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1、(10)授权公告号 CN 103283654 B (45)授权公告日 2014.09.03 CN 103283654 B (21)申请号 201310216552.1 (22)申请日 2013.06.03 A01K 61/00(2006.01) (73)专利权人 山东省海洋资源与环境研究院 地址 264006 山东省烟台市经济开发区长江 路 216 号 (72)发明人 刘相全 杨顶珑 韦秀梅 杨建敏 杨嘉龙 孙国华 王忠全 (74)专利代理机构 北京世誉鑫诚专利代理事务 所 ( 普通合伙 ) 11368 代理人 郭官厚 US 5047344 A,1991.09.10, 全文 . CN 1430。
2、882 A,2003.07.23, 全文 . RU 2275803 C1,2006.05.10, 全文 . UA 76680 C2,2006.08.15, 全文 . 常亚青等 . 刺参的人工育苗 . 刺参健康增养 殖实用新技术 . 海洋出版社 ,2009,( 第 1 版 ), 第 58、 66-67 页 . Jin-Long Yang et al.Effects of neuroactive compounds, ions and organic solvents on larval metamorphosis of the mussel Mytilus coruscus. Aquacultu。
3、re .2013, 第 396-399 卷第 106-112 页 . Bin Zhao et al.Larval settlement of the silver- or goldlip pearl oyster Pinctada maxima (Jameson) in response to natural biofi lms and chemical cues. Aquaculture .2003, 第 220 卷 ( 第 1-4 期 ), 第 883-901 页 . 李一峰等 . 人工诱导物影响海洋无脊椎动物 幼体附着变态的研究 .海洋科学 .2011, 第 35 卷 ( 第 8 期 )。
4、, 第 102-107 页 . (54) 发明名称 一种提高刺参幼虫附着变态率的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种提高刺参幼虫附着变态 率的方法, 其特征在于, 包括以下步骤 : 准备培 养液、 培养液中诱导幼虫、 普通海水中培养、 观察 计数以及计算附着变态率和附着变态提高率, 上 述培养液包括 : 不同浓度的 5- 羟色胺工作液、 未添加 5- 羟色胺的海水对照 ; 其中, 用浓度为 0.1mmol/L的5-羟色胺诱导刺参樽形幼虫24h, 其 对刺参樽形幼虫附着变态的诱导效果最好, 附着 变态提高率可达 12.76。本发明的有益之处在 于 : 5- 羟色胺无毒, 使用安全 ; 整个诱导。
5、处理过程 操作简单, 容易实现 ; 可以有效缩短刺参幼虫附 着变态时间, 促进幼虫变态的同步性, 减少刺参苗 种在附着变态中的死亡, 提高附着变态率, 增加了 刺参育苗的经济受益。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李永双 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书4页 (10)授权公告号 CN 103283654 B CN 103283654 B 1/1 页 2 1. 一种提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 包括以下步骤 : (一)、 准备培养液 : 将5-羟色胺溶于海水中得到工作液, 5-羟色。
6、胺的浓度为0.1mmol/ L, 以未添加 5- 羟色胺的海水为对照, 每组设置三个平行 ; (二)、 培养液中诱导幼虫 : 用200目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫, 放到步骤 ( 一 ) 中的培养液中充氧培养, 幼虫的培养密度为 200 个 /L, 诱导培养时间为 24h ; ( 三 )、 普通海水中培养 : 将经步骤 ( 二 ) 诱导后的幼虫用 200 目筛绢捞出, 放到设置有 聚乙烯附着板的普通海水中继续培养, 幼虫的培养密度为 200 个 /L, 饵料为鼠尾藻和无菌 底泥 ; (四)、 观察计数 : 幼虫在培养液中和普通海水中培养共计48h后观察计数, 统计聚乙烯 附着板上刺参幼。
7、虫摄食后所留空斑的数目 ; ( 五 )、 计算附着变态率和附着变态提高率 : 附着变态率 ( 附着变态幼虫数 / 总幼虫 数 )100; 附着变态提高率实验组幼虫变态附着率平均值 - 对照组幼虫附着变态率平 均值。 2. 根据权利要求 1 所述的提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 在步骤 ( 三 ) 中, 每升普通海水中至少放置两片聚乙烯附着板。 权 利 要 求 书 CN 103283654 B 2 1/4 页 3 一种提高刺参幼虫附着变态率的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种提高海洋水产动物幼虫附着变态率的方法, 具体涉及一种提高刺 参幼虫附着变态率的方法, 属于水产动物育苗。
8、和养殖技术领域。 背景技术 0002 刺 参 (Apostichopus japonicus Selenka),属 棘 皮 动 物 门,刺 参 纲 (Holothuroidea), 刺参科 (Stichopodidae), 仿刺参属 (Apostichopus), 具有很高的营养 保健和医用价值。刺参是我国水产养殖业内产值、 利润最高的种类之一。刺参幼虫发育到 一定阶段, 具有附着变态的能力, 遇到合适的附着基, 在外界物质的刺激下, 完成附着变态。 变态过程是其从幼虫向成体转变的一个重要发育阶段。在刺参苗种生产中, 幼虫在附着变 态阶段对外界环境因子的变化比较敏感, 最易引起幼虫大批量死亡。。
9、幼虫附着变态的成功 与否往往决定着出苗量和育苗的成败。 因此, 如何提高幼虫的附着变态率, 缩短幼虫附着变 态时间, 减少死亡率成为苗种生产中一个亟待解决的问题。 发明内容 0003 为解决现有技术的不足, 本发明的目的在于提供一种操作简单、 可有效提高刺参 幼虫附着变态率、 缩短幼虫附着变态时间、 减少幼虫死亡率的方法。 0004 为了实现上述目标, 本发明采用如下的技术方案 : 0005 一种提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 包括以下步骤 : 0006 (一)、 准备培养液 : 将5-羟色胺溶于海水中得到工作液, 以未添加5-羟色胺的海 水为对照, 每组设置三个平行 ; 000。
10、7 (二)、 培养液中诱导幼虫 : 用200目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫, 放到 步骤 ( 一 ) 中的培养液中充氧培养, 诱导培养时间为 12h 或者 24h ; 0008 ( 三 )、 普通海水中培养 : 将经步骤 ( 二 ) 诱导后的幼虫用 200 目筛绢捞出, 放到设 置有聚乙烯附着板的普通海水中继续培养, 饵料为鼠尾藻和无菌底泥 ; 0009 (四)、 观察计数 : 幼虫在培养液中和普通海水中培养共计48h后观察计数, 统计聚 乙烯附着板上刺参幼虫摄食后所留空斑的数目 ; 0010 ( 五 )、 计算附着变态率和附着变态提高率 : 附着变态率 ( 附着变态幼虫数 / 总 幼虫。
11、数 )100; 附着变态提高率实验组幼虫变态附着率平均值 - 对照组幼虫附着变态 率平均值。 0011 前述的提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 在步骤 ( 一 ) 中, 5- 羟色胺 的浓度为 0.001mmol/L-1mmol/L。 0012 前述的提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 在步骤 ( 一 ) 中, 5- 羟色胺 的浓度为 0.1mmol。 0013 前述的提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 在步骤 ( 二 ) 中, 幼虫的诱 导培养时间为 24h。 说 明 书 CN 103283654 B 3 2/4 页 4 0014 前述的提高刺参幼虫附着变态率。
12、的方法, 其特征在于, 在步骤 ( 二 ) 中, 幼虫的培 养密度为 200 个 /L。 0015 前述的提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 在步骤 ( 三 ) 中, 幼虫的培 养密度为 200 个 /L。 0016 前述的提高刺参幼虫附着变态率的方法, 其特征在于, 在步骤 ( 三 ) 中, 每升普通 海水中至少放置两片聚乙烯附着板。 0017 本发明采用 5- 羟色胺作为诱导剂, 5- 羟色胺可作用于刺参幼虫的 5- 羟色胺靶细 胞, 封闭 K+渗漏通道, 引起细胞膜去极化, 从而激活 Ca2+电位门控通道, 使 Ca2+进入细胞内, 与甘油二酯一起激活蛋白激酶 C, 激活的蛋白。
13、激酶 C 引发幼虫变态。 0018 本发明的有益之处在于 : 5- 羟色胺无毒, 使用安全 ; 整个诱导处理过程操作简单, 容易实现 ; 可以有效缩短刺参幼虫附着变态时间, 促进幼虫变态的同步性, 减少刺参苗种在 附着变态中的死亡, 提高附着变态率, 附着变态提高率最高可达 12.76, 增加了刺参育苗 的经济收益。 具体实施方式 0019 以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。 0020 实施例 1-4 0021 一、 准备培养液 : 将 5- 羟色胺溶于海水中得到工作液, 工作液的浓度依次为 0.001mmol/L、 0.01mmol/L、 0.1mmol/L、 1mmol/L, 然后取。
14、1L工作液放置于2L烧杯中, 每个浓 度设置三个平行, 待用 ; 同时, 以未添加 5- 羟色胺的海水为对照, 取 1L 海水放置于 2L 烧杯 中, 设置三个平行, 待用。 0022 二、 培养液中诱导幼虫 : 用 200 目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫, 放到步 骤一中的培养液中充氧培养, 每个烧杯中放置 200 个幼虫, 诱导培养时间为 12h。 0023 三、 普通海水中培养 : 将经步骤二诱导后的幼虫用 200 目筛绢捞出, 放到设置有两 片聚乙烯附着板的 1L 普通海水中继续培养, 幼虫的培养密度仍为 200 个 /L, 饵料为鼠尾藻 和无菌底泥。 0024 四、 观察计数 。
15、: 幼虫在普通海水中培养 36h 后观察计数, 统计聚乙烯附着板上刺参 幼虫摄食后所留空斑的数目。 0025 五、 计算附着变态率和附着变态提高率 : 0026 附着变态率 ( 附着变态幼虫数 / 总幼虫数 )100 ; 0027 附着变态提高率实验组幼虫变态附着率平均值 - 对照组幼虫附着变态率平均 值。 0028 不同浓度的 5- 羟色胺诱导幼虫 12h, 对刺参樽形幼虫附着变态提高率的影响详见 表 1。 0029 表 1 5- 羟色胺的浓度对刺参樽形幼虫附着变态提高率的影响 0030 说 明 书 CN 103283654 B 4 3/4 页 5 实施例编号5- 羟色胺的浓度诱导时间普通海。
16、水中继续培养时间附着变态提高率 10.001mmol/L12h36h0.75 20.01mmol/L12h36h5.00 30.1mmol/L12h36h7.27 41mmol/L12h36h8.48 0031 实施例 5-8 0032 一、 准备培养液 : 将 5- 羟色胺溶于海水中得到工作液, 工作液的浓度依次为 0.001mmol/L、 0.01mmol/L、 0.1mmol/L、 1mmol/L, 然后取1L工作液放置于2L烧杯中, 每个浓 度设置三个平行, 待用 ; 同时, 以未添加 5- 羟色胺的海水为对照, 取 1L 海水放置于 2L 烧杯 中, 设置三个平行, 待用。 0033。
17、 二、 培养液中诱导幼虫 : 用 200 目筛绢取发育到樽形幼虫时期的刺参幼虫, 放到步 骤一中的培养液中充氧培养, 每个烧杯中放置 200 个幼虫, 诱导培养时间为 24h。 0034 三、 普通海水中培养 : 将经步骤二诱导后的幼虫用 200 目筛绢捞出, 放到设置有两 片聚乙烯附着板的 1L 普通海水中继续培养, 幼虫的培养密度仍为 200 个 /L, 饵料为鼠尾藻 和无菌底泥。 0035 四、 观察计数 : 幼虫在普通海水中培养 24h 后观察计数, 统计聚乙烯附着板上刺参 幼虫摄食后所留空斑的数目。 0036 五、 计算附着变态率和附着变态提高率 : 0037 附着变态率 ( 附着变。
18、态幼虫数 / 总幼虫数 )100 ; 0038 附着变态提高率实验组幼虫变态附着率平均值 - 对照组幼虫附着变态率平均 值。 0039 不同浓度的 5- 羟色胺诱导幼虫 24h, 对刺参樽形幼虫附着变态提高率的影响详见 表 2。 0040 表 2 5- 羟色胺的浓度对刺参樽形幼虫附着变态提高率的影响 0041 实施例编号5- 羟色胺的浓度诱导时间普通海水中继续培养时间附着变态提高率 50.001mmol/L24h24h3.82 60.01mmol/L24h24h5.34 70.1mmol/L24h24h12.76 81mmol/L24h24h10.28 说 明 书 CN 103283654 B。
19、 5 4/4 页 6 0043 本发明采用 5- 羟色胺作为诱导剂, 其无毒, 使用安全 ; 整个诱导处理过程操作简 单, 容易实现 ; 本发明的方法可以有效缩短刺参幼虫附着变态时间, 促进幼虫变态的同步 性, 减少刺参苗种在附着变态中的死亡, 提高附着变态率, 增加了刺参育苗的经济收益。 0044 需要说明的是, 上述实施例不以任何形式限制本发明, 凡采用等同替换或等效变 换的方式所获得的技术方案, 均落在本发明的保护范围内。 0042 由实施例 1-8 的统计数据可知, 以不同浓度的 5- 羟色胺工作液诱导刺参樽形 幼虫, 幼虫的附着变态率有了显著的提高, 尤其是用浓度为 0.1mmol/L 的 5- 羟色胺诱导 刺参樽形幼虫 24h, 其对刺参樽形幼虫附着变态的诱导效果最好, 附着变态提高率可达 12.76。 说 明 书 CN 103283654 B 6 。