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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611167690.5 (22)申请日 2016.12.16 (71)申请人 新昌县柏克动物饲料技术开发有限 公司 地址 312500 浙江省绍兴市新昌县东茗乡 里王村442号 (72)发明人 任倩妍 李泳霏 (74)专利代理机构 北京高航知识产权代理有限 公司 11530 代理人 赵永强 (51)Int.Cl. A23K 10/30(2016.01) A23K 50/80(2016.01) A61K 36/634(2006.01) A61P 31/04(2006.01) 。
2、(54)发明名称 罗非鱼用预防链球菌病饲料添加剂 (57)摘要 本发明公开了一种罗非鱼用预防链球菌病 饲料添加剂， 由以下重量份的原料制备而成： 黄 芩2030份、 杭白菊 2030份、 连翘2030份、 三异辛酸甘油酯0.001-0.005份、 淀粉辛烯基琥 珀酸铝0.01-0.03份、 当归2030份。 本发明所用 原料来源于纯天然药物， 具有来源广、 起效快、 无 毒副作用、 低残留、 防治效果良好等优点， 可有效 预防罗非鱼链球菌病的发生。 权利要求书1页 说明书3页 CN 106721005 A 2017.05.31 CN 106721005 A 1.一种罗非鱼用预防链球菌病饲料添加。
3、剂， 其特征在于由以下原料按重量份组成： 黄 芩2030份、 杭白菊 2030份、 连翘2030份、 三异辛酸甘油酯0.001-0.005份、 淀粉辛烯 基琥珀酸铝0.01-0.03份、 当归2030份。 2.根据权利要求1所述的饲料添加剂， 其特征在于优选由以下重量份的原料制备而成： 黄芩25份、 杭白菊 25份、 连翘25份、 三异辛酸甘油酯0.002份、 淀粉辛烯基琥珀酸铝0.02份、 当归25份。 3.根据权利要求1所述的饲料添加剂， 其特征在于优选由以下重量份的原料制备而成： 黄芩30份、 杭白菊 20份、 连翘20份、 三异辛酸甘油酯0.002份、 淀粉辛烯基琥珀酸铝0.02份、 。
4、当归30份。 4.根据权利要求1所述的饲料添加剂， 其特征在于： 上述饲料添加剂， 将原料粉碎磨成 粉末， 采用水煎醇沉法提取， 再经旋转蒸发提取获得。 5.根据权利要求1所述的饲料添加剂， 其特征在于所述水煎醇沉法包括以下步骤 ： 1） 按重量份数称取黄芩、 杭白菊、 连翘、 三异辛酸甘油酯、 淀粉辛烯基琥珀酸铝、 当归， 按质量体积比1:4加水浸泡0.5h， 之后加热1h水温保持在 100， 过滤； 2） 滤渣再按质量体积比1:4加水， 直接加热1h， 温度依然保持在100， 过滤， 重复两次； 3） 将所获得的滤液合并， 放在3000r/min的离心机上离心1h； 再取上清液于旋转蒸发仪。
5、 上提取， 加入95%酒精， 使混合液乙醇浓度达80%， 静置24h， 旋转蒸发回收酒精至药液浓度为 1g/mL； 115高压灭菌20min， -20保存备用。 6.权利要求1所述饲料添加剂的使用方法， 其特征在于： 将添加剂按50150mL药液/kg 饲料拌入基础饲料投喂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106721005 A 2 罗非鱼用预防链球菌病饲料添加剂 技术领域 0001 本发明涉及一种鱼用饲料添加剂， 尤其是一种罗非鱼用预防链球菌病饲料添加 剂。 属于饲料添加剂技术领域。 背景技术 0002 自然生长的罗非鱼的肉味鲜美， 肉质细嫩， 无论是红烧还是清烹， 味道俱佳， 。
6、罗非 鱼含有多种不饱和脂肪酸和丰富的蛋白质， 为人们提高较为丰富的营养， 且罗非鱼骨刺少， 没有肌间小刺， 一般人群都可食用， 老少皆宜。 0003 中国的环境和气候等条件均适宜罗非鱼生长， 是罗非鱼养殖的主要国家之一。 然 而， 随着罗非鱼产业的迅速发展， 病害给罗非鱼养殖业造成极大的损失。 其中链球菌病成为 罗非鱼健康养殖的最大威胁。 目前， 市场上针对罗非鱼链球菌病的专用饲料比较少， 而且效 果大都不理想。 因此， 有必要提供一种罗非鱼用预防链球菌病的饲料添加剂， 能有效预防链 球菌病。 从而避免在罗非鱼养殖过程中由于细菌作用的发生给养殖户造成巨大经济损失。 发明内容 0004 本发明所。
7、要解决的技术问题是提供一种罗非鱼用预防链球菌病饲料添加剂， 它可 以有效的预防罗非鱼链球菌病。 0005 为解决上述技术问题， 本发明采用以下技术方案： 罗非鱼用预防链球菌饲料添加 剂， 由以下重量份的原料制备而成： 黄芩2030份、 杭白菊2030份、 连翘2030份、 三异辛 酸甘油酯0.001-0.005份、 淀粉辛烯基琥珀酸铝0.01-0.03份、 当归2030份。 0006 优选由以下原料及其重量份数组成： 黄芩25份、 杭白菊25份、 连翘25份、 三异辛酸 甘油酯0.002份、 淀粉辛烯基琥珀酸铝0.02份、 当归25份。 0007 优选由以下原料及其重量份数组成： 黄芩30份、。
8、 杭白菊20份、 连翘20份、 三异辛酸 甘油酯0.002份、 淀粉辛烯基琥珀酸铝0.02份、 当归30份。 0008 上述饲料添加剂， 将原料粉碎磨成粉末， 采用水煎醇沉法提取， 再经旋转蒸发提取 获得。 0009 水煎醇沉法包括以下步骤： 1、 按重量份数称取黄芩、 杭白菊、 连翘、 三异辛酸甘油酯、 淀粉辛烯基琥珀酸铝、 当归， 按质量体积比1:4加水浸泡0.5h， 之后加热1h水温保持在100， 过滤； 2、 滤渣再按质量体积比1:4加水， 直接加热1h， 温度依然保持在100， 过滤， 重复两次； 3、 将所获得的滤液合并， 放在3000r/min的离心机上离心1h； 再取上清液于旋。
9、转蒸发仪 上提取， 加入95%酒精， 使混合液乙醇浓度达80%， 静置24h， 旋转蒸发回收酒精至药液浓度为 1g/mL； 115高压灭菌20min， -20保存备用。 0010 上述饲料添加剂的使用方法， 将添加剂按50150mL药液/kg饲料拌入基础饲料投 喂。 0011 针对罗非鱼链球菌病缺乏安全有效药物的问题， 本发明采用纯中药制成， 配方合 说 明 书 1/3 页 3 CN 106721005 A 3 理， 绿色纯天然， 有效性高。 本发明所用原料大部分来源于纯天然药物， 具有来源广、 起效 快、 无毒副作用、 减少患病、 低残留、 防治效果良好等优点。 经实验证明， 在易发病的时间。
10、针 对性的使用本发明的添加剂， 可有效预防罗非鱼链球菌病的发生。 具体实施方式 0012 实施例 1 罗非鱼用预防链球菌病饲料添加剂的制备 表1罗非鱼用预防链球菌病饲料添加剂配方， 由以下重量份的原料制备而成： 序号黄芩杭白菊连翘当归三异辛酸甘油酯淀粉辛烯基琥珀酸铝 1203020300.0020.02 2252525250.0020.02 3203030200.0010.01 4253020250.0020.02 5202530250.0020.02 参考表 1 的配方， 取中草药原料分别制备配方一至五的添加剂， 先将中草药原料粉碎 磨成粉末， 采用水煎醇沉法提取， 再经旋转蒸发提取获得， 。
11、具体如下： 1、 按重量份数称取黄芩、 杭白菊、 连翘、 三异辛酸甘油酯、 淀粉辛烯基琥珀酸铝、 当归， 按质量体积比1:4加水浸泡0.5h， 之后加热1h水温保持在100， 过滤； 2、 滤渣再按质量体积比1:4加水， 直接加热1h， 温度依然保持在100， 过滤， 重复两次； 3、 将所获得的滤液合并， 放在3000r/min的离心机上离心1h； 再取上清液于旋转蒸发仪 上提取， 加入95%酒精， 使混合液乙醇浓度达80%， 静置24h， 旋转蒸发回收酒精至药液浓度为 1g/mL； 115高压灭菌20min， -20保存备用。 0013 上述饲料添加剂的使用方法， 将添加剂按50150mL。
12、药液/kg饲料拌入基础饲料投 喂。 少量的三异辛酸甘油酯、 淀粉辛烯基琥珀酸铝组合物， 能与当归等植物成分物质结合， 能在鱼体内形成刺激， 提高免疫力、 抗菌消炎、 减少患病。 0014 使用方法： 在链球菌疾病高发的季节使用进行防疫， 以防止链球菌疾病的暴发。 将 配方1至5的药液分别按药液饲料比50、 75、 100、 125、 150mL/kg， 用喷洒器将添加剂均匀喷洒 于相应质量的日用常规罗非鱼饲料上， 搅拌混匀， 使其充分与饲料融合， 阴干24h备用。 将含 添加剂的饲料每日按体重的5%的量投喂， 连续使用10天。 结果： 感染对照组发病后死亡率达 到95.83%， 对照药物组氟苯。
13、尼考治疗组死亡率为70.83%， 保护率为26.08%。 复方中草药饲料 添加剂预防效果显著， 高剂量组 （100ml/kg） 、 中剂量组 （50ml/kg） 、 低剂量组 （25ml/kg） 的保 护率分别为47.82%、 34.78%、 26.08%， 均明显高于氟苯尼考治疗组和感染对照组。 0015 本发明研究的罗非鱼用预防链球菌病饲料添加剂对罗非鱼链球菌病预防效果的 研究 1材料方法 1.1材料 (1) 实验用菌 无乳链球菌采购自浙江海洋学院。 菌种划线接种于羊血平板培养基， 37培养168h。 挑取单个菌落， 接种至5%血清脑心浸出液肉汤培养基中， 37培养至1618h。 使用时用。
14、生 说 明 书 2/3 页 4 CN 106721005 A 4 理盐水10倍稀释备用。 0016 (2) 实验用药 复方中草药饲料添加剂 （按实施例 1 配方2制备） 。 0017 氟苯尼考， 购自北京华邦动物药业有限公司 (3) 实验用鱼 选自某养殖场的吉富罗非鱼 （体重 50100g/体长 815cm） 1.2方法 （1） 饲料添加剂的制备 制法同实施例 1。 0018 将药液分别按一定药液饲料比 （mL/kg） ， 用喷洒器将添加剂均匀喷洒于相应质量 的日用常规罗非鱼饲料上， 搅拌混匀， 使其充分与饲料融合， 阴干24h备用。 氟苯尼考添加量 为0.05g/kg。 0019 （2） 实。
15、验用鱼准备 选自某养殖场的吉富罗非鱼 （体重 50100g/体长 815cm） ， 实验前暂养于水塘中。 0020 （3） 实验用菌 实验前取菌种， 划线纯于血平板进行纯培养。 37培养1618h。 再用生理盐水洗下菌 落， 采用比浊法配置成7.5108CFU/mL菌液备用。 0021 （4） 实验处理 取罗非鱼300尾， 分为感染不给药组， 低剂量组 （25ml/kg） ， 中剂量组 （50ml/kg） ， 高剂量 组 （150ml/kg） ， 氟苯尼考对照组以及生理盐水对照组。 感染对照组和生理盐水对照组只给 常规饲料， 其余各组投喂相应含药饲料。 投喂10天后用无乳链球菌临床分离株进行腹。
16、腔注 射攻毒， 攻毒菌量为7.5108 CFU/mL， 每尾 0.2mL。 攻毒后观察10天， 统计罗非鱼死亡情 况， 并观察攻毒后罗非鱼的病症变化。 死亡罗非鱼采取脑组织接种于血平板于37培养， 观 察有无链球菌生长。 按各组鱼死亡数计算组方对罗非鱼的保护率。 保护率计算方法： 保护率 = （阳性感染组死亡数-试验组死亡数） /阳性感染组死亡数100%。 0022 2 实验结果 攻毒后7天各组死亡情况统计如表 2 ： 表2实验结果 日期25ml/kg50ml/kg100ml/kg氟苯尼考空百对照阴性对照 总数505050505050 死亡数22151022490 剩余28354028150 死亡率44%30%20%44%2%0 保护率56%70%80%56% 对死亡鱼采取脑组织接种血平板， 经培养均发现有链球菌生长。 第 10天之后没有发现 死鱼， 存活罗非鱼全部处死， 采取脑组织接种于血平板， 未见有链球菌生成。 0023 3 实验结论 本发明的饲料添加剂能有效预防罗非鱼链球菌病的发生， 取得了预期成果， 值得进一 步开发利用。 说 明 书 3/3 页 5 CN 106721005 A 5 。