技术领域
本发明属于生物发酵技术领域，具体涉及一种植物酵素无害化制备方法。
背景技术
酵素是指植物进行深层发酵，提取的一种含生物活性物质的低盐液体，在整个发酵过程中，微生物通过自己的新陈代谢，使原料发生多种变化。这些生物活性成分至少包括酚类物质、有机酸、糖类和酶。酵素中含有的生物活性成分，可影响服用者体内的活性酶，从细胞层面调节机体的生命活动，具有生命活力的保健作用。20世纪初酵素开始在日本盛行，紧接着陆续被台湾、新加坡、马来西亚、韩国和美国等地引进，并在所到之处引起酵素热，反响异常强烈，它的抗氧化、抗菌消炎、促进新陈代谢、提高免疫力、美白、抗衰老等功能受到人们的热力追捧。
近年来，酵素功能性产品层出不穷，酵素的生产工艺也在不断更新，但大多数发酵工艺受优势菌种的选择、环境中微生物及气候条件的影响，会产生喝风酵素、甲醇含量高、亚硝酸盐含量高等诸多问题，成为了酵素食用安全的不利因素。
中国专利CN105105119公开了一种基于接种菌种进行发酵制备水果酵素的方法，包括选料、剥皮切片、调整糖度、灭菌、添加改性发酵液、发酵和过滤等步骤，可最大限度的提高微生物酵素的抗氧化活性和酶活力，但其菌种组合及发酵程序均致力于水果酵素的发酵，对于人参、灵芝等硬质原材料却发酵效率低下，费时且这些贵重植物难以充分分解。尤其是其采用曲霉发酵，且未对甲醇、亚硝酸盐含量等进行合理设计，具有一定的不安全因素。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种植物酵素无害化制备方法，通过优势微生物的引入、发酵环境条件的控制，可显著降低酵素食用安全的不利因素。
为解决以上技术问题，本发明通过以下技术方案实现：
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5～0.6：9～12混合均匀后，接入产朊假丝酵母菌(接种量为6～8％)和保加利亚乳杆菌(接种量为9～12％)，于30～35℃密封发酵12～18天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中3～5min，加入其重量3～5倍的水，再接入产朊假丝酵母菌(接种量为3～4％)和保加利亚乳杆菌(接种量为4～6％)，于35～40℃密封发酵6～8天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入噬热链球菌(接种量为8～10％)和纳豆芽孢杆菌(接种量为4～7％)，常温下密封发酵25～30天，过滤得到三次发酵液；
(5)将水滑石与三次发酵液混合(重量比为0.06～0.09:1)，进行超声分散处理(30～40KHz，20～30min)，过滤，即得到植物酵素原液。
上述菌种的接种量为种子液的体积和接种前原料液体积的比例，所述种子液中活菌含量不低于1*108个/mL。
优选的，所述植物原料包括人参、燕窝、虫草和灵芝中的至少一种。
优选的，所述水滑石的制备方法如下：将AlCl3和MgCl2分别配制成浓度为0.6～0.8mol·L-1的水溶液，再将二者以体积比1:2～3混合，持续进行搅拌，15～20min后，用浓度为10～20wt％的KOH水溶液调节混合溶液pH值至9～10，得到沉淀；将所得沉淀用蒸馏水分散洗涤，直至洗涤液为中性，将沉淀置于110～120℃条件下烘干12h，然后，将烘干物打碎成颗粒状，以15℃·min-1升温至360～380℃保温1.5h，再以9℃·min-1继续升温至800～850℃保温4h，自然冷却，即得。
本发明的有益效果如下：
(1)本发明先加入酵母菌(需氧繁殖、厌氧代谢)、乳酸菌(厌氧菌)进行一次发酵，将果胶严格厌氧分解，再加入噬热链球菌，进行二次发酵，噬热链球菌产生的制霉素可以抑制曲霉的存活，尽可能避免甲醇酯的分解。
(2)本发明在二次发酵液中加入适量水滑石，其层间阴离子可与其中的亚硝酸根离子进行离子交换，以降低亚硝酸盐的残留量。
(3)本发明所用产朊假丝酵母菌能利用原料中多种物质进行新陈代谢，且有氧条件下不产酒精，可诱导合成一定量亚硝酸还原酶，以及代谢木质水解液，能充分将人参、燕窝、虫草和灵芝等贵重原料分解成小分子，便于吸收。且可同化硝酸盐，在同化过程中，亚硝酸还原酶助于减少中间产物的量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。
实例1
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料(人参、燕窝、虫草和灵芝1:1:1:1)清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5：10混合均匀后，接入产朊假丝酵母菌(接种量为7％)和保加利亚乳杆菌(接种量为10％)，于30～35℃密封发酵15天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中4min，加入其重量4倍的水，再接入产朊假丝酵母菌(接种量为3％)和保加利亚乳杆菌(接种量为5％)，于35～40℃密封发酵7天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入噬热链球菌(接种量为9％)和纳豆芽孢杆菌(接种量为6％)，常温下密封发酵28天，过滤得到三次发酵液；
(5)将水滑石与三次发酵液混合(重量比为0.08:1)，进行超声分散处理(35KHz，25min)，过滤，即得到植物酵素原液。
所述水滑石的制备方法如下：将AlCl3和MgCl2分别配制成浓度为0.7mol·L-1的水溶液，再将二者以体积比1:2.5混合，持续进行搅拌，18min后，用浓度为15wt％的KOH水溶液调节混合溶液pH值至9～10，得到沉淀；将所得沉淀用蒸馏水分散洗涤，直至洗涤液为中性，将沉淀置于115℃条件下烘干12h，然后，将烘干物打碎成颗粒状，以15℃·min-1升温至380℃保温1.5h，再以9℃·min-1继续升温至830℃保温4h，自然冷却，即得。
实例2
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料(人参、灵芝1:1)清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5：10混合均匀后，接入产朊假丝酵母菌(接种量为7％)和保加利亚乳杆菌(接种量为10％)，于30～35℃密封发酵15天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中4min，加入其重量4倍的水，再接入产朊假丝酵母菌(接种量为3％)和保加利亚乳杆菌(接种量为5％)，于35～40℃密封发酵7天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入噬热链球菌(接种量为9％)和纳豆芽孢杆菌(接种量为6％)，常温下密封发酵28天，过滤得到三次发酵液；
(5)将水滑石与三次发酵液混合(重量比为0.08:1)，进行超声分散处理(35KHz，25min)，过滤，即得到植物酵素原液。
所述水滑石的制备方法如下：将AlCl3和MgCl2分别配制成浓度为0.7mol·L-1的水溶液，再将二者以体积比1:2.5混合，持续进行搅拌，18min后，用浓度为15wt％的KOH水溶液调节混合溶液pH值至9～10，得到沉淀；将所得沉淀用蒸馏水分散洗涤，直至洗涤液为中性，将沉淀置于115℃条件下烘干12h，然后，将烘干物打碎成颗粒状，以15℃·min-1升温至380℃保温1.5h，再以9℃·min-1继续升温至830℃保温4h，自然冷却，即得。
实例3
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料(燕窝)清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5：10混合均匀后，接入产朊假丝酵母菌(接种量为7％)和保加利亚乳杆菌(接种量为10％)，于30～35℃密封发酵15天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中4min，加入其重量4倍的水，再接入产朊假丝酵母菌(接种量为3％)和保加利亚乳杆菌(接种量为5％)，于35～40℃密封发酵7天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入噬热链球菌(接种量为9％)和纳豆芽孢杆菌(接种量为6％)，常温下密封发酵28天，过滤得到三次发酵液；
(5)将水滑石与三次发酵液混合(重量比为0.08:1)，进行超声分散处理(35KHz，25min)，过滤，即得到植物酵素原液。
所述水滑石的制备方法如下：将AlCl3和MgCl2分别配制成浓度为0.7mol·L-1的水溶液，再将二者以体积比1:2.5混合，持续进行搅拌，18min后，用浓度为15wt％的KOH水溶液调节混合溶液pH值至9～10，得到沉淀；将所得沉淀用蒸馏水分散洗涤，直至洗涤液为中性，将沉淀置于115℃条件下烘干12h，然后，将烘干物打碎成颗粒状，以15℃·min-1升温至380℃保温1.5h，再以9℃·min-1继续升温至830℃保温4h，自然冷却，即得。
对比例1
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料(人参、燕窝、虫草和灵芝1:1:1:1)清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5：10混合均匀后，接入产朊假丝酵母菌(接种量为7％)和活性乳酸菌(接种量为10％)，于30～35℃密封发酵15天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中4min，加入其重量4倍的水，再接入产朊假丝酵母菌(接种量为3％)和活性乳酸菌(接种量为5％)，于35～40℃密封发酵7天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入噬热链球菌(接种量为9％)和活性乳酸菌(接种量为6％)，常温下密封发酵28天，过滤得到三次发酵液；
(5)将水滑石与三次发酵液混合(重量比为0.08:1)，进行超声分散处理(35KHz，25min)，过滤，即得到植物酵素原液。
所述水滑石的制备方法如下：将AlCl3和MgCl2分别配制成浓度为0.7mol·L-1的水溶液，再将二者以体积比1:2.5混合，持续进行搅拌，18min后，用浓度为15wt％的KOH水溶液调节混合溶液pH值至9～10，得到沉淀；将所得沉淀用蒸馏水分散洗涤，直至洗涤液为中性，将沉淀置于115℃条件下烘干12h，然后，将烘干物打碎成颗粒状，以15℃·min-1升温至380℃保温1.5h，再以9℃·min-1继续升温至830℃保温4h，自然冷却，即得。
对比例2
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料(人参、燕窝、虫草和灵芝1:1:1:1)清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5：10混合均匀后，接入啤酒酵母菌(接种量为7％)和保加利亚乳杆菌(接种量为10％)，于30～35℃密封发酵15天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中4min，加入其重量4倍的水，再接入啤酒酵母菌(接种量为3％)和保加利亚乳杆菌(接种量为5％)，于35～40℃密封发酵7天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入啤酒酵母菌(接种量为9％)和纳豆芽孢杆菌(接种量为6％)，常温下密封发酵28天，过滤得到三次发酵液；
(5)将水滑石与三次发酵液混合(重量比为0.08:1)，进行超声分散处理(35KHz，25min)，过滤，即得到植物酵素原液。
所述水滑石的制备方法如下：将AlCl3和MgCl2分别配制成浓度为0.7mol·L-1的水溶液，再将二者以体积比1:2.5混合，持续进行搅拌，18min后，用浓度为15wt％的KOH水溶液调节混合溶液pH值至9～10，得到沉淀；将所得沉淀用蒸馏水分散洗涤，直至洗涤液为中性，将沉淀置于115℃条件下烘干12h，然后，将烘干物打碎成颗粒状，以15℃·min-1升温至380℃保温1.5h，再以9℃·min-1继续升温至830℃保温4h，自然冷却，即得。
对比例3
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料(人参、燕窝、虫草和灵芝1:1:1:1)清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5：10混合均匀后，接入产朊假丝酵母菌(接种量为7％)和保加利亚乳杆菌(接种量为10％)，于30～35℃密封发酵15天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中4min，加入其重量4倍的水，再接入产朊假丝酵母菌(接种量为3％)和保加利亚乳杆菌(接种量为5％)，于35～40℃密封发酵7天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入噬热链球菌(接种量为9％)和纳豆芽孢杆菌(接种量为6％)，常温下密封发酵28天，过滤得到三次发酵液；
(5)将市售铝镁水滑石与三次发酵液混合(重量比为0.08:1)，进行超声分散处理(35KHz，25min)，过滤，即得到植物酵素原液。
对比例4
一种植物酵素无害化制备方法，包括以下步骤：
(1)将植物原料(人参、燕窝、虫草和灵芝1:1:1:1)清洗干净后，沥干水分，再进行臭氧消毒，然后切成片状；
(2)将植物原料、红糖、水以重量比1：0.5：10混合均匀后，接入产朊假丝酵母菌(接种量为7％)和保加利亚乳杆菌(接种量为10％)，于30～35℃密封发酵15天，然后进行过滤，得到一次发酵液和一次发酵渣；
(3)将一次发酵渣置于空气中4min，加入其重量4倍的水，再接入产朊假丝酵母菌(接种量为3％)和保加利亚乳杆菌(接种量为5％)，于35～40℃密封发酵7天，过滤回收发酵液，与一次发酵液合并，得到二次发酵液；
(4)在二次发酵液中再接入噬热链球菌(接种量为9％)和纳豆芽孢杆菌(接种量为6％)，常温下密封发酵28天，过滤得到三次发酵液，即得到植物酵素原液。
检测以上实施方式所得植物酵素原液，具体理化指标见下表：