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1、(10)申请公布号 CN 103285394 A (43)申请公布日 2013.09.11 CN 103285394 A *CN103285394A* (21)申请号 201310054350.1 (22)申请日 2009.04.17 61/046,008 2008.04.18 US 200980123324.1 2009.04.17 A61K 45/00(2006.01) A61K 31/201(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 3/06(2006.01) (71)申请人 犹他大学研究基金会 地址 美国犹他州 (72)发明人 杨天新 (74)专利代理机构 北京。
2、市柳沈律师事务所 11105 代理人 谢梦欣 (54) 发明名称 使用硝化脂质治疗脂质病症和肥胖以及与脂 质和肥胖相关的病状 (57) 摘要 本发明涉及使用硝化脂质治疗脂质病症和肥 胖以及与脂质和肥胖相关的病状， 具体的涉及使 用硝化脂质治疗脂质病症、 与脂质相关的病症或 病状、 肥胖和与肥胖相关的病症的方法。具体而 言， 本方法包括在受试者中施用有效量的经硝化 的脂肪酸或其酯以减少甘油三酯、 游离脂肪酸、 体 重、 胆固醇、 尿蛋白排泄和氧化应激中的一种或多 种或增加血浆 HDL 的水平。 (30)优先权数据 (62)分案原申请数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 9 页。
3、 附图 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书9页 附图6页 (10)申请公布号 CN 103285394 A CN 103285394 A *CN103285394A* 1/1 页 2 1. 一种方法， 包括以治疗脂质病症、 肥胖、 与脂质相关的病状或病症、 与肥胖相关的病 状或病症中的一种或多种的有效量对有需要的受试者施用硝化脂质。 2. 权利要求 1 的方法， 其中所述脂质病症选自高甘油三酯血症、 高游离脂肪酸浓度和 低高密度脂蛋白 - 胆固醇浓度 (hypo-HDL-C) 中的一种或多种。 3. 权利要求 2 的方法， 其中所述脂质病。
4、症与肥胖相关。 4. 权利要求 1 的方法， 其中所述与脂质相关的病状或病症和与肥胖相关的病状或病症 选自与脂质或肥胖相关的器官损伤或功能障碍、 蛋白尿、 视网膜病变、 神经病或肾病。 5. 权利要求 1 的方法， 包括以在受试者中减少甘油三酯、 游离脂肪酸、 体重、 胆固醇、 尿 蛋白排泄和氧化应激中一种或多种的水平或增加血浆 HDL 水平的有效量对有需要的受试 者施用硝化脂质， 所述减少或增加是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平或速率。 6. 权利要求 1 的方法， 其中所述硝化脂质与一种或多种治疗剂组合施用， 其中所述治 疗剂选自在脂质病症、 肥胖、 与脂质相关的病状或病症和与肥胖相关。
5、的病状或病症的治疗 中有用的药剂。 7. 权利要求 1 的方法， 其中所述硝化脂质包括单不饱和脂肪酸或多不饱和脂肪酸。 8. 权利要求 7 的方法， 其中所述单不饱和脂肪酸是油酸。 9. 权利要求 8 的方法， 其中所述单不饱和脂肪酸选自 9- 硝基油酸、 10- 硝基油酸或其 组合。 10. 权利要求 1 的方法， 其中所述量的范围为每日约 1g 至 1g。 11. 权利要求 5 的方法， 包括以减少受试者体重的有效量对有需要的受试者施用硝化 脂质， 所述减少是相对于施用硝化脂质之前该受试者的体重。 12. 权利要求 11 的方法， 其中所述体重减少约 5% 至约 15%。 13. 权利要求。
6、 5 的方法， 包括以在受试者中减少甘油三酯水平的有效量对有需要的受 试者施用硝化脂质， 所述减少是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平。 14. 权利要求 12 的方法， 其中所述甘油三酯的水平减少约 10% 至约 50%。 15. 权利要求 5 的方法， 包括以在受试者中减少游离脂肪酸水平的有效量对有需要的 受试者施用硝化脂质， 所述减少是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平。 16. 权利要求 15 的方法， 其中所述血浆游离脂肪酸水平减少约 10% 至约 90%。 17. 权利要求 5 的方法， 包括以在受试者中减少尿蛋白排泄水平的有效量对有需要的 受试者施用硝化脂质， 所述减少是相对。
7、于施用硝化脂质之前该受试者的水平。 18. 权利要求 17 的方法， 其中所述尿蛋白排泄的速率减少约 20% 至约 70%。 19.权利要求5的方法， 包括以在受试者中增加血浆HDL水平的有效量对有需要的受试 者施用硝化脂质， 所述增加是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平。 20. 权利要求 19 的方法， 其中所述血浆 HDL 水平增加约 10% 至约 90%。 21. 权利要求 1 的方法， 其中所述受试者是肥胖的或病态肥胖的。 权 利 要 求 书 CN 103285394 A 2 1/9 页 3 使用硝化脂质治疗脂质病症和肥胖以及与脂质和肥胖相关 的病状 0001 本申请是申请日为 2。
8、009 年 04 月 17 日， 申请号为 200980123324.1 （国际申请号为 PCT/US2009/041018） ， 名称为 “使用硝化脂质治疗脂质病症和肥胖以及与脂质和肥胖相关 的病状” 的发明专利申请的分案申请。 0002 对相关申请的交叉引用 0003 本申请要求提交于 2008 年 4 月 18 日的临时申请号 61/046008 的优先权， 并将其 以提述的方式全文并入本文。 发明领域 0004 本发明涉及使用硝化脂质(nitrated lipid)治疗脂质病症、 肥胖和与肥胖相关的 病状和病症的方法。具体而言， 所述方法包括使用硝化的脂肪酸或其酯以在受试者中减少 甘油。
9、三酯和游离脂肪酸的水平， 和 / 或减少受试者的体重， 和 / 或增加高密度脂蛋白 (HDL) 的水平， 和 / 或减少氧化应激。 背景技术 0005 在过去二十年间， 超重(overweight)和肥胖个人的比率(prevalence)急剧升高。 目前， 在美国 65% 的成人超重， 而 31% 的成人肥胖。肥胖在儿童中的发病率也急剧提高。肥 胖， 以及高甘油三酯血症 (hypertriglyceridemia) 是 2 型糖尿病、 高血压和其他慢性疾病 的主要危险因素 (risk factor) 的表现。其结果是 1800 万美国人罹患糖尿病， 而每隔一分 钟就有一个美国人新诊断出罹患该疾。
10、病。 0006 已证明过氧化物酶体增殖激活受体 (peroxisome proliferation-activated receptor， PPAR)的调制剂对治疗某些方面的与脂质和肥胖相关的病状和病症是有用的。 噻 唑烷二酮类 (TZDs)， 例如， 罗格列酮 (rosiglitazone) 和吡格列酮 (pioglitazone) 为合成 的 PPAR 激活剂， 其对控制高血糖高度有效， 但对脂肪的概貌 (profile) 仅有有限的有益 作用。TZD 还与几种主要的副作用 ( 如水肿、 体重增加、 和慢性心力衰竭的发病率增加 ) 相 关。这些副作用常常需要中止治疗。合成 PPAR 激活剂。
11、氯贝丁酯 (Clofibrate) 和非诺贝 特(fenofibrate)在临床上用作降脂剂(lipid lowering agent)， 但仅具有有限的效力。 近 来开发的 PPAR/ 双重激动剂是为了达成对高血糖和高甘油三酯血症二者相近的控制 这一目标。 然而， 第一种PPAR/双重激动剂Muraglitazar与组合死亡终点(composite end point of death)， 主要的不利心血管事件 ( 心肌梗死、 中风和短暂性缺血发作 ) 和慢 性心力衰竭相关。 发明内容 0007 现有技术提供了对治疗脂质病症、 肥胖以及与脂质和肥胖相关的病状或病症有用 的方法和药物。所述方法。
12、包括以有效治疗脂质病症、 肥胖以及与脂质和肥胖相关的病状或 病症中的一种或多种的量对有需要的受试者施用至少一种硝化脂质。硝化脂质与现有的 说 明 书 CN 103285394 A 3 2/9 页 4 供治疗脂质病症、 肥胖以及与脂质和肥胖相关的病状的化合物和方法相比提供了多种优 点。首先， 硝化脂质与合成化合物相比可显示较优的功效 (efficacy) 和安全概貌 (safety profile)。 举例而言， 硝化油酸(OA-NO2)相比罗格列酮可在低得多的剂量(至少低100倍) 实现近似的功效。其次， 硝化脂质显示通常不见于合成化合物的强有力的 (robust) 降脂作 用 (lipid 。
13、lowering effect)。再次， 令人惊讶并意想不到地， 和与体重增加相关的 TZD 相 对， 硝化脂质诱导体重减少。 0008 本方法包括对有需要的受试者施用有效量的硝化脂质。 多种脂质可用于形成所述 硝化脂质， 包括但不仅限于， 脂肪酸或其酯。 同样， 多种脂肪酸可与公开的本方法相容， 包括 但不仅限于， 单不饱和和多不饱和脂肪酸。 还在本文中提供了合成硝化脂质的过程， 获得脂 质的来源以及硝化脂质的施用途径。 0009 所述硝化脂质以治疗脂质病症、 肥胖、 与脂质相关的病状或病症以及与肥胖相关 的病状或病症中的一种或多种的有效量施用。所述脂质病症可为高甘油三酯血症、 高游离 脂肪。
14、酸浓度和低高密度脂蛋白 - 胆固醇浓度 (hypo-HDL-C) 中的一种或多种。所述脂质病 症可与肥胖相关或无关。 所述与脂质相关的病状或病症以及与肥胖相关的病状或病症可为 与肥胖或脂质相关的器官损伤或功能障碍、 蛋白尿、 视网膜病变、 神经病和肾病中的一种或 多种。 0010 对所述受试者施用的硝化脂质的有效量可变动。在一些方面， 有效量为减少受试 者体重或者使受试者的体重增加减慢或停止的量， 所述减少、 减慢、 停止是相对于施用所述 硝化脂质之前受试者的体重或体重增加。 在另一些方面， 有效量为减少受试者的食物摄入、 甘油三酯水平、 游离脂肪酸水平、 葡萄糖水平、 胆固醇水平、 胰岛素水。
15、平、 氧化应激水平和 / 或尿蛋白排泄 (urinary protein excretion) 的速率中一种或多种的量。在另一些方面， 有效量是在受试者中增加 HDL 水平的量。所述水平或速率在受试者中相对于在施用硝化脂 质之前该受试者的水平和速率是增加或减少的。还在另一些方面， 有效量是提供这些治疗 结果的多种组合的量。 0011 本文中公开的方法还可包括施用多种对治疗脂质病症、 与脂质相关的病状或病 症、 肥胖或与肥胖相关的病状或病症是有用的治疗剂 (therapeutic agent)。此外， 本发明 涵盖了将所述硝化脂质施用与其他疗法结合。 0012 本发明还涉及如下方面 ： 0013。
16、 1. 一种方法， 包括以治疗脂质病症、 肥胖、 与脂质相关的病状或病症、 与肥胖相关 的病状或病症中的一种或多种的有效量对有需要的受试者施用硝化脂质。 0014 2. 项 1 的方法， 其中所述脂质病症选自高甘油三酯血症、 高游离脂肪酸浓度和低 高密度脂蛋白 - 胆固醇浓度 (hypo-HDL-C) 中的一种或多种。 0015 3. 项 2 的方法， 其中所述脂质病症与肥胖相关。 0016 4. 项 1 的方法， 其中所述与脂质相关的病状或病症和与肥胖相关的病状或病症选 自与脂质或肥胖相关的器官损伤或功能障碍、 蛋白尿、 视网膜病变、 神经病或肾病。 0017 5. 项 1 的方法， 包括以。
17、在受试者中减少甘油三酯、 游离脂肪酸、 体重、 胆固醇、 尿蛋 白排泄和氧化应激中一种或多种的水平或增加血浆 HDL 水平的有效量对有需要的受试者 施用硝化脂质， 所述减少或增加是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平或速率。 0018 6. 项 1 的方法， 其中所述硝化脂质与一种或多种治疗剂组合施用， 其中所述治疗 说 明 书 CN 103285394 A 4 3/9 页 5 剂选自在脂质病症、 肥胖、 与脂质相关的病状或病症和与肥胖相关的病状或病症的治疗中 有用的药剂。 0019 7. 项 1 的方法， 其中所述硝化脂质包括单不饱和脂肪酸或多不饱和脂肪酸。 0020 8. 项 7 的方法，。
18、 其中所述单不饱和脂肪酸是油酸。 0021 9. 项 8 的方法， 其中所述单不饱和脂肪酸选自 9- 硝基油酸、 10- 硝基油酸或其组 合。 0022 10. 项 1 的方法， 其中所述量的范围为每日约 1g 至 1g。 0023 11. 项 5 的方法， 包括以减少受试者体重的有效量对有需要的受试者施用硝化脂 质， 所述减少是相对于施用硝化脂质之前该受试者的体重。 0024 12. 项 11 的方法， 其中所述体重减少约 5% 至约 15%。 0025 13. 项 5 的方法， 包括以在受试者中减少甘油三酯水平的有效量对有需要的受试 者施用硝化脂质， 所述减少是相对于施用硝化脂质之前该受试。
19、者的水平。 0026 14. 项 12 的方法， 其中所述甘油三酯的水平减少约 10% 至约 50%。 0027 15. 项 5 的方法， 包括以在受试者中减少游离脂肪酸水平的有效量对有需要的受 试者施用硝化脂质， 所述减少是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平。 0028 16. 项 15 的方法， 其中所述血浆游离脂肪酸水平减少约 10% 至约 90%。 0029 17. 项 5 的方法， 包括以在受试者中减少尿蛋白排泄水平的有效量对有需要的受 试者施用硝化脂质， 所述减少是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平。 0030 18. 项 17 的方法， 其中所述尿蛋白排泄的速率减少约 20%。
20、 至约 70%。 0031 19.项5的方法， 包括以在受试者中增加血浆HDL水平的有效量对有需要的受试者 施用硝化脂质， 所述增加是相对于施用硝化脂质之前该受试者的水平。 0032 20. 项 19 的方法， 其中所述血浆 HDL 水平增加约 10% 至约 90%。 0033 21. 项 1 的方法， 其中所述受试者是肥胖的或病态肥胖的。 0034 附图简述 0035 图 1 ： 雄性 4 月龄 Zucker 肥胖大鼠 ( 肥胖 ) 在用溶剂载体 (vehicle)、 OA-NO2和 OA 均以 7.5g/kg/ 日通过微渗透泵 (osmotic mini-pump) 灌注 14 日之后的体。
21、重增加。使 用用溶剂载体处理的年龄和性别匹配的瘦大鼠作为对照。瘦 ： n=3 ； 溶剂载体 ： n=7 ； OA-NO2： N=5 ； OA ： n=5。* ： 针对肥胖 / 溶剂载体 P0.05。数据为均值 标准误差 (SE)。 0036 图 2 ： 在标明的时间点在所述 Zucker 肥胖大鼠中确定食物摄入。* ： 在相应的时期 针对肥胖 / 溶剂载体 P0.05。瘦 ： n=3 ； 溶剂载体 ： n=7 ； OA-NO2： N=5 ； OA ： n=5。数据为均值 标准误差。 0037 图 3a-b ： 在 Zucker 肥胖大鼠中 OA-NO2对血浆甘油三酯 (A) 和血浆未酯化的脂肪。
22、 酸 (B) 的作用。测定法在处理前和处理后第 14 日进行。瘦 ： n=3 ； 溶剂载体 ： n=7 ； OA-NO2： N=5 ； OA ： n=5。(A)* ： 针对肥胖 / 溶剂载体 P0.05 ； (B)# ： 针对肥胖 / 溶剂载体或肥胖 / 第 0 日 P0.001。数据为均值 标准误差。 0038 图 4 ： OA-NO2和 OA 在 Zucker 肥胖大鼠中对高胆固醇血症的作用比较。在处理前 和处理后第 14 日测定血浆胆固醇。瘦 ： n=3 ； 溶剂载体 ： n=7 ； OA-NO2： N=5 ； OA ： n=5。数据为 均值 标准误差。 0039 图 5a-b ： OA。
23、-NO2和 OA 在 Zucker 肥胖大鼠中对血浆 HDL 的作用比较。在处理前和 说 明 书 CN 103285394 A 5 4/9 页 6 处理后第 14 日测定血浆 HDL(A) 和 HDL 对总胆固醇的比例 (B)。瘦 ： n=3 ； 溶剂载体 ： n=7 ； OA-NO2： N=5 ； OA ： n=5。* ： 在同一组中针对第 0 日或针对肥胖 / 溶剂载体 P0.05。数据为均 值 标准误差。 0040 图 6 ： OA-NO2和 OA 在 Zucker 肥胖大鼠中对血浆 TBARS 的作用比较。* ： 在同一组 中针对第 0 日 P0.05 ； # ： 针对肥胖 / 溶剂载。
24、体 P0.01。瘦 ： n=3 ； 溶剂载体 ： n=7 ； OA-NO2： N=5 ； OA ： n=5。数据为均值 标准误差。 0041 图 7 ： OA-NO2和 OA 在 Zucker 肥胖大鼠中对蛋白尿的作用比较。* ： 在同一组中针 对第 0 日 P0.05 ； # ： 针对肥胖 / 溶剂载体 P0.01。瘦 ： n=3 ； 溶剂载体 ： n=7 ； OA-NO2： N=5 ； OA ： n=5。数据为均值 标准误差。 0042 图 8a-b ： 在 Zucker 糖尿病大鼠 (ZDF 种系 ) 中 OA-NO2对高血糖 (A) 和高胰岛素血 症 (B) 的作用。ZDF 大鼠用 O。
25、A-NO2以 7.5g/kg/ 日通过微渗透泵灌注 1 周。在 OA-NO2处 理之前和之后测定血浆葡萄糖和胰岛素。血的取样在从 6:00PM 禁食 (fasting) 到 9:00AM 之后进行。每组 N=4。* ： 针对第 0 日 P0.05。数据为均值 标准误差。 0043 发明详述 0044 在全文中使用如下定义的下述术语。 0045 “肥胖” 通常定义为超过 30 的体重指数 (BMI)。 “病态肥胖症 (mobid obesity)” 指 40 或更高的 BMI。然而， 就本公开而言， BMI 为 25-30 的受试者 ( 考虑为超重 )， 或 25 及以 上也包括在 “肥胖” 的。
26、范围之内。然而， BMI 在 25 及以下的受试者也可为本治疗方法的受试 者。 0046 “与肥胖相关的病状或病症”为与肥胖一同发生的病状， 并包括但不仅限于， 高 甘油三酯血症、 血脂障碍 (dyslipidemia)、 蛋白尿、 胰岛素耐受性以及代谢综合征、 视网 膜病变、 神经病和肾病。与肥胖相关的病状或病症还可包括糖尿病并发症， 如糖尿病性视 网膜病变 (diabetic retinopathy)、 糖尿病性神经病 (diabetic neuropathy) 和糖尿病 性肾病 (diabetic nephropathy)。其他与肥胖相关的病状或病症包括美国专利公开号 2007/0232。
27、579 公开的那些。 0047 “脂质病症” 包括但不仅限于高甘油三酯血症、 血脂障碍和低高密度脂蛋白 - 胆固 醇浓度。 0048 “与脂质相关的病状和病症” 为与脂质病症一同发生的病状和病症， 且包括但不仅 限于肥胖。 0049 “治疗” 意指将与病状或病症 ( 例如， 疾病 ) 相关的症状全部或部分的缓解， 或停 止这些症状的进一步进展或恶化， 或防止(prevention)或预防(prophylaxis)所述疾病或 病症。同样， 如在本文中使用， 本文公开的化合物的 “有效量” 指将与病状或病症相关的症 状全部或部分的缓解， 或停止这些症状的进一步进展或恶化， 或防止所述疾病或病症或提。
28、 供对所述疾病或病症的预防的化合物的量。 举例而言， 在治疗肥胖中， 所需治疗结果的实例 是体重增加的减慢或停止， 或者体重的减少。 还在另一个实施例中， 治疗肥胖可包括在儿童 中防止肥胖。所述儿童可对肥胖或与肥胖相关的病状易感 (susceptible)， 或遗传上有相 应诱因 (genetically predisposed)。同样， 本文中公开的化合物有效量可指在儿童中防 止肥胖的化合物的量。作为另一个实例， 供治疗与脂质相关的病症或病状 ( 如高甘油三酯 血症 ) 的化合物有效量可在儿童或其他受试者中减慢、 停止或减少甘油三酯的水平。此外， 说 明 书 CN 103285394 A 6。
29、 5/9 页 7 治疗无需通过施用一次剂量的化合物来进行， 而是经常通过一系列剂量的施用来进行。因 此， 有效量， 足以缓解的量或足以治疗疾病、 病症或病状的量可以以一次或多次剂量或分散 为一次或多次施用的单一剂量来施用。 0050 本文中公开的方法包括对有需要的受试者施用有效量的硝化脂质。 硝化脂质是包 含至少一个与所述脂质共价键合的硝基 (NO2) 基团的脂质。本文中公开的方法涵盖施用单 一类型的硝化脂质或两种或更多种不同类型硝化脂质的混合物。举例而言， 单一类型的硝 化脂质为 9- 硝基 -9- 顺式 - 十八烷酸 (9-nitro-9-cis-octadecanoic acid)。因此。
30、，“类 型” 是根据脂质、 立体化学和 NO2基团的数量和位置来鉴别化合物。 0051 硝化脂质包括经硝化的脂肪酸或其酯。脂肪酸是具有末端 COOH 基团的取代或未 取代的烷基或烯基。 在一些实施方案中， 所述烷基或烯基是C8-C24烷基或烯基。 可使用广泛 种类的脂肪酸， 包括但不仅限于， 单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。在一些实施方案中， 所述单不饱和脂肪酸是油酸。 在一些实施方案中， 所述油酸是9-硝基油酸、 10-硝基油酸或 其组合。脂肪酸的酯是具有末端 COOR 基团的取代或未取代的烷基或烯基。在一些实施方 案中， 所述烷基或烯基是 C8-C24烷基或烯基。R 可包括但不仅限于， C。
31、1-8烷基或甘油基。 0052 硝化脂质可根据已知过程来合成。举例而言， 美国专利公开号 2007/0232579 公开 了包括将脂质与汞盐、 含硒化合物和硝化化合物反应以产生第一中间物， 并将第一中间物 与氧化剂反应的步骤的过程。 有用的汞盐、 含硒化合物、 硝化化合物、 氧化剂、 反应物的相对 量和反应条件也在美国专利公开号 2007/0232579 中公开。上述合成过程可提供两种或更 多种类型的硝化脂质， 如需要， 其可通过本领域已知技术分离或纯化。 0053 如上所述的脂质可从多种来源获得。举例而言， 脂质可为商业上可获得的， 或可 从天然来源获得。植物油， 包括但不仅限于橄榄油、 亚。
32、麻子油 (linseed oil)、 亚麻子油 (flaxseed oil)、 菜籽油和紫苏子油 (perilla oil) 为脂肪酸脂质可能的天然来源。鱼油 或其他海产油 (marine oil) 为脂肪酸其他的可能来源。在任何这些或其他天然来源中存 在的硝化脂质可以以本文中公开的方法提取和 / 或纯化以供使用。 0054 硝化脂质是以有效治疗一种或多种选自下组的病状的量施用的 ： 脂质病症、 肥胖、 与脂质相关的病状或病症和与肥胖相关的病状或病症。所述脂质病症可为高甘油三酯血 症、 高游离脂肪酸浓度和低高密度脂蛋白 - 胆固醇浓度 (hypo-HDL-C) 中的一种或多种。所 述脂质病症可。
33、与肥胖相关或无关。 所述与脂质相关的病状和病症和与肥胖相关的病状和病 症可为与肥胖或脂质相关的器官损伤或功能障碍， 包括蛋白尿、 视网膜病变、 神经病和肾病 中的一种或多种。 0055 在公开的方法中， 所述硝化脂质是以有效量对受试者施用的。 在一些实施方案中， 所述有效量是相对于在施用硝化脂质之前受试者的体重减少所述受试者体重的量。 在一些 实施方案中， 所述受试者的体重减少了约 1% 至约 20%， 约 5% 至约 20% 或约 5% 至约 15%。在 其他实施方案中， 所述有效量是相对于在施用硝化脂质之前受试者的体重增加减慢或停止 该受试者的体重增加的量。在其他实施方案中， 所述有效量是。
34、相对于在施用硝化脂质之前 受试者的食物摄入减少受试者身体食物摄入的量。在其他实施方案中， 受试者的食物摄入 减少了约 10% 至约 70%， 约 15% 至约 50% 或约 20% 至约 30%。 0056 在其他实施方案中， 所述方法涉及治疗罹患脂质病症或与脂质相关的病症或病状 的受试者， 例如， 需要减少受试者的甘油三酯、 胆固醇、 游离脂肪酸、 尿蛋白水平或氧化应激 说 明 书 CN 103285394 A 7 6/9 页 8 水平， 或者增加受试者血浆高密度脂蛋白 (HDL) 水平的受试者。因此， 在一些实施方案中， 所述量对相对于施用硝化脂质之前受试者的水平减少该受试者中的甘油三酯水。
35、平是有效 的。在一些这样的实施方案中， 受试者的甘油三酯水平减少了约 5% 或约 10% 至约 50%， 约 15% 至约 45%， 或约 20% 至约 40%。在其他实施方案中， 所述量对相对于在施用硝化脂质之 前受试者的水平减少该受试者中的血浆游离脂肪酸水平是有效的。在一些这样的实施方 案中， 受试者的血浆游离脂肪酸水平减少了约 10% 至约 90%， 约 20% 至约 70%， 或约 30% 至约 60%。在其他实施方案中， 所述量对减少尿蛋白的水平是有效的。在一些这样的实施方案 中， 受试者的血浆尿蛋白减少了约 10% 至约 90%， 约 20% 至约 70%， 或约 30% 至约 6。
36、0%。在其 他实施方案中， 所述量对相对于在施用硝化脂质之前受试者的水平增加该受试者中的血浆 HDL的水平是有效的。 在一些这样的实施方案中， 受试者的血浆HDL水平增加了约10%至约 90%， 约 15% 至约 70%， 或约 20% 至约 50%。 0057 在其他方面， 所述方法涉及减少受试者的葡萄糖水平， 和 / 或胰岛素水平。因此， 在一些实施方案中， 所述量对相对于在施用硝化脂质施用之前受试者的水平减少受试者中 的葡萄糖的水平是有效的。在这样的实施方案中， 受试者的葡萄糖水平减少了约 10% 至约 60%， 约 15% 至约 50%， 或约 20% 至约 45%。在其他实施方案中，。
37、 所述量对相对于在施用硝化 脂质之前受试者的水平减少受试者中的胆固醇的水平是有效的。在这样的实施方案中， 受 试者的胆固醇水平减少了约 0% 至约 60%， 约 10% 至约 50%， 或约 20% 至约 40%。在其他实施 方案中， 所述量对相对于在施用接受硝化脂质之前受试者的水平减少受试者中的胰岛素水 平是有效的。在这样的实施方案中， 受试者的胰岛素水平减少了约 10% 至约 90%， 约 20% 至 约 80%， 或约 20% 至约 50%。 0058 在一些实施方案中， 所述方法涉及减少受试者的氧化应激水平。氧化应激被报道 为在代谢综合征的发展中起致病作用。氧化应激可与肥胖或高血脂症相。
38、关或无关。因此， 在一些实施方案中， 所述量对相对于在施用硝化脂质之前受试者中的水平减少该受试者中 的氧化应激的水平是有效的。在这样的实施方案中， 血浆硫代巴比妥酸 (Thiobarbituric acid， TBARS) 测定作为系统性氧化应激的指标。因此， 在一些实施方案中， 所述量对相对于 在施用硝化脂质之前受试者中的水平减少该受试者中血浆 TBARS 的水平是有效的。在一些 这样的实施方案中， 受试者的血浆 TBARS 水平减少了约 10% 至约 90%， 约 20% 至约 70%， 或约 30% 至约 60%。 0059 本文中公开的方法还涵盖以有效提供多种如上所述的治疗结果的组合的。
39、量施用 硝化脂质。 举例而言， 在一些实施方案中， 所述硝化脂质的有效量是减少受试者体重和甘油 三酯水平二者的量。在其他实施方案中， 所述有效量是减少受试者甘油三酯水平， 和 / 或受 试者葡萄糖水平、 胰岛素水平和尿蛋白排泄速率中的一种或多种的量。还在其他的实施方 案中， 所述有效量是减少受试者体重、 甘油三酯水平， 和 / 或受试者葡萄糖水平、 胰岛素水 平和尿蛋白排泄速率中的一种或多种的量。在其他实施方案中， 所述有效量是减少受试者 的体重、 甘油三酯水平和增加受试者血浆 HDL 水平的量。还在另一个实施方案中， 所述有效 量是减少受试者体重、 甘油三酯水平和尿蛋白水平的量。 0060 。
40、施用的所述硝化脂质具体的有效量会取决于多种因素而变动， 例如， 待治疗的病 状、 受试者的年龄、 体重、 一般健康、 性别和饮食， 给药间隔和施用途径。 在一些实施方案中， 所述硝化脂质的有效量的范围为约每日 1g 至约每日 1g， 约每日 1mg 至约每日 500mg， 约 说 明 书 CN 103285394 A 8 7/9 页 9 每日 1mg 至约每日 100mg 或约每日 2mg 至约每日 10mg。 0061 任何本文中公开的硝化脂质可单独或与一种或多种其他治疗剂组合对受试者施 用。 “组合施用 (administered in combination)” 指所述硝化脂质和所述治疗。
41、剂可作为 单一组合物施用， 作为不同药剂 (as separate dose) 同时施用， 或顺次施用。顺次施用 (sequential administration) 指将硝化脂质和至少一种治疗剂不拘顺序先后施用。可使 用多种治疗剂， 包括但不仅限于上述在脂质病症、 与脂质相关的病症或病状、 肥胖或任何与 肥胖相关的病状或病症的治疗中有用的那些。硝化脂质可与其他疗法一同施用， 所述其他 疗法包括但不仅限于， 袖状胃切除术 (sleeve gastrectomy) 的手术， 生活方式改变的非药 理学疗法， 使用抑制素、 brate、 烟酸和 -3 脂肪酸或鱼油的药理学疗法。 0062 硝化脂质。
42、可通过任何数量的药物配制剂和施用途径对受试者施用。所述配制剂 可采用颗粒、 粉末、 片剂、 胶囊、 糖浆、 栓剂、 注射液、 乳液、 酏剂、 悬液或溶液的形式。视需 要， 这些配制剂还可包含多种公知的药学上可接受的添加剂、 载体和 / 或赋形剂。所述配 制剂可通过多种施用途径递送至受试者， 例如， 通过局部施用、 经皮施用、 口服施用、 鼻部 施用、 直肠施用、 皮下注射、 静脉内注射、 肌肉内注射或腹膜内注射。任何美国专利公开号 2007/0232579 中公开的配制剂、 递送方法和药学上可接受的添加剂、 载体和赋形剂也可用 于本文中描述的方法。另一个可能的施用途径包括将硝化脂质掺入多种食品。
43、。食品包括但 不仅限于， 黄油、 人造奶油、 植物油等。 0063 所公开方法的受试者包括可从硝化脂质的施用获益的任何动物。 在一些实施方案 中， 所述受试者是哺乳动物， 例如人、 灵长类、 犬、 猫、 马、 牛、 猪或啮齿类， 例如大鼠或小鼠。 通常所述哺乳动物是人。人可为成人或儿童。所述人可对与脂质相关的病症或病状、 肥胖 或与肥胖相关的病症或病状易感， 或遗传上有相应诱因。 0064 本领域技术人员会理解， 就任何和全部目的而言， 特别是在提供书面描述方面， 本 文中公开的所有范围还涵盖任何和全部可能的亚范围及其亚范围的组合。 任何列举的范围 可方便地认为是充分的描述了该范围， 并使其能。
44、够至少拆分为相同的二等分、 三等分、 四等 分、 五等分、 十等分等。作为非限定性的实例， 本文中讨论的每个范围可方便地拆分为下三 分之一、 中三分之一和上三分之一等。本领域技术人员也会理解， 所有如 “高至” 、“至少” 、 “多于” 、“少于” 等表述包含所记载的数量， 并表明该范围可随后如上所述拆分为亚范围。最 后， 本领域技术人员会理解， 范围包括所有的单个成员。因此， 举例而言， 具有 1-3 个原子的 组指具有 1、 2 或 3 个原子的组。同样， 具有 1-5 个原子的组指具有 1、 2、 3、 4 或 5 个原子的 组， 依此类推。 0065 所有在本说明书中提及的公开、 专利。
45、申请、 授权专利和其他文件均以全文提述的 方式并入本文， 如同每个单独的公开、 专利申请、 授权专利或其他文件均特别地并单独地指 明以全文提述的方式并入本文一般。 如果在以提述的方式并入本文的文本中包含的定义与 本公开的定义相悖， 则予以排除。 0066 就本公开而言， 除非另行指明，“一个” 或 “一种” 意指 “一个或多个” 或 “一种或多 种” 。 0067 虽然已经一般性的描述了本技术， 通过参照下述实施例， 将使其更方便地让人理 解， 所述实施例仅供说明， 而并非意欲限定本技术。 说 明 书 CN 103285394 A 9 8/9 页 10 实施例 0068 材料和方法 ： 006。
46、9 动物 0070 雄 性 4 月 龄 Zucker 肥 胖 和 Zucker 糖 尿 病 大 鼠 来 自 Charles River Laboratory(Wilmington,MA)。所有的动物饲养 (house) 在具有 12 小时光 / 暗循环 (light/dark cycle) 的空调房间中。所有的过程和实验方法遵循 University of Utah 的 Laboratory Animal Care Committee 设定的规程。 0071 材料 0072 9- 硝 基 油 酸 和 10- 硝 基 油 酸 是 硝 基 油 酸 (OA-NO2) 的 两 个 区 域 异 构 体 。
47、(regioisomer)， 其在体内通过硝化油酸以大约相同比例形成。参见 Baker P.R. 等， Fatty acid transduction of nitric oxide signaling:multiple nitrated unsaturated fatty acid derivatives exist in human blood and urine and serve as endogenous peroxisome proliferator-activated receptor ligands,J BiolChem,280:42464-42475,2005。这两种化合物购。
48、自 Cayman Chemicals(Ann Arbor,MI) (9- 硝基油酸 ： Cat#10008042;10- 硝基油酸 ： Cat#10008043)， 并作为 1:1 异构体混合物使 用。 0073 油酸购自 Sigma(Cat#75090)。 0074 动物实验方法 0075 长期灌注 OA-NO2的实验方法 1 0076 用溶剂载体 ( 乙醇 )、 7.5g/kg/ 日的 OA-NO2或 7.5g/kg/ 日的 OA 通过微渗透 泵处理肥胖和糖尿病 (ZDF) 两个种系的 Zucker 大鼠 (Charles River)。在异氟烷的麻醉 下， 将所述微泵植入至颈部区域的皮下。
49、。 在处理之前和之后确定体重、 食物摄入并收集血液 和尿试样。 在血液采样之前， 动物从6:00pm禁食至9:00am。 血液采样通过用剃刀片(razor blade) 在尾部制造小切口 (2mm) 来进行。24 小时的尿使用代谢笼收集。 0077 实施例 1: 使用硝化脂质在 Zucker 肥胖大鼠中治疗肥胖和高血脂症和肾脏损伤 0078 成体 Zucker 肥胖大鼠发展出严重的肥胖和高血脂症， 但相对而言对糖尿病具有 抗性。因此， 这些动物用于测试 OA-NO2的体重减少和降脂作用。为了确定这些作用是否可 直接归结于脂肪酸的硝化， 使用其母体脂肪酸 (OA) 作为对照。从 4 月龄开始， 用溶剂载体、 OA-NO2(9- 硝基油酸和 10- 硝基油酸购自 Cayman Chemical,Ann Arbor,MI 并作为 1:1 混合 物使用 ) 或 OA( 均为 7.5g/kg/ 日 ) 对 Zucker 肥。