即为 慈姑亚临界水萃取液； 浓缩： 将经过得到的慈姑液浓缩至原体积的1/2； 醇沉： 向浓缩液加入其4倍体积的95乙醇， 静置24h后， 离心分离沉淀； 富集/分离： 将沉淀复溶后， 上已经平衡好的DEAE-52纤维素， 以去离子水为洗脱液， 收集水洗的部分， 经加压浓缩得到浓缩液； 干燥： 将浓缩液干燥后， 即为慈姑多糖； (2)组合物的制备 组合物中慈姑多糖质量分数10-50， 辅助成分的质量分数分别为糊精5-10、 淀粉5-20、 蜂蜡1-5、 十二烷基硫酸1-5。
5、， 依照上述比例配制而成。 3.根据权利要求2所述的一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法， 其特 征在于亚临界水萃取条件为： 将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜， 控制磁耦合搅拌器 300-600转/min， 萃取压力1-12MPa， 温度100-180， 萃取10-30min， 结束后， 离心， 收集上清 液， 即为慈姑亚临界水萃取液。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108434171 A 2 一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于农产品加工技术领域， 具体涉及一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组 合物及其制备方法。 背景技术 000。
6、2 慈姑(Sagittaria sagittifolia Linm)， 又名茨菰、 茨菇， 为泽泻科慈姑属多年生 宿根浅水草本植物。 我国是慈姑的原产地， 以南方水乡为主， 且多以栽培居多， 尤其以江苏 省扬州市宝应县慈姑种植面积大， 品质好， 素有 “中国慈姑之乡” 的美誉， 并作为国家地理标 志产品。 慈姑的可食球茎富含淀粉、 蛋白质和多种维生素， 膳食纤维、 生物碱、 多酚以及铁、 钙、 锌等多种人体所需的微量元素， 其平均营养价值均高于莲藕、 菱白及菱角等水生蔬菜的 平均营养价值， 被认为是无公害绿色保健食品中的上等珍品。 慈姑即是营养价值颇高的美 味佳肴。 现代药理学研究表明， 慈姑。
7、具有抗氧化、 解毒、 降血糖、 抗肿瘤等多种功效， 同时对 镉、 异烟肼、 利福平诱导的肝损伤具有保护作用。 0003 吴小南等报道预先给予慈菇汁可降低镉和CCl4致急、 慢性肝损伤(中国公共卫生， 2002， 18:1312-1313； 中国公共卫生， 1999， 15:16-18)。 陆祖福和吴小南等报道慈菇汁对镉 致大鼠肝脂质过氧化反应具有拮抗作用(中国公共卫生学报1999， 18:348-350； 中国公共卫 生2002， 18： 388-389； 福建医科大学学报， 2001， 35： 116-118)。 廖艳等报道慈菇汁对异烟肼 和利福平合用致大鼠肝损伤具有保护作用(北京中医药大学。
8、学报， 2012， 35:761-764)。 从以 上研究表明， 慈姑汁中含有预防和治疗化学性或药物肝损伤的有效成分， 但上述报道所用 慈姑汁均是将慈姑风干后， 按重量比1:1加蒸馏水于磨浆机中磨碎， 压滤后制得的慈姑汁， 实际上是冷水短时浸提得到的慈姑水提液， 此慈姑液中含有一定量的营养成分和活性物 质， 也含有对肝损伤有预防或治疗作用的有效成分， 但现有文献均未继续跟踪慈姑具有预 防化学性肝损伤作用的有效成分。 本发明通过生物追踪法确定了慈姑中预防化学性肝损伤 的有效部位和成分， 并将其制备成组合物加以利用。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制。
9、备方法， 为 预防化学性肝损伤提供新的药物资源， 同时也解决慈姑预防或治疗化学性肝损伤的有效部 位和成分不明确的问题。 0005 一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物， 其由下列质量份数的原料组成： 0006 0007 说 明 书 1/4 页 3 CN 108434171 A 3 0008 上述一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法， 按照下述步骤进行： 0009 (1)慈姑多糖的制备 0010 慈姑预处理： 将新鲜慈姑除杂、 清洗、 切片后， 备用。 0011 打浆： 切片后立即加入质量体积比1:10(g:mL)的水打浆， 打浆液过60目工业滤 布。 0012 亚临界水萃取： 将过滤。
10、液经压力泵注入亚临界萃取釜， 控制磁耦合搅拌器300- 600转/min， 萃取压力1-12MPa， 温度100-180， 萃取10-30min， 结束后， 离心， 收集上清液， 即为慈姑亚临界水萃取液。 0013 浓缩： 将经过得到的慈姑液浓缩至原体积的1/2。 0014 醇沉： 向浓缩液加入其4倍体积的95乙醇， 静置24h后， 离心分离沉淀。 0015 富集/分离： 将沉淀复溶后， 上已经平衡好的DEAE-52纤维素， 以去离子水为洗脱 液， 收集水洗的部分， 经加压浓缩得到浓缩液。 0016 干燥： 将浓缩液干燥后， 即为慈姑多糖。 0017 (2)组合物的制备 0018 组合物中慈姑。
11、多糖质量分数10-50， 辅助成分的质量分数分别为糊精5-10、 淀粉5- 20、 蜂蜡1-5、 十二烷基硫酸1-5， 依照上述比例配制而成， 并根据需要制成粉剂、 胶囊、 片剂 和颗粒剂等口服制剂。 0019 本发明的有益效果： 0020 (1)本发明通过生物追踪法明确了慈姑预防化学性肝损伤的有效部位和成分， 为 慈姑资源精准开发预防化学性肝损伤的药物或营养保健产品提供新资源。 0021 (2)本发明提供了预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法， 该组合物以 功能明确的慈姑多糖为主， 加入部分辅料制备而成、 操作过程简单、 易于工业化放大。 0022 (3)本发明制得的预防化学性肝损伤的。
12、组合物粉末， 可以直接加入医学上可接受 的辅料或辅助成分制成粉剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊等等口服制剂， 能满足不同人群需求。 具体实施方式 0023 为使本发明的上述目的、 特征和优点能够更加明显易懂， 下面通过本发明的具体 实施方式做详细的说明。 在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明， 但 是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施， 本领域技术人员可以在不违 背本发明内涵的情况下做类似推广， 因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。 0024 本专利慈姑多糖组合物对CCl4或酒精致肝细胞损伤的预防作用均使用人肝癌细 胞HepG2为细胞模型， 该细胞购自北京中科。
13、院生物化学和细胞生物学研究所， HepG2细胞培 养于含10灭活新生牛血清DMEM培养液中， 置于37， 5CO2， 饱和湿度的培养箱中培养， 细胞贴壁生长， 每2-3d传代1次。 实验用CCl4溶于0.5二甲基亚砜(DMSO)溶液中， 配置成 24mM的CCl4溶液， 酒精用完全培养液配成终浓度2.4的酒精液。 组合物预防作用研究的方 法如下： 0025 将对数生长期的HepG2细胞按1104个/孔接种于96孔板， 于37、 5CO2培养箱中 孵育24h， 预先用终浓度为300 g/mL的组合物孵育4h后， 再用终浓度24mM CCl4处理细胞12h 或终浓度2.4的乙醇溶液处理细胞12h，。
14、 结束后， 吸除培养液， 用PBS清洗2次， 每孔加入100 说 明 书 2/4 页 4 CN 108434171 A 4 L MTT(1mg/mL)， 继续培养4h， 去上清液， 每孔加入150 L DMSO， 充分振荡10min， 用酶标仪 在490nm处测定吸光度值， 计算细胞存活率， 其存活率()(给药组吸光度值/对照组吸光 度值)100。 0026 实施例1 0027 慈姑多糖的制备： 将新鲜慈姑除杂、 清洗、 切片后， 立即加入质量体积比1:10(g: mL)的水打浆， 打浆液过60目工业滤布； 将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜中， 控制磁耦 合搅拌器300转/min， 萃取压力1。
15、MPa， 温度100， 萃取10min， 结束后， 离心， 收集上清液； 将 上清液浓缩至原体积的1/2； 向浓缩液中加入其4倍体积的95乙醇， 静置24h后， 离心分离 沉淀； 将沉淀复溶后， 上已经平衡好的DEAE-52纤维素， 以去离子水为洗脱液， 收集水洗的部 分， 浓缩后干燥， 即为慈姑多糖， 得率为10.57， 其中多糖含量80.13， 蛋白含量2.54。 0028 组合物的制备： 组合物中慈姑多糖质量分数10， 辅助成分的质量分数分别为糊精 10、 淀粉20、 蜂蜡5、 十二烷基硫酸5， 直接制成粉剂或胶囊， 或者以水为溶剂制成片剂和颗粒 剂等口服制剂。 该组合物对CCl4和酒精。
16、致肝细胞损伤的预防作用效果见表1。 0029 实施例2 0030 慈姑前处理方法同实施例1， 将得到过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜， 控制磁耦 合搅拌器400转/min， 萃取压力5MPa， 温度140， 萃取20min， 结束后， 离心， 收集上清液； 其 后续处理同实施例1， 得到慈姑多糖得率为17.72， 其中多糖含量84.31， 蛋白含量 1.18。 0031 组合物的制备： 组合物中慈姑多糖质量分数30， 辅助成分的质量分数分别为糊精 8、 淀粉7、 蜂蜡3、 十二烷基硫酸3， 直接制成粉剂或胶囊， 或者以水为溶剂制成片剂和颗粒剂 等口服制剂。 该组合物对CCl4和酒精致肝细胞损伤的。
17、预防作用效果见表1。 0032 实施例3 0033 慈姑前处理同实施例1， 将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜中， 控制磁耦合搅拌 器600转/min， 萃取压力12MPa， 温度180， 萃取10min， 结束后， 离心， 收集上清液； 其后续处 理同实施例5， 该慈姑多糖得率为18.67， 多糖含量86.09， 蛋白含量1.39。 0034 组合物的制备： 组合物中慈姑多糖质量分数50， 辅助成分的质量分数分别为糊精 5、 淀粉5、 蜂蜡1、 十二烷基硫酸1， 直接制成粉剂或胶囊， 或者以水为溶剂制成片剂和颗粒剂 等口服制剂。 该组合物对CCl4和酒精致肝细胞损伤的预防作用效果见表1。 0035 表1组合物对CCl4诱导的肝细胞损伤的预防作用 0036 组别存活率() 正常对照1002.54 0.5DMSO98.723.87 24mM CCl434.030.45 CCl4+实施例175.422.46 CCl4+实施例283.955.08 CCl4+实施例390.492.45 2.4酒精63.683.46 酒精+实施例181.065.10 说 明 书 3/4 页 5 CN 108434171 A 5 酒精+实施例285.033.76 酒精+实施例392.185.69 说 明 书 4/4 页 6 CN 108434171 A 6 。