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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810006859.1 (22)申请日 2018.01.04 (71)申请人 陕西乾宁健康食品有限公司 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区神 农路建设大厦507室 (72)发明人 翟文俊 (74)专利代理机构 北京科亿知识产权代理事务 所(普通合伙) 11350 代理人 汤东凤 (51)Int.Cl. A23F 3/08(2006.01) A23F 3/34(2006.01) C12N 1/36(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明。
2、名称 基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌 的培养接种方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于天然菌种的杜仲叶 茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 将杜仲叶水 浸后获得杜仲培养液， 在杜仲培养液中接种从茯 砖茶中获取的冠突散囊菌孢子， 并经过冠突散囊 菌逐步驯化后， 制备得到杜仲叶茯砖茶接种液， 接种至杜仲叶茯砖茶胚料中。 本发明制备的杜仲 叶茯砖茶不含有任何茶叶成分， 而是采用纯杜仲 树叶按照茯茶工艺制备而成， 再经过汽蒸、 渥堆、 发花等工艺流程， 有效去除了杜仲叶的苦味、 涩 味和草腥味， 改善了杜仲茶及饮品的口感， 同时 由于采用了茯茶工艺中的冠突散囊菌孢子接种， 更增添了杜仲叶茯砖茶具。
3、有的助消化和减肥功 能。 杜仲叶茯砖茶揉合杜仲叶特有的清香与冠突 散囊菌菌香， 在香气、 滋味、 汤色等内质方面更 佳。 权利要求书1页 说明书5页 CN 108142598 A 2018.06.12 CN 108142598 A 1.基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 其特征在于： 在茯砖茶 上挑选黄色闭囊壳， 经纯化和培养后制成菌悬液； 将杜仲叶水浸后获得杜仲培养液， 按照从 少到多的比例， 逐次加入至所述的菌悬液中， 对冠突散囊菌进行逐步驯化后， 制备得到杜仲 叶茯砖茶接种液， 再接种至杜仲叶茯砖茶胚料中。 2.根据权利要求1所述的基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的。
4、培养接种方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 【2.1】 杜仲培养液的制备 将新鲜杜仲叶或者杜仲干叶水浸后加入营养剂制备得到杜仲培养液， 留作备用； 【2.2】 冠突散囊菌获取及纯化 选择市场上发花品质优良的茯砖茶， 采用无菌接种针挑取茯砖茶上的黄色闭囊壳， 接 种于标准培养基中， 挑取其中旺盛期的黄色闭囊壳作平板划线得到初步纯化， 将其置入含 有无菌水的无菌瓶中， 制成菌悬液待用； 【2.3】 冠突散囊菌驯化 给步骤 【2.2】 的菌悬液中按照从少到多的比例， 逐次加入步骤 【2.1】 的杜仲培养液， 每 加入一次杜仲培养液后， 在25-30培养2-5天， 进行冠突散囊菌驯化； 【2.4】 。
5、杜仲叶茯砖茶接种液的制备 将步骤 【2.3】 驯化完毕后的含有菌悬液和杜仲培养液的基液置于摇床中摇振培养， 培 养温度为28-30， 培养15-20天， 获得最终的杜仲茯茶菌液， 作为杜仲茯茶制备生产中接 种液， 接种至经过渥堆后的杜仲叶茯砖茶胚料。 3.根据权利要求1所述的基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 其特征在于： 步骤 【2.1】 杜仲培养液按照每公斤杜仲干叶加20公斤的水或者每公斤新鲜杜 仲叶加10公斤的水， 在水温70-100浸取而得。 4.根据权利要求1所述的基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 其特征在于： 步骤 【2.1】 中的营养剂为Na。
6、Cl、 NH4NO3、 蔗糖、 MgSO4、 K2HPO4， 按照NaCl:NH4NO3: 蔗糖:MgSO4:K2HPO4:水为32:33:20:40:41:1000的重量比混合配置。 5.根据权利要求1所述的基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 其特征在于： 步骤 【2.2】 中的标准培养基采用黑茶浸提液、 蔗糖、 琼脂和水配置而成， 配置中 调节其PH值为5-6。 6.根据权利要求1所述的基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 其特征在于： 步骤 【2.3】 冠突散囊菌驯化中， 首次加入的杜仲培养液为菌悬液体积的0.05- 0.1倍， 最后一次加入的杜仲培养液。
7、为菌悬液体积的10-50倍， 中间添加的次数为3-10次。 7.根据权利要求5所述的基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 其特征在于： 标准培养基的pH值为5.8。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108142598 A 2 基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法 技术领域 0001 本发明属于茶叶加工领域， 具体涉及一种利用杜仲叶制备茯砖茶中的冠突散囊菌 的培养及接种方法。 背景技术 0002 茯砖茶属黑茶类， 也称发酵茶始祖， 有助消化减肥和补充各类维生素、 微量元素 等。 据史书记载第一块茯砖茶诞生于陕西咸阳泾阳县。 目前生产的茯砖茶， 外形砖面平整。
8、， 棱角分明， 厚薄一致， 发花普遍茂盛， 茯茶砖面为黑褐色或黄褐色。 泡饮时， 要求汤红不浊， 香清不粗， 味厚不涩， 口劲强， 耐冲泡， 特别要求砖内冠突散囊菌普遍茂盛， 干嗅有花的清 香。 带有金花这种冠突散囊菌类的茯茶泡饮时， 花香会融入茶汤之中， 化作茶的滋味而更加 醇厚微涩， 清纯不粗、 口感强劲。 此外金花还可以有效地促进调节新陈代谢， 降血脂、 调理肠 胃， 起到保健和病理预防作用。 0003 杜仲叶内含有内脂、 香豆精、 生物碱、 多糖、 还原糖、 有机酸、 蛋白质、 氨基酸和杜仲 胶等成分， 其中有效成分有： 松脂醇二葡萄糖甙、 桃叶珊瑚甙、 绿原酸、 杜仲胶、 筋骨草甙、。
9、 杜 仲甙、 山奈酚、 咖啡酸、 酒石酸、 还原糖、 黄酮化合物、 生物碱等， 具有降血压、 减肥、 抗衰老、 补肝肾等功效。 目前市面上现在已经有杜仲茶及系列饮料， 其中杜仲茶采用传统绿茶杀青 翻炒工艺制成， 在产业应用中存在的问题是： 杜仲叶本身具有草腥味、 苦味和涩味， 使得现 有的杜仲茶以及根据杜仲叶制备的饮品在口感上普遍存在草腥味等缺陷， 限制了杜仲茶以 及相关杜仲叶饮料产业的推广应用。 而目前普遍采用的在杜仲叶加工过程中加入臭氧或其 他化学物质来去除草腥味的方法， 效果不佳而且工艺复杂、 成本高， 限制了其大面积推广。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种基于天然菌种的杜仲。
10、叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接 种方法， 采用该方案获得的接种液对渥堆后的杜仲叶茯砖茶胚料接种， 通过茯茶发酵工艺， 去除了杜仲叶原有的涩味和苦味， 制备获得的杜仲叶茯砖茶及其饮料口感优于普通的杜仲 茶及其饮品。 0005 本发明采用的技术方案如下： 0006 基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法， 其特征在于： 在茯砖 茶上挑选黄色闭囊壳， 经纯化和培养后制成菌悬液； 将杜仲叶水浸后获得杜仲培养液， 按照 从少到多的比例， 逐次加入至所述的菌悬液中， 对冠突散囊菌进行逐步驯化后， 制备得到杜 仲叶茯砖茶接种液， 再接种至杜仲叶茯砖茶胚料中。 0007 上述基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶。
11、冠突散囊菌的培养接种方法中， 包括以下步 骤： 0008 【2.1】 杜仲培养液的制备 0009 将新鲜杜仲叶或者杜仲干叶水浸后加入营养剂制备得到杜仲培养液， 留作备用； 0010 【2.2】 冠突散囊菌获取及纯化 说 明 书 1/5 页 3 CN 108142598 A 3 0011 选择市场上发花品质优良的茯砖茶， 采用无菌接种针挑取茯砖茶上的黄色闭囊 壳， 接种于标准培养基中， 挑取其中旺盛期的黄色闭囊壳作平板划线得到初步纯化， 将其置 入含有无菌水的无菌瓶中， 制成菌悬液待用； 0012 【2.3】 冠突散囊菌驯化 0013 给步骤 【2.2】 的菌悬液中按照从少到多的比例， 逐次加入。
12、步骤 【2.1】 的杜仲培养 液， 每加入一次杜仲培养液后， 在25-30培养2-5天， 进行冠突散囊菌驯化； 0014 【2.4】 杜仲叶茯砖茶接种液的制备 0015 将步骤 【2.3】 驯化完毕后的含有菌悬液和杜仲培养液的基液置于摇床中摇振培 养， 培养温度为28-30， 培养15-20天， 获得最终的杜仲茯茶菌液， 作为杜仲茯茶制备生 产中接种液， 接种至经过渥堆后的杜仲叶茯砖茶胚料。 0016 上述基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法中， 步骤 【2.1】 杜 仲培养液按照每公斤杜仲干叶加20公斤的水或者每公斤新鲜杜仲叶加10公斤的水， 在水温 70-100浸取而得。 0。
13、017 上述基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法中， 步骤 【2.1】 中 的营养剂为NaCl、 NH4NO3、 蔗糖、 MgSO4、 K2HPO4， 按照NaCl:NH4NO3:蔗糖:MgSO4:K2HPO4:水为 32:33:20:40:41:1000的重量比混合配置。 0018 上述基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法中， 步骤 【2.2】 中 的标准培养基采用黑茶浸提液、 蔗糖、 琼脂和水配置而成， 配置中调节其PH值为5-6。 0019 上述基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法中， 步骤 【2.3】 冠 突散囊菌驯化中， 首次加入的杜仲培养液。
14、为菌悬液体积的0.05-0.1倍， 最后一次加入的杜 仲培养液为菌悬液体积的10-50倍， 中间添加的次数为3-10次。 0020 上述基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶冠突散囊菌的培养接种方法中， 标准培养基的 pH值为5.8。 0021 本发明具有的有益技术效果如下： 0022 1、 本发明在杜仲叶茯砖茶制备中， 采用对冠突散囊菌的菌悬液中， 由低浓度到高 浓度逐渐加入杜仲培养液的方案， 实现了冠突散囊菌的驯化培养。 由于冠突散囊菌是生长 在常规茶叶制成的茯砖茶上使其产生金花的菌种， 而本发明的杜仲叶茯茶采用纯杜仲叶按 照茯茶的工艺制备而成， 本身并不含任何茶叶成份。 众所周知， 杜仲叶自身包含的。
15、绿原酸等 抗菌药用成份， 会抑制冠突散囊菌孢子的生长， 因此为了使得冠突散囊菌能够在杜仲叶繁 殖， 故采用了逐步培养驯化的过程， 在菌悬液中按照逐渐加入含有杜仲的培养液， 使得冠突 散囊菌逐渐能适应杜仲培养液的环境， 最终实现了普通冠突散囊菌孢子在纯杜仲叶茯砖茶 上的培养和成熟， 并发花茂盛。 0023 2、 采用本发明工艺制备的杜仲叶茯砖茶及其饮料， 而是采用纯杜仲树叶按照茯茶 工艺制备而成， 再经过汽蒸、 渥堆、 发花等工艺流程， 有效去除了杜仲叶的苦味、 涩味和草腥 味， 改善了杜仲茶及饮品的口感， 同时由于采用了茯茶工艺中的冠突散囊菌孢子接种， 更增 添了杜仲叶茯砖茶具有的助消化和减肥。
16、功能。 0024 3、 采用本发明工艺制备的杜仲叶茯砖茶感官品质具有独特风格， 杜仲叶茯砖茶揉 合杜仲叶特有的清香与冠突散囊菌菌香， 在香气、 滋味、 汤色等内质方面无涩味， 汤色淡黄 明亮， 品质更佳， 除保持杜仲的营养外， 同时也是一种养脾胃的保健茶。 说 明 书 2/5 页 4 CN 108142598 A 4 具体实施方式 0025 为使本发明的目的、 技术方案和优点更加清楚明白， 下面结合实施例对本发明做 进一步的详细说明。 在此， 本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明， 但并不作为对 本发明的限定。 0026 实施例1 0027 本发明的基于天然菌种的杜仲叶茯砖茶制备方法， 。
17、包括以下步骤： 0028 (1)杜仲叶的采集 0029 采摘每年7-10月的杜仲叶， 自然风干， 晒干或烘干系统烘干， 含水量在10， 烘干 温度为65， 用塑料编织袋装放置于通风干燥处备用。 0030 (2)杜仲叶的初步处理 0031 将杜仲叶清洗干净， 用切割刀分割成细条， 或者整叶直接上滚圆筛分选去杂， 即得 杜仲叶原料。 0032 (3)杜仲培养液的制备 0033 将步骤(2)中滚圆筛漏下的细末杜仲叶浸取成杜仲汁液， 按照每公斤杜仲干叶加 20公斤的水， 在水温70-100浸取而得。 在浸取液中加入NaCl、 NH4NO3、 蔗糖、 MgSO4、 K2HPO4作 为营养剂， 并按照Na。
18、Cl:NH4NO3:蔗糖:MgSO4:K2HPO4:水为32:33:20:40:41:1000的重量比混 合配置， 制成杜仲培养液， 留作后续备用。 0034 (4)冠突散囊菌获取及纯化 0035 选择市场上发花品质优良的茯砖茶3-5种， 采用无菌接种针挑取茯砖茶上的黄色 闭囊壳， 接种于标准培养基中， 在30培养2天； 挑取其中旺盛期的黄色闭囊壳作平板划线， 经2次划线后得到初步纯化， 将其置入含有无菌水的无菌瓶中， 制成菌悬液待用。 其中标准 培养基采用黑茶浸提液、 蔗糖、 琼脂和水配置而成， 配置中调节其PH值为5-6， 优选PH5.8， 其配置浓度和方法参考常规技术文献。 0036 (。
19、5)冠突散囊菌驯化 0037 在步骤(4)的菌悬液中， 按照从少到多的比例， 逐次加入步骤(3)的杜仲培养液， 依 次按照原菌悬液与杜仲培养液的体积比分别为1:0.05、 1:0.5、 1:2、 1:5、 1:10的比例加入， 每加入一次杜仲培养液后， 在25培养2天， 直到冠突散囊菌生长旺盛时， 即完成驯化。 0038 (6)杜仲茯茶接种液的制备 0039 将步骤(5)驯化后的含有菌悬液和杜仲培养液的基液置于摇床中摇振培养， 培养 温度为28， 转速为200r/min， 培养15天， 获得最终的杜仲茯茶菌液， 作为杜仲茯茶制备生 产中接种液。 0040 (7)汽蒸、 渥堆 0041 将步骤(。
20、2)处理过的杜仲叶原料喷水后， 检测含水量达到20时高温汽蒸， 汽蒸温 度为100， 汽蒸时长为5分钟； 将汽蒸后的杜仲叶片立即进行堆积， 依据杜仲叶的加工量， 集中堆积。 堆高2米， 渥堆时间3.5小时， 堆内温度控制在75-80。 若超过80时应立即翻 堆散热。 渥堆后的杜仲叶， 外形色泽由深浅不同的杂色变成色泽一致的黄褐色， 内质滋味由 青涩草腥味变成醇厚的芳香味。 汽蒸和渥堆使杜仲叶充分软化， 脱除异味， 有效地清除杜仲 叶的草腥味， 同时借助水热作用促进杜仲叶叶片内复杂的理化变化。 说 明 书 3/5 页 5 CN 108142598 A 5 0042 (8)杜仲叶胚料和杜仲叶汁液的。
21、混合 0043 将渥堆后的杜仲叶精确称重， 确定杜仲叶胚料重量之后， 添加步骤(3)的杜仲培养 液， 调整杜仲叶含水量20-40之间， (通常按照每500g杜仲叶胚料中加杜仲培养液200g)， 充分搅拌均匀， 再次通过蒸汽机进行汽蒸软化， 汽蒸温度100， 时间5秒， 制成杜仲叶混合 胚料。 0044 (9)接种冠突散囊菌孢子 0045 将经过汽蒸软化过的杜仲叶混合胚料均匀摊开， 自然冷却至室温， 根据汽蒸软化 后的杜仲叶混合胚料的重量， 喷洒步骤(6)的杜仲茯茶接种液， 喷洒量参照一般的茯茶接种 工艺而定。 0046 (10)压制发花 0047 将接种冠突散囊孢子菌的杜仲叶胚料， 按要求称重。
22、后装入模具， 压制成茶砖块型。 再置于烘房中进行发花干燥， 即为杜仲叶茯砖茶成品。 0048 实施例2 0049 (1)杜仲叶的采集 0050 每年7-10月采摘无虫害、 叶面整齐的杜仲叶。 0051 (2)杜仲叶的初步处理 0052 将杜仲叶清洗干净， 用切割刀分割成细条， 或者整叶直接上滚圆筛分选去杂， 即得 杜仲叶原料。 0053 (3)杜仲培养液的制备 0054 将步骤(2)中滚圆筛漏下的细末杜仲叶浸取成杜仲汁液， 按照每公斤杜仲干叶加 20公斤的水， 在水温70-100浸取而得。 在浸取液中加入NaCl、 NH4NO3、 蔗糖、 MgSO4、 K2HPO4作 为营养剂， 并按照NaC。
23、l:NH4NO3:蔗糖:MgSO4:K2HPO4:水为32:33:20:40:41:1000的重量比混 合配置， 制成杜仲培养液， 留作后续备用。 0055 (4)冠突散囊菌获取及纯化 0056 选择市场上发花品质优良的茯砖茶3-5种， 采用无菌接种针挑取茯砖茶上的黄色 闭囊壳， 接种于标准培养基中， 在30培养2天； 挑取其中旺盛期的黄色闭囊壳作平板划线， 经2-3次划线后得到初步纯化， 将其置入含有无菌水的无菌瓶中， 制成菌悬液待用。 其中标 准培养基采用黑茶浸提液、 蔗糖、 琼脂和水配置而成， 配置中调节其PH值为5-6， 优选PH 5.8， 其配置浓度和方法参考常规技术文献。 0057。
24、 (5)冠突散囊菌驯化 0058 在步骤(4)的菌悬液中， 按照从少到多的比例， 逐次加入步骤(3)的杜仲培养液， 依 次按照原菌悬液与杜仲培养液的体积比分别为1:0.1、 1:0.5、 1:2、 1:5、 1:10、 1:50的比例加 入， 每加入一次杜仲培养液后， 在25培养2天， 直到冠突散囊菌生长旺盛时， 即完成驯化。 0059 (6)杜仲茯茶接种液的制备 0060 将步骤(5)驯化后的含有菌悬液和杜仲培养液的基液置于摇床中摇振培养， 培养 温度为28， 转速为200r/min， 培养20天， 获得最终的杜仲茯茶菌液， 作为杜仲茯茶制备生 产中接种液。 0061 (7)汽蒸、 渥堆 0。
25、062 将步骤(2)处理过的杜仲叶原料进行高温汽蒸， 汽蒸温度为120， 汽蒸时长为1分 说 明 书 4/5 页 6 CN 108142598 A 6 钟； 将汽蒸后的杜仲叶片立即进行堆积， 依据杜仲叶的加工量， 集中堆积。 堆高2米， 渥堆时 间5小时， 堆内温度控制在75-80。 若超过80时应立即翻堆散热。 渥堆后的杜仲叶， 外 形色泽由深浅不同的杂色变成色泽一致的黄褐色， 内质滋味由青涩草腥味变成醇厚的芳香 味。 汽蒸和渥堆使杜仲叶充分软化， 脱除异味， 有效地清除杜仲叶的草腥味， 同时借助水热 作用促进杜仲叶叶片内复杂的理化变化。 0063 (8)杜仲叶胚料和杜仲叶汁液的混合 006。
26、4 将渥堆后的杜仲叶精确称重， 确定杜仲叶胚料重量之后， 添加步骤(3)的杜仲培养 液， 调整杜仲叶含水量20-40之间(通常按照每500g杜仲叶胚料中加杜仲培养液200g)， 充 分搅拌均匀， 再次通过蒸汽机进行汽蒸软化， 汽蒸温度107， 时间10秒， 制成杜仲叶混合胚 料。 0065 (9)接种冠突散囊菌孢子 0066 将经过汽蒸软化过的杜仲叶混合胚料均匀摊开， 自然冷却至室温， 根据汽蒸软化 后的杜仲叶混合胚料的重量， 喷洒步骤(6)的杜仲茯茶接种液， 喷洒量参照一般的茯茶接种 工艺而定。 0067 (10)压制发花 0068 将接种冠突散囊孢子菌的杜仲叶胚料， 按要求称重后装入模具， 压制成茶砖块型。 再置于烘房中进行发花干燥， 即为杜仲叶茯砖茶成品。 0069 分别按照实施例1、 2制备得到了杜仲叶茯砖茶， 并邀请9人品鉴小组进行了品尝评 价， 得到的结果如下表所示。 0070 项目名称感官指标 发花状态及色泽金色、 普遍茂盛 色泽褐黄油润 香气冲泡后有杜仲的香气和冠突散囊菌菌香 冲泡汤色黄亮 滋味醇和纯正， 无草腥味 叶底黄褐色 说 明 书 5/5 页 7 CN 108142598 A 7 。