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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810321799.2 (22)申请日 2018.04.11 (71)申请人 钦州学院 地址 535011 广西壮族自治区钦州市钦南 区滨海新城滨海大道12号 (72)发明人 尹艳镇 卿垂军 张瑞瑞 梁兴唐 王芸 王道波 刘子杰 梁潘霞 潘丽萍 钟书明 (74)专利代理机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 代理人 杨敬 (51)Int.Cl. A23J 1/04(2006.01) A01K 61/54(2017.01) A23K 50/80(2016.。
2、01) A23K 20/20(2016.01) (54)发明名称 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种牡蛎富硒蛋白粉的制备 方法， 所述制备方法包括： 将活牡蛎在含有0.1- 0.25质量分数的酵母硒海水中放置10-15天； 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干 净， 再将牡蛎肉与去离子水按重量比10:10-50， 高速搅碎， 得到牡蛎液往牡蛎液中添加蛋白酶重 量比100:0.5-1， 在压力为30-50MPa， 温度为40- 50的条件下， 搅拌1-2小时， 过滤得到牡蛎蛋白 酶解液； 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干 燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉； 本发明利用。
3、牡蛎作 为原料制备富硒蛋白粉， 其中牡蛎中锌含量最 高， 而硒含量较低， 因此本发明通过利用活牡蛎 添加酵母硒培养10-15天， 增加牡蛎中硒蛋白的 含量。 权利要求书1页 说明书5页 CN 108477377 A 2018.09.04 CN 108477377 A 1.一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包括： 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.1-0.25质量分数的酵母硒海水中 放置10-15天； 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水按重 量比10:10-50， 高速搅碎， 得到牡蛎液； 步骤三、 往牡蛎液中添。
4、加蛋白酶重量比100:0.5-1， 在压力为30-50MPa， 温度为40-50 的条件下， 搅拌1-2小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 2.如权利要求1所述的牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 其特征在于， 步骤一中将活牡蛎在 含有0.1-0.25质量分数的酵母硒海水中后还包括每天在电磁场中放置1-2小时， 电磁场 的强度为1-2微特拉。 3.如权利要求1所述的牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 其特征在于， 步骤一中将活牡蛎在 含有0.1-0.25质量分数的酵母硒海水中后还包括每天往海水中添加海水重量分数10- 20的小分子团水， 。
5、在添加完小分子团水后， 搅动海水10-15分钟。 4.如权利要求1所述的牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 其特征在于， 将步骤二得到的牡蛎 液放置于超声波中间歇处理1-2小时， 超声波频率为500-1000赫兹。 5.如权利要求1所述的牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 其特征在于， 往步骤二得到的牡蛎 液添加富硒菌种与酵母硒， 发酵10-24小时， 其中所述牡蛎液、 富硒菌种与酵母硒的重量比 为100:0.1-0.5:0.1-0.5。 6.如权利要求5所述的牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 其特征在于， 所述富硒菌种由以下 方法制成： 将酵母菌和乳酸菌按重量比1:2混合， 加入0.5L无菌水， 再采用柠檬酸调节。
6、无菌 水的PH为3.5-5， 再加入30-50g氯化钠和30-50g葡萄糖以及200g经过糊化的马铃薯泥， 分装 在100ml的培养瓶中， 温度控制在40-60， 放置于无氧环境下培养10-24小时后， 每个培养 瓶中加入标准硒溶液10-50ml， 所述标准硒溶液的浓度为200-500ug/ml， 将培养瓶放置在振 荡器中1-3分钟后， 再调节PH至3.5-5， 再放置于无氧环境下培养24-48小时后， 分离纯化得 到富硒菌种。 7.如权利要求1所述的牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 其特征在于， 步骤四中在将牡蛎蛋 白酶解液灭酶后还包括牡蛎蛋白质提纯， 提纯的具体步骤包括： 加入10-50重的三氯。
7、醋 酸-丙酮搅拌均匀后， 放置反应釜中， 温度调节至0至4以及压力为1-5Mpa下搅拌处理5-10 分钟， 温度不变压力为常压放置10-20分钟后， 温度调节至0-4以及压力为1-5Mpa下搅拌 处理5-10分钟， 温度不变压力为常压放置10-20分钟后， 循环处理， 在温度至0至4以及压 力为1-5Mpa下搅拌处理累积时间为40-60分钟后结束处理， 放置到离心机中500转/min离心 5-10分钟， 得到沉淀， 将沉淀冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108477377 A 2 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及蛋白粉制备。
8、技术领域， 具体涉及一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法。 背景技术 0002 牡蛎别名又叫生蚝， 是所有食物中含锌最丰富的(每100g牡蛎,不包括壳的重量， 含水87.1， 含锌71.2mg， 富含蛋白锌， 是很好的补锌食物， 要补锌可以常吃牡蛎或蛋白锌。 为牡蛎科(ostreae)动物牡蛎(ostreagigastnunb)及其近缘动物的全体， 是海产贝壳。 在亚 热带、 热带沿海都适宜蚝的养殖， 我国分布很广， 北起鸭绿江， 南至海南岛， 沿海皆可产蚝。 蚝乃软体有壳， 依附寄生的动物， 咸淡水交界所产尤为肥美。 0003 硒是人体必需的微量营养元素， 具有抗癌、 提高免疫力、 延缓衰老等多种作。
9、用， 被 誉为 “生命之火” 、“抗癌之王” 等。 1973年， WHO和国际营养组织规定硒是人和动物必需的微 量营养元素。 目前己证实， 硒是构成哺乳动物体内30多种含硒蛋白质与含硒酶如谷胱甘肤 过氧化物酶、 硫氧还原蛋白酶以及碘化甲腺原氨酸脱碘酶等的重要组成成分， 具有抗氧化、 抗癌、 提高机体免疫力等多种生物学功能。 全世界有40多个国家和地区,大约5-10亿人缺 硒。 我国有三分之二的地区属缺硒区， 其中30为严重缺硒地区。 中国营养学会推荐人体硒 摄入量为50-200 g/d， 而我国城市居民摄入量仅26-32 g/d， 硒摄入量严重偏低。 利用生物 转化法将无机硒转化成有机硒， 提。
10、高食物中硒含量， 是改善人体硒营养的重要途径。 通过膳 食补充硒源， 提高人体免疫力， 实现人们健康长寿， 是世界各国均重点关注的民生问题。 富 硒农产品是具有保健功能的高价值农产品， 可以用于科学补硒。 通过富硒农产品科学补硒， 英国、 芬兰、 澳大利亚等缺硒国家居民的人均硒摄入量得到有效提高。 0004 目前牡蛎与硒结合研究较少， 本发明提供一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法。 发明内容 0005 本发明的一个目的提供一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 本发明利用牡蛎作为原 料制备富硒蛋白粉， 其中牡蛎中锌含量最高， 而硒含量较低， 因此本发明通过利用活牡蛎添 加酵母硒培养10-15天， 增加牡蛎中。
11、硒蛋白的含量。 0006 本发明提供的技术方案为： 0007 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0008 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.1-0.25质量分数的酵母硒海 水中放置10-15天； 0009 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水 按重量比10:10-50， 高速搅碎， 得到牡蛎液， 其中高速搅碎的速度大于5000转/分； 0010 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:0.5-1， 在压力为30-50MPa， 温度为40- 50的条件下， 搅拌1-2小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 0011 步骤四。
12、、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0012 优选的是， 步骤一中将活牡蛎在含有0.1-0.25质量分数的酵母硒海水中后还包 说 明 书 1/5 页 3 CN 108477377 A 3 括每天在电磁场中放置1-2小时， 电磁场的强度为1-2微特拉。 0013 优选的是， 步骤一中将活牡蛎在含有0.1-0.25质量分数的酵母硒海水中后还包 括每天往海水中添加海水重量分数10-20的小分子团水， 在添加完小分子团水后， 搅动海 水10-15分钟。 0014 优选的是， 将步骤二得到的牡蛎液放置于超声波中间歇处理1-2小时， 超声波频率 为500-1000赫兹。 0。
13、015 优选的是， 往步骤二得到的牡蛎液添加富硒菌种与酵母硒， 发酵10-24小时， 其中 所述牡蛎液、 富硒菌种与酵母硒的重量比为100:0.1-0.5:0.1-0.5。 0016 优选的是， 所述富硒菌种由以下方法制成： 将酵母菌和乳酸菌按重量比1:2混合， 加入0.5L无菌水， 再采用柠檬酸调节无菌水的PH为3.5-5， 再加入30-50g氯化钠和30-50g葡 萄糖以及200g经过糊化的马铃薯泥， 分装在100ml的培养瓶中， 温度控制在40-60， 放置于 无氧环境下培养10-24小时后， 每个培养瓶中加入标准硒溶液10-50ml， 所述标准硒溶液的 浓度为200-500ug/ml，。
14、 将培养瓶放置在振荡器中1-3分钟后， 再调节PH至3.5-5， 再放置于无 氧环境下培养24-48小时后， 分离纯化得到富硒菌种； 利用此方法培养出来的富硒菌种。 0017 优选的是， 步骤四中在将牡蛎蛋白酶解液灭酶后还包括牡蛎蛋白质提纯， 提纯的 具体步骤包括： 加入10-50重的三氯醋酸-丙酮搅拌均匀后， 放置反应釜中， 温度调节至0 至4以及压力为1-5Mpa下搅拌处理5-10分钟， 温度不变压力为常压放置10-20分钟后， 温 度调节至0-4以及压力为1-5Mpa下搅拌处理5-10分钟， 温度不变压力为常压放置10-20分 钟后， 循环处理， 在温度至0至4以及压力为1-5Mpa下搅。
15、拌处理累积时间为40-60分钟后结 束处理， 放置到离心机中500转/min离心5-10分钟， 得到沉淀， 将沉淀冷冻干燥得到所述牡 蛎富硒蛋白粉。 0018 本发明的有益效果如下： 0019 本发明利用牡蛎作为原料制备富硒蛋白粉， 其中牡蛎中锌含量最高， 而硒含量较 低， 因此本发明通过利用活牡蛎添加酵母硒培养10-15天， 增加牡蛎中硒蛋白的含量； 优选 的在微电磁场的条件更加能促进硒的交换与牡蛎中蛋白形成硒蛋白， 显著提高牡蛎的硒蛋 白含量， 优选的还有每天添加小分子团水， 利用小分子团水独特的包裹性能将酵母硒分子 包裹进而形成小分子， 在短时间内被牡蛎吸收并且转化成硒蛋白， 能显著促进。
16、牡蛎对酵母 硒的吸收， 本发明还利用富硒菌种对牡蛎液进行处理， 从而能显著提高制备的牡蛎富硒蛋 白粉中的有机硒含量； 本发明还利用10-50重的三氯醋酸-丙酮对蛋白粉进行提纯， 使得 本发明的蛋白粉纯度高， 并且提纯时间短效率高。 具体实施方式 0020 下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明， 以令本领域技术人员参照说 明书文字能够据以实施。 0021 实施例1 0022 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0023 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.1质量分数的酵母硒海水中放 置10天； 0024 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净。
17、， 再将牡蛎肉与去离子水 说 明 书 2/5 页 4 CN 108477377 A 4 按重量比10:10， 高速搅碎， ， 其中高速搅碎的速度5500转/分， 得到牡蛎液； 0025 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:0.5， 在压力为30MPa， 温度为40的条 件下， 搅拌1小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 0026 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0027 实施例2 0028 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0029 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.25质量分数的酵母硒海水中 放置15天， 每天在。
18、电磁场中放置2小时， 电磁场的强度为2微特拉； 0030 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水 按重量比10:50， 高速搅碎， 得到牡蛎液； 0031 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:1， 在压力为50MPa， 温度为50的条件 下， 搅拌2小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 0032 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0033 实施例3 0034 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0035 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.2质量分数的酵母硒海水中放 置12天， 每。
19、天往海水中添加海水重量分数10的小分子团水， 在添加完小分子团水后， 搅动 海水10分钟； 0036 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水 按重量比10:20， 高速搅碎， 得到牡蛎液； 0037 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:0.7， 在压力为40MPa， 温度为45的条 件下， 搅拌1.5小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 0038 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0039 实施例4 0040 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0041 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎。
20、在含有0.15质量分数的酵母硒海水中 放置12天， 每天在电磁场中放置1.5小时， 电磁场的强度为1.5微特拉， 每天往海水中添加海 水重量分数15的小分子团水， 在添加完小分子团水后， 搅动海水12分钟； 0042 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水 按重量比10:25， 高速搅碎， 得到牡蛎液； 0043 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:0.8， 在压力为45MPa， 温度为45的条 件下， 搅拌1.5小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 0044 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0045 实施例。
21、5 0046 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0047 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.2质量分数的酵母硒海水中放 置12天， 每天在电磁场中放置1小时， 电磁场的强度为2微特拉， 每天往海水中添加海水重量 分数15的小分子团水， 在添加完小分子团水后， 搅动海水12分钟； 0048 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水 说 明 书 3/5 页 5 CN 108477377 A 5 按重量比10:20， 高速搅碎， 得到牡蛎液， 牡蛎液放置于超声波中间歇处理1小时， 超声波频 率为800赫兹， 将经过处理的牡蛎液添。
22、加富硒菌种与酵母硒， 发酵20小时， 其中所述牡蛎液、 富硒菌种与酵母硒的重量比为100:0.3:0.3； 0049 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:0.8， 在压力为45MPa， 温度为45的条 件下， 搅拌1.5小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 0050 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0051 实施例6 0052 一种牡蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0053 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.1质量分数的酵母硒海水中放 置10天， 每天在电磁场中放置1小时， 电磁场的强度为1微特拉， 每天往海水中添加海。
23、水重量 分数10-20的小分子团水， 在添加完小分子团水后， 搅动海水10分钟； 0054 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水 按重量比10:10， 高速搅碎， 得到牡蛎液， 牡蛎液放置于超声波中间歇处理1小时， 超声波频 率为500赫兹， 将经过处理的牡蛎液添加富硒菌种与酵母硒， 发酵10小时， 其中所述牡蛎液、 富硒菌种与酵母硒的重量比为100:0.1:0.1， 所述富硒菌种由以下方法制成： 将酵母菌和乳 酸菌按重量比1:2混合， 加入0.5L无菌水， 再采用柠檬酸调节无菌水的PH为3.5， 再加入30g 氯化钠和30g葡萄糖以及200g经过糊化。
24、的马铃薯泥， 分装在100ml的培养瓶中， 温度控制在 40， 放置于无氧环境下培养10小时后， 每个培养瓶中加入标准硒溶液10ml， 所述标准硒溶 液的浓度为200ug/ml， 将培养瓶放置在振荡器中1分钟后， 再调节PH至3.5， 再放置于无氧环 境下培养24小时后， 分离纯化得到富硒菌种； 利用此方法培养出来的富硒菌种； 0055 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:0.5， 在压力为30MPa， 温度为40的条 件下， 搅拌1小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 0056 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 经过冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0057 实施例7 0058 一种牡。
25、蛎富硒蛋白粉的制备方法， 所述制备方法包括： 0059 步骤一、 选择活牡蛎作为原料， 将活牡蛎在含有0.25质量分数的酵母硒海水中 放置15天， 每天在电磁场中放置2小时， 电磁场的强度为2微特拉， 每天往海水中添加海水重 量分数20的小分子团水， 在添加完小分子团水后， 搅动海水15分钟； 0060 步骤二、 将活牡蛎摘取牡蛎肉， 将牡蛎肉的内脏清洗干净， 再将牡蛎肉与去离子水 按重量比10:50， 高速搅碎， 得到牡蛎液， 牡蛎液放置于超声波中间歇处理2小时， 超声波频 率为1000赫兹， 将经过处理的牡蛎液添加富硒菌种与酵母硒， 发酵24小时， 其中所述牡蛎 液、 富硒菌种与酵母硒的重。
26、量比为100:0.5:0.5， 所述富硒菌种由以下方法制成： 将酵母菌 和乳酸菌按重量比1:2混合， 加入0.5L无菌水， 再采用柠檬酸调节无菌水的PH为5， 再加入 50g氯化钠和50g葡萄糖以及200g经过糊化的马铃薯泥， 分装在100ml的培养瓶中， 温度控制 在60， 放置于无氧环境下培养24小时后， 每个培养瓶中加入标准硒溶液50ml， 所述标准硒 溶液的浓度为500ug/ml， 将培养瓶放置在振荡器中3分钟后， 再调节PH至5， 再放置于无氧环 境下培养48小时后， 分离纯化得到富硒菌种； 利用此方法培养出来的富硒菌种； 0061 步骤三、 往牡蛎液中添加蛋白酶重量比100:1， 。
27、在压力为50MPa， 温度为50的条件 下， 搅拌2小时， 过滤得到牡蛎蛋白酶解液； 说 明 书 4/5 页 6 CN 108477377 A 6 0062 步骤四、 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后， 将牡蛎蛋白酶解液灭酶后还包括牡蛎蛋白质 提纯， 提纯的具体步骤包括： 加入50重的三氯醋酸-丙酮搅拌均匀后， 放置反应釜中， 温度 调节至4以及压力为5Mpa下搅拌处理10分钟， 温度不变压力为常压放置20分钟后， 温度调 节至4以及压力为5Mpa下搅拌处理10分钟， 温度不变压力为常压放置20分钟后， 循环处 理， 在温度至4以及压力为5Mpa下搅拌处理累积时间为60分钟后结束处理， 放置到离心机 中。
28、500转/min离心10分钟， 得到沉淀， 将沉淀冷冻干燥得到所述牡蛎富硒蛋白粉。 0063 对比例1 0064 与实施例1相同， 缺少步骤1。 0065 采用考马斯亮蓝法(Bradford法)测试牡蛎富硒蛋白粉含量， 计算牡蛎富硒蛋白粉 提取率和牡蛎富硒蛋白粉纯度， 利用高效液相-氢化物发生-原子荧光光谱法分析提取的牡 蛎富硒蛋白粉中的总硒含量以及有机硒含量， 结果如下表： 0066 富硒蛋白粉提取率富硒蛋白粉纯度有机硒含量总硒含量 实施例153.590.47.54mg/kg8.21mg/kg 实施例253.490.211.35mg/kg12.20mg/kg 实施例352.891.412.4。
29、5mg/kg13.53mg/kg 实施例453.990.914.42mg/kg15.51mg/kg 实施例554.190.716.01mg/kg17.25mg/kg 实施例653.291.216.58mg/kg17.64mg/kg 实施例752.194.516.39mg/kg17.82mg/kg 对比例152.190.10.85mg/kg0.92mg/kg 0067 由表中数据可见， 本发明的方法能显著提高牡蛎富硒蛋白粉中有机硒的含量， 有 机硒的含量比例高达90以上。 0068 尽管本发明的实施方案已公开如上， 但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域， 对于熟悉本领域的人员而言， 可容易地 实现另外的修改， 因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下， 本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实施例。 说 明 书 5/5 页 7 CN 108477377 A 7 。