技术领域
本发明属于生物肥料技术领域，尤其涉及一种用于水产养殖微生态制剂的制备方法。
背景技术
目前，对水产动物疾病的预防和治疗药物基本仍采用抗生素，但由于长期、大量使用抗生素，致病菌耐药性增强、菌群失调、免疫力下降、疾病复发率高、药物残留等种种弊端日益严重，同时也严重危害动物机体及人类健康。在此形势下，改变养殖观念、预防重于治疗，并开发应用无毒、无药残的新型绿色饲料添加剂是必然趋势。
微生态制剂，也叫活菌制剂或生菌剂，是指运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂。目前微生态制剂己被应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域中。在饲料工业中广泛应用的有植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌等，在食品中广泛应用的有乳酸菌、双歧杆菌、肠球菌和酵母菌等。近几年来，水产养殖业中微生态制剂已经在逐步地取代传统的添加剂。在未来，微生态制剂作为遵循生态环境自然循环法则的无公害制剂，将是添加剂行业的一种发展趋势。
微生态制剂是目前常用和研究较多的一种绿色、安全的饲料添加剂，此类制剂是用动物有益菌经工业化高密度发酵生产得到的，包含有很多的有益微生物及其代谢产物构成的活菌制剂，可以直接饲喂动物。微生态制剂通过维持肠道内微生态平衡而发挥作用，具有防病、增强机体免疫力、促进生长、增加体重等多种功能，且无污染，无残留，不产生抗药性，是一种绿色、安全的饲料添加剂。
市场上的微生态产品种类繁多，质量参差不齐，目前，随着人工喂养的普及，都是以配合饲料为主要喂养方法，由于微生态试剂中的微生物易造成水产动物适口性差，采食量降低，易造成其生长发育慢，易患各种传染病。
因此，有必要研制出一种性能优良，绿色安全的微生态制剂，这将是添加剂行业的一大发展。
发明内容
本发明所要解决的技术问题：针对微生态试剂中的微生物易造成水产动物适口性差，采食量降低，易造成其生长发育慢，易患各种传染病的问题，提供了一种用于水产养殖微生态制剂的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
一种用于水产养殖微生态制剂的制备方法，包括如下步骤：
（1）将池塘淤泥、草炭及绿藻放入搅拌机中搅拌均匀，收集搅拌混合物，并使用氢氧化钠溶液调节搅拌混合物pH至5.0～7.0，放入发酵罐中进行发酵，收集发酵混合物；
（2）将发酵混合物进行过滤，收集过滤液，按重量份数计，取60～65份酵母浸膏、35～40份胰蛋白胨、23～26份过滤液、13～15份水、8～11份硝酸铵、4～6份亚硫酸钠、2～5份卵磷脂及1～3份钼酸钠，混合均匀，收集混合物；
（3）将混合物放入容器中，并将容器置于恒温培养箱中进行培养20～24h，在培养过程中，每2～4h向容器中加入添加液；
（4）在培养结束后，将容器取出，使用无菌水淋洗容器中混合物表面，直至其表面无菌丝，收集淋洗液，将淋洗液、载体混合，静置，再加入桃胶，搅拌，冷冻干燥，收集干燥物，粉碎，过筛，收集过筛颗粒，得用于水产养殖微生态制剂。
所述步骤（1）中池塘淤泥、草炭及绿藻的质量比为8：1～3：4。
所述步骤（1）中发酵条件为温度29～36℃，自然通风。
所述步骤（3）中添加液的制备，按质量比2:4:9，将苦楝皮、松针及水放入蒸煮锅中进行蒸煮，过滤，收集滤液，即得添加液，添加液每次添加量为混合物质量的4～8％。
所述步骤（4）中载体为经煅烧、粉碎、过筛的蛭石颗粒，所述淋洗液、载体的质量比为5:1。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
本发明使用水产养殖环境中的池塘淤泥作为菌源供体，一方面池塘淤泥中的菌种对水产动物伤害小，两者兼容性好，另一面池塘淤泥中的微生物可以产生有机酸类物质促进鱼类的消化，以便采食，并且再通过草炭及绿藻对池塘淤泥中的生态群进行优化处理，改善生态群，再进行筛选培养，使用钼酸钠作为筛选颗粒，获得有益菌种，再使用添加液进行进一步筛选，通过筛选获得，可产生抗菌类物质的菌种，随后通过蛭石对菌种的吸附，利用桃胶进行包裹，避免菌种的流失，同时提高微生态制剂的效果。
具体实施方式
添加液的制备：按质量比2:4:9，将苦楝皮、松针及水放入蒸煮锅中，在100℃下进行蒸煮6～8h，过滤，收集滤液，即得添加液。
载体的制备：将蛭石置于1.1mol/L盐酸溶液中浸泡30min，再放入煅烧炉中，在1100℃下煅烧1h，进行粉碎，过200筛，收集蛭石颗粒，再将蛭石颗粒浸泡在1.2mol/L葡萄糖溶液中3h，冷冻干燥，收集干燥物，即得载体。
一种用于水产养殖微生态制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
（1）按质量比为8：1～3：4，将池塘淤泥、草炭及绿藻放入搅拌机中搅拌均匀，收集搅拌混合物，并使用氢氧化钠溶液调节搅拌混合物pH至5.0～7.0，放入发酵罐中进行发酵，发酵温度为29～36℃，自然通风，发酵2～4天，收集发酵混合物；
（2）将发酵混合物进行过滤，收集过滤液，按重量份数计，取60～65份酵母浸膏、35～40份胰蛋白胨、23～26份过滤液、13～15份水、8～11份硝酸铵、4～6份亚硫酸钠、2～5份卵磷脂及1～3份钼酸钠，混合均匀，收集混合物；
（3）将混合物放入容器中，并将容器置于恒温培养箱中进行培养20～24h，培养温度为25～34℃，在培养过程中，每2～4h向容器中加入添加液，添加液每次添加量为混合物质量的4～8％；
（4）在培养结束后，将容器取出，观察容器中混合物表面有无菌丝，若无菌丝存在，重复步骤（3），进行重新培养，若有菌丝存在，使用无菌水以10mL/s淋洗容器中混合物表面，直至其表面无菌丝，收集淋洗液，按质量比5:1，将淋洗液、载体混合，静置3h，再加入桃胶，加入量为载体质量的30～40％，以800r/min搅拌30～40min，冷冻干燥，收集干燥物，粉碎，过200目筛筛，收集过筛颗粒，得用于水产养殖微生态制剂。
实施例1
添加液的制备：按质量比2:4:9，将苦楝皮、松针及水放入蒸煮锅中，在100℃下进行蒸煮6h，过滤，收集滤液，即得添加液。
载体的制备：将蛭石置于1.1mol/L盐酸溶液中浸泡30min，再放入煅烧炉中，在1100℃下煅烧1h，进行粉碎，过200筛，收集蛭石颗粒，再将蛭石颗粒浸泡在1.2mol/L葡萄糖溶液中3h，冷冻干燥，收集干燥物，即得载体。
一种用于水产养殖微生态制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
（1）按质量比为8：1：4，将池塘淤泥、草炭及绿藻放入搅拌机中搅拌均匀，收集搅拌混合物，并使用氢氧化钠溶液调节搅拌混合物pH至5.0，放入发酵罐中进行发酵，发酵温度为29℃，自然通风，发酵2天，收集发酵混合物；
（2）将发酵混合物进行过滤，收集过滤液，按重量份数计，取60份酵母浸膏、35份胰蛋白胨、23份过滤液、13份水、8份硝酸铵、4份亚硫酸钠、2份卵磷脂及1份钼酸钠，混合均匀，收集混合物；
（3）将混合物放入容器中，并将容器置于恒温培养箱中进行培养20h，培养温度为25℃，在培养过程中，每2h向容器中加入添加液，添加液每次添加量为混合物质量的4％；
（4）在培养结束后，将容器取出，观察容器中混合物表面有无菌丝，若无菌丝存在，重复步骤（3），进行重新培养，若有菌丝存在，使用无菌水以10mL/s淋洗容器中混合物表面，直至其表面无菌丝，收集淋洗液，按质量比5:1，将淋洗液、载体混合，静置3h，再加入桃胶，加入量为载体质量的30％，以800r/min搅拌30min，冷冻干燥，收集干燥物，粉碎，过200目筛筛，收集过筛颗粒，得用于水产养殖微生态制剂。
实施例2
添加液的制备：按质量比2:4:9，将苦楝皮、松针及水放入蒸煮锅中，在100℃下进行蒸煮7h，过滤，收集滤液，即得添加液。
载体的制备：将蛭石置于1.1mol/L盐酸溶液中浸泡30min，再放入煅烧炉中，在1100℃下煅烧1h，进行粉碎，过200筛，收集蛭石颗粒，再将蛭石颗粒浸泡在1.2mol/L葡萄糖溶液中3h，冷冻干燥，收集干燥物，即得载体。
一种用于水产养殖微生态制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
（1）按质量比为8：2：4，将池塘淤泥、草炭及绿藻放入搅拌机中搅拌均匀，收集搅拌混合物，并使用氢氧化钠溶液调节搅拌混合物pH至6.0，放入发酵罐中进行发酵，发酵温度为33℃，自然通风，发酵3天，收集发酵混合物；
（2）将发酵混合物进行过滤，收集过滤液，按重量份数计，取63份酵母浸膏、37份胰蛋白胨、25份过滤液、14份水、10份硝酸铵、5份亚硫酸钠、4份卵磷脂及2份钼酸钠，混合均匀，收集混合物；
（3）将混合物放入容器中，并将容器置于恒温培养箱中进行培养22h，培养温度为28℃，在培养过程中，每3h向容器中加入添加液，添加液每次添加量为混合物质量的6％；
（4）在培养结束后，将容器取出，观察容器中混合物表面有无菌丝，若无菌丝存在，重复步骤（3），进行重新培养，若有菌丝存在，使用无菌水以10mL/s淋洗容器中混合物表面，直至其表面无菌丝，收集淋洗液，按质量比5:1，将淋洗液、载体混合，静置3h，再加入桃胶，加入量为载体质量的35％，以800r/min搅拌35min，冷冻干燥，收集干燥物，粉碎，过200目筛筛，收集过筛颗粒，得用于水产养殖微生态制剂。
实施例3
添加液的制备：按质量比2:4:9，将苦楝皮、松针及水放入蒸煮锅中，在100℃下进行蒸煮8h，过滤，收集滤液，即得添加液。
载体的制备：将蛭石置于1.1mol/L盐酸溶液中浸泡30min，再放入煅烧炉中，在1100℃下煅烧1h，进行粉碎，过200筛，收集蛭石颗粒，再将蛭石颗粒浸泡在1.2mol/L葡萄糖溶液中3h，冷冻干燥，收集干燥物，即得载体。
一种用于水产养殖微生态制剂的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
（1）按质量比为8：3：4，将池塘淤泥、草炭及绿藻放入搅拌机中搅拌均匀，收集搅拌混合物，并使用氢氧化钠溶液调节搅拌混合物pH至7.0，放入发酵罐中进行发酵，发酵温度为36℃，自然通风，发酵4天，收集发酵混合物；
（2）将发酵混合物进行过滤，收集过滤液，按重量份数计，取65份酵母浸膏、40份胰蛋白胨、26份过滤液、15份水、11份硝酸铵、6份亚硫酸钠、5份卵磷脂及3份钼酸钠，混合均匀，收集混合物；
（3）将混合物放入容器中，并将容器置于恒温培养箱中进行培养24h，培养温度为34℃，在培养过程中，每4h向容器中加入添加液，添加液每次添加量为混合物质量的8％；
（4）在培养结束后，将容器取出，观察容器中混合物表面有无菌丝，若无菌丝存在，重复步骤（3），进行重新培养，若有菌丝存在，使用无菌水以10mL/s淋洗容器中混合物表面，直至其表面无菌丝，收集淋洗液，按质量比5:1，将淋洗液、载体混合，静置3h，再加入桃胶，加入量为载体质量的40％，以800r/min搅拌40min，冷冻干燥，收集干燥物，粉碎，过200目筛筛，收集过筛颗粒，得用于水产养殖微生态制剂。
对比例：沧州市某生物科技有限公司生产的水产养殖微生态制剂
方法：取实施例与对比例所制备的水产养殖微生态制剂与鱼饲料进行等比例的配比，进行比较：
用微量稀释法进行平板计数，检测其活菌数。
根据GB/T14700-1993和GB/T6432-1994检测其蛋白质和维生素的含量。
水产养殖微生态制剂的具体检测情况如表1
表1
检测项目 实施例1 实施例2 实施例3 对比例 活菌含量（CFU/ml） 8.43±0.35 8.69±0.54 9.43±0.53 6.88±0.02 蛋白质率（%） 40.38 42.49 45.28 39.43 维生素率（%） 20.54 22.31 26.82 19.83
取40条1日龄的鱼苗随机分成四组，分别投喂实施例与对比例所制备的水产养殖微生态制剂。将各组在20日龄、60日龄、100日龄和140日龄分别称重并记录其均重，检测其生长情况。
不同阶段各组鱼苗均重具体检测情况如表2
表2
检测项目 实施例1 实施例2 实施例3 对比例 20龄(g) 16.44 16.12 16.35 16.38 60龄(g) 41.35±1.66 42.11±0.98 46.65±2.29 40.23±1.22 100龄(g) 64.3±1.19 65.21±0.75 70.31±1.11 60.22±0.88 140龄(g) 114±1.71 116±0.35 120±1.71 104±1.20
由上可知，本发明所生产的水产养殖微生态制剂营养成分含量高，且可以有效促进水产动物的生长发育，是一种安全高效的水产养殖微生态制剂，值得推广和使用。