技术领域
本发明涉及植物种质资源保存技术领域，具体涉及一种马铃薯种质的离体循环保存方法。
背景技术
马铃薯分布广泛，适应性强、产量高、营养丰富，是一种宜粮、宜菜、宜饲、宜做工业原料等具有多种用途的作物。但马铃薯是无性繁殖作物，实生种子杂合度高，不宜作为种质保存，与大多数通过实生种子繁殖的作物不同，马铃薯是以块茎进行繁殖的，所以马铃薯种质资源的保存具有其特殊性。
目前马铃薯资源主要采用田间繁殖保存和组培离体保存。而以块茎方式“春种，秋收，冬窖藏”来大田继代繁殖保存马铃薯种质资源要花费大量的人力、物力和财力，占用一定面积的土地，而且由于连年田间种植和冬贮，导致各种病害不断侵染和病毒积累，造成资源退化、混杂或遗失；利用一般的组织培养技术保存马铃薯种质资源，试管苗每间隔2-3个月就需要转接一次，这样不断重复的工作既浪费材料又浪费大量的人力物力；采用培养基中加入植物生长抑制剂的方法，会长时期使试管苗培养于高浓度的植物生长调节剂中，可能引发遗传变异；采取10℃以下低温保存，虽然可延缓植物生长，减少继代次数，但耗能成本高；而超低温保存方法尚处于实验室研究阶段，不能用于大规模种质资源的保存。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种马铃薯种质的离体循环保存方法（“苗-薯-苗”离体循环保存技术）。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种马铃薯种质的离体循环保存方法，包括以下步骤：
1）将马铃薯种质脱毒苗接种到培养容器中的保存培养基上进行培养，光照强度为3000-4000Lx，每天光照时间为14h，培养温度为常温，培养时间为30天；
2）将步骤1）中的温度调节为15℃-19℃，光照时间调整为8h，培养60天，脱毒苗上形成试管薯；继续培养300-400天，每株脱毒苗都有至少一个试管薯形成，试管薯重量为0.5-1.5g；3）再将步骤2）中的温度调节到常温，培养100-200天，脱毒苗枯萎，在试管薯芽眼部位发育出小苗，并逐渐长高，叶片展开，节间增长；
4）将步骤3）得到的发育出的小苗切段或将试管薯直接转接到保存培养基上，继续保存即可。
进一步的，上述的一种马铃薯种质的离体循环保存方法，所述保存培养基的组成为MS培养基+8%白糖+4.5g/L琼脂粉，pH值为5.8。
进一步的，上述的一种马铃薯种质的离体循环保存方法，所述培养容器的封口材料为硅胶塞。
进一步的，上述的一种马铃薯种质的离体循环保存方法，所述保存过程中，共连续保存490-690天，继代后正常生长。
本发明的目的之一是利用试管离体培养，解决马铃薯种质田间种植、占用土地、薯块贮藏问题，并避免田间病虫害的侵袭。
本发明的目的之二是利用现有茎尖脱毒技术，恢复原材料的特征特性,达到复壮的作用，解决马铃薯种质退化问题。
本发明的目的之三是通过培养基加入渗透压调节剂，延缓试管苗生长，延长保存时间，减少继代次数，解决马铃薯种质保存周期短、易污染问题。
本发明的目的之四是通过调节培养基，延长保存时间。
本发明的目的之五是通过封口材料，防止培养基水分挥发，延长保存时间。
本发明的目的之六是通过调节保存环境条件，解决马铃薯种质保存成本高、周期短问题。
本发明提供的一种马铃薯种质的离体循环保存方法，其有益效果为：
（1）保存过程不加任何激素或植物生长调节剂，可避免种质发生遗传变异；
（2）保存中使用的设备简单，所用的灯光培养室秋冬季节室内温度较低，不用增降温设备，春夏季可利用空调将温度控制到所需温度，不用特殊制冷，相比利用10℃以下低温保存更节约能源；
（3）种质保存周期长，保存过程中产生的试管薯粒大，可用于大田直播生产种薯，并有助于研究单位随时利用种质资源作杂交育种材料；
（4）该方法操作简单，成本低廉，安全可靠，可省时、省工高效保存马铃薯种质资源，有力促进马铃薯育种进程和新品种推广。
通过马铃薯种质离体保存效果试验，以一般组织培养保存为对照，结果表明一般组织培养试管苗只能保存90天左右，之后会陆续死亡；利用本发明提供的“苗-薯-苗”离体循环保存技术，保存400天时试管苗存活率为80%，保存后期，一些材料的试管苗老化干枯死亡，而试管薯依然健康存在，将试管薯转接至快繁培养基上可形成正常植株继续生长，持续保存期可达到490-690天。
附图说明
图1为本发明马铃薯种质脱毒苗接种到保存培养基培养30天图（左面3株为对照）。
图2为本发明一种马铃薯种质“苗-薯-苗”离体保存方法保存脱毒苗300-400天图（试管薯形成）。
图3为本发明一种马铃薯种质“苗-薯-苗”离体保存方法保存脱毒苗400-600天图（试管薯萌发出小苗）。
图4为本发明一种马铃薯种质“苗-薯-苗”离体保存方法继代保存图。
具体实施方式
实施例1：
一种马铃薯种质的离体循环保存方法，其步骤如下：
（1）将种质脱毒苗接种到保存培养基中，光照强度3500Lx左右，光照时间14h，常温（22℃左右）培养30天（图1）；保存培养基的组成为MS培养基+8%白糖+4.5g/L琼脂粉，pH值为5.8；
（2）然后将温度调节为17℃±2，光照时间8h，培养60天，脱毒苗上形成试管薯；继续培养300-400天，每株试管苗都有一至多个试管薯形成，试管薯有的嵌在培养基里，有的结在植株上部，颜色发绿，大小在0.5-1.5g（图2）；
（3）调节温度到常温培养100-200天，脱毒苗逐渐枯萎，在试管薯芽眼部位发育出小苗，并逐渐长高，叶片展开，节间增长（图3）；
（4）然后将小苗切段或将试管薯直接转接到保存培养基上，继续保存(图4）。
培养容器的封口材料为硅胶塞，保存过程中，共连续保存490-690天，继代后正常生长。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。