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1、(10)授权公告号 CN 102934799 B (45)授权公告日 2014.05.07 CN 102934799 B (21)申请号 201210461990.X (22)申请日 2012.11.16 A23L 1/29(2006.01) A23L 1/20(2006.01) (73)专利权人 南京艾德凯腾生物医药有限责任 公司 地址 210012 江苏省南京市雨花台区长虹路 439 号 (72)发明人 王雪根 张耀明 何凌云 陈强 金皓洁 汪洋 张相年等 . 蚕豆的活性成分及应用 .全 国第六届天然药物资源学术研讨会论文集 .2004,155 156. (54) 发明名称 一种含蚕豆提取。
2、物的保健品及应用 (57) 摘要 本发明公开了一种含蚕豆提取物的保健品， 活性成分由蚕豆提取物和葡萄籽提取物组成， 优选蚕豆提取物与葡萄籽提取物的重量比为 3-18 1。本发明将蚕豆提取物与葡萄籽提取物 有机组合， 使得两者天然物质所含的黄酮类、 多酚 类、 磷脂类等成分重新组合， 获得了协同保护多巴 胺能神经元、 减肥降血脂的功效， 弥补了蚕豆提取 物作为单一成分的保健缺陷， 强化产品特定功效， 从而更好地发挥和提升产品的保健功能。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 唐亚楠 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书。
3、1页 说明书5页 (10)授权公告号 CN 102934799 B CN 102934799 B 1/1 页 2 1. 一种含蚕豆提取物的保健品， 其特征在于 ： 活性成分由蚕豆提取物和葡萄籽提取物 组成， 蚕豆提取物与葡萄籽提取物的重量比为 3-18 ： 1 ； 所述蚕豆提取物按如下方法制备而成 ： 取新鲜蚕豆， 筛检， 清洗， 压榨取汁， 榨汁液静置 使沉淀， 滤过， 滤液备用 ； 蚕豆渣加适量 75% 乙醇提取两次， 每次 1.5 小时， 提取液回收乙醇 后与所述滤液合并， 减压浓缩至 60相对密度为 1.2-1.25 的浸膏， 喷雾干燥， 即得蚕豆提 取物 ； 所述葡萄籽提取物按如下方。
4、法制备而成 ： 取葡萄籽， 筛检， 烘干粉碎后过 60 目筛， 加 8 倍量的 75% 乙醇， 在 70条件下浸提两次， 每次 1 小时， 提取液静置使沉淀， 离心， 收集上清 液， 回收乙醇， 将上清液浓缩， 将稠膏干燥， 粉碎成 100 目细粉， 即得葡萄籽提取物。 2. 根据权利要求 1 所述含蚕豆提取物的保健品， 其特征在于 ： 蚕豆提取物与葡萄籽提 取物的重量比为 6-10 ： 1。 3. 活性成分由权利要求 1 所述的蚕豆提取物和葡萄籽提取物按重量比为 3-18 ： 1 组成 的组合物在制备减肥的药品中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102934799 B 2 1/5 页 3 。
5、一种含蚕豆提取物的保健品及应用 技术领域 0001 本发明属于保健食品制备技术领域， 具体而言， 涉及一种含蚕豆提取物的保健品 及应用。 背景技术 0002 蚕豆是一种一年生或越年生豆科植物， 富含磷、 镁、 硒等微量元素， 还含有具有抗 氧化活性的水溶性蛋白组分 ； 新鲜蚕豆则是维生素A和维生素C的上等来源， 含有多种具有 降血脂、 抗动脉硬化、 抗肿瘤、 抗骨质疏松等作用的黄酮类物质， 此外蚕豆中的原花色素具 有抗氧化、 抑菌、 抗癌和抗突变等生理活性。近年来， 蚕豆在营养保健与药用价值方面的研 究不断深入， 蚕豆资源的综合开发利用引起社会各方面的广泛重视。 研究并深入开发蚕豆， 这对实现。
6、蚕豆产业化和延伸产业链具有重要意义。 0003 目前市场出售的蚕豆保健品， 以单一的蚕豆制品居多。 从中医养生角度分析， 单一 的蚕豆制品存在成分固定单纯、 功效不够全面， 起效不够迅速的弱点。 蚕豆提取物来源于同 一植物， 存在成分固定单纯、 同外源性的保健成分和功效不能协同互补， 近期保健效果不突 出。 发明内容 0004 为克服现有技术的缺陷， 本发明采用以蚕豆提取物为主要成分， 通过大量试验筛 选后添加具有广泛地生物活性、 药食同源的天然物质， 组合成系列保健品， 从而提供一种含 蚕豆提取物的保健品及应用， 以扩大蚕豆的使用范围， 强化特定的保健功效， 满足人们多层 次的保健需求。 0。
7、005 本发明的第一个目的是这样实现的 ： 0006 一种含蚕豆提取物的保健品， 活性成分由蚕豆提取物和葡萄籽提取物组成。 0007 优选地， 所述含蚕豆提取物的保健品， 其中蚕豆提取物与葡萄籽提取物的重量比 为 3-18 ： 1。 0008 进一步优选地， 所述含蚕豆提取物的保健品， 其中蚕豆提取物与葡萄籽提取物的 重量比为 6-10 ： 1。 0009 再进一步优选地， 所述蚕豆提取物按如下方法制备而成 ： 取新鲜蚕豆， 筛检， 清洗， 压榨取汁， 榨汁液静置使沉淀， 滤过， 滤液备用 ； 蚕豆渣加适量 75% 乙醇提取两次， 每次 1.5 小时， 提取液回收乙醇后与所述滤液合并， 减压浓。
8、缩至 60相对密度为 1.2-1.25 的浸膏， 喷雾干燥， 即得蚕豆提取物。 0010 再进一步优选地， 所述葡萄籽提取物按如下方法制备而成 ： 取葡萄籽， 筛检， 烘干 粉碎后过 60 目筛， 加 8 倍量的 75% 乙醇， 在 70条件下浸提两次， 每次 1 小时， 提取液静置 使沉淀， 离心， 收集上清液， 回收乙醇， 将上清液浓缩， 将稠膏干燥， 粉碎成 100 目细粉， 即得 葡萄籽提取物。 0011 本发明人通过蚕豆提取物联合葡萄籽提取物治疗帕金森病大鼠前后， 帕金森病大 说 明 书 CN 102934799 B 3 2/5 页 4 鼠旋转行为及多巴胺能神经形态学观察， 发现蚕豆。
9、提取物联合葡萄籽提取物对帕金森病模 型大鼠黑质细胞有保护作用。 因此， 本发明的第二个目的在于提供一种新用途， 即活性成分 由蚕豆提取物和葡萄籽提取物组成的组合物在制备治疗帕金森病的药品或保健品中的应 用。 0012 另外， 本发明人通过动物实验研究发现， 蚕豆提取物联合葡萄籽提取物用于肥胖 并高血脂模型小鼠， 结果是用药后在降低体重、 血清总胆固醇、 血清甘油三酯和低密度脂蛋 白胆固醇方面， 蚕豆提取物与葡萄籽提取物存在着明显的协同性作用， 在升高高密度脂蛋 白胆固醇方面也有着比较明显的优势。 因此， 本发明的第三个目的在于提供一种新用途， 即 活性成分由蚕豆提取物和葡萄籽提取物组成的组合物。
10、在制备减肥、 降血脂的药品或保健品 中的应用。 0013 与现有技术相比， 本发明涉及的保健品具有如下优点和显著的进步 ： 采用新鲜蚕 豆提取物与葡萄籽提取物有机组合， 使得两者天然物质所含的黄酮类、 多酚类、 磷脂类等成 分重新组合， 获得了协同治疗帕金森病、 降血脂的功效， 同时可以辅助减肥， 弥补了蚕豆提 取物作为单一成分的保健缺陷， 强化产品特定功效， 从而更好地发挥和提升产品的保健功 能。 具体实施例 0014 以下是本发明的具体实施例， 对本发明的技术方案做进一步作描述， 但是本发明 的保护范围并不限于这些实施例。 凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发 明的保护范围之内。
11、。本发明实施例 2、 3 所用的提取物样品同实施例 1。 0015 实施例 1 ： 0016 新鲜蚕豆提取物按如下方法制备而得 ： 0017 取新鲜蚕豆， 筛检， 清洗， 压榨取汁， 榨汁液静置过夜使沉淀， 滤过， 滤液备用 ； 蚕豆 渣加适量 75% 乙醇提取两次， 每次 1.5 小时， 提取液回收乙醇后与上述滤液合并， 减压浓缩 至 60相对密度为 1.2-1.25 的浸膏， 喷雾干燥， 即得蚕豆提取物。 0018 葡萄籽提取物按如下方法制备而得 ： 0019 取葡萄籽， 筛检， 烘干粉碎后过 60 目筛， 加 8 倍量的 75% 乙醇， 在 70条件下浸提 两次， 每次 1 小时， 提取。
12、液静置使沉淀， 离心， 收集上清液， 回收乙醇， 将上清液浓缩， 将稠膏 干燥， 粉碎成 100 目细粉， 即得葡萄籽提取物。 0020 称取上述新鲜蚕豆提取物88公斤， 葡萄籽提取物12公斤， 采用现有常规技术制作 成口服液、 胶囊、 片剂或颗粒剂。具体步骤是主药计量、 选择并计量辅料， 均匀混料， 充填胶 囊 （或灌装口服液、 压片、 颗粒分装） 、 检验、 灭菌、 包装即得。 0021 实施例 2 组合物对帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用 0022 成年健康 Wistar 雄性大鼠， 重量 180-200g。按改良的 Thomas 方法制作帕金森 病大鼠模型， 将成功帕金森病大鼠模型。
13、随机分为组合物组 （n=30） 、 帕金森病组 （n=30） ， 选 择模型成功后 1,7,14d 为观察时点。组合物组 （ZH 组） 大鼠每天 9 点按照体重进行 2.5g/ （kgd） 蚕豆提取物 +0.25g/（kgd） 葡萄籽提取物灌胃， 帕金森病组 （PD 组） 大鼠进行生 理盐水灌胃， 直至观察时点。 0023 按改良的 Thomas 方法制作帕金森病大鼠模型 ： 用 7% 水合氯醛 （0.6ml/100g） 进行 说 明 书 CN 102934799 B 4 3/5 页 5 腹腔注射麻醉， 将头颅水平位固定在脑立体定位仪上， 参照 Paxions and Watson 图谱确定 。
14、右侧中脑腹侧被盖部 （VTA） 、 黑质致密部 （SNc） 的三维坐标位置， 暴露大鼠头顶部手术区， 用碘酒， 乙醇消毒， 正中切开大鼠颅颈部皮肤， 剥离骨膜、 暴露前囟， 人字缝。用颅骨钻钻两 个直径为4mm的颅孔， 按照坐标3.3l/注射点， 以0.5l/min缓慢注射0.3%6-OHDA， 留针 10min 后以 1mm/min 的速度缓慢拔针， 手术完毕后用医用明胶海绵填塞颅骨孔， 缝合切口， 大鼠用包被保暖。 0024 到预定时点， 先将待观察的大鼠放在盆内 5min 以适应环境， 并观察有无自发旋转 行为， 然后按照每千克体重腹腔注射阿扑吗啡 0.5mg， 用钟式测转仪测量旋转次数。
15、。按预定 时点将ZH组和PD组大鼠行麻醉后进行2.5%戊二醛、 4%多聚甲醛混合透心灌注， 固定， 断头 后取中脑进行石蜡包埋。 0025 石蜡块切片， 脱蜡， 片厚 5m， 加 1 ： 100TBS 稀释， 蛋白酶 K 37消化， 用蒸馏水洗 涤4次， 每次3min， 加标记缓冲液， 每张取DIG-UTP和TDT各1L， 加入17L标记缓冲液中 混匀， 放在湿盒中， 37标记2h， 每片加封闭液50L， 在室温中放置30min， 1:100封闭液稀 释链酶亲和素 - 过氧化酶， 显色采用 DAB、 苏木素轻度复染， 透明， 脱水， 封片， 显微镜观察。 0026 帕金森病大鼠旋转行为表现为以。
16、右足为支撑点向健侧旋转， PD 组 1,7,14d 旋转圈 数无明显差异， ZH 组随提取物治疗时间增加而圈数减少， 其中 7,14d 旋转圈数明显少于 PD 组 ； PD 组 1,7,14d 黑质尼氏细胞数逐渐减少， 具有明显差异。ZH 组随提取物治疗时间增加 其黑质尼氏细胞数也逐渐减少， 也具有明显差异， 但是 ZH 组黑质尼氏细胞数 1,7,14d 均明 显多于 PD 组 ； PD 组 1,7,14d 黑质凋亡细胞数逐渐增加， 且具有明显差异， ZH 组随提取物治 疗时间增加其黑质凋亡细胞数逐渐减少， 且具有明显差异， 其中 7,14d 黑质凋亡细胞数明 显少于 PD 组。 0027 表。
17、 3 PD 组、 ZH 组各时点旋转圈数、 黑质尼氏细胞数、 黑质凋亡细胞数 0028 0029 与 1d 比较， #P0.05 ； 与 7d 比较，P0.05, 与 PD 组比较，*P0.05 0030 研究表明， 帕金森病发病过程存在细胞凋亡， 自由基、 神经毒素损伤等机制引起黑 质多巴胺能神经元变性。在自由基 - 细胞凋亡 -PD 路径上， 自由基起着关键性的作用， 抗自 由基成为抑制黑质细胞细胞凋亡重要措施。 凋亡控制系统可能是调节黑质纹状体退行性关 键。 Xic采用TUNEl方法观察到帕金森病大鼠黑质损伤呈现细胞凋亡动态改变， 并且有凋亡 黑质细胞沿着 6-OHDA 注射针道分布现象。
18、， 动物实验证实细胞凋亡参与了大鼠帕金森病的 发病。本试验发现 ZH 组大鼠 7,14d 黑质细胞凋亡数显著低于 PD 组， 表明蚕豆提取物联合 葡萄籽提取物对帕金森病模型大鼠黑质细胞有保护作用。 说 明 书 CN 102934799 B 5 4/5 页 6 0031 实施例 3 组合物对肥胖并高血脂症小鼠的影响 0032 4 周龄 KM 小鼠， 雌雄各半 , 喂以高脂饲料 （高脂饲料的配方为酪蛋白 1kg， L- 半胱 氨酸 15g， 麦芽糊精 0.75kg， 蔗糖 0.35kg， 纤维素 0.25kg， 大豆油 0.15kg， 猪油 1.25kg） 。饲 养 10 周后， 淘汰体重小于 5。
19、0g 的小鼠， 然后分为如下各组 ： 模型对照组、 阳性对照组、 试验 组， 每组 12 只。各组大鼠按如下剂量进行灌胃给予受试物， 每天 12 ： 00 灌胃一次， 持续 8 周。 0033 模型对照组 ： 等体纯化水 ； 0034 阳性对照组 ： 5mg/（kgd） 瑞舒伐他汀钙 ； 0035 试验组 ： 1.5g/（kgd） 新鲜蚕豆提取物 +0.25g/（kgd） 葡萄籽提取物。 0036 从给药后第 2 周开始每隔 2 周称体重， 结果显示， 从第 4 周开始， 试验组与模型 组相比有显著性差异 （P 0.05） ； 从第 6 周起， 试验组与模型组相比有极显著性差异 （P 0.01。
20、） 。 另外， 从第6周开始， 试验组与瑞舒伐他汀组相比， 逐渐表现出显著性差异或极显 著性差异 （P 0.05 或 P 0.01） 。这些试验结果均表明蚕豆提取物联合葡萄籽提取物具 有很好的减肥功效。实验结果详见表 1。 0037 表 1 各组对小鼠体重的影响 （单位 ： g） 0038 0039 与模型组比较， *P 0.05 ； 与模型组比较，*P 0.01 ； 0040 与阳性对照组比较，￥P 0.05 ； ￥P 0.01。 0041 给药结束后， 检测血清总胆固醇 （TC） ， 低密度脂蛋白胆固醇 （LDL-C） ， 高密度脂蛋 白胆固醇 （HDL-C） ， 甘油三酯 （TG） 。结。
21、果显示， 试验组与模型组相比， 总胆固醇、 甘油三酯、 高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的水平有显著性差异 （P 0.05） 或极显著性 差异 （P 0.01） 。另外， 无论是 TC、 TG、 HDL-C， 还是 LDL-C 的水平， 本发明试验组与阳性对 照组相比没有显著性差异 （P 0.05） ， 这说明蚕豆提取物联合葡萄籽提取物降低血脂效果 接近瑞舒伐他汀钙的疗效， 具有意想不到的协同降血脂作用。实验结果详见表 2。 0042 表 2 各组对小鼠血液中脂质的影响 （mmol/L） 0043 说 明 书 CN 102934799 B 6 5/5 页 7 0044 与模型组比较， *P 0.05 ； 与模型组比较，*P 0.01 ； 0045 与阳性对照组比较，￥P 0.05 ； ￥P 0.01。 说 明 书 CN 102934799 B 7 。