一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201410491712.8	申请日：	2014.09.24
公开号：	CN104195261A	公开日：	2014.12.10
当前法律状态：	实审	有效性：	审中
法律详情：	专利申请权的转移IPC(主分类):C12Q 1/68登记生效日:20171027变更事项:申请人变更前权利人:陈启龙变更后权利人:新疆医科大学第一附属医院变更事项:地址变更前权利人:830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市新市区新医路8号9号楼1单元1808号变更后权利人:830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市新市区鲤鱼山路1号变更事项:申请人变更前权利人:马嵋\|\|\|实质审查的生效 IPC(主分类):C12Q 1/68申请日:20140924\|\|\|公开
IPC分类号：	C12Q1/68	主分类号：	C12Q1/68
申请人：	陈启龙; 马嵋
发明人：	陈启龙; 马嵋; 张亚楼; 王雪梅
地址：	830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市新市区新医路8号9号楼1单元1808号
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内容摘要

本发明公开了一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，(1)PCR反应总体积为25μl，包括0.1μg BSA、pH9.2 104μmol/L Tri s-HCl、2.5×104μmol/L KCl、1.5×103μmol/LMgCl2、200μmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、2.5UTaq酶及2.5μl DNA样品；上游引物Eglf：5′-CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物Eglr：5′-CACATCATCTTA-CAATAACACC-3′；目的片段大小为255bp；(2)热循环参数：95℃预变性5min；95℃30s；53.5℃30s；72℃45s；共40次循环；72℃后延伸10min；(3)1.5％琼脂糖电泳检测PCR产物。本发明所带来的有益效果是：采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。

权利要求书

1. 一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，其特征在于，具体为，
(1)PCR反应总体积为25μl，包括0.1μg BSA、pH9.2 104μmol/L Tris-HCl、2.5×10⁴μmol/L KCl、1.5×103μmol/LMgCl2、200μmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、2.5UTaq酶及2.5μl DNA样品；
上游引物Eglf：5′-CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物Eglr：5′-CACATCATCTTA-CAATAACACC-3′；目的片段大小为255bp；
(2)热循环参数：95℃预变性5min；95℃30s；53.5℃30s；72℃45s；共40次循环；72℃后延伸10min；
(3)1.5％琼脂糖电泳检测PCR产物。

2. 如权利要求1所述的采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，其特征在于，检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力。

说明书

一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法
技术领域
本发明涉及寄生虫检测技术领域，具体为一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法。
背景技术
细粒棘球绦虫有较广泛的宿主适应性，分布遍及世界各大洲牧区，主要以犬和偶蹄类家畜之间循环为特点，在我国主要是绵羊/犬动物循环，牦牛/犬循环仅见于青藏高原和甘肃省的高山草甸和山麓地带。
我国是世界上棘球蚴病流行最严重的国家之一，主要流行区在我国西部和北部广大农牧地区，即新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙和四川7省区，其次是陕西、山西和河北部分地区。另外，在东北三省、河南、山东、安徽、湖北、贵州和云南等省有散发病例。迄今全国已有23个省、市、区证实有当地感染的病人。据几个重点流行省区的不完全统计，全国受棘球蚴病威胁的人口约5000万，患病人数约为50～60万，人群中最易感染者是学龄前儿童(新疆15289例病人中，15岁以下者占32.1％)。主要动物中间宿主绵羊的感染率在3.3％～90％之间，家犬的感染率在7％～71％之间。随着西部大开发战略的实施，对本病的防治日益成为重要的任务。
因此，迫切需要一种有效检测细粒棘球绦虫DNA的方法。
发明内容
为了克服以上技术缺陷，本发明提供一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为，一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，
(1)PCR反应总体积为25μl，包括0.1μg BSA、pH9.2 104μmol/L Tris-HCl、2.5×10⁴μmol/L KCl、1.5×103μmol/LMgCl2、200μmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、2.5UTaq酶及2.5μl DNA样品；
上游引物Eglf：5′-CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物Eglr：5′-CACATCATCTTA-CAATAACACC-3′；目的片段大小为255bp；
(2)热循环参数：95℃预变性5min；95℃30s；53.5℃30s；72℃45s；共40次循环；72℃后延伸10min；
(3)1.5％琼脂糖电泳检测PCR产物。
本发明所带来的的有益效果是：采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力，对操作者更加安全。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。
具体实施方式
本发明为一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，
(1)PCR反应总体积为25μl，包括0.1μg BSA、pH9.2 104μmol/L Tris-HCl、2.5×10⁴μmol/L KCl、1.5×103μmol/LMgCl2、200μmol/L dNTP、0.4μmol/L引物、2.5UTaq酶及2.5μl DNA样品；
上游引物Eglf：5′-CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物Eglr：5′-CACATCATCTTA-CAATAACACC-3′；目的片段大小为255bp；
(2)热循环参数：95℃预变性5min；95℃30s；53.5℃30s；72℃45s；共40次循环；72℃后延伸10min；
(3)1.5％琼脂糖电泳检测PCR产物。
采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力，对操作者更加安全。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。
本发明不局限于上述实施方式，任何人应得知在本发明启示下做出的结构变化所得出的相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。
本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。

资源描述

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1、10申请公布号CN104195261A43申请公布日20141210CN104195261A21申请号201410491712822申请日20140924C12Q1/6820060171申请人陈启龙地址830000新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市新市区新医路8号9号楼1单元1808号申请人马嵋72发明人陈启龙马嵋张亚楼王雪梅54发明名称一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法57摘要本发明公开了一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，1PCR反应总体积为25L，包括01GBSA、PH92104MOL/LTRISHCL、25104MOL/LKCL、15103MOL/LMG。

2、CL2、200MOL/LDNTP、04MOL/L引物、25UTAQ酶及25LDNA样品；上游引物EGLF5CATTAATGTATTTTGTAAAGTTG3，下游引物EGLR5CACATCATCTTACAATAACACC3；目的片段大小为255BP；2热循环参数95预变性5MIN；9530S；53530S；7245S；共40次循环；72后延伸10MIN；315琼脂糖电泳检测PCR产物。本发明所带来的有益效果是采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识。

3、产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104195261ACN104195261A1/1页21一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，其特征在于，具体为，1PCR反应总体积为25L，包括01GBSA、PH92104MOL/LTRISHCL、25104MOL/LKCL、15103MOL/LMGCL2、200MOL/LDNTP、04MOL/L引物、25UTAQ酶及25LDNA样品；上游引物EGLF5CATTAATGTATTTTGTAAAGTTG3，下游引物EGLR5CACATCATCTTACAATAACACC3；目的片段大小为255BP；2热循环参数95预变性。

4、5MIN；9530S；53530S；7245S；共40次循环；72后延伸10MIN；315琼脂糖电泳检测PCR产物。2如权利要求1所述的采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，其特征在于，检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力。权利要求书CN104195261A1/2页3一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法技术领域0001本发明涉及寄生虫检测技术领域，具体为一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法。背景技术0002细粒棘球绦虫有较广泛的宿主适应性，分布遍及世界各大洲牧区，主要以犬和偶蹄类家畜之间循环为特点，在我国主要是绵羊/犬动物循环，牦牛/犬循环仅见于。

5、青藏高原和甘肃省的高山草甸和山麓地带。0003我国是世界上棘球蚴病流行最严重的国家之一，主要流行区在我国西部和北部广大农牧地区，即新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙和四川7省区，其次是陕西、山西和河北部分地区。另外，在东北三省、河南、山东、安徽、湖北、贵州和云南等省有散发病例。迄今全国已有23个省、市、区证实有当地感染的病人。据几个重点流行省区的不完全统计，全国受棘球蚴病威胁的人口约5000万，患病人数约为5060万，人群中最易感染者是学龄前儿童新疆15289例病人中，15岁以下者占321。主要动物中间宿主绵羊的感染率在3390之间，家犬的感染率在771之间。随着西部大开发战略的实施，对本病的。

6、防治日益成为重要的任务。0004因此，迫切需要一种有效检测细粒棘球绦虫DNA的方法。发明内容0005为了克服以上技术缺陷，本发明提供一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法。0006本发明解决其技术问题所采用的技术方案为，一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，00071PCR反应总体积为25L，包括01GBSA、PH92104MOL/LTRISHCL、25104MOL/LKCL、15103MOL/LMGCL2、200MOL/LDNTP、04MOL/L引物、25UTAQ酶及25LDNA样品；0008上游引物EGLF5CATTAATGTATTTTGTAAAGTTG3。

7、，下游引物EGLR5CACATCATCTTACAATAACACC3；目的片段大小为255BP；00092热循环参数95预变性5MIN；9530S；53530S；7245S；共40次循环；72后延伸10MIN；0010315琼脂糖电泳检测PCR产物。0011本发明所带来的的有益效果是采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力，对操作者更加安全。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。具体实施方式说明书CN104195261A2/2页40012本发明为一种采用PCR方法扩增粪便细粒棘球绦虫DNA的方法，具体为，00131PCR反应总体积为25L，包括01G。

8、BSA、PH92104MOL/LTRISHCL、25104MOL/LKCL、15103MOL/LMGCL2、200MOL/LDNTP、04MOL/L引物、25UTAQ酶及25LDNA样品；0014上游引物EGLF5CATTAATGTATTTTGTAAAGTTG3，下游引物EGLR5CACATCATCTTACAATAACACC3；目的片段大小为255BP；00152热循环参数95预变性5MIN；9530S；53530S；7245S；共40次循环；72后延伸10MIN；0016315琼脂糖电泳检测PCR产物。0017采用PCR方法检测前需对粪便进行加热处理，消除了虫卵的感染力，对操作者更加安全。PCR方法不仅可以区分形态上相似的虫卵，还可能对虫卵数做出预测。0018本发明不局限于上述实施方式，任何人应得知在本发明启示下做出的结构变化所得出的相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。0019本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。说明书CN104195261A。

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