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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710544881.7 (22)申请日 2017.07.06 (71)申请人 浦江县欧立生物技术有限公司 地址 322200 浙江省金华市浦江县太白路 23号一楼朝北 (72)发明人 李冰 (74)专利代理机构 北京华仲龙腾专利代理事务 所(普通合伙) 11548 代理人 李静 (51)Int.Cl. A23B 4/20(2006.01) A23B 4/22(2006.01) C12P 21/02(2006.01) C12R 1/04(2006.01) (54)发明名称 带。
2、鱼的生物保鲜剂 (57)摘要 本发明公开了带鱼的生物保鲜剂， 其组成及 其重量份为： 茶多酚5-8份、 大蒜素2-4份、 壳聚糖 3-5份、 维生素E3-5份、 植物酸0.4-0.5份、 生物酶 2-4份、 活性多肽亚铁螯合物2-4份、 蒸馏水100- 120份， 通过放线菌发酵制备活性多肽， 经离心与 硫酸铵沉淀提纯活性多肽， 然后制备活性多肽亚 铁螯合物。 有益效果为： 生物保鲜剂具有优良的 杀菌、 抗氧化、 抑制酶活性等作用， 可将带鱼的保 鲜期限由数天延长至40-60天， 因此保鲜效果很 好； 活性多肽亚铁螯合物清除自由基的能力赋予 了保鲜剂极强的抗氧化能力， 因此本生物保鲜剂 是一种。
3、安全、 无毒、 高效的生物保鲜剂， 较好地保 持带鱼的原有品质， 能显著延长其货架期。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 CN 107318948 A 2017.11.07 CN 107318948 A 1.带鱼的生物保鲜剂， 其组成及其重量份为： 茶多酚5-8份、 大蒜素2-4份、 壳聚糖3-5 份、 维生素E3-5份、 植物酸0.4-0.5份、 生物酶2-4份、 活性多肽亚铁螯合物2-4份、 蒸馏水 100-120份。 2.根据权利要求2所述的带鱼的生物保鲜剂， 其特征在于： 所述的植物酸为植酸或柠檬 酸或山梨酸。 3.根据权利要求2所述的带鱼的生物保鲜剂， 其特征在于： 所述的生物。
4、酶为低温蛋白酶 或溶菌酶或葡萄糖氧化酶或异淀粉酶或纤维素酶。 4.根据权利要求2所述的带鱼的生物保鲜剂， 其特征在于： 所述的活性多肽的氨基酸序 列为： SCASRCCRARRCRARRCGCRARRCGYYVSVFRC。 5.根据权利要求1所述的带鱼的生物保鲜剂， 其特征在于： 所述的保鲜剂的制备方法包 括以下步骤： 1） 发酵： 用放线菌发酵制备活性多肽； 2） 提纯： 通过离心提纯与硫酸铵沉淀提纯活性多肽； 3） 螯合： 制备活性多肽亚铁螯合物； 4） 生物保鲜剂的制备： 组合成分制备带鱼的生物保鲜剂。 6.根据权利要求5所述的带鱼的生物保鲜剂的制备方法， 其特征在于： 所述的发酵步骤 。
5、为： 称取黄豆粉18-20份、 淀粉4-5份、 酵母膏2-3份、 蔗糖8-10份、 氯化钠2-3份、 蛋白胨2-3 份、 磷酸氢二钾0.5-0.6份、 七水硫酸镁0.5-0.6份、 葡萄糖10-12份、 碳酸钙1-1.2份、 蒸馏水 900-1000份， 调节pH7.2-7.4， 112-114灭菌10-15分钟得发酵培养液； 以发酵培养液质量 的3-4%接种放线菌菌母， 在28-30通风条件下发酵2-4小时得发酵液。 7.根据权利要求5所述的带鱼的生物保鲜剂的制备方法， 其特征在于： 所述的提纯步骤 为： 将发酵液置于离心机中， 于35-38温度在4000-4500r/min条件下离心10-。
6、15分钟， 取上 清液； 将上清液在4-6下冷冻离心， 在转速7500-8000r/min条件下下离心10-15分钟， 取上 清液； 将研细的硫酸铵按照55-60%的饱和度加入到上述上清液中， 4-6下保存过夜后用 9500-10000r/min离心30-45分钟， 取沉淀加入2-3倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液。 8.根据权利要求5所述的带鱼的生物保鲜剂的制备方法， 其特征在于： 所述的螯合步骤 为： 取提纯后的活性多肽溶液， 在搅拌下加入0.8-1倍量的含有10%质量分数的FeCI2水溶 液， 以盐酸和氢氧化钠溶液调节pH为7-7.2， 在20-22温度下震荡合成15-17分钟， 得活性 多。
7、肽亚铁螯合物。 9.根据权利要求5所述的带鱼的生物保鲜剂的制备方法， 其特征在于： 所述的生物保鲜 剂的制备步骤为： 称取茶多酚5-8份、 大蒜素2-4份、 壳聚糖3-5份、 维生素E3-5份、 植物酸 0.4-0.5份、 生物酶2-4份、 活性多肽亚铁螯合物2-4份、 蒸馏水100-120份， 以盐酸和氢氧化 钠溶液调节pH为7.0-7.2， 均匀搅拌混合15-20分钟即得带鱼的生物保鲜剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107318948 A 2 带鱼的生物保鲜剂 技术领域 0001 本发明涉及保鲜剂领域， 尤其是涉及一种带鱼的生物保鲜剂。 技术背景 0002 带鱼属于脊索动物。
8、门下脊椎动物亚门中的硬骨鱼纲鲈形目带鱼科， 又叫刀鱼、 裙 带、 肥带、 油带、 牙带鱼等， 性凶猛。 带鱼肉厚刺少， 营养丰富。 每100克带鱼肉中， 蛋白质有19 克， 脂肪有7.4克。 带鱼为高脂鱼类， 含蛋白质、 脂肪、 维生素B1、 B2和烟酸、 钙、 磷、 铁、 碘等成 分。 带鱼的鱼鳞中还含有多种不饱和脂肪酸、 纤维性物质、 6-硫代鸟嘌呤等有效成分， 其中 纤维性物质可以抑制胆固醇， 也可以抗癌。 带鱼肉有补脾、 益气、 暖胃、 养肝、 泽肤、 补气、 养 血、 健美的作用， 适合体虚之人如头晕、 气短、 乏力、 营养不良者食用， 对脾胃虚弱、 消化不 良、 皮肤干燥者尤为适宜。
9、。 所以， 胃口不佳的人， 可以考虑在夏天多吃些带鱼。 但带鱼自带的 大量细菌 （如假单胞细菌等） 在适宜的环境中不断繁殖， 极易腐败变质， 在水产品捕捞、 储 运、 加工过程中， 需要采取适当的保鲜措施防止其腐败变质。 如何保存带鱼使其品质不发生 变化， 保持带鱼新鲜的应用研究就显得尤为重要。 0003 生物保鲜剂是指从动植物、 微生物中提取的天然的或利用生物工程技术改造而获 得的对人体安全的保鲜剂。 因化学保鲜剂具有残留严重、 潜在危害大等缺点， 使得无残留、 可代谢、 安全性高等优点的生物保鲜剂成为现代食品保鲜的研究热点。 0004 目前,关于带鱼的保鲜技术有很多方法， 现有技术如授权公。
10、众号为CN 103689062 B的中国发明专利， 公开了带鱼保鲜剂、 其制备方法及其使用方法， 该方法具有制作简单易 行、 保鲜处理过程简便的优点， 但是其仅仅是数种植物提取物的简单配比， 因此其保鲜效果 有限， 没有发挥出生物保鲜剂的无残留、 安全性高等优点。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种无毒副物质残留的、 保鲜效果好的带鱼的生物保鲜 剂。 0006 本发明针对背景技术中提到的问题， 采取的技术方案为： 带鱼的生物保鲜剂， 其组 成及其重量份为： 茶多酚5-8份、 大蒜素2-4份、 壳聚糖3-5份、 维生素E3-5份、 植物酸0.4-0.5 份、 生物酶2-4份、 活性多肽。
11、亚铁螯合物2-4份、 蒸馏水100-120份， 该带鱼的生物保鲜剂具有 优良的抑菌性、 抗氧化性、 抑制酶活性等优点， 不影响带鱼的色泽和口感， 是一种高效、 安 全、 无毒的生物保鲜剂。 0007 本发明方法用到的菌种及其所购买企业为： 宁都菌密码生物科技有限公司。 0008 作为优选， 带鱼的生物保鲜剂， 其制备方法包括： 发酵： 称取黄豆粉18-20份、 淀粉4-5份、 酵母膏2-3份、 蔗糖8-10份、 氯化钠2-3份、 蛋白 胨2-3份、 磷酸氢二钾0.5-0.6份、 七水硫酸镁0.5-0.6份、 葡萄糖10-12份、 碳酸钙1-1.2份、 蒸馏水900-1000份， 调节pH7.2。
12、-7.4， 112-114灭菌10-15分钟得发酵培养液； 以发酵培养 液质量的3-4%接种放线菌菌母， 在28-30通风条件下发酵2-4小时得发酵液； 发酵产物中 说 明 书 1/4 页 3 CN 107318948 A 3 含有一种活性多肽， 该活性多肽的亚铁螯合物具有清除自由基的能力， 从而起到抗氧化的 作用， 该活性多肽的氨基酸序列为： SCASRCCRARRCRARRCGCRARRCGYYVSVFRC； 提纯： 将发酵液置于离心机中， 于35-38温度在4000-4500r/min条件下离心10-15分 钟， 取上清液； 将上清液在4-6下冷冻离心， 在转速7500-8000r/mi。
13、n条件下下离心10-15分 钟， 取上清液； 将研细的硫酸铵按照55-60%的饱和度加入到上述上清液中， 4-6下保存过 夜后用9500-10000r/min离心30-45分钟， 取沉淀加入2-3倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液， 应用离心提纯与硫酸铵沉淀提纯能有效的增加活性多肽的占比， 为进一步螯合做准备； 螯合： 取提纯后的活性多肽溶液， 在搅拌下加入0.8-1倍量的含有10%质量分数的FeCI2 水溶液， 以盐酸和氢氧化钠溶液调节pH为7-7.2， 在20-22温度下震荡合成15-17分钟， 得 活性多肽亚铁螯合物， 真空干燥浓缩后冻干保存， 活性多肽的亚铁螯合物具有很强的抗氧 化能力， 可。
14、以作为抗氧化剂使用， 保鲜效果显著； 生物保鲜剂的制备： 称取下列组成及其重量份的茶多酚5-8份、 大蒜素2-4份、 壳聚糖3- 5份、 维生素E3-5份、 植物酸0.4-0.5份、 生物酶2-4份、 活性多肽亚铁螯合物2-4份、 蒸馏水 100-120份， 以盐酸和氢氧化钠溶液调节pH为7.0-7.2， 均匀搅拌混合15-20分钟即得带鱼的 生物保鲜剂， 该保鲜剂取材天然环保， 无毒副物质残留， 具有优良的杀菌、 抗氧化、 抑制酶活 等作用， 是一种安全、 无毒、 高效的生物保鲜剂。 0009 作为优选， 所用的植物酸为植酸或柠檬酸或山梨酸。 0010 作为优选， 所用的生物酶为低温蛋白酶或。
15、溶菌酶或葡萄糖氧化酶或异淀粉酶或纤 维素酶。 0011 与现有技术相比， 本发明的优点在于： 生物保鲜剂具有优良的杀菌、 抗氧化、 抑制 酶活性等作用， 可将带鱼的保鲜期限由数天延长至40-60天， 因此保鲜效果很好； 活性多肽 亚铁螯合物清除自由基的能力赋予了保鲜剂极强的抗氧化能力， 因此本生物保鲜剂是一种 安全、 无毒、 高效的生物保鲜剂， 较好地保持带鱼的原有品质， 能显著延长其货架期。 具体实施方式 0012 下面通过实施例对本发明方案作进一步说明： 实施例1： 带鱼的生物保鲜剂， 其组成及其重量份为： 茶多酚5份、 大蒜素2份、 壳聚糖3份、 维生素 E3份、 柠檬酸0.2份、 山梨。
16、酸0.2份、 溶菌酶1份、 葡萄糖氧化酶1份、 活性多肽亚铁螯合物2份、 蒸馏水100份， 它的制备包括以下步骤： 1） 称取黄豆粉18份、 淀粉4份、 酵母膏2份、 蔗糖8份、 氯化钠2份、 蛋白胨2份、 磷酸氢二钾 0.5份、 七水硫酸镁0.5份、 葡萄糖10份、 碳酸钙1份、 蒸馏水900份， 调节pH为7.2， 112灭菌 10分钟得发酵培养液； 接种2.8g放线菌菌母， 在28通风条件下发酵2小时得发酵液； 2） 将 发酵液置于离心机中， 于35温度在4000r/min条件下离心10分钟， 将上清液在4下冷冻 离心， 7500r/min转速条件下离心10分钟， 取上清液； 将研细的硫。
17、酸铵按照55%的饱和度加入 到上述上清液中， 4下保存过夜后用9500r/min离心30分钟， 取沉淀加入2倍的蒸馏水搅拌 得活性多肽溶液； 3） 活性多肽溶液在搅拌下加入0.8倍量的含有10%质量分数的FeCI2水溶 液， 调节pH为7， 在20温度下震荡合成15分钟， 得活性肽亚铁螯合物； 4） 称取茶多酚5份、 大 蒜素2份、 壳聚糖3份、 维生素E3份、 柠檬酸0.2份、 山梨酸0.2份、 溶菌酶1份、 葡萄糖氧化酶1 说 明 书 2/4 页 4 CN 107318948 A 4 份、 活性多肽亚铁螯合物2份、 蒸馏水100份， 调节pH为7.0， 均匀搅拌混合15分钟即得带鱼的 生物。
18、保鲜剂。 0013 实施例2： 带鱼的生物保鲜剂， 其组成及其重量份为： 茶多酚8份、 大蒜素4份、 壳聚糖5份、 维生素 E5份、 植酸0.3份、 柠檬酸0.2份、 溶菌酶2份、 葡萄糖氧化2份、 活性多肽亚铁螯合物4份、 蒸馏 水120份， 它的制备包括以下步骤： 1） 发酵： 称取黄豆粉20份、 淀粉5份、 酵母膏3份、 蔗糖10份、 氯化钠3份、 蛋白胨3份、 磷酸 氢二钾0.6份、 七水硫酸镁0.6份、 葡萄糖12份、 碳酸钙1.2份、 蒸馏水1000份， 调节pH为7.4， 114灭菌15分钟得发酵培养液； 接种4.2g放线菌菌母， 在30通风条件下发酵4小时得发 酵液； 发酵产物。
19、中含有一种活性多肽， 该活性多肽的亚铁螯合物具有清除自由基的能力； 2） 提纯： 将发酵液置于离心机中， 于38温度在4500r/min条件下离心15分钟， 取上清 液； 将上清液在6下冷冻离心， 在转速8000r/min条件下下离心15分钟， 取上清液； 将研细 的硫酸铵按照60%的饱和度加入到上述上清液中， 6下保存过夜后用10000r/min离心45分 钟， 取沉淀加入3倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液， 应用离心提纯与硫酸铵沉淀提纯能有效 的增加活性多肽的占比； 3） 螯合： 取提纯后的活性多肽溶液， 在搅拌下加入1倍量的含有10%质量分数的FeCI2水 溶液， 以盐酸和氢氧化钠溶液调节p。
20、H为7.2， 在22温度下震荡合成17分钟， 得活性肽亚铁 螯合物， 真空干燥浓缩后冻干保存， 活性多肽的亚铁螯合物具有很强的抗氧化能力， 可以作 为抗氧化剂使用， 保鲜效果显著； 4） 生物保鲜剂的制备： 称取茶多酚8份、 大蒜素4份、 壳聚糖5份、 维生素E5份、 植酸0.3 份、 柠檬酸0.2份、 溶菌酶2份、 葡萄糖氧化2份、 活性多肽亚铁螯合物4份、 蒸馏水120份， 以盐 酸和氢氧化钠溶液调节pH为7.2， 均匀搅拌混合20分钟即得带鱼的生物保鲜剂， 该保鲜剂取 材天然环保， 无毒副物质残留， 具有优良的杀菌、 抗氧化、 抑制酶活等作用。 0014 实施例3： 带鱼的生物保鲜剂， 。
21、其组成及其重量份为： 茶多酚6份、 大蒜素3份、 壳聚糖4份、 维生素 E4份、 植酸0.1份、 柠檬酸0.2份、 山梨酸0.1份、 葡萄糖氧化酶1份、 异淀粉酶1份、 纤维素酶1 份、 活性多肽亚铁螯合物3份、 蒸馏水100份， 它的制备包括以下步骤： 发酵： 称取黄豆粉18份、 淀粉4份、 酵母膏2份、 蔗糖8份、 氯化钠2份、 蛋白胨2份、 磷酸氢 二钾0.5份、 七水硫酸镁0.5份、 葡萄糖10份、 碳酸钙1份、 蒸馏水900份， 调节pH7.2， 114灭 菌12分钟得发酵培养液； 接种2.8g放线菌菌母， 在30通风条件下发酵4小时得发酵液； 发 酵产物中含有一种活性多肽， 该活性。
22、多肽的亚铁螯合物具有清除自由基的能力， 从而起到 抗氧化的作用； 提纯： 将发酵液置于离心机中， 于37温度在4500r/min条件下离心15分钟， 取上清液； 将上清液在4下冷冻离心， 在转速8000r/min条件下下离心15分钟， 取上清液； 将研细的硫 酸铵按照60%的饱和度加入到上述上清液中， 4-6下保存过夜后用10000r/min离心45分 钟， 取沉淀加入2倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液， 应用离心提纯与硫酸铵沉淀提纯能有效 的增加活性多肽的占比， 为进一步螯合做准备； 螯合： 取提纯后的活性多肽溶液， 在搅拌下加入1倍量的含有10%质量分数的FeCI2水溶 液， 以盐酸和氢氧化钠。
23、溶液调节pH为7.0， 在20温度下震荡合成15分钟， 得活性肽亚铁螯 说 明 书 3/4 页 5 CN 107318948 A 5 合物， 真空干燥浓缩后冻干保存， 活性多肽的亚铁螯合物具有很强的抗氧化能力， 可以作为 抗氧化剂使用， 保鲜效果显著； 生物保鲜剂的制备： 称取下列组成及其重量份的茶多酚6份、 大蒜素3份、 壳聚糖4份、 维 生素E4份、 植酸0.1份、 柠檬酸0.2份、 山梨酸0.1份、 葡萄糖氧化酶1份、 异淀粉酶1份、 纤维素 酶1份、 活性多肽亚铁螯合物3份、 蒸馏水100份， 以盐酸和氢氧化钠溶液调节pH为7.0， 均匀 搅拌混合15分钟即得带鱼的生物保鲜剂， 该保鲜。
24、剂取材天然环保， 无毒副物质残留， 具有优 良的杀菌、 抗氧化、 抑制酶活等作用， 是一种安全、 无毒、 高效的生物保鲜剂。 0015 本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知， 在此不进行赘述。 0016 以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明， 应理解的是以上所述仅 为本发明的具体实施例， 并不用于限制本发明， 凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、 补充或类似方式替代等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 4/4 页 6 CN 107318948 A 6 SEQUENCE LISTING 浦江县欧立生物技术有限公司 带鱼的生物保鲜剂 2 1 PatentIn version 3.5 1 33 PRT 人工合成 1 Ser Cys Ala Ser Arg Cys Cys Arg Ala Arg Arg Cys Arg Ala Arg Arg 1 5 10 15 Cys Gly Cys Arg Ala Arg Arg Cys Gly Tyr Tyr Val Ser Val Phe Arg 20 25 30 Cys 序 列 表 1/1 页 7 CN 107318948 A 7 。