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1、10申请公布号CN104072546A43申请公布日20141001CN104072546A21申请号201410266205422申请日20140616C07H15/203200601C07H1/0820060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种提取水牛果素A的方法57摘要本发明公开了一种提取水牛果素A的方法，其特征在于包括以银水牛果的叶为原料，通过组织破碎、纤维素酶酶解得到酶解原料，加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥，再利用高压硅胶柱层析纯化，收集水牛果素A流分，减。
2、压浓缩，乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A。本发明的方法操作简单，适合规模化生产，且能耗低、污染小、生产周期短，是一种易于工业化的生产工艺。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104072546ACN104072546A1/1页21一种提取水牛果素A的方法，其特征在于包括以下步骤（1）以银水牛果的叶为原料，放入高速组织捣碎机，在转速为18000RPM条件下保持35MIN后，过40目筛备用；（2）原料按照料液比146（G/ML）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0305的纤维素酶，在超声功率500700W、4560。
3、条件下酶解6090MIN，得到酶解原料；（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；（4）将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；（5）将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A结晶。2如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（2）中乙醇水溶液体积百分比为7080。3如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（2）中提取溶剂为7085的乙醇溶液。4如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（3）中闪式提取电压。
4、为150V，提取时间为35MIN。5如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（4）中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPA，柱内径为250MM，层析柱径高比为110。6如权利要求1所述的一种提取水牛果素A的方法，其特征在于所述步骤（4）中所述氯仿甲醇的体积比为11113。权利要求书CN104072546A1/3页3一种提取水牛果素A的方法技术领域0001本发明属于中药化学技术领域，涉及一种一种提取水牛果素A的方法。背景技术0002水牛果素A（SHEPHAGENINA），分子式为C48H32O32，分子量为112075，结构式为水牛果素A是从胡颓子科ELAE。
5、AGNACEAE银水牛果SHEPHERDIAARGENTEANUTT叶中分离得到一种活性化合物。药理研究表明，水牛果素A具有抗HIV1逆转录酶，IC50为0049M，强于阳性对照物EPIGALLOCATECHINGALLATEIC50为025M。0003现有技术中，尚未见工业化制备水牛果素A的生产工艺报道。发明内容0004本发明的目的是提供一种提取水牛果素A的方法。0005为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种提取水牛果素A的方法，其特征在于包括以下步骤（1）以银水牛果的叶为原料，放入高速组织捣碎机，在转速为18000RPM条件下保持35MIN后，过40目筛备用；（2）原料按照料液比146。
6、（G/ML）的比例加入乙醇水溶液后，再加入0305的纤维素酶，在超声功率500700W、4560条件下酶解6090MIN，得到酶解原料；（3）将酶解原料投入加入闪式提取器中，加入提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液，浓缩干燥得到粗提物；（4）将所得粗提物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，氯仿甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；（5）将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶。0006所述步骤（2）中乙醇水溶液体积百分比为7080。0007所述步骤（2）中提取溶剂为7085的乙醇溶液。说明书CN104072546A2/3页40008所述步骤（3）中闪。
7、式提取电压为150V，提取时间为35MIN。0009所述步骤（4）中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，耐压35MPA，柱内径为250MM，层析柱径高比为110。0010所述步骤（4）中所述氯仿甲醇的体积比为11113。0011本发明的有益效果是本发明操作简单，耗时短，得率高，易规模化生产；采用高压层析柱，上样量大，生产周期短，分离度好，产品纯度高。0012下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。0013具体实施方式实施例1以银水牛果的叶为原料，切成1CM左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000RPM条件下保持5MIN后，过40目筛备用。
8、，称取1KG，按照料液比14（G/ML）的比例加入80乙醇水溶液后，再加入05的纤维素酶，在超声功率700W、50条件下酶解70MIN，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入6L80的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为3MIN，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPA，柱内径为250MM，层析柱径高比为110，氯仿甲醇按体积比为11、16、113梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为958。0014实施例2以银。
9、水牛果的叶为原料，切成1CM左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000RPM条件下保持3MIN后，过40目筛备用，称取1KG，按照料液比16（G/ML）的比例加入70乙醇水溶液后，再加入04的纤维素酶，在超声功率700W、45条件下酶解90MIN，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入45L75的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为5MIN，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPA，柱内径为250MM，层析柱径高比为110，氯仿甲醇按体积比为11、17、113梯度洗脱，收集水。
10、牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为944。0015实施例3以银水牛果的叶为原料，切成1CM左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000RPM条件下保持5MIN后，过40目筛备用，称取1KG，按照料液比15（G/ML）的比例加入75乙醇水溶液后，再加入05的纤维素酶，在超声功率600W、55条件下酶解75MIN，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入4L70的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为4MIN，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层。
11、析纯化，耐压35MPA，柱内径为250MM，层析柱径高比为110，氯仿甲醇按体积比为11、15、112梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为954。说明书CN104072546A3/3页50016实施例4以银水牛果的叶为原料，切成1CM左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000RPM条件下保持5MIN后，过40目筛备用，称取1KG，按照料液比16（G/ML）的比例加入75乙醇水溶液后，再加入03的纤维素酶，在超声功率500W、60条件下酶解60MIN，得到酶解原料，加入闪式提取器中，加入5L85的乙醇溶液作为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为3MIN，进行闪式提取2次，过滤得到提取液，提取液浓缩干燥后得到粗提物，用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶（硅胶目数为200目）柱层析纯化，耐压35MPA，柱内径为250MM，层析柱径高比为110，氯仿甲醇按体积比为11、17、113梯度洗脱，收集水牛果素A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重结晶得到水牛果素A白色结晶，含量为949。说明书CN104072546A。