《23氰基RSUB1/SUBRSUB2/SUBRSUB3/SUB氮杂苯基RSUB4/SUB硫代类化合物及其药物组合物和其应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《23氰基RSUB1/SUBRSUB2/SUBRSUB3/SUB氮杂苯基RSUB4/SUB硫代类化合物及其药物组合物和其应用.pdf（17页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510212286.4 (22)申请日 2015.04.29 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104922125 A (43)申请公布日 2015.09.23 (73)专利权人 中国科学院昆明植物研究所 地址 650201 云南省昆明市蓝黑路132号 (72)发明人 左之利 侯博 张树群 赵勤实 许伟均 朱维良 (74)专利代理机构 昆明协立知识产权代理事务 所(普通合伙) 53108 代理人 马晓青 (51)Int.Cl. A61K 31/455(2006。
2、.01) A61K 31/4725(2006.01) A61K 31/4709(2006.01) A61K 31/47(2006.01) A61P 25/28(2006.01) (56)对比文件 Weijun Xu et alNovel non-peptide b- secretase inhibitors derived from structure-based virtual screening and bioassay. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters .2009, (第19期),第3188- 3192页. Weijun Xu et al。
3、Identification of a sub-micromolar, non-peptide inhibitor of b-secretase with low neural cytotoxicity through in silico screening. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters .2010, (第20 期),第5763-5766页. 周禹等.非肤类B A C E I 抑制剂双a 做为 抗阿尔茨海默病候选药物的初步研究. 中国药 理学与毒理学杂志 （增刊） .2011,第25卷第127 页. Sophie Martel.Large,。
4、 chemically diverse dataset of logP measurements for benchmarking studies. European Journal of Pharmaceutical Sciences .2013, (第48期),第 21-29页. 审查员 曹寅秋 (54)发明名称 2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代 类化合物及其药物组合物和其应用 (57)摘要 本发明涉及包含2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂 苯基-R4-硫代类化合物A、 B、 C类和至少一种药 学上可接受的载体的药物组合物， 2-3-氰基- R1-R2-R3-氮杂苯基。
5、-R4-硫代类化合物A、 B、 C 类， 氰基-杂苯基-硫代类化合物在医药技术领域 的应用。 乙酰胆碱酯酶(AChE)被证实与阿尔茨海 默症(AD)病因存在着密切联系。 本发明提供了2- 3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合 物在制备乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂中的应用。 该系列化合物经过体外激酶活性实验， 证明其有 明显的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制作用。 权利要求书1页 说明书13页 附图2页 CN 104922125 B 2018.09.11 CN 104922125 B 1.下述化合物在制备治疗阿尔茨海默症的药物中的应用， 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 。
6、104922125 B 2 2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物及其药物 组合物和其应用 (一)技术领域 0001 本发明涉及医药技术领域， 具体涉及旧的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫 代类化合物， 以它们为活性成分的药物组合物， 以及它们在制备乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制 剂及其在制备治疗阿尔茨海默症(AD)的药物中的应用。 (二)背景技术 0002 阿尔茨海默症(AD)是一种中枢神经系统退行性疾病， 是老年期痴呆的主要类型。 已经成为老年人群中继心脏病、 恶性肿瘤和中风之后的第四大 “杀手” ， 严重危及人类尤其 是老年人的健康， 对社会和经济造。
7、成巨大的影响。 阿尔茨海默症发现已久， 研究颇多， 其病 理学特征是大脑皮层和海马出现大量的老年斑和神经微丝缠结、 神经传递基质乙酰胆碱水 平降低、 Tau 蛋白的过度磷酸化。 科学家们针对这3种主要的病理特征研究AD的病因及治疗 策略。 虽然 AD的病因复杂， 但患者脑内乙酰胆碱酯酶(AChE)活性过度， 神经递质缺失， 是导 致AD疾病的直接原因。 AChE是生物神经传导中的一种关键性的酶， 该酶降解乙酰胆碱， 保证 神经信号在生物体内的正常传递。 虽然针对AChE靶标的研究最早， 但其却是最经典的靶标， 至今FDA批准过的治疗AD的5种药物都是AChE抑制剂， 因此对AChE靶标的研究仍。
8、是AD 药物 发现的热点之一。 目前一些很有希望的AChE抑制剂在药物研发的临床阶段， 比如QR Pharm 公司的AChE抑制剂Posiphen处于II期临床。 据统计， 1998年到2011年之间阿尔茨海默症药 物研发失败101例， 成功只有3例， 这不包括2012年礼来公司候选药物Solanezumab 在III期 临床的失败； 2012年8月强生与辉瑞两大公司联合研发的AD免疫治疗药物 Bapineuzumab III期临床研究的失败； 以及2013年百特国际处在III期的阿尔茨海默症候选药物 Gammagard的失败。 0003 AD这种高度复杂、 多病因的临床疾病， 对其进行单一靶。
9、标设计得到的药物需有高 度的专一性。 若能研发出乙酰胆碱酯酶靶标的抑制剂， 那么所及先导化合物就能成为治疗 AD疾病的关键因素。 加之， 对先导化合物结构改造， 提高疗效， 减少不良反应的工作有着重 要的医学和社会意义。 实际上， 单一靶标药物的研发备受关注， 国内外一些科研工作者也在 从事针对AD的单靶点抑制剂的研发工作。 上海药物研究所的同仁们也发现了有效的AChE抑 制剂； 华中师范大学的科学工作者针对AChE进行了一药多靶点的研究工作； 浙江大学药学 院的科研工作者在治疗AD的抑制剂研究中发现了具有AChE,H3R和BACE1抑制活性的化合 物。 Carlo Melchiorre等人也。
10、发现了具有特殊抑制活性的小分子化合物。 但是目前已经发 现的单抑制剂的生物活性、 透过血脑屏障的能力、 成药性等方面的性质都有待提高。 0004 传统意义上的药物分子的结构优化合成， 存在盲目性、 工作量大、 耗时耗力等缺 点。 本项目拟在以前工作的基础上， 以上述活性化合物为先导， 通过各种计算机辅助药物设 计的手段， 建立药效团模型和3D定量构效关系模型， 获得配体与受体直接相互作用模式的 信息。 依据模型和作用模式的信息， 有目的性地开展结构改造及构效关系的研究， 研发结构 新颖的能够通过血脑屏障的AChE高效抑制剂， 至今未见该化合物在治疗阿尔茨海默症的相 说 明 书 1/13 页 3。
11、 CN 104922125 B 3 关报道。 (三)发明内容 0005 本发明的目的是以2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代化合物抑制剂分子 在抗阿尔茨海默症中的应用， 开发具有同类骨架的先导化合物。 本发明提供了2-3-氰基- R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代化合物作为抗阿尔茨海默症用途， 可作为阿尔茨海默症的药 物， 而且本发明化合物易合成， 成本廉价和副作用小。 0006 为了实现本发明的上述目的， 本发明提供了如下的技术方案， 0007 药物组合物， 其包含下述通式( )所示的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫 代类化合物A、 B、 C类和至少一种。
12、药学上可接受的载体， 0008 0009 式( )中， R1为如下基团之一： 0010 0011 R2为如下基团之一： 0012 0013 R3为如下基团之一： 0014 说 明 书 2/13 页 4 CN 104922125 B 4 0015 R4如下基团之一： 0016 0017 2、 药物组合物， 其包含下述通式(II)所示的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4- 硫代类化合物A、 B、 C类和至少一种药学上可接受的载体， 0018 0019 式(II)中， R1、 R2、 和R4为-H、 烷基、 取代苯、 杂环类基团； R3为酯类， 胺类或醚类衍生 物)， 式(II)中， R。
13、1、 R2基团如下述表中所示： 说 明 书 3/13 页 5 CN 104922125 B 5 0020 说 明 书 4/13 页 6 CN 104922125 B 6 0021 0022 上述通式(I)所述的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物用作为乙 酰胆碱酯酶制剂。 0023 上述通式(II)所示的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物用作为 乙酰胆碱酯酶抑制剂。 0024 上述通式( )所示所示的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物在制 备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。 0025 上述通式(II)所示的2-3-氰基-R。
14、1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物在制备 乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。 说 明 书 5/13 页 7 CN 104922125 B 7 0026 上述通式( )所示的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物在制备治 疗阿尔茨海默症药物中的应用。 0027 上述通式(II)所示的2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物在制备 治疗阿尔茨海默症药物中的应用。 0028 本发明通过长期研究首次发现并通过活性测试， 验证了本发明式I和式II的硫代 类化合物具有乙酰胆碱酯酶(AChE)效抑制活性。 该类化合物结构新颖， 化学上易于合成。 同 时本发明还提。
15、供了式( )中2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代类化合物作为乙酰胆 碱酯酶 (AChE)靶标抑制剂的新用途。 0029 本发明化合物用作药物时， 可以直接使用， 或者以药物组合物的形式使用。 该药物 组合物含有0.199， 优选为0.590的本发明化合物， 其余为药物学上可接受的， 对人和 动物无毒和惰性的可药用载体或赋形剂。 0030 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、 半固体和液体稀释剂、 超填 料以及药物制品辅剂。 将所述的有效提取物或有效部位以单位体重服用量的形式使用。 本 发明的药物可经口服和口腔喷雾两种形式给药。 0031 口服可用其固体或液体制剂， 。
16、如粉剂、 片剂、 糖衣片剂、 胶囊、 酊剂、 糖浆、 滴丸剂 等。 0032 口腔喷雾可用其固体或液体制剂。 0033 本发明药物可用于治疗阿尔茨海默症。 (四)附图说明 0034 附图为本发明部分2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代化合物在体外乙酰 胆碱酯酶(AChE)的抑制曲线图， 图1至图6为分别为化合物A-1、 A-2、 A-3、 C-1、 C-2、 C-3抑制 曲线， 该部分化合物具有明显的抑制活性。 (五)具体实施方式 0035 下面结合附图， 用本发明的下述实施例对本发明的实质性内容进行详细叙述， 但 并不以此来限定本发明。 0036 实施例1： 0037 本发明。
17、所有化合物均可购自荷兰specs公司(网址： ),均为 specs公司化合物库中的化合物， 其中的A、 B、 C类化合物在库中相应的编号如下： 0038 化合物 编号 化合物 编号 A-1 AK-777/36504051 C-3 AO-022/40937558 A-2 AK-777/36504053 C-4 AE-848/40937961 A-3 AK-777/36840033 C-5 AG-205/40649526 B-1 AQ-750/41791721 C-6 AE-848/41150930 B-2 AP-906/42050592 C-7 AO-022/42435149 C-1 AE-84。
18、8/15115153 C-8 AE-848/15116542 C-2 AO-022/42435147 说 明 书 6/13 页 8 CN 104922125 B 8 0039 实施例2： 0040 本发明化合物对乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制作用： 0041 1、 实验原理 0042 乙酰胆碱酯酶能够催化其底物类似物碘化硫代乙酰胆碱降解， 生成硫代胆碱和乙 酸， 反应生成物与显色剂DTNB反应生成黄色物质， 在405nm处有特异光吸收。 化合物与乙酰 胆碱酯酶的混合液在37反应， 如果化合物对乙酰胆碱酯酶有抑制作用， 那么乙酰胆碱酯 酶催化底物类似物碘化硫代乙酰胆碱降解的量就会减少， 相应的与。
19、DTNB反应生成的黄色化 合物减少， 即在405nm处的光吸收值变小， 以此来筛选具有抑制活性的化合物。 0043 2、 试剂仪器 0044 试剂： 本专利申请涉及的化合物； Na2HPO4； NaH2PO4； 乙酰胆碱酯酶、 碘化硫代乙酰 胆碱、 DTNB、 他克林均， 均购自Sigma。 0045 仪器： PE公司EnVision。 0046 3、 实验操作过程 0047 1)用磷酸盐缓冲液(每100mL磷酸盐缓冲液中含0.1M Na2HPO4溶液94.7mL； 0.1M NaH2PO4溶液5.3mL， 调pH至8.0)将AChE稀释成0.1U/mL工作液； 0048 2)碘化硫代乙酰胆碱。
20、和DTNB用磷酸盐缓冲液配成6.25mM的溶液(工作液)； 0049 3)化合物用DMSO稀释成1mM工作液， 保证不同浓度的化合物溶液中DMSO浓度相同 (均为2)， DMSO在最终反应体系中的终浓度为0.1， 化合物终浓度为50 M。 阳性对照为他 克林， 终浓度为0.333 M； 阴性对照组(NC组)为2DMSO溶剂对照。 0050 4)反应在96孔板中进行， 向96孔板中依次加入下列试剂(加入试剂的体积为一个 反应的体积)， 每个样品做3个重复； 0051 铺板： 200uL/体系， 每孔内化合物的终浓度为50 M， 他克林的终浓度为0.333 M。 0052 0053 5)加入显色剂。
21、和底物后1小时内， 每30秒钟检测一次405nm吸光值。 0054 6)选择NC组吸光值平均值约为1时的样品吸光值， 计算化合物吸光值平均值(化合 说 明 书 7/13 页 9 CN 104922125 B 9 物测定值- 背景值)， 并按照(NC-化合物吸光值平均值)/NC*100来计算化合物AChE抑制 率。 0055 4、 实验结果 0056 1)抑制率： 抑制率(NC-化合物吸光值平均值)/NC*100 0057 样本 抑制率() SD 抑制活性 样本 抑制率() SD 抑制活性 TA 56.84 1.58 C-2 68.32 2.73 + A-1 68.41 0.81 + C-3 7。
22、0.59 0.41 + A-2 78.24 1.07 + C-4 73.43 1.29 + A-3 78.77 0.41 + C-5 69.40 1.58 + B-1 77.35 0.79 + C-6 61.62 1.89 + B-2 40.13 0.86 + C-7 29.44 5.84 + C-1 75.07 0.45 + C-8 11.37 3.52 + 0058 2)结果描述如抑制率表， 从表中可知， 他克林抑制率正常， 本发明化合物A、 B和C类 对AChE 均有一定的抑制活性， 其中化合物A-1、 A-2、 A-3、 C-1、 C-2、 C-3、 C-4、 C-5与C-6， 抑制 。
23、活性较强。 0059 实施例3： 0060 本发明化合物对乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性IC50的测定 0061 1、 实验原理(同实施例1)。 0062 2、 试剂仪器(同实施例1) 0063 3、 实验操作过程 0064 1)用磷酸盐缓冲液(每100mL磷酸盐缓冲液中含0.1M Na2HPO4溶液94.7mL； 0.1M NaH2PO4溶液5.3mL， 调pH至8.0)将AChE稀释成0.1U/mL工作液； 0065 2)碘化硫代乙酰胆碱和DTNB用磷酸盐缓冲液配成6.25mM的溶液(工作液)； 0066 3)化合物用DMSO稀释成浓度梯度。 阳性对照为他克林， 用DMSO稀释成浓度梯度。
24、； 阴 性对照组(NC组)为2DMSO溶剂对照。 0067 4)反应在96孔板中进行， 铺板按200uL/体系， 每个样品做3个重复。 0068 化合物和他克林浓度梯度的设定(用1DMSO稀释)： 0069 TA浓度梯度设定(7个)： 2 M； 1 M； 0.5 M； 0.2 M； 0.04 M； 0.008 M； 0.0016 M。 0070 化合物浓度梯度设定(7个)： 150 M； 100 M； 50 M； 30 M； 10 M； 3 M； 1 M。 0071 铺板： 200uL/体系， 每孔内DMSO的终浓度均为0.1， 每个样本做3个复孔。 说 明 书 8/13 页 10 CN 10。
25、4922125 B 10 0072 0073 0074 5)加入显色剂和底物后1小时内， 每30秒钟检测一次405nm吸光值。 0075 6)选择NC组吸光值平均值约为1时的样品吸光值， 计算化合物吸光值平均值 (化 合物测定值-背景值)， 并按照(NC-化合物吸光值平均值)/NC*100来计算化合物AChE 抑 制率。 0076 4、 实验结果 0077 1)抑制率： 抑制率(NC-化合物吸光值平均值)/NC*100 说 明 书 9/13 页 11 CN 104922125 B 11 0078 0079 0080 2)AChE IC50结果： 用origin8软件来做拟合曲线， 计算IC50。
26、值， 见下表： 0081 0082 本发明化合物经乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性筛选， 并测得相应半数有效抑制浓 度 (IC50)。 选自式( )的13个2-3-氰基-R1-R2-R3-氮杂苯基-R4-硫代化合物的化学结构 式及相应活性如下所示， 其中百分数表示化合物反应终浓度为50 M时对AChE的抑制率。 说 明 书 10/13 页 12 CN 104922125 B 12 0083 说 明 书 11/13 页 13 CN 104922125 B 13 0084 0085 实施例4： 0086 按实施例1制得本发明的A、 B、 C类化合物， 按其与赋形剂重量比1:1的比例加入赋 形剂， 。
27、制粒压片。 0087 实施例5： 0088 按实施例1制得化合物， 按其与赋形剂重量比1:2的比例加入赋形剂， 制粒压片。 0089 实施例6： 0090 按实施例1制得化合物， 按常规胶囊制剂方法制成胶囊。 0091 实施例7： 0092 按实施例1制得化合物， 再按下述方法制成片剂： 说 明 书 12/13 页 14 CN 104922125 B 14 0093 0094 实施例8： 0095 胶囊剂： 本发明化合物 100mg 0096 淀粉 适量 0097 硬脂酸镁 适量 0098 制备方法： 将化合物与助剂混合， 过筛， 在合适的容器中均匀混合， 把得到的混合 物装入硬明胶胶囊。 0。
28、099 实施例9： 0100 0101 制备方法： 搅拌下于适当体积的重蒸馏水中每次加入一种成分， 直至完全深解， 然 后再加入另一种成分。 加水至2ml后， 将该溶液在无菌过滤器上过滤， 装入瓶中并按照适当 的剂量分隔。 0102 实施例10： 0103 滴丸： 本发明化合物 1g 0104 聚乙二醇6000 9g 0105 制法： 化合物与聚乙二醇6000熔融液的制备： 按上述处方量称取本发明化合物， 加 入适量无水乙醇， 微热溶解后， 加入处方量的聚乙二醇熔融液中(60水浴保温)， 搅拌混合 均匀， 直至乙醇挥尽为止， 静置于60水浴中保温30分钟， 待气泡除尽， 然后将除尽气泡的 上述混匀熔融液转入贮液筒内， 在保温80-85的条件下， 控制滴速， 一滴滴地滴入冷凝液 中， 等冷凝完全， 倾去冷凝液， 收集滴丸， 沥净和用滤纸除去丸上的冷凝液， 放置硅胶干燥器 中或自然干燥即可。 说 明 书 13/13 页 15 CN 104922125 B 15 图1 图2 图3 说 明 书 附 图 1/2 页 16 CN 104922125 B 16 图4 图5 图6 说 明 书 附 图 2/2 页 17 CN 104922125 B 17 。