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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610982512.1 (22)申请日 2016.11.09 (71)申请人 山东金城生物药业有限公司 地址 255130 山东省淄博市淄川区经济开 发区胶王路复线北,东一路西 (72)发明人 孙国祥 张旭 张成国 姚晨阳 陈英雯 (74)专利代理机构 青岛华慧泽专利代理事务所 (普通合伙) 37247 代理人 袁红红 沙莎 (51)Int.Cl. A23K 50/80(2016.01) A23K 20/163(2016.01) A23K 20/142(2016.01) (。
2、54)发明名称 一种虹鳟复合免疫增强剂的制备方法 (57)摘要 本发明属于饲料添加剂领域， 具体公开了一 种虹鳟复合用免疫增强剂的制备方法。 该方法首 先采用低温高压均质法对面包酵母进行破壁处 理， 处理条件为： 压力192MPa， 料液比15:100g/ mL， 循环次数6次， 提取温度14； 用葡聚糖酶进 行酶解提取， 提取条件为： pH5.5， 葡聚糖酶/酵母 1:4， 温度43， 时间3h； 提取免疫增强剂出谷胱 甘肽与甘露聚糖、 -葡聚糖以一定比例混合， 用 水溶解； 将混合溶解液加入到明胶水溶液中； 采 用磁力搅拌器混合均匀； 利用液体后喷涂技术将 混合液与维生素、 油脂混合添加到。
3、虹鳟饲料中， 使谷胱甘肽的添加量为饲料总量的0 .01- 0.06。 权利要求书1页 说明书3页 CN 106509493 A 2017.03.22 CN 106509493 A 1.一种虹鳟复合免疫增强剂的制备方法， 其特征在于： 包括以下步骤： (1)采用低温高压均质法对面包酵母进行破壁处理， 处理条件为： 压力192MPa， 料液比 15:100g/mL， 循环次数6次， 提取温度14； (2)用葡聚糖酶进行酶解提取， 提取条件为： pH5.5， 葡聚糖酶/酵母1:4， 温度43， 时间 3h； (3)提取免疫增强剂出谷胱甘肽； (4)将谷胱甘肽与甘露聚糖、 -葡聚糖依次混合， 加入到明。
4、胶水溶液中； (5)采用磁力搅拌器混合均匀； (6)利用液体后喷涂技术将混合液与维生素、 油脂混合添加到虹鳟饲料中， 使谷胱甘肽 的添加量为饲料总量的0.01-0.06。 2.如权利要求1所述的一种虹鳟复合免疫增强剂的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 (4)中谷胱甘肽1-6份， 甘露聚糖10份， -葡聚糖5份。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106509493 A 2 一种虹鳟复合免疫增强剂的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及饲料添加剂， 特别涉及一种虹鳟复合免疫增强剂的制备方法。 背景技术 0002 谷胱甘肽最早由deRey-Palhade于1888年在酵母细胞内发现， 。
5、它可与硫元素混合 后产生硫化氢， 广泛存在于其它活体组织中。 谷胱甘肽是由三种氨基酸， 即谷氨酸 (glutamine)， 半胱氨酸(cysteine)及甘氨酸(glycine)所组成的三肽， 属于一种非蛋白质 低分子量的硫醇， 英文名称为glutathione(GSH),中文名称作谷胱甘肽。 GSH在自然界中主 要存在于酵母、 动物肝脏、 肌肉及血液里， 许多植物如蔬菜、 豆类、 谷物、 薯类、 菇类及细菌内 也含有GSH。 在还原型谷胱甘肽的分子结构中， 半胱氨酸的氨基和谷氨酸的-羧基结合， 形 成稳定的-肽键， 这种结构能够抵抗细胞内肽酶的水解， 使谷胱甘肽具有相对稳定的性 质。 另外，。
6、 半胱氨酸上的活性基因巯基(-SH)， 赋予了谷胱甘肽多种重要的作用， 如促进生长 发育、 抗氧化、 解毒等。 0003 随着养殖集约化程度的不断提高， 养殖中的应激因子， 如营养、 环境恶化(氨氮、 亚 硝酸盐和pH等)、 拥挤等大量涌现， 导致水产动物代谢紊乱， 抗病力下降， 疾病流行和爆发。 近年来， 随着研究的不断深入， 发现通过营养调控提高生产效率、 提高或激活水产动物自身 的抗氧化防御能力， 不仅可克服传统使用抗生素治疗方法存在的缺陷， 而且有利于健康养 殖， 减少对环境的污染， 保证食品安全。 同时， 在水产养殖中贯彻 “防重于治” ， 如何提高水产 动物机体免疫力， 提高动物对。
7、胁迫的抵抗能力已成为研究的热点。 0004 谷胱甘肽具有较强的抗氧化、 清除自由基能力。 GSH的琉基是供氢体,是自由基的 清除剂， 能保护蛋白免受氧化损伤； 它还是GSH-Px酶和GST酶特有的底物,能通过这两种酶 来清除细胞内的自由基和过氧化物,从而维持细胞及组织结构的正常功能和代谢。 GSH可参 与氨基酸的吸收， 促进机体对矿物质铁、 硒、 钙和脂溶性维生素的吸收和转运。 同时， GSH还 具有解毒功效。 GSH在生物机体内和毒素结合生成可溶性的化合物再经由尿液或肠道排出， 许多的致癌物、 重金属、 药品代谢产物、 除草剂、 杀虫剂、 烟尘及其它污染物等都由这个途径 转化成无害物后从身体。
8、排出。 谷胱甘肽被用于饲料中， 通常被人接受的比例是5-10。 发明内容 0005 本发明为了提高虹鳟免疫功能及促进生长， 提供一种功能专一、 适用于集约化虹 鳟养殖的免疫增强剂。 0006 为了实现上述目的， 本发明是通过以下方案予以实现的。 0007 一种虹鳟复合免疫增强剂的制备方法， 包括以下步骤： 0008 (1)采用低温高压均质法对面包酵母进行破壁处理， 处理条件为： 压力192MPa， 料 液比15:100g/mL， 循环次数6次， 提取温度14； 0009 (2)用葡聚糖酶进行酶解提取， 提取条件为： pH5.5， 葡聚糖酶/酵母1:4， 温度43， 时间3h； 说 明 书 1/。
9、3 页 3 CN 106509493 A 3 0010 (3)提取出谷胱甘肽， 用水溶解； 0011 (4)将谷胱甘肽与甘露聚糖、 -葡聚糖依次混合， 加入到明胶水溶液中； 0012 (5)采用磁力搅拌器混合均匀； 0013 (6)利用液体后喷涂技术将混合液与维生素、 油脂混合添加到虹鳟饲料中， 使谷胱 甘肽的添加量为饲料总量的0.01-0.06。 0014 上述方案中， 优选地， 步骤(4)中谷胱甘肽、 甘露聚糖、 -葡聚糖的质量分数为： 谷 胱甘肽1-6份， 甘露聚糖10份， -葡聚糖5份。 0015 与已有技术相比， 本发明具有以下有益效果： 0016 现有水产或畜禽饲料中免疫增强剂的使。
10、用多属于 “外源性” 添加， 多属于机体自身 不能合成， 并具有典型的剂量效应， 存在作用机理不明确等特点， 导致功效缺乏稳定。 所以 这种饲料添加剂并不能普遍应用于水产或畜禽的养殖， 尤其是一些成本利润比较高的动物 养殖。 虹鳟属经济价值较高的鱼类， 市场对功能性添加剂需求较为迫切， 提高虹鳟免疫功能 及促进生长， 能够满足养殖实际需求。 谷胱甘肽提取方法成熟， 无毒、 提高免疫力、 抗菌抗病 毒、 无残留， 符合绿色饲料及绿色养殖的要求， 是一种全新的天然绿色饲料添加剂， 选定该 添加比例， 是现有技术意想不到的， 后续实验证明该添加比例使虹鳟各项指标达到预料不 到的良好效果。 具体实施方。
11、式 0017 下面结合附表对本发明的具体实施方式进一步说明： 0018 采用低温高压均质法对面包酵母进行破壁处理， 处理条件为： 压力192MPa， 料液比 15:100g/mL， 循环次数6次， 提取温度14。 破壁处理后， 对提取液进行静置存放60分钟。 采 用葡聚糖酶进行酶解提取， 提取条件为： pH 5.5， 葡聚糖酶/酵母1:4， 温度43， 时间3h。 面 包酵母破壁率为50， 谷胱甘肽提取量为62.4mg/g酵母。 0019 将谷胱甘肽1-6份， 甘露聚糖10份， -葡聚糖5份混合添加至虹鳟配合饲料中。 添加 过程为： 将称量后的谷胱甘肽、 甘露聚糖和 -葡聚糖用少量水溶解， 将。
12、溶解液加入到一定质 量分数的明胶水溶液中， 采用磁力搅拌器混合均匀。 利用液体后喷涂技术将混合液与维生 素、 油脂等加入到饲料中。 0020 选择健康、 初始体重为700g左右的实验鱼， 随机平均分成5组， 对照组、 0.01添加 组、 0.02添加组、 0.04添加组、 0.06添加组。 对照组用的是不添加谷胱甘肽的虹鳟饲 料； 添加组是指将谷胱甘肽按相应比例添加到虹鳟饲料中， 各组实验鱼分别用各自饲料养 殖8周。 实验开始和结束分别称重， 采集血液、 肝脏、 脾脏、 头肾等器官称重， 肝脏低温保存。 在实验中测血清肝脏抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、 过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化。
13、 物酶(GPX)活力和丙二醛(MDA)含量， 研究谷胱甘肽对虹鳟生长及免疫机能的影响， 各养殖 组的实验结果如表1、 2和3所示。 说 明 书 2/3 页 4 CN 106509493 A 4 0021 0022 表1谷胱甘肽复合物对虹鳟生长指标的影响 0023 0024 表2谷胱甘肽复合物对虹鳟血清抗氧化反应的影响 0025 0026 表3谷胱甘肽复合物对虹鳟肝脏抗氧化反应的影响 0027 血清肝脏抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、 过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物 酶(GPX)活力及丙二醛(MAD)含量的测定采用本领域常规使用的检测方法或者商品用试剂 盒来检测。 0028 饲料中添加谷胱甘肽复合物后显著增加虹鳟的特定生长率和增重率， 并能降低饲 料系数和死亡率(表1)。 饲料中添加谷胱甘肽后显著影响血清和肝脏中SOD、 CAT、 GPX等活 力， 但对MDA含量无显著影响(表2和表3)。 0029 以上所述仅是本发明的基本原理， 并非对本发明作任何限制， 凡是依据本发明对 其进行等同变化和修饰， 均在本专利技术保护方案的范畴之内。 说 明 书 3/3 页 5 CN 106509493 A 5 。