《用于实现用于收集和转移分子生物学样品之装置的方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《用于实现用于收集和转移分子生物学样品之装置的方法.pdf（11页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201280004723.8 (22)申请日 2012.01.03 MI2011A000004 2011.01.05 IT A61B 10/00(2006.01) B01L 3/00(2006.01) C12M 1/30(2006.01) G01N 1/10(2006.01) (73)专利权人 意大利科潘恩集团公司 地址 意大利布雷西亚 (72)发明人 达尼埃莱特里瓦 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 彭鲲鹏 郑斌 CN 101765551 A,2010.06.30, 说明书第 0045-0046、。
2、 0141 段， 附图 1A-1B. WO 2004/086979 A1,2004.10.14, 说明书第 3 页第 19 行 - 第 5 页、 第 6 页第 21-22 行， 附图 1-2. WO 2009/136892 A1,2009.11.12, 说明书第 5 页第 30 行 - 第 6 页第 7 行 . US 6887681 B2,2005.05.03,说明书第15栏 第 55 行 - 第 16 栏第 2 行 . US 4421809 A,1983.12.20,说明书第2栏第 40-57 行 . CN 101389716 A,2009.03.18, 全文 . US 2003129765。
3、 A1,2003.07.10, 全文 . (54) 发明名称 用于实现用于收集和转移分子生物学样品之 装置的方法 (57) 摘要 用于实现收集和转移分子生物学样品之装置 (1) 的方法， 所述装置至少包含 ： 具有至少第一部 分(2a)的支撑体(support body)(2)和通过植绒 (ocking)连接并且排布在所述支撑体(2)之所 述第一部分(2a)上从而界定出植绒收集部分(3) 的多根纤维 (6)， 其用于将一定量的分子生物学 样品收集在所述收集部分 (3) 上， 所述方法至少 包括用表面活性剂预处理所述多根纤维 (6) 的步 骤， 所述用表面活性剂预处理所述多根纤维 (6) 的步骤。
4、在通过植绒将所述纤维应用在所述支撑体 (2)上之后进行和/或在通过植绒将所述纤维(6) 应用在所述支撑体 (2) 上之前进行和 / 或在其中 在产生所述纤维 (6) 期间向所述纤维 (6) 添加所 述表面活性剂。 (30)优先权数据 (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2013.07.05 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/IB2012/050018 2012.01.03 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2012/093350 EN 2012.07.12 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 王传利 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书。
5、3页 说明书6页 附图1页 CN 103327906 B 2016.06.29 CN 103327906 B 1.用于实现收集、 保存和转移分子生物学样品之装置的方法， 所述装置至少包含： 具有至少第一部分(2a)的支撑体(2)， 和 多根纤维(6)， 其通过植绒连接并且排布在所述支撑体(2)之所述第一部分(2a)上， 从 而界定出植绒收集部分(3)， 其用于将一定量的分子生物学样品收集在所述收集部分(3)上 并保存所述样品一段时间， 所述方法至少包括用表面活性剂预处理所述多根纤维(6)的步骤， 其中用所述表面活 性剂预处理是用于将所述样品在所述收集部分上保存预定的时间， 所述用表面活性剂预处。
6、 理所述多根纤维(6)的步骤在通过植绒将所述纤维应用在所述支撑体(2)上之后进行和/或 在通过植绒将所述纤维(6)应用在所述支撑体(2)上之前进行和/或在其中在产生所述纤维 (6)期间向所述纤维(6)添加所述表面活性剂。 2.根据权利要求1所述的方法， 其中所述表面活性剂是阳离子表面活性剂。 3.根据权利要求1所述的方法， 其中所述表面活性剂是季铵化合物。 4.根据权利要求1所述的方法， 其中所述表面活性剂是具有正电部分的盐， 所述正电部 分至少由末端为季铵基团的碳原子链构成。 5.根据权利要求1所述的方法， 其中所述表面活性剂是苯扎氯铵。 6.根据权利要求1所述的方法， 其中所述表面活性剂是。
7、季铵盐或者所述表面活性剂包 含季铵盐的混合物。 7.根据权利要求1所述的方法， 其中所述表面活性剂是烷基-苄基-二甲基铵之氯化物 的混合物， 其中所述烷基为辛基至十八基。 8.根据权利要求1所述的方法， 其中所述表面活性剂选自包括苯扎氯铵、 苄索氯铵、 西 他氯胺、 月桂基三甲基溴化铵、 十四烷基三甲基溴化铵、 西曲溴铵、 十六烷基三甲基溴化铵、 西吡氯铵和司拉氯铵的组。 9.根据权利要求1所述的方法， 其还包括预先准备水基溶液的步骤， 所述溶液包含所述 表面活性剂， 其在所述溶液中的量为按体积计或按重量计0.1至15， 并且其中用表面活 性剂处理所述多根纤维(6)的步骤通过所述纤维(6)对所。
8、述溶液的吸收来进行， 所述的纤维 (6)对所述溶液的吸收在通过植绒将所述纤维(6)应用在所述体(2)的第一部分(2a)上之后 进行。 10.根据权利要求9所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计或 按重量计0.2至10。 11.根据权利要求9所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计或 按重量计0.5至5。 12.根据权利要求9所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计或 按重量计0.8至1.5。 13.根据权利要求9所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计或 按重量计0.4至1.2。 14.根据权利要求1所述的方法， 其还包。
9、括预先准备水基溶液的步骤， 所述溶液包含的 所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计或按重量计0.1至15， 并且其中用表面 活性剂处理所述多根纤维(6)的步骤通过所述纤维(6)对所述溶液的吸收来进行， 所述的纤 维(6)对所述溶液的吸收在通过植绒将纤维(6)应用在所述体(2)的第一部分(2a)上之前进 权 利 要 求 书 1/3 页 2 CN 103327906 B 2 行。 15.根据权利要求14所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计 或按重量计0.2至10。 16.根据权利要求14所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计 或按重量计0.5至5。 17。
10、.根据权利要求14所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计 或按重量计0.8至1.5。 18.根据权利要求14所述的方法， 其中所述表面活性剂在所述溶液中的量为按体积计 或按重量计0.4至1.2。 19.用于收集、 保存和转移分子生物学样品的装置(1)， 其至少包含： 具有至少第一部分 (2a)的支撑体(2)和通过植绒连接并且排布在所述支撑体(2)之所述第一部分(2a)上的多 根纤维(6)， 从而界定了植绒收集部分(3)， 其用于将一定量的分子生物学样品收集在所述 收集部分(3)上并保存一段时间， 其特征在于所述多根纤维(6)经表面活性剂预处理， 从而 将所述样品在所述收集部。
11、分上保存预定的时间， 并且增加所述收集装置可释放的和可用于 分子生物学操作的DNA或RNA的量。 20.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述表面活性剂是阳离子表面活性剂。 21.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述表面活性剂是苯扎氯铵。 22.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述表面活性剂是具有正电部分的盐， 所述 正电部分至少由末端为季铵基团的碳原子链构成。 23.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述表面活性剂是季铵盐或者其中其包含季 铵盐的混合物。 24.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述表面活性剂是烷基-苄基-二甲基铵之氯 化物的混合物， 其中所。
12、述烷基为辛基至十八基。 25.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述表面活性剂是季铵化合物。 26.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述表面活性剂选自包括苯扎氯铵、 苄索氯 铵、 西他氯胺、 月桂基三甲基溴化铵、 十四烷基三甲基溴化铵、 西曲溴铵、 十六烷基三甲基溴 化铵、 西吡氯铵和司拉氯铵的组。 27.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述植绒收集部分(3)被构建成收集基本已 知量的所述样品， 或收集的所述样品的量包含5至1000微升和/或收集样品的量为每mm2至 少0.5 l。 28.根据权利要求27所述的装置(1)， 其中收集的所述样品的量包含10微升至500微升。。
13、 29.根据权利要求27所述的装置(1)， 其中收集的所述样品的量包含50至200微升。 30.根据权利要求27所述的装置(1)， 其中收集的所述样品的量包含80至120微升。 31.根据权利要求27所述的装置(1)， 其中收集样品的量为每mm2至少0.6 l。 32.根据权利要求27所述的装置(1)， 其中收集样品的量为每mm2至少0.7 l。 33.根据权利要求27所述的装置(1)， 其中收集样品的量为每mm2至少0.75 l。 34.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述纤维(6)以基本有序的方式排布在所述 支撑体(2)的第一部分(2a)上从而在所述收集部分(3)上形成基本连续的层。
14、， 和/或所述纤 维(6)以这样的方式排布在所述收集部分(3)上， 从而界定出多个用于通过毛细作用吸收所 权 利 要 求 书 2/3 页 3 CN 103327906 B 3 述样品的毛细间隙(9)。 35.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述纤维(6)的纱线支数为1.7至3.3分特克 斯和/或长度为0.6至3mm。 36.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述纤维(6)由选自以下的材料制成： 聚酰 胺、 人造丝、 聚酯、 碳纤维、 藻酸盐/酯、 天然纤维或其混合物。 37.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述纤维(6)由尼龙制成。 38.根据权利要求19所述的装置(1)。
15、， 其中所述收集部分(3)表现为： 所述纤维(6)在收 集部分(3)上的表面密度为每mm250至500纤维。 39.根据权利要求19所述的装置(1)， 其中所述收集部分(3)表现为： 所述纤维(6)在收 集部分(3)上的表面密度为每mm2100至200纤维。 40.用于通过根据权利要求19所述的装置(1)收集、 保存和转移分子生物学样品的方 法， 所述方法至少包括将分子生物学样品至少收集在具有支撑体(2)的所述收集装置(1)的 植绒收集部分(3)上的步骤， 所述收集部分(3)包含所述支撑体(2)的第一部分(2a)和通过 植绒连接并且排布在所述支撑体(2)的所述第一部分(2a)上的多根纤维(6)。
16、， 所述多根纤维 (6)经阳离子表面活性剂预处理， 从而将所述样品在所述收集部分上保存预定的时间。 41.根据权利要求40所述的方法， 其用于收集和转移DNA或RNA样品和/或包含DNA或RNA 样品的细胞。 42.根据权利要求40所述的方法， 其还包括从所述收集部分(3)中释放所述分子生物学 样品以便能够对所述样品进行分子生物学操作的步骤。 43.根据权利要求40所述的方法， 其中所述预定的时间为24小时。 44.根据权利要求40所述的方法， 其中所述预定的时间为一周。 45.根据权利要求40所述的方法， 其还包括干燥至少提供有所述样品之所述收集部分 (3)的步骤。 46.根据权利要求45所。
17、述的方法， 其中所述干燥步骤通过在强制通风烘箱中干燥来进 行。 47.根据权利要求45所述的方法， 其还包括在干燥步骤期间将所述收集部分(3)插入密 封容器的步骤。 权 利 要 求 书 3/3 页 4 CN 103327906 B 4 用于实现用于收集和转移分子生物学样品之装置的方法 0001 本发明涉及用于实现用于收集和转移分子生物学样品之装置的方法。 0002 本发明还涉及使用所述方法实现的用于收集和转移分子生物学样品的装置以及 使用所述装置的用于收集和转移分子生物学样品的方法。 0003 本发明适用于例如收集和转移分子生物学样品， 例如DNA、 RNA以及包含DNA和RNA 的细胞。 0。
18、004 本发明还可有效地应用于收集和转移其他类型的分析物或生物学样品或生物来 源的样品。 0005 现有技术包括多种用于收集和转移分析物如组织或生物物质(例如， 随后待进行 分析或诊断类型的实验室检查)的装置。 现有技术尤其描述了常规收集装置的用途， 所述装 置包含伸长的支撑体(support body)以及缠绕在所述体之一端的伸长的纤维(一般为棉 花)， 以界定出在其内部用于吸收待收集样品的收集部分。 0006 这些装置表现出多种缺点， 其中事实是生物样品倾向于保留在收集部分的内部， 因此难以在需要的时候从收集部分提取出来。 因此， 可从最初可得的样品中回收之样品的 量非常有限， 这导致了多。
19、种缺点。 因为在一些情况下， 起初所收集物质的实际的量可能非常 有限， 所以具有根本重要性的是能够收集最大可能百分比的初始收集的物质。 为了避免该 缺点， 提供了通常称为植绒拭子(flocked swab)的装置， 其包含伸长的支撑体和在所述支 撑体的一端的多个植绒纤维(其界定出用于分析物或生物样品的收集部分)。 可通过在磁场 中植绒将纤维植绒在所述体上， 并且可使用合适的胶或甚至不使用粘合剂而将纤维粘附至 支撑体。 纤维可有序地排布并且基本与支撑体垂直， 从而界定出用于收集、 运输和选择释放 所收集样品的最佳构型。 这类装置是已知的， 例如在属于本申请人的专利EP1608268 B1中。 由。
20、于平行于支撑体的纤维的有序排布， 这些装置能够吸收至少等于上述常规装置的分析物 或样品的量， 但是其表现出在合适时间能使从收集部分释放更大量之分析物或样品(容易 地回收原始样品的高达80或甚至更多)的大的优点。 本申请人已发现尽管上述植绒装置 也可有利用地用于收集和转移分子生物学样品(如DNA、 RNA以及含有这些样品的细胞)， 但 是通过该装置释放和可有效用于进行分子生物学操作(如聚合或扩增)的DNA和RNA的量有 时候是不令人满意的或不足的， 其具有在待在所述样品上进行之进行过程的情况下的全部 随之发生的困难。 0007 本发明的主要目的是解决一个或更多个在现有技术中遇到的问题。 本发明的。
21、一个 目的是提供用于收集和转移分子生物学样品的方法和装置， 相对于已知的装置， 本发明提 供的方法和装置能够从收集装置中提取更大量的可用于进行分子生物学操作的分子生物 学样品。 本发明的另一目的是提供用于收集和转移分子生物学样品的方法和装置， 其能够 以最佳形式和条件从收集装置中提取最大可能百分比的装置最初所收集的DNA或RNA， 用于 全部进一步的用途。 本发明的另一目的是提供用于收集和转移分子生物学样品的方法和装 置， 其能够有效保持由装置收集之DNA或RNA样品的完整性。 本发明的另一目的是提供用于 收集和转移分子生物学样品的方法和装置， 其能够降低需要对装置释放的DNA或RNA样品进 。
22、行聚合反应或聚合酶的链式反应的循环次数。 本发明的另一目的是提供用于收集和转移分 说 明 书 1/6 页 5 CN 103327906 B 5 子生物学样品的方法和装置， 其的实现简单并经济。 根据一个或更多个所附权利要求(单独 或组合)或其与下文描述的一个或更多个其他方面的任何组合所述的， 将更完整地出现在 下文描述中的这些以及除此之外的其他目的通过用于收集和转移生物分子学样品的方法 和装置以及用于实现用于收集和转移生物分子学样品之装置的方法而基本实现。 在另一个 方面， 本发明还涉及根据所附方法权利要求中的任意一项或根据本文所述另外方面的方 法， 其还至少包括以下步骤： 生产具有至少第一部。
23、分之装置的支撑体的步骤以及通过植绒 在第一部分上应用多根纤维的步骤。 0008 在另一个方面， 本发明还涉及根据所附方法权利要求中的任意一项或根据本文所 述的另外方面的方法， 其还包括在对纤维预处理的步骤之后干燥纤维的步骤。 在另一个方 面， 本发明还涉及根据所附方法权利要求中的任意一项或根据本文所述的另外方面的方 法， 其中表面活性剂是阳离子或苯扎氯铵(BAC或烷基-二甲基-苄基氯化铵或ADBAC)， 并且 其中纤维由尼龙制成。 在另一个方面， 本发明还涉及用于收集和转移分子生物学样品的装 置， 其根据任意一项所附权利要求由用于实现用于收集和转移分子生物学样品之装置的方 法来实现。 在另一个。
24、方面， 本发明还涉及根据所附方法权利要求中的任意一项或本文所述 的另外方面的方法， 其中预先准备溶液的阶段包括以下步骤： 预先准备预定量的表面活性 剂(优选阳离子)； 将所述预定量的表面活性剂溶解在水中以得到溶液， 和/或使溶液基本上 均质的步骤。 在另一个方面， 本发明还涉及根据所附方法权利要求中的任意一项或本文所 述的另外方面的方法， 其还包括干燥至少由样品提供之收集部分的步骤和/或还包括在干 燥步骤期间或独立于干燥步骤之外将收集部分插入密封容器的步骤。 在另一个方面， 本发 明还涉及根据所附方法权利要求中的任意一项或本文所述的另外方面的方法， 其还包括例 如通过在液体介质中稀释、 在缓冲。
25、剂或缓冲溶液中悬浮以从收集部分释放至少80、 或至 少86、 或至少90、 或至少95的所收集样品的步骤。 在其另一个优选方面， 本发明还涉 及表面活性剂或阳离子表面活性剂的用途， 其用于预处理通过植绒应用在或待应用在用于 收集和转移分子生物学样品之装置的支撑体上的纤维， 从而相对于可未进行预处理之装置 的纤维中得到的可释放的和可用于分子生物学操作的量， 提高可由收集装置释放的和可用 于分子生物学操作的DNA或RNA的量。 在其另一个优选方面， 本发明还涉及阳离子表面活性 剂(特别是苯扎氯铵)的用途， 其用于预处理通过植绒应用在或待应用在收集和转移分子生 物学样品之装置的支撑体上的尼龙纤维， 。
26、从而相对于收集和转移装置的可释放量， 提高可 用于分子生物学操作的DNA或RNA百分比。 在另一个方面， 本发明还涉及阳离子表面活性剂 的用途， 其用于生产待通过植绒应用在分子生物学样品之收集和转移装置的支撑体上的纤 维， 其中在生产纤维期间将阳离子表面活性剂添加到用于实现纤维的材料中。 现在借助附 图通过非限制性实例提供本发明的一个或更多个优选实施方案的详细描述， 附图中： 0009 图1是根据本实例之一个实施方案的装置的侧视图； 0010 图2是关于收集部分的图1装置的详细图示； 0011 图3是根据本发明的一个实施方案的容器。 0012 接下来描述根据本发明的一个或更多个实施方案的分子生。
27、物学样品的收集和转 移装置1。 在本文中， 术语 “分子生物学” 旨在意指能够检测、 分析、 操作(manipulation)、 扩 增(PCR)和复制(克隆)核酸(DNR和RNA)的技术。 0013 表述 “可用于分子生物学操作的DNR或RNA” 旨在意指DNA或RNA是完整的， 未被损坏 说 明 书 2/6 页 6 CN 103327906 B 6 或未呈现为不可用， 并且在任何情况下对于进行多种分子生物学操作(如聚合作用)都是足 够良好的状态。 0014 参照附图， 1以其整体表示用于收集和转移分子生物学样品的装置。 装置1包含支 撑体2， 其可以具有伸长的构型和/或基本为棒状的构型。 。
28、支撑体2可具有任何部件 (section)， 包括可沿其纵向伸缩可变的一种。 支撑体具有界定出样品的收集部分3的第一 部分2a(例如末端部分)、 基本为棒状的中央第二部分2b以及末端第三部分2c， 其处可由操 作者用手握住或者可与另外的抓取元件(gripping element)4(如试管盖5等)连接。 0015 样品的收集部分3可以制成拭子。 收集部分3是植绒的， 通过在所述体的第一端2a 上植绒多根纤维6来实现。 植在第一端上的纤维6可由亲水或不亲水材料制成， 但是由于纤 维6的特性及其在支撑体2上的分布， 在任何情况下收集部分3都通过毛细作用而亲水。 植绒 纤维6优选由尼龙制成。 换言之。
29、， 收集部分3可以是这样的纤维6的连续层， 其由对样品基本 吸收或不吸收的材料制成， 但是具有有序的多个毛细间隙9， 其中通过吸收可以保留预定量 的样品(例如， 液体样品)， 并且在合适时间可通过例如将收集部分3在特定的释放表面摩擦 以定量从中释放样品。 这类植绒拭子的实例举例说明于属于本申请人的专利EP1.608.268 中， 其关于植绒拭子结构的内容通过引用并入本说明书中。 如在上述专利中描述的， 通过植 绒的沉积， 在收集装置1相关端上产生有序排布的多根纤维6的连续且均质的层， 所述多根 纤维6在支撑体2的第一部分2a的每点上基本垂直， 并且其每一个与相邻的纤维6基本平行。 在纤维6之间。
30、界定出相应有序的多个毛细间隙9， 其间可通过毛细作用的吸收来收集并保留 预定量的样品。 通过例如在特定表面上摩擦或将样品在合适的稀释剂中稀释， 植绒层随后 可有效释放所收集的样品。 植绒收集部分3可被构形并制作成期望的大小以收集合适量的 样品， 或收集以下量的样品： 例如5至1000微升、 10微升至500微升或50至200微升， 或80至 120微升。 纤维6可以以基本有序的方式排布在支撑体2上， 从而在收集部分3上形成基本连 续的层和/或可排布在收集部分3上从而界定出多个用于通过毛细作用吸收液体样品的毛 细间隙9。 纤维6可具有1至10分特克斯(Dtex)， 或优选1.7至3.3分特克斯的。
31、纱线支数(yarn count)， 和/或纤维6可表现出0.6至3mm的长度。 纤维6可通过植绒排布在支撑体2的收集部 分3上， 其表面密度为例如每mm2支撑体2的第一部分2a的表面50至500根纤维， 或每mm2100至 200根纤维。 纤维层可以界定出例如每mm2支撑体2的表面至少0.5 l， 或每mm2至少0.6 l， 或 每mm2至少0.7 l， 或每mm2至少0.75 l的吸收能力。 纤维6可以由基本不亲水的物质或不吸收 样品的材料制成， 和/或由基本亲水的物质或吸收样品的材料制成和/或由选自以下的材料 制成： 聚酰胺、 尼龙、 人造丝、 聚酯、 碳纤维、 藻酸盐/酯(alginat。
32、e)、 天然纤维或上述材料的 混合物。 纤维优选由尼龙制成。 支撑体2可表现出2cm至20cm， 或3cm至18cm， 或6cm至16cm的 纵向伸缩和/或0.5mm至5mm， 或1mm至3mm， 或1.5至2.5mm的厚度或与其中轴垂直的截面的直 径。 收集部分3可表现出8cm至0.5cm或5cm至1cm的纵向伸缩和/或10mm至1mm或8mm至2mm或 5mm至2.5mm的包含纤维6的直径或厚度。 收集部分3可表现出适合待收集样品之种类的或适 合收集位置(collection seating)的任何形状， 例如圆形或具有一个或更多个存在的边缘 (live edge)。 支撑体2可具有用于促。
33、使在其第一端和第二端之间的中间位置选择性断裂所 述体本身的中间弱化部分， 以便例如促使收集部分3插入到容器7中用于运送。 收集装置1可 包含多个支撑体2， 每个支撑体具有构造或形状不同且被特别地构造以收集特定位置中的 样品或收集特定量之样品的收集部分3。 在本发明中， 在用于收集样品之前(例如在装置1的 说 明 书 3/6 页 7 CN 103327906 B 7 生产阶段期间)用表面活性剂对纤维6进行预处理。 表面活性剂可以是阳离子、 阴离子、 非离 子或两性的。 在本发明中， 表面活性剂优选阳离子。 在本发明中， 使用阳离子表面活性剂(例 如特别是苯扎氯铵)能够以出乎意料和特别显著的方式实。
34、现上述目的。 在本发明中， 在使用 尼龙纤维中使用阳离子表面活性剂(例如特别是苯扎氯铵)能够以出乎意料和特别显著的 方式实现上述目的。 在本发明中， 阳离子表面活性剂优选苯扎氯铵(BAC或烷基-二甲基-苄 基氯化铵或ADBAC)。 阳离子表面活性剂可以是具有由至少具有季铵基团之碳链构成的正电 部分(positive part)的盐和/或可以是季铵盐或者可以包含铵盐的混合物。 阳离子表面活 性剂可以是烷基-苄基-二甲基铵之氯化物的混合物， 其中烷基为辛基(octile)(C8H17-)至 十八基(octadecyl)(C18H37-)。 在一个替选实施方案中， 阳离子表面活性剂可以是溴化十六 烷。
35、基三甲胺(CTAB或十六烷基三甲基溴化胺)。 在另一些替选实施方案中， 阳离子表面活性 剂可以是例如苄索氯铵、 西他氯胺(cetalkonium chloride)、 月桂基三甲基溴化铵、 十四烷 基三甲基溴化铵、 西曲溴铵(cetrimide)、 十六烷基三甲基溴化铵(cetrimonium bromide)、 西吡氯铵或司拉氯铵(stearalkonium chloride)。 收集装置1还可包含用于运输样品的容 器7， 其具有内部容纳位置10和入口(access opening)11。 容器7可以是用于运送生物材料 或生物来源之样品的试管。 收集装置1还可包含封闭帽5， 其可移除地可安装。
36、在入口上以选 择性封闭容器7。 收集装置1还可至少包含位于容器7中或其他有用位置的干燥或除湿元件 (dehumidifying element)， 例如包含硅胶的袋子。 容器7和/或封闭帽5和/或支撑体2可由 塑料材料(如聚苯乙烯(polystyrol或polystyrene)或聚丙烯)制成和/或其材料适用于待 收集的特定样品， 或者一般适用于生物材料或生物来源材料。 容器7和/或封闭帽5和/或支 撑体2可以是灭菌的。 收集装置1还可包含密封包装(作为已知类型未在图中举例说明)， 在 用于收集样品前可以将支撑体2和/或容器7和封闭帽5装于所述密封包装中。 支撑体2、 所述 包装、 容器7和帽5。
37、可以是无菌的。 本发明还涉及用于实现用于收集和转移上述种类的分子 生物学样品之装置1的方法。 所述方法可包括例如以下步骤(其本身是已知类型的， 因此未 更详细地描述)： 例如通过塑料材料的挤出来实现支撑体2； 在所述体2的第一部分2a上应用 合适的胶； 通过在电磁场中植绒的方式在第一部分2a上应用纤维6； 在合适的常规类型干燥 室中将胶干燥， 从而至少部分地使胶聚合。 在本发明中， 所述方法还包括用上述类型的阳离 子表面活性剂预处理所述多根纤维6的步骤。 所述方法还可至少包括在预处理纤维的步骤 之后将纤维例如在干燥室中干燥的步骤。 用阳离子表面活性剂预处理所述多根纤维6的步 骤可在通过植绒将纤。
38、维应用在支撑体2上之后进行， 并且其可通过直接将收集部分浸泡在 包含阳离子表面活性剂的溶液中来完成。 或者， 用上述阳离子表面活性剂预处理所述多根 纤维6的步骤可在通过植绒将纤维6应用在支撑体2上之前进行， 因此在纤维6植绒之前对其 进行处理。 还或者， 可在生产纤维6期间向纤维6中添加阳离子表面活性剂， 向制得纤维的已 知种类材料中添加预定量的阳离子表面活性剂。 所述方法还可包括预先准备水基溶液的步 骤， 所述溶液包含的表面活性剂(优选阳离子)在溶液中的百分比、 浓度值或量为按体积计 或按重量计0.1至15、 或0.2至10、 或0.5至5、 或0.8至1.5或0.4至1, 2。 例如， 优。
39、选的浓度为每100ml溶液0.4g苯扎氯铵至每100ml溶液1.2g。 同样优选的浓度 可应用于其他阳离子表面活性剂。 预先准备溶液的步骤可包括以下步骤： 预先准备预定量 的阳离子表面活性剂； 将所述预定量的阳离子表面活性剂溶解在水中或水溶液中以得到溶 液， 和/或使溶液基本均质的步骤。 用阳离子表面活性剂处理多根纤维6的步骤可通过纤维 说 明 书 4/6 页 8 CN 103327906 B 8 对所述溶液的吸收来进行。 纤维6对所述溶液的吸收可在通过植绒将纤维应用在所述体的 收集部分上之后或在通过植绒将纤维应用在所述体的收集部分上之前进行。 本发明还涉及 通过上述类型的装置1用于收集和转移。
40、分子生物学样品的方法。 所述方法至少包括将分子 生物学样品至少收集在收集装置1之植绒收集部分3上的步骤， 其中多根纤维6经上述类型 的阳离子表面活性剂预处理。 所述方法可用于收集和转移DNA或RNA样品， 和/或包含DNA或 RNA的样品的细胞。 所述方法还可包括将样品在收集部分3上保存预定时间的步骤。 所述方 法还可包括对至少具有所收集样品的收集部分3进行脱水或干燥的步骤。 干燥步骤可通过 例如在强制通风烘箱中干燥或通过其他已知类型和适合于处理所述样品的方法来进行。 0016 所述方法还可包括将收集部分3插入到真空容器(类型已知， 因此未在图中举例说 明)并且在容器中基本产生真空的步骤。 该。
41、产生真空的步骤可以在干燥步骤期间进行， 或在 与干燥步骤分开的其他时间进行。 所述方法还可包括例如用至少水化溶液使收集部分3上 的样品再水化以在收集部分3上得到预定量的再水化样品的步骤。 所述方法还可包括将含 有样品的收集部分3插入到容器7(例如试管)中， 用帽5或封闭盖封闭容器7， 以及转移包含 收集部分3的容器7的步骤， 和/或在容器7中预先准备预定量的用于液化和/或保存样品的 物质8的步骤， 和/或以用于速率轻摇、 振荡或旋转包含具有样品之收集部分3的容器7的旨 在使样品液化的步骤。 所述方法还可包括从收集部分中释放分子生物学样品以便能够对样 品进行分子生物学操作的步骤。 所述方法可特别。
42、地包括通过在液体介质或稀释缓冲液中稀 释来释放至少80、 或至少85、 或至少90的所收集分子生物学样品的量以便能够进一 步对样品进行操作的步骤。 可通过常规摩擦操作促进释放。 本发明还涉及上述类型的阳离 子表面活性剂用于预处理纤维6的用途， 所述纤维6通过植绒应用在或待应用在收集装置的 支撑体2上并且转移分子生物学样品。 在下文中我们将报道通过用浓度为每100ml液体约1g 苯扎氯铵之溶液处理具有植绒尼龙纤维的植绒拭子来进行的测试结果。 0017 为了模拟犯罪现场的DNA收集， 用100ul无菌脱矿质水再湿润唾液斑(其之前在坚 硬表面上干燥以再现犯罪现场的DNA收集)， 每个唾液斑用单个拭子。
43、收集。 计算回收DNA的平 均浓度和百分比。 测试不同种类的拭子： 未涂覆(未处理)的植绒尼龙纤维拭子和涂覆(处 理)的尼龙纤维拭子。 在测试期间， 研究拭子上最佳和临界环境条件下的DNA保存。 特别地， 一旦样品从例如犯罪现场收集直到其到达法医实验室， 测试评价样品在拭子上的恰当保 存。 进行两种测试： 0018 1)为了验证涂覆植绒拭子保持在犯罪现场收集之DNA的能力， 将唾液接种在拭子 上并且提取DNA， 在实时PCR中在时间0和室温下1周后定量DNA。 0019 下表示出了在不同时间(时间0、 24小时后、 48小时后和1周后)从涂覆拭子回收的 DNA百分比： 0020 涂覆拭子； 测。
44、试时间点DNA浓度(ng/ul)DNA回收百分比() 时间01,70ng/ul100 时间24小时1,68ng/ul99 时间48小时1,69ng/ul100 时间1周1,67ng/ul98 0021 2)为了模拟在最大量之环境污染物的存在下的犯罪现场收集和为了模拟在临界 说 明 书 5/6 页 9 CN 103327906 B 9 温度条件下(例如， 在夏天的时间或非常热的地区)的拭子运输， 其温度变化和随后污染物 的过度生长可能是在拭子上保存人DNA的实际问题， 完成了另一测试： 每一拭子接种环境污 染物试剂和人唾液的100ul 0,5McF混合物。 提取每一拭子的DNA并且在实时PCR中。
45、在时间0、 在室温(RT)下时间3天和+37下时间3天、 在室温(RT)下时间5天和+37下时间5天时定 量。 下图表示了在2种不同温度下测试的保存在拭子上的人DNA的趋势： 0022 0023 对于涂覆拭子所需的实时PCR需要的循环数， 在不同测试条件下， 循环数为最小约 27.27(在时间0时)至最大约27.27(37下5天后)， 而未涂覆的拭子需要的循环数为最小 27.38(在时间0时)至最大约33.33(37下5天后)。 上述测试表明不仅在室温(优化条件) 下， 而且在临界孵育温度(+37)下， 涂覆的拭子在5天后还能够保存约100的所收集DNA， 不需要使用硅胶装置干燥拭子， 并且与。
46、未涂覆拭子相比， 测试灵敏度提高了高达100倍。 本 发明提供一个或更多个下述优点。 首要的是， 本发明使得方法和根据所述方法实现的装置 以及使用所述装置的方法能够消除现有技术遇到的问题。 本发明还使得能够从收集装置中 提取相对量(相对于收集的量)的分子生物学样品(例如， DNA或RNA)， 特别是能够使得样品 相对于现有技术更仔细地且在更好的完整条件下保存； 因此， 任何随后在实验室中的使用 成为可能。 本发明相对于现有技术能够提高可用于分子生物学操作(包括收集和转移)的 DNA或RNA的百分比。 这成为可能是因为这样的处理能力， 其保持人细胞的完整性和避免其 裂解， 还因此保持核酸的完整性。
47、。 除了上述内容外， 本发明还可有利地用于收集其他待分析 的生物学或化学样品。 相对于已知装置， 本发明还允许收集、 转移大量生物学样品以及使得 大量生物学样品可用于分析和进一步操作。 本发明使得大量DNA或RNA在分子生物学操作中 可得和可用于进行分子生物学操作， 相对于已知装置， 其量显著增大， 甚至高达10倍。 本发 明还能够降低对装置释放的DNA或RNA样品进行聚合反应或聚合酶链式反应所需的循环数， 因为其能够从收集装置释放更多量的可用于这些操作的DNA或RNA。 最后， 本发明的实现简 单并经济。 说 明 书 6/6 页 10 CN 103327906 B 10 图3 说 明 书 附 图 1/1 页 11 CN 103327906 B 11 。