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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810448910.4 (22)申请日 2018.05.11 (71)申请人 江西科技师范大学 地址 330000 江西省南昌市红谷滩新区红 角洲学府大道589号 (72)发明人 熊向源 陈道鸽 龚妍春 李资玲 李玉萍 (51)Int.Cl. A61K 9/127(2006.01) A61K 47/22(2006.01) A61K 47/34(2017.01) A61K 38/28(2006.01) A61P 3/10(2006.01) B82Y 5/00(2011.01)。
2、 (54)发明名称 一种靶向纳米囊泡的制备方法及其应用 (57)摘要 本发明属于生物医药领域， 具体涉及一种装 载胰岛素的靶向载体的制备方法及应用， 靶向纳 米囊泡由FA-P85-PLGA和TPGS两种物质按照质量 比4-6:2-4混合而成， 本发明制备的混合纳米囊 泡在体内降血糖效果与FA-P85-PLGA相比， 具有 更好的降糖作用， 添加了TPGS能改善纳米囊泡的 降血糖效果， 具有良好的前景。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 108514548 A 2018.09.11 CN 108514548 A 1.一种靶向纳米囊泡的制备方法及其应用， 其特征在于： 所述靶向纳米囊泡由。
3、FA-P85- PLGA和TPGS两种物质按照质量比4-6:2-4混合而成， 所述FA-P85-PLGA和TPGS的结构式如 下： 2.如权利要求1所述的靶向纳米囊泡， 其特征在于： 所述靶向纳米囊泡的具体制备方法 为： (1)按质量比为5:3将7.8125mg的FA-P85-PLGA和4.6875mg的TPGS， 溶于1ml DMSO中， 将 其逐滴滴加到胰岛素溶液中， 磁力搅拌30min， 之后于20000rpm， 4， 50min高速离心， 沉淀 加3ml超纯水复溶， 制得载药FA-P85-PLGA/TPGS混合囊泡制剂。 3.根据权利要求1所述的一种靶向纳米囊泡的制备方法及其应用， 其。
4、特征在于： 所述靶 向纳米囊泡的应用为作为降血糖药物的载体。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108514548 A 2 一种靶向纳米囊泡的制备方法及其应用 技术领域 0001 本发明属于生物医药领域， 具体涉及一种装载胰岛素的靶向载体的制备方法及应 用。 背景技术 0002 目前， 世界上患糖尿病的人数日益增多， 中国是拥有糖尿病人数最多的国家。 无论 是I型糖尿病还是型糖尿病最终都需要使用胰岛素维持血糖， 此药物直接口服无效。 而生 物相容性两亲性高分子材料形成的囊泡可以作为药物载体， 既可以包埋亲水性药物也可包 埋疏水性药物。 包埋进囊泡的蛋白类药物能抵御胃肠道急剧的化学环境和。
5、酶的降解作用。 聚乳酸-羟基乙酸共聚物poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA在人体内可以生物降 解， 作为药用辅料已经收录进美国药典。 Pluronic也是一种被FDA批准使用的材料， 且已有 上市的含Pluronic的制剂。 叶酸(folic acid， FA)是一种水溶性维生素， 能与人小肠上皮细 胞上的叶酸受体特异性结合， FA能作为靶向分子促进蛋白质类药物的跨膜吸收。 聚乙二醇 1000维生素E琥珀酸酯(D- -tocopheryl polyethylene 1000succinate， TPGS)为一种重要 的药用辅料， 在药学领域应用广泛， 并作为增溶。
6、剂、 渗透促进剂、 吸收促进剂和乳化剂等应 用于制剂研究中。 0003 在口服胰岛素制剂的研发中， 促进胰岛素的细胞吸收及增强降血糖效果是亟待解 决的问题。 发明内容 0004 本发明目的在于提供一种装载胰岛素的靶向载体， 能够包埋胰岛素， 能够有效控 制血糖。 同时提供了该载药囊泡的配制方法、 包埋方法， 以及该载药囊泡的体内降血糖效 果。 0005 本发明所用聚合物的化学结构如下： 说 明 书 1/3 页 3 CN 108514548 A 3 0006 0007 载药囊泡的制备方法是： 0008 (1)采用开环聚合的方式， 以FA-P85为引发剂， LA、 GA为单体通过开环聚合方法合 成。
7、聚合物FA-P85-PLGA。 0009 (2)FA-P85-PLGA和TPGS按照质量比5： 3溶于1ml DMSO中， 将其逐滴滴加到胰岛素 溶液中， 磁力搅拌半个小时。 之后用离心机高速离心其中转速20000rpm， 温度4， 时间 50min， 取上清液用BCA法测定胰岛素的包埋率， 沉淀加超纯水复溶， 制得载药FA-P85-PLGA/ TPGS混合囊泡制剂。 0010 本发明的有益效果： 0011 本发明提供的添加了TPGS的靶向混合纳米囊泡能够包埋胰岛素， 并具有增强的和 持续的口服降血糖作用， 在口服胰岛素和其他蛋白类药物等领域具有良好的应用前景。 附图说明 0012 图1为本发。
8、明所用FA-P85-PLGA和TPGS的化学结构式。 0013 图2为本发明载药囊泡制剂在糖尿病大鼠模型中的降血糖效果。 具体实施方式 0014 实施例1 0015 1、 将干燥的FA与二环己基碳二亚胺(DCC)加到50ml无水DMSO， 室温下搅拌24和， 将 干燥后的P85与4-二甲氨基吡啶(DMAP)加到FA与的混合溶液中， 室温下搅拌48h； 上述得到 的溶液置于离心管中离心， 离心之后的上清置于3500Da的透析袋中， 用8倍体积的DMSO透析 过夜， 之后用二蒸水透析三天， 将透析液用旋蒸仪旋干， 温度不高于40， 所得固体FA-P85 放入真空干燥箱中干燥24h。 分别称取3.9。
9、9g FA-P85、 3.61g LA和4.01g GA， 以辛酸亚锡为 催化剂， 温度为150， 无氧的氩气环境中的反应8h， 将合成产物用冰乙醚纯化， 即可得到 FA-P85-PLGA。 0016 2、 制备得到的FA-P85-PLGA共聚物的分子量和PLGA的链段含量由FA-P85-PLGA的 核磁谱图计算得到， 结果为FA-P85-PLGA的分子量(Mn)为15500， LA、 GA链段的含量分别为 说 明 书 2/3 页 4 CN 108514548 A 4 32.5wt、 37.8wt， 也即相应聚合物的结构式为FA-PEO26-PPO39-PEO26-PGA70-PLA113。 。
10、该共 聚物的叶酸含量通过紫外分光光度计测定， 摩尔含量为28。 0017 3、 称取15.625mg FA-P85-PLGA和9.375mg TPGS， 溶于2ml DMSO中， 将其逐滴滴加 到10ml、 5mg/ml的胰岛素溶液中， 磁力搅拌半个小时。 之后20000rpm， 4， 50min高速离心， 取上清液用BCA法测定胰岛素的包埋率， 沉淀加3ml超纯水复溶， 制得载药囊泡制剂。 不含 TPGS的囊泡制剂的制法除不加TPGS外， 其它步骤与上述相同。 0018 FA-P85-PLGA和FA-P85-PLGA/TPGS的胰岛素包埋率分别为7.36、 5.37。 0019 4、 取健康。
11、雄性SD大鼠(20020g)， 饮水不限禁食12h后， 按照150mg/kg每隔24h腹 腔注射四氧嘧啶溶液， 共注射三次， 注射后恢复进食。 空腹12h后， 取血用罗氏血糖试纸测大 鼠空腹血糖值， 当血糖值不小于16.67mmol/L时， 即为糖尿病大鼠。 取诱导成功的糖尿病大 鼠20只， 随机分为4组。 一组腹腔注射胰岛素溶液5IU/kg， 即为SC 5IU/kg组； 二组口服胰岛 素溶液100IU/kg； 三组口服FA-P85-PLGA纳米溶液， 50IU/kg； 四组口服FA-P85-PLGA/TPGS纳 米溶液， 50IU/kg。 测试四组试剂在糖尿病大鼠体内的降血糖结果。 说明书附。
12、图2为四组试剂 在糖尿病大鼠体内的降血糖结果。 0020 皮下注射组(5IU/kg)： 血糖在0-4小时急剧下降,， 在4h时， 血糖值达到最低(原始 值的8.7)， 然后随着时间的延长， 血糖又回升至原始值的81.7， 可见皮下注射胰岛素在 短时间内具有降血糖效果， 但作用并不持久。 0021 口服胰岛素溶液组(100IU/kg)： 从0-24h， 血糖值并没有明显的降低。 由此可见单 纯口服胰岛素溶液对于血糖的降低没有作用。 0022 FA-P85-PLGA和FA-P85-PLGA/TPGS两组， 在0-4h， 血糖具有明显的下降， 在4h时血 糖分别降到初始血糖值的40和32， 并在此水平上保持了20h。 通过体内降糖实验可以看 出FA-P85-PLGA/TPGS及FA-P85-PLGA比皮下注射胰岛素、 口服游离胰岛素溶液具有更好更 长效的降糖效果。 并且可以看出FA-P85-PLGA/TPGS与FA-P85-PLGA相比， 具有更好的降糖作 用。 说 明 书 3/3 页 5 CN 108514548 A 5 图1 图2 说 明 书 附 图 1/1 页 6 CN 108514548 A 6 。