萝卜的育种方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201811147435.3

申请日:

20180929

公开号:

CN109220778A

公开日:

20190118

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:

IPC分类号:

A01H1/02,A01H1/08,A01H4/00

主分类号:

A01H1/02,A01H1/08,A01H4/00

申请人:

中国农业科学院麻类研究所

发明人:

梅时勇,贺正金,张冀芳

地址:

410000 湖南省长沙市岳麓区咸嘉湖西路348号

优先权:

CN201811147435A

专利代理机构:

北京集佳知识产权代理有限公司

代理人:

张柳;赵青朵

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内容摘要

本发明涉及农作物育种领域,特别涉及萝卜的育种方法。本发明利用萝卜单倍体育种技术创制一系列晚薹萝卜DH系;对获得的DH系进行雄性不育保持力测定,然后以保持型DH系为轮回亲本,转育DH雄性不育系;按育种目标从上述获得的创制材料中挑选出一批候选材料,并以DH雄性不育系为母本,DH系为父本,进行组合力测定,筛选出优势杂交组合。本发明提供的育种方法有效缓解了春白萝卜种子严重依赖进口的局面。作为国产春白萝卜换代品种的中萝一号的成功选育与商业化应用,进一步丰富了国产春白萝卜的品种储备,增强了国内进口春白萝卜替代品种的整体综合竞争力,为国内萝卜育种团队完成春白萝卜种子进口替代进程增强了技术实力。

权利要求书

1.育种方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤1:以“梅花春萝卜”为母本、“白玉春萝卜”为父本,通过单倍体育种获得DH系;步骤2:选择田间农艺性状综合评价优良的DH系测定雄性不育保持力,获得保持型DH系,以所述保持型DH系作为轮回亲本,获得DH雄性不育系;步骤3:以“广东春不老萝卜”为母本、“天鸿春萝卜”为父本,通过单倍体育种获得DH系;选择田间农艺性状综合评价优良的DH纯系作为父本,以步骤2获得的所述DH雄性不育系作为母本,进行双列杂交,经组合力测定,获得优势杂交组合。 2.如权利要求1所述的育种方法,其特征在于,所述单倍体育种具体为:获得外植体后接种于诱导培养基,培养至单倍体胚状体出现为止;将所述单倍体胚状体经光培养绿化后转移至生芽培养基,培养获得分化出芽眼的单倍体再生苗,将所述单倍体再生苗转入生根培养基生根,再移入大田栽培,当长出3~5片真叶时取其叶片镜检,确定其染色体倍性,对未发生染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍;待所述单倍体再生苗抽苔后,将其单株套袋自交,单株采集种籽;取育种目标季节播种,筛选综合经济性状优良的纯系。 3.如权利要求2所述的育种方法,其特征在于,所述诱导培养基的pH值为5.8~6.0,其组份以质量份计包括: 4.如权利要求2所述的育种方法,其特征在于,所述诱导培养基的组份以质量份计包括: 5.如权利要求2所述的育种方法,其特征在于,所述生芽培养基的pH值为5.5~5.6,其组份以质量份计包括: 6.如权利要求2所述的育种方法,其特征在于,所述生根培养基的pH值为5.5~5.6,其组份以质量份计包括: 7.如权利要求2至6任一项所述的育种方法,其特征在于,所述诱导培养基的培养条件为33~38℃的条件下暗培养1~2天,将其转入温度为20~28℃的条件下暗培养至单倍体胚状体出现为止。 8.如权利要求2至7任一项所述的育种方法,其特征在于,所述光培养的温度为20~28℃。 9.如权利要求2至8任一项所述的育种方法,其特征在于,所述培养获得分化出芽眼的单倍体再生苗,将所述单倍体再生苗转入生根培养基生根具体为每25~30天继代一次,当五日滑均温度低于28℃时已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝卜生根培养基中继续发育。

说明书

技术领域

本发明涉及农作物育种领域,特别涉及萝卜的育种方法。

背景技术

萝卜是我国第二大蔬菜作物,年播种面积1800万亩,面积和产量均占我国蔬菜总量的10%左右。萝卜原产于我国,我国各地的萝卜种质资源非常丰富,萝卜杂优种子广泛种植前,每个县都至少有四种以上的地方品种广泛种植。但在晚抽薹种质资源方面,我国极度缺乏,以至于集中生产、运销全国的生产模式启动之初,早熟型晚薹萝卜一引入,就形成了席卷全国的风潮,并在近二十年的时期高度垄断我国种子市场。

春白萝卜种子严重依赖进口的局面下,国内三十多个萝卜育种单位倍感压力,但国内原有的种质资源不能解决问题,只能用引入的杂交一代与国内原有的优良秋冬萝卜杂交后创制我们自有的萝卜亲本材料。

由于进口品种也在不断更新换代,常规系谱育种很难跟上进口品种更新换代的步伐。因此,提供有效缓解春白萝卜种子严重依赖进口局面的新品种及新品种的育种方法具有重要的现实意义。

目前,在萝卜育种领域主要采用株系筛选的方法来选育萝卜新纯系。株系筛选法是将符合育种目标的互补型育种材料进行人工剥蕾去雄杂交,获得F1代即杂交一代,再对该F1代进行多代单株自交,并对每代的单株系材料进行经济性状比较,筛选出优良的单株进行下一代的单株自交,从而选育出基本符合要求的萝卜新纯系。株系筛选法虽然可以选育出综合经济性状较好的萝卜常规新品种和杂交组合,但该方法仍存在如下缺陷:其一,由于萝卜的染色体数为9对,在不考虑互换和易位重组因素的情况下,可以将每条染色体视作一个遗传连锁体,其自交后代的纯合率仅为2-9即1/512,这样其任何一个株群中绝大多数均为杂合体,而纯合体非常稀少,且很难鉴别纯合体和杂合体,从而大幅增加了萝卜品种选育的难度;其二,在萝卜品种的选育过程中,田间表现型优良的单株大多数杂合程度高,而大多数纯合程度高的单株田间表现型较差,这样纯合程度高的植株反而容易被淘汰,导致优良性状丢失,难以获得最优组合型的纯系品种;其三,萝卜杂交后代的自交衰退现象十分严重,使其育成纯系品种的过程漫长,育种工作效率十分低下。

发明内容

有鉴于此,本发明提供一种萝卜的育种方法。提供的萝卜单倍体育种技术在商业化应用上的成功,有效缓解了春白萝卜种子严重依赖进口的局面。

为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:

本发明提供了一种育种方法,包括如下步骤:

步骤1:以“梅花春萝卜”为母本、“白玉春萝卜”为父本,通过单倍体育种获得DH系;

步骤2:选择田间农艺性状综合评价优良的DH系测定雄性不育保持力,获得保持型DH系,以所述保持型DH系作为轮回亲本,获得DH雄性不育系;

步骤3:以“广东春不老萝卜”为母本、“天鸿春萝卜”为父本,通过单倍体育种获得DH系;选择田间农艺性状综合评价优良的DH纯系作为父本,以步骤2获得的所述DH雄性不育系作为母本,进行双列杂交,经组合力测定,获得优势杂交组合。

具体的,本发明提供的育种方法为:

⑴“梅花春萝卜”为母本、“白玉春萝卜”为父本,配制互补组合,利用萝卜单倍体育种技术创制DH系928个,再经田间性状综合评价获得9个优良DH系,对这9个优良DH系进行雄性不育保持力测定,获得保持型DH系4个(ED0108、ED0126、ED0152、ED0198),再以这四个DH保持系为轮回亲本(是指在回交时的亲本。回交是指个亲本杂交产生的杂种再与亲本之一进行杂交。一般在第一次杂交时选具有优良特性的品种作母本,而在以后各次回交时作父本,这亲本在回交时叫轮回亲本)获得了DH雄性不育系四个(ED0108A、ED0126A、ED0152A、ED0198A)。

⑵以“广东春不老萝卜”为母本、“天鸿春萝卜”为父本,配制互补组合,利用萝卜单倍体育种技术创制DH系836个,再经田间性状综合评价获得10个优良DH系(ED5168、ED5236、ED5238、ED5265、ED5279、ED5398、ED5628、ED5789、ED5796、ED5863),用这些DH系作为父本材料。

⑶取上述两个配合力较强的晚抽薹雄性不育系ED0108A、ED0198A作母本,以上述获得的获得的10份DH纯系ED5168、ED5236、ED5238、ED5265、ED5279、ED5398、ED5628、ED5789、ED5796、ED5863作父本系,进行双列杂交(双列杂交设计包括完全双列杂交和不完全双列杂交。完全双列杂交是指一组亲本间进行所有可能的杂交)

⑷对上述20个试配组合进行多轮品比试验,筛选出的最优组合为ED0108A×ED5168。

⑸ED0108A×ED5168在多个萝卜主产区进行了区域适应性试验,均显著优于现有进口主栽品种,经湖南省农作物审定委员会登记,定名为“中萝一号”。

在本发明的一些具体实施方案中,所述单倍体育种具体为:获得外植体后接种于诱导培养基,培养至单倍体胚状体出现为止;将所述单倍体胚状体经光培养绿化后转移至生芽培养基,培养获得分化出芽眼的单倍体再生苗,将所述单倍体再生苗转入生根培养基生根,再移入大田栽培,当长出3~5片真叶时取其叶片镜检,确定其染色体倍性,对未发生染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍;待所述单倍体再生苗抽苔后,将其单株套袋自交,单株采集种籽;取育种目标季节播种,筛选综合经济性状优良的纯系。

具体的,单倍体育种的方法为:

1)外植体制备:用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的,选择符合育种目标的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;用于雄性不育系即杂交新品种母本系选育的,选择符合育种目标的现有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;

2)单倍体诱导:将作为外植体的花药接种于萝卜单倍体诱导培养基上,在温度为33~38℃的条件下暗培养1~2天,然后将其转入温度为20~28℃的条件下暗培养至单倍体胚状体出现为止;

3)再生培养:将所培养出的单倍体胚状体置于温度为20~28℃的条件下光培养,在单倍体胚状体绿化后转移到萝卜生芽培养基上,此后每25~30天继代一次,当五日滑均温度低于28℃时将已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝卜生根培养基中继续发育;

4)大田移植与染色体加倍:将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培,当长出3~5片真叶时取其叶片下表皮镜检,确定其染色体倍性,对未发生染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍;

5)隔离授粉:当大田里的单倍体再生苗抽苔后,将其分单株套袋自交,分单株采集种籽;

6)经济性状筛选:对单株套袋自交所获得的种籽,各取少量于育种目标季节播种,观察并筛选出综合经济性状优良的纯系;

7)后期育种程序:用于常规新品种选育的,取上述综合经济性状优良的恢复型纯系,扩大繁殖,即可获得萝卜新优品种;用于杂交新品种选育的,取上述综合经济性状优良的保持型和父本型纯系,人工剥蕾去雄配制杂交组合,所获杂交后代播种后进行组合力测定,对于特殊配合力强的组合,取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交,选育出相应的不育系,大量繁殖上述优良组合的不育系和父本系,即可获得萝卜新优杂交品种。

在本发明的一些具体实施方案中,所述诱导培养基的pH值为5.8~6.0,其组份以质量份计包括:

在本发明的一些具体实施方案中,所述诱导培养基的组份以质量份计包括:

在本发明的一些具体实施方案中,所述生芽培养基的pH值为5.5~5.6,其组份以质量份计包括:

在本发明的一些具体实施方案中,所述生根培养基的pH值为5.5~5.6,其组份以质量份计包括:

在本发明的一些具体实施方案中,所述诱导培养基的培养条件为33~38℃的条件下暗培养1~2天,将其转入温度为20~28℃的条件下暗培养至单倍体胚状体出现为止。

在本发明的一些具体实施方案中,所述光培养的温度为20~28℃。

在本发明的一些具体实施方案中,所述培养获得分化出芽眼的单倍体再生苗,将所述单倍体再生苗转入生根培养基生根具体为每25~30天继代一次,当五日滑均温度低于28℃时已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝卜生根培养基中继续发育。

本发明利用萝卜单倍体育种技术创制一系列晚薹萝卜DH系;对获得的DH系进行雄性不育保持力测定,然后以保持型DH系为轮徊亲本,转育DH雄性不育系;按育种目标从上述获得的创制材料中挑选出一批候选材料,并以DH雄性不育系为母本,DH系为父本,进行组合力测定,筛选出优势杂交组合。本发明提供的萝卜单倍体育种技术在商业化应用上的成功,有效缓解了春白萝卜种子严重依赖进口的局面。

进口春白萝卜品种与国内春白萝卜地方品种杂交后进行单倍体培养,选取其中的晚薹白萝卜DH系进行组合力测定,获得优良组合。这样的组合聚合了国内外春白萝卜的优良基因,表现出优良的生产优势。

白玉春、天鸿春均为韩国产春白萝卜品种,抽薹极晚,肉质根长柱形,白皮白肉,萝卜味淡。梅花春为广东地方春白萝卜品种,在广东省元月份播种不会发生先期抽薹现象,内质根罐子形,白皮白肉,具有中国萝卜的风味。广东春不老为广东省地方春白萝卜品种,在广东省元月份播种不会发生先期抽薹现象,内质根长柱形且樱口较小(似瓶口),白皮白肉,具有中国萝卜的风味。

父本ED5168聚合了广东春不老和天鸿春的优点,耐抽薹性与天鸿春相近,萝卜风味与广东春不老相近,肉质根长度比天鸿春略短。

母本ED0108A聚合了梅花春和白玉春的优点,耐抽薹性与白玉春相近,萝卜风味与梅花春相近,肉质根外形及长度与白玉春相近。

作为国产春白萝卜换代品种的中萝一号的成功选育与商业化应用,进一步丰富了国产春白萝卜的品种储备,增强了国内进口春白萝卜替代品种的整体综合竞争力,为国内萝卜育种团队完成春白萝卜种子进口替代进程增强了技术实力。

具体实施方式

本发明公开了一种萝卜的育种方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。

本发明提供的萝卜的育种方法中所用原料、辅料及试剂均可由市场购得。

下面结合实施例,进一步阐述本发明:

实施例1单倍体育种

1)外植体制备:用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的,选择符合育种目标的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;用于雄性不育系即杂交新品种母本系选育的,选择符合育种目标的现有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;

2)单倍体诱导:将作为外植体的花药接种于萝卜单倍体诱导培养基上,在温度为33~38℃的条件下暗培养1~2天,然后将其转入温度为20~28℃的条件下暗培养至单倍体胚状体出现为止;

3)再生培养:将所培养出的单倍体胚状体置于温度为20~28℃的条件下光培养,在单倍体胚状体绿化后转移到萝卜生芽培养基上,此后每25~30天继代一次,当五日滑均温度低于28℃时将已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝卜生根培养基中继续发育;

4)大田移植与染色体加倍:将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培,当长出3~5片真叶时取其叶片下表皮镜检,确定其染色体倍性,对未发生染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍;

5)隔离授粉:当大田里的单倍体再生苗抽苔后,将其分单株套袋自交,分单株采集种籽;

6)经济性状筛选:对单株套袋自交所获得的种籽,各取少量于育种目标季节播种,观察并筛选出综合经济性状优良的纯系;

7)后期育种程序:用于常规新品种选育的,取上述综合经济性状优良的恢复型纯系,扩大繁殖,即可获得萝卜新优品种;用于杂交新品种选育的,取上述综合经济性状优良的保持型和父本型纯系,人工剥蕾去雄配制杂交组合,所获杂交后代播种后进行组合力测定,对于特殊配合力强的组合,取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交,选育出相应的不育系,大量繁殖上述优良组合的不育系和父本系,即可获得萝卜新优杂交品种。

诱导培养基的pH值为5.8~6.0,其包括(mg/L):

生芽培养基的pH值为5.5~5.6,其包括(mg/L):

生根培养基的pH值为5.5~5.6,其包括(mg/L):

实施例2单倍体育种

1)外植体制备:用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的,选择符合育种目标的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;用于雄性不育系即杂交新品种母本系选育的,选择符合育种目标的现有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;

2)单倍体诱导:将作为外植体的花药接种于萝卜单倍体诱导培养基上,在温度为33~38℃的条件下暗培养1~2天,然后将其转入温度为20~28℃的条件下暗培养至单倍体胚状体出现为止;

3)再生培养:将所培养出的单倍体胚状体置于温度为20~28℃的条件下光培养,在单倍体胚状体绿化后转移到萝卜生芽培养基上,此后每25~30天继代一次,当五日滑均温度低于28℃时将已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝卜生根培养基中继续发育;

4)大田移植与染色体加倍:将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培,当长出3~5片真叶时取其叶片下表皮镜检,确定其染色体倍性,对未发生染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍;

5)隔离授粉:当大田里的单倍体再生苗抽苔后,将其分单株套袋自交,分单株采集种籽;

6)经济性状筛选:对单株套袋自交所获得的种籽,各取少量于育种目标季节播种,观察并筛选出综合经济性状优良的纯系;

7)后期育种程序:用于常规新品种选育的,取上述综合经济性状优良的恢复型纯系,扩大繁殖,即可获得萝卜新优品种;用于杂交新品种选育的,取上述综合经济性状优良的保持型和父本型纯系,人工剥蕾去雄配制杂交组合,所获杂交后代播种后进行组合力测定,对于特殊配合力强的组合,取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交,选育出相应的不育系,大量繁殖上述优良组合的不育系和父本系,即可获得萝卜新优杂交品种。

诱导培养基包括(mg/L):

生芽培养基的pH值为5.5~5.6,其包括(mg/L):

生根培养基的pH值为5.5~5.6,其包括(mg/L):

实施例3单倍体育种

1)外植体制备:用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的,选择符合育种目标的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;用于雄性不育系即杂交新品种母本系选育的,选择符合育种目标的现有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交,获得萝卜的杂交后代,播种其杂交后代,待抽苔开花后取其花药作为外植体;

2)单倍体诱导:将作为外植体的花药接种于萝卜单倍体诱导培养基上,在温度为33~38℃的条件下暗培养1~2天,然后将其转入温度为20~28℃的条件下暗培养至单倍体胚状体出现为止;

3)再生培养:将所培养出的单倍体胚状体置于温度为20~28℃的条件下光培养,在单倍体胚状体绿化后转移到萝卜生芽培养基上,此后每25~30天继代一次,当五日滑均温度低于28℃时将已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝卜生根培养基中继续发育;

4)大田移植与染色体加倍:将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培,当长出3~5片真叶时取其叶片下表皮镜检,确定其染色体倍性,对未发生染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍;

5)隔离授粉:当大田里的单倍体再生苗抽苔后,将其分单株套袋自交,分单株采集种籽;

6)经济性状筛选:对单株套袋自交所获得的种籽,各取少量于育种目标季节播种,观察并筛选出综合经济性状优良的纯系;

7)后期育种程序:用于常规新品种选育的,取上述综合经济性状优良的恢复型纯系,扩大繁殖,即可获得萝卜新优品种;用于杂交新品种选育的,取上述综合经济性状优良的保持型和父本型纯系,人工剥蕾去雄配制杂交组合,所获杂交后代播种后进行组合力测定,对于特殊配合力强的组合,取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交,选育出相应的不育系,大量繁殖上述优良组合的不育系和父本系,即可获得萝卜新优杂交品种。

诱导培养基的pH值为5.8~6.0,其包括(mg/L):

生芽培养基的pH值为5.5~5.6,其包括(mg/L):

生根培养基的pH值为5.5~5.6,其包括(mg/L):

实施例4萝卜新品种的育种

⑴“梅花春萝卜”为母本、“白玉春萝卜”为父本,配制互补组合,利用实施例1~3提供的萝卜单倍体育种技术创制DH系928个,再经田间性状综合评价获得9个优良DH系,对这9个优良DH系进行雄性不育保持力测定,获得保持型DH系4个(ED0108、ED0126、ED0152、ED0198),再以这四个DH保持系为轮回亲本(是指在回交时的亲本。回交是指个亲本杂交产生的杂种再与亲本之一进行杂交。一般在第一次杂交时选具有优良特性的品种作母本,而在以后各次回交时作父本,这亲本在回交时叫轮回亲本)获得了DH雄性不育系四个(ED0108A、ED0126A、ED0152A、ED0198A)。

⑵以“广东春不老萝卜”为母本、“天鸿春萝卜”为父本,配制互补组合,利用实施例1~3提供的萝卜单倍体育种技术创制DH系836个,再经田间性状综合评价获得10个优良DH系(ED5168、ED5236、ED5238、ED5265、ED5279、ED5398、ED5628、ED5789、ED5796、ED5863),用这些DH系作为父本材料。

⑶取上述两个配合力较强的晚抽薹雄性不育系ED0108A、ED0198A作母本,以上述获得的获得的10份DH纯系ED5168、ED5236、ED5238、ED5265、ED5279、ED5398、ED5628、ED5789、ED5796、ED5863作父本系,进行双列杂交,于2010年春季配制杂交组合,共配组合20个,用于2011-2012年的配合力测定试验和多点品比试验。

表1杂交组合表

ED0108A×ED5168 ED0108A×ED5236 ED0108A×ED5265 ED0108A×ED5279 ED0108A×ED5398 ED0108A×ED5398 ED0108A×ED5628 ED0108A×ED5789 ED0108A×ED5796 ED0108A×ED5863 ED0198A×ED5168 ED0198A×ED5236 ED0198A×ED5265 ED0198A×ED5279 ED0198A×ED5398 ED0198A×ED5398 ED0198A×ED5628 ED0198A×ED5789 ED0198A×ED5796 ED0198A×ED5863

⑷对上述20个试配组合进行多轮品比试验,筛选出的最优组合为ED0108A×ED5168。

①试配组合2010年高山秋茬品比试验

试验材料:上述春白萝卜材料的双列杂交后代,以白光为对照。

试验地点:恩施市板桥镇大山顶村。

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,7月25日播种,露地栽培。

试验结果:见表1。

从表2中可以看出,2010年高山秋茬试配组合ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0108A×ED5236、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5398、ED0198A×ED5279、ED0108A×ED5628、ED0198A×ED5628、ED0108A×ED5279、ED0198A×ED5789、ED0108A×ED5789产量高于对照,其中组合ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0108A×ED5236、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5398、ED0198A×ED5279与对照达到显著差异;组合ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0108A×ED5236、ED0198A×ED5265与对照达到极显著差异(p<0.01)。

表2试配组合2010年高山秋茬产量比较

差异。根据试配组合2010年高山秋茬组合比试验结果筛选出四个最优组合,分别为:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0108A×ED5236、ED0198A×ED5265。这些组合产量高于对照且达到显著差异。

②试配组合2011年平原早春茬品比试验

试验材料:上述春白萝卜材料的双列杂交后代,以白光为对照。

试验地点:荆州市李埠镇杨井村

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,2月28日播种,露地栽培。

试验结果:见表3。

从表3中可以看出,2011年平原早春组合ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5628、ED0198A×ED5398、ED0108A×ED5398、ED0198A×ED5279、ED0108A×ED5236、ED0198A×ED5628、ED0108A×ED5279、ED0198A×ED5789、ED0108A×ED5398产量高于对照,其中组合ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5628、ED0198A×ED5398、ED0108A×ED5398与对照达到显著差异;组合ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5628、ED0198A×ED5398与对照达到极显著差异。

根据试配组合2011年平原早春品比试验结果筛选出四个最优组合,分别为:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5628、ED0198A×ED5398。这些组合产量高于对照且达到显著差异。

合并2008年高山秋茬和2009年平原春茬各4个最优组合,得到5个优良组合:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5236、ED0108A×ED5628。

表3试配组合2011年平原早春产量比较

③2011年高山夏茬组合比较试验

试验材料:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5236、ED0108A×ED5628五个优良组合参试,以白光为对照。

试验地点:恩施市板桥镇大山顶村。

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,5月10日播种,地膜覆盖栽培。

试验结果:见表4。

表4

组合 I Ⅱ Ⅲ Xi P0.05 P0.01 ED0108A×ED5168 158 160 160 159.3 a A ED0198A×ED5398 153 155 156 153.7 b B ED0198A×ED5265 151 154 152 152.3 bc BC ED0108A×ED5236 148 150 150 149.3 c BC ED0108A×ED5628 147 148 146 147.0 c C 白光 135 138 142 138.3 d D

④2011年高山秋茬组合比较试验

试验材料:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5236、ED0108A×ED5628五个优良组合参试,以白光为对照。

试验地点:恩施市板桥镇大山顶村。

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,7月10日播种,露地栽培。

试验结果:见表5

表5 2011年高山秋茬组合比较试验

组合 I Ⅱ Ⅲ Xi P0.05 P0.01 ED0108A×ED5168 169 171 171 170.3 a A ED0198A×ED5265 165 167 167 165.3 b B ED0198A×ED5398 162 165 163 163.3 bc BC ED0108A×ED5236 158 160 160 159.3 c C ED0108A×ED5628 158 158 156 157.3 c C 白光 145 149 152 148.7 d D

从表4可以看出,2001年高山秋茬ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5265、ED0198A×ED5398、ED0108A×ED5236、ED0108A×ED5628产量高于对照,其中组合ED0108A×ED5168与ED0198A×ED5265达到极显著差异,

ED0198A×ED5265与ED0198A×ED5398差异不显著。

⑤2012年平原早春茬品比试验

试验材料:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5236、ED0108A×ED5628五个优良组合参试,以白光为对照。

试验地点:荆州市李埠镇杨井村

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,2月28日播种,露地栽培。

表6 2012年平原早春茬组合产量比较

组合 I Ⅱ Ⅲ Xi P0.05 P0.01 ED0108A×ED5168 143 145 145 144.3 a A ED0198A×ED5398 138 140 141 139.7 b B ED0198A×ED5265 136 139 137 137.3 bc BC ED0108A×ED5236 133 135 135 134.3 c BC ED0108A×ED5628 132 133 131 132.0 c C 白光 121 123 127 123.7 d D

从表6可以看出,2010年平原早春茬ED0108A×ED5168、

ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265、ED0108A×ED5236、ED0108A×ED5628产量高于对照,其中组合ED0108A×ED5168与ED0198A×ED5398达到极显著差异,ED0198A×ED5398与ED0198A×ED5265差异不显著。

从2011年高山夏茬、2011年高山秋茬和2012年平原早春茬组合比较试验可以看出,ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265表现良好且稳定。

⑥2012年高山夏茬组合比较试验

试验材料:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265三个优良组合参试,以白光为对照。

试验地点:恩施市板桥镇大山顶村。

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,5月10日播种,地膜覆盖栽培。

试验结果:见表7

表7 2012年高山夏茬组合产量比较

从表7可以看出,2010年高山夏茬ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265产量高于对照,其中组合ED0108A×ED5168与

ED0198A×ED5398达到极显著差异,ED0198A×ED5398与ED0198A×ED5265差异不显著。

⑦2012年高山秋茬组合比较试验

试验材料:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265三个优良组合参试,以白光为对照。

试验地点:恩施市板桥镇大山顶村。

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,7月10日播种,露地栽培。

试验结果:见表8。

从表8可以看出,2012年高山夏茬ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5265、ED0198A×ED5398产量高于对照,其中组合ED0108A×ED5168与

ED0198A×ED5265达到极显著差异,E ED0198A×ED5265与D0198A×ED5398差异不显著。

表8 2012年高山秋茬组合产量比较

组合 I Ⅱ Ⅲ Xi P0.05 P0.01 ED0108A×ED5168 155 150 161 155.3 a A ED0198A×ED5265 139 140 137 138.3 b B ED0198A×ED5398 134 130 129 131.0 b B 白光 130 126 130 128.7 c c

⑧2013年平原早春茬组合比较试验

试验材料:ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265三个优良组合参试,以白光为对照。

试验地点:荆州市李埠镇杨井村

试验方法:随机区组排列,重复三次,小区面积13.3m2,行距30cm,株距20cm,2月28日播种,露地栽培。

表9 2013年平原早春茬组合产量比较

组合 I Ⅱ Ⅲ Xi P0.05 P0.01 ED0108A×ED5168 141 135 146 140.7 a A ED0198A×ED5398 124 125 122 123.3 b B ED0198A×ED5265 119 115 114 116.0 b B 白光 115 111 115 113.7 c c

从表9可以看出,2013年平原早春茬ED0108A×ED5168、ED0198A×ED5398、ED0198A×ED5265产量高于对照,其中组合ED0108A×ED5168与ED0198A×ED5398达到极显著差异,E D0198A×ED5398与ED0198A×ED5265差异不显著。

从2012年高山夏茬、2012年高山秋茬和2013年平原早春茬组合比较试验结果可以看出ED0108A×ED5168表现最优良,确定其为入选组合,并初步命名为中萝一号。

⑸ED0108A×ED5168在多个萝卜主产区进行了区域适应性试验,均显著优于现有进口主栽品种,经湖南省农作物审定委员会登记,定名为“中萝一号”。

2013在石门、炎陵、桑植、荆州、君山一共五个点五点品比试验,以白光为对照,汇总结果见表10。

表10中萝一号2013年多点试验产量结果表

注:小区面积为16.7平方米。

从表10可知,中单一号在2013年五个点的产量均比对照达极显著增产,平均增产达16.18%,而且试种地的农民反映整齐度好,商品性佳。

2014在石门、炎陵、桑植、荆州、君山五点品比试验,以白光为对照,结果汇总见表11。

表11中单一号2014年多点试验产量结果表

注:小区面积为16.7平方米。

从表11可知,中单一号在2014年五个点的产量均比对照达极显著增产,平均增产达17.70%,而且试种地的农民反映整齐度好,商品性佳。

以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811147435.3 (22)申请日 2018.09.29 (71)申请人 中国农业科学院麻类研究所 地址 410000 湖南省长沙市岳麓区咸嘉湖 西路348号 (72)发明人 梅时勇 贺正金 张冀芳 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 张柳 赵青朵 (51)Int.Cl. A01H 1/02(2006.01) A01H 1/08(2006.01) A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 萝 卜的育种方法 (57)摘要。

2、 本发明涉及农作物育种领域, 特别涉及萝 卜 的育种方法。 本发明利用萝 卜单倍体育种技术创 制一系列晚薹萝 卜DH系; 对获得的DH系进行雄性 不育保持力测定, 然后以保持型DH系为轮回亲 本, 转育DH雄性不育系; 按育种目标从上述获得 的创制材料中挑选出一批候选材料, 并以DH雄性 不育系为母本, DH系为父本, 进行组合力测定, 筛 选出优势杂交组合。 本发明提供的育种方法有效 缓解了春白萝 卜种子严重依赖进口的局面。 作为 国产春白萝 卜换代品种的中萝一号的成功选育与 商业化应用, 进一步丰富了国产春白萝 卜的品种 储备, 增强了国内进口春白萝 卜替代品种的整体 综合竞争力, 为国内。

3、萝 卜育种团队完成春白萝 卜种 子进口替代进程增强了技术实力。 权利要求书4页 说明书23页 CN 109220778 A 2019.01.18 CN 109220778 A 1.育种方法, 其特征在于, 包括如下步骤: 步骤1: 以 “梅花春萝 卜” 为母本、“白玉春萝 卜” 为父本, 通过单倍体育种获得DH系; 步骤2: 选择田间农艺性状综合评价优良的DH系测定雄性不育保持力, 获得保持型DH 系, 以所述保持型DH系作为轮回亲本, 获得DH雄性不育系; 步骤3: 以 “广东春不老萝 卜” 为母本、“天鸿春萝 卜” 为父本, 通过单倍体育种获得DH系; 选 择田间农艺性状综合评价优良的DH。

4、纯系作为父本, 以步骤2获得的所述DH雄性不育系作为 母本, 进行双列杂交, 经组合力测定, 获得优势杂交组合。 2.如权利要求1所述的育种方法, 其特征在于, 所述单倍体育种具体为: 获得外植体后 接种于诱导培养基, 培养至单倍体胚状体出现为止; 将所述单倍体胚状体经光培养绿化后 转移至生芽培养基, 培养获得分化出芽眼的单倍体再生苗, 将所述单倍体再生苗转入生根 培养基生根, 再移入大田栽培, 当长出35片真叶时取其叶片镜检, 确定其染色体倍性, 对 未发生染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍; 待所述单倍体再生苗抽苔后, 将其单 株套袋自交, 单株采集种籽; 取育种目标季节播种, 筛选综。

5、合经济性状优良的纯系。 3.如权利要求2所述的育种方法, 其特征在于, 所述诱导培养基的pH值为5.86.0, 其 组份以质量份计包括: 权 利 要 求 书 1/4 页 2 CN 109220778 A 2 4.如权利要求2所述的育种方法, 其特征在于, 所述诱导培养基的组份以质量份计包 括: 权 利 要 求 书 2/4 页 3 CN 109220778 A 3 5.如权利要求2所述的育种方法, 其特征在于, 所述生芽培养基的pH值为5.55.6, 其 组份以质量份计包括: 6.如权利要求2所述的育种方法, 其特征在于, 所述生根培养基的pH值为5.55.6, 其 组份以质量份计包括: 权 利。

6、 要 求 书 3/4 页 4 CN 109220778 A 4 7.如权利要求2至6任一项所述的育种方法, 其特征在于, 所述诱导培养基的培养条件 为3338的条件下暗培养12天, 将其转入温度为2028的条件下暗培养至单倍体胚 状体出现为止。 8.如权利要求2至7任一项所述的育种方法, 其特征在于, 所述光培养的温度为2028 。 9.如权利要求2至8任一项所述的育种方法, 其特征在于, 所述培养获得分化出芽眼的 单倍体再生苗, 将所述单倍体再生苗转入生根培养基生根具体为每2530天继代一次, 当 五日滑均温度低于28时已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝 卜生根培养基中继续发 育。 权 利 。

7、要 求 书 4/4 页 5 CN 109220778 A 5 萝 卜的育种方法 技术领域 0001 本发明涉及农作物育种领域, 特别涉及萝 卜的育种方法。 背景技术 0002 萝 卜是我国第二大蔬菜作物, 年播种面积1800万亩, 面积和产量均占我国蔬菜总量 的10左右。 萝 卜原产于我国, 我国各地的萝 卜种质资源非常丰富, 萝 卜杂优种子广泛种植前, 每个县都至少有四种以上的地方品种广泛种植。 但在晚抽薹种质资源方面, 我国极度缺乏, 以至于集中生产、 运销全国的生产模式启动之初, 早熟型晚薹萝 卜一引入, 就形成了席卷全 国的风潮, 并在近二十年的时期高度垄断我国种子市场。 0003 春。

8、白萝 卜种子严重依赖进口的局面下, 国内三十多个萝 卜育种单位倍感压力, 但国 内原有的种质资源不能解决问题, 只能用引入的杂交一代与国内原有的优良秋冬萝 卜杂交 后创制我们自有的萝 卜亲本材料。 0004 由于进口品种也在不断更新换代, 常规系谱育种很难跟上进口品种更新换代的步 伐。 因此, 提供有效缓解春白萝 卜种子严重依赖进口局面的新品种及新品种的育种方法具有 重要的现实意义。 0005 目前, 在萝 卜育种领域主要采用株系筛选的方法来选育萝 卜新纯系。 株系筛选法是 将符合育种目标的互补型育种材料进行人工剥蕾去雄杂交, 获得F1代即杂交一代, 再对该 F1代进行多代单株自交, 并对每代。

9、的单株系材料进行经济性状比较, 筛选出优良的单株进 行下一代的单株自交, 从而选育出基本符合要求的萝 卜新纯系。 株系筛选法虽然可以选育出 综合经济性状较好的萝 卜常规新品种和杂交组合, 但该方法仍存在如下缺陷: 其一, 由于萝 卜 的染色体数为9对, 在不考虑互换和易位重组因素的情况下, 可以将每条染色体视作一个遗 传连锁体, 其自交后代的纯合率仅为2-9即1/512, 这样其任何一个株群中绝大多数均为杂 合体, 而纯合体非常稀少, 且很难鉴别纯合体和杂合体, 从而大幅增加了萝 卜品种选育的难 度; 其二, 在萝 卜品种的选育过程中, 田间表现型优良的单株大多数杂合程度高, 而大多数纯 合程。

10、度高的单株田间表现型较差, 这样纯合程度高的植株反而容易被淘汰, 导致优良性状 丢失, 难以获得最优组合型的纯系品种; 其三, 萝 卜杂交后代的自交衰退现象十分严重, 使其 育成纯系品种的过程漫长, 育种工作效率十分低下。 发明内容 0006 有鉴于此, 本发明提供一种萝 卜的育种方法。 提供的萝 卜单倍体育种技术在商业化 应用上的成功, 有效缓解了春白萝 卜种子严重依赖进口的局面。 0007 为了实现上述发明目的, 本发明提供以下技术方案: 0008 本发明提供了一种育种方法, 包括如下步骤: 0009 步骤1: 以 “梅花春萝 卜” 为母本、“白玉春萝 卜” 为父本, 通过单倍体育种获得D。

11、H系; 0010 步骤2: 选择田间农艺性状综合评价优良的DH系测定雄性不育保持力, 获得保持型 DH系, 以所述保持型DH系作为轮回亲本, 获得DH雄性不育系; 说 明 书 1/23 页 6 CN 109220778 A 6 0011 步骤3: 以 “广东春不老萝 卜” 为母本、“天鸿春萝 卜” 为父本, 通过单倍体育种获得DH 系; 选择田间农艺性状综合评价优良的DH纯系作为父本, 以步骤2获得的所述DH雄性不育系 作为母本, 进行双列杂交, 经组合力测定, 获得优势杂交组合。 0012 具体的, 本发明提供的育种方法为: 0013 “梅花春萝 卜” 为母本、“白玉春萝 卜” 为父本, 配。

12、制互补组合, 利用萝 卜单倍体育种 技术创制DH系928个, 再经田间性状综合评价获得9个优良DH系, 对这9个优良DH系进行雄性 不育保持力测定, 获得保持型DH系4个(ED0108、 ED0126、 ED0152、 ED0198), 再以这四个DH保 持系为轮回亲本(是指在回交时的亲本。 回交是指个亲本杂交产生的杂种再与亲本之一进 行杂交。 一般在第一次杂交时选具有优良特性的品种作母本, 而在以后各次回交时作父本, 这亲本在回交时叫轮回亲本)获得了DH雄性不育系四个(ED0108A、 ED0126A、 ED0152A、 ED0198A)。 0014 以 “广东春不老萝 卜” 为母本、“天鸿。

13、春萝 卜” 为父本, 配制互补组合, 利用萝 卜单倍 体育种技术创制DH系836个, 再经田间性状综合评价获得10个优良DH系(ED5168、 ED5236、 ED5238、 ED5265、 ED5279、 ED5398、 ED5628、 ED5789、 ED5796、 ED5863), 用这些DH系作为父本材 料。 0015 取上述两个配合力较强的晚抽薹雄性不育系ED0108A、 ED0198A作母本, 以上述 获得的获得的10份DH纯系ED5168、 ED5236、 ED5238、 ED5265、 ED5279、 ED5398、 ED5628、 ED5789、 ED5796、 ED5863。

14、作父本系, 进行双列杂交(双列杂交设计包括完全双列杂交和不完 全双列杂交。 完全双列杂交是指一组亲本间进行所有可能的杂交) 0016 对上述20个试配组合进行多轮品比试验, 筛选出的最优组合为ED0108A ED5168。 0017 ED0108AED5168在多个萝 卜主产区进行了区域适应性试验, 均显著优于现有进 口主栽品种, 经湖南省农作物审定委员会登记, 定名为 “中萝一号” 。 0018 在本发明的一些具体实施方案中, 所述单倍体育种具体为: 获得外植体后接种于 诱导培养基, 培养至单倍体胚状体出现为止; 将所述单倍体胚状体经光培养绿化后转移至 生芽培养基, 培养获得分化出芽眼的单倍。

15、体再生苗, 将所述单倍体再生苗转入生根培养基 生根, 再移入大田栽培, 当长出35片真叶时取其叶片镜检, 确定其染色体倍性, 对未发生 染色体自然加倍的单株进行人工染色体加倍; 待所述单倍体再生苗抽苔后, 将其单株套袋 自交, 单株采集种籽; 取育种目标季节播种, 筛选综合经济性状优良的纯系。 0019 具体的, 单倍体育种的方法为: 0020 1)外植体制备: 用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的, 选择符合育种目标 的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂交后代, 待抽苔开花后取 其花药作为外植体; 用于雄性不育系即杂交新品种母本系选育的, 选择符合育种目标的现 。

16、有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂 交后代, 待抽苔开花后取其花药作为外植体; 0021 2)单倍体诱导: 将作为外植体的花药接种于萝 卜单倍体诱导培养基上, 在温度为33 38的条件下暗培养12天, 然后将其转入温度为2028的条件下暗培养至单倍体胚 状体出现为止; 0022 3)再生培养: 将所培养出的单倍体胚状体置于温度为2028的条件下光培养, 说 明 书 2/23 页 7 CN 109220778 A 7 在单倍体胚状体绿化后转移到萝 卜生芽培养基上, 此后每2530天继代一次, 当五日滑均温 度低于28时将已分化出芽眼的单倍体再生。

17、苗转入到萝 卜生根培养基中继续发育; 0023 4)大田移植与染色体加倍: 将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培, 当长 出35片真叶时取其叶片下表皮镜检, 确定其染色体倍性, 对未发生染色体自然加倍的单 株进行人工染色体加倍; 0024 5)隔离授粉: 当大田里的单倍体再生苗抽苔后, 将其分单株套袋自交, 分单株采集 种籽; 0025 6)经济性状筛选: 对单株套袋自交所获得的种籽, 各取少量于育种目标季节播种, 观察并筛选出综合经济性状优良的纯系; 0026 7)后期育种程序: 用于常规新品种选育的, 取上述综合经济性状优良的恢复型纯 系, 扩大繁殖, 即可获得萝 卜新优品种; 用于杂。

18、交新品种选育的, 取上述综合经济性状优良的 保持型和父本型纯系, 人工剥蕾去雄配制杂交组合, 所获杂交后代播种后进行组合力测定, 对于特殊配合力强的组合, 取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交, 选育出相 应的不育系, 大量繁殖上述优良组合的不育系和父本系, 即可获得萝 卜新优杂交品种。 0027 在本发明的一些具体实施方案中, 所述诱导培养基的pH值为5.86.0, 其组份以 质量份计包括: 0028 说 明 书 3/23 页 8 CN 109220778 A 8 0029 0030 0031 在本发明的一些具体实施方案中, 所述诱导培养基的组份以质量份计包括: 说 明 书 4/23。

19、 页 9 CN 109220778 A 9 0032 0033 在本发明的一些具体实施方案中, 所述生芽培养基的pH值为5.55.6, 其组份以 质量份计包括: 0034 0035 在本发明的一些具体实施方案中, 所述生根培养基的pH值为5.55.6, 其组份以 质量份计包括: 0036 说 明 书 5/23 页 10 CN 109220778 A 10 0037 0038 在本发明的一些具体实施方案中, 所述诱导培养基的培养条件为3338的条件 下暗培养12天, 将其转入温度为2028的条件下暗培养至单倍体胚状体出现为止。 0039 在本发明的一些具体实施方案中, 所述光培养的温度为2028。

20、。 0040 在本发明的一些具体实施方案中, 所述培养获得分化出芽眼的单倍体再生苗, 将 所述单倍体再生苗转入生根培养基生根具体为每2530天继代一次, 当五日滑均温度低于 28时已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝 卜生根培养基中继续发育。 0041 本发明利用萝 卜单倍体育种技术创制一系列晚薹萝 卜DH系; 对获得的DH系进行雄性 不育保持力测定, 然后以保持型DH系为轮徊亲本, 转育DH雄性不育系; 按育种目标从上述获 得的创制材料中挑选出一批候选材料, 并以DH雄性不育系为母本, DH系为父本, 进行组合力 测定, 筛选出优势杂交组合。 本发明提供的萝 卜单倍体育种技术在商业化应用上的成。

21、功, 有 效缓解了春白萝 卜种子严重依赖进口的局面。 0042 进口春白萝 卜品种与国内春白萝 卜地方品种杂交后进行单倍体培养, 选取其中的晚 薹白萝 卜DH系进行组合力测定, 获得优良组合。 这样的组合聚合了国内外春白萝 卜的优良基 因, 表现出优良的生产优势。 0043 白玉春、 天鸿春均为韩国产春白萝 卜品种, 抽薹极晚, 肉质根长柱形, 白皮白肉, 萝 卜 味淡。 梅花春为广东地方春白萝 卜品种, 在广东省元月份播种不会发生先期抽薹现象, 内质 根罐子形, 白皮白肉, 具有中国萝 卜的风味。 广东春不老为广东省地方春白萝 卜品种, 在广东 省元月份播种不会发生先期抽薹现象, 内质根长柱。

22、形且樱口较小(似瓶口), 白皮白肉, 具有 中国萝 卜的风味。 0044 父本ED5168聚合了广东春不老和天鸿春的优点, 耐抽薹性与天鸿春相近, 萝 卜风味 与广东春不老相近, 肉质根长度比天鸿春略短。 0045 母本ED0108A聚合了梅花春和白玉春的优点, 耐抽薹性与白玉春相近, 萝 卜风味与 梅花春相近, 肉质根外形及长度与白玉春相近。 0046 作为国产春白萝 卜换代品种的中萝一号的成功选育与商业化应用, 进一步丰富了 国产春白萝 卜的品种储备, 增强了国内进口春白萝 卜替代品种的整体综合竞争力, 为国内萝 卜 育种团队完成春白萝 卜种子进口替代进程增强了技术实力。 具体实施方式 0。

23、047 本发明公开了一种萝 卜的育种方法, 本领域技术人员可以借鉴本文内容, 适当改进 工艺参数实现。 特别需要指出的是, 所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而 易见的, 它们都被视为包括在本发明。 本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描 说 明 书 6/23 页 11 CN 109220778 A 11 述, 相关人员明显能在不脱离本发明内容、 精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改 动或适当变更与组合, 来实现和应用本发明技术。 0048 本发明提供的萝 卜的育种方法中所用原料、 辅料及试剂均可由市场购得。 0049 下面结合实施例, 进一步阐述本发明: 0050 实施例。

24、1单倍体育种 0051 1)外植体制备: 用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的, 选择符合育种目标 的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂交后代, 待抽苔开花后取 其花药作为外植体; 用于雄性不育系即杂交新品种母本系选育的, 选择符合育种目标的现 有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂 交后代, 待抽苔开花后取其花药作为外植体; 0052 2)单倍体诱导: 将作为外植体的花药接种于萝 卜单倍体诱导培养基上, 在温度为33 38的条件下暗培养12天, 然后将其转入温度为2028的条件下暗培养至单倍体胚 状体出现为止; 0。

25、053 3)再生培养: 将所培养出的单倍体胚状体置于温度为2028的条件下光培养, 在单倍体胚状体绿化后转移到萝 卜生芽培养基上, 此后每2530天继代一次, 当五日滑均温 度低于28时将已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝 卜生根培养基中继续发育; 0054 4)大田移植与染色体加倍: 将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培, 当长 出35片真叶时取其叶片下表皮镜检, 确定其染色体倍性, 对未发生染色体自然加倍的单 株进行人工染色体加倍; 0055 5)隔离授粉: 当大田里的单倍体再生苗抽苔后, 将其分单株套袋自交, 分单株采集 种籽; 0056 6)经济性状筛选: 对单株套袋自交所获得的种。

26、籽, 各取少量于育种目标季节播种, 观察并筛选出综合经济性状优良的纯系; 0057 7)后期育种程序: 用于常规新品种选育的, 取上述综合经济性状优良的恢复型纯 系, 扩大繁殖, 即可获得萝 卜新优品种; 用于杂交新品种选育的, 取上述综合经济性状优良的 保持型和父本型纯系, 人工剥蕾去雄配制杂交组合, 所获杂交后代播种后进行组合力测定, 对于特殊配合力强的组合, 取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交, 选育出相 应的不育系, 大量繁殖上述优良组合的不育系和父本系, 即可获得萝 卜新优杂交品种。 0058 诱导培养基的pH值为5.86.0, 其包括(mg/L): 说 明 书 7/23 。

27、页 12 CN 109220778 A 12 0059 0060 0061 生芽培养基的pH值为5.55.6, 其包括(mg/L): 说 明 书 8/23 页 13 CN 109220778 A 13 0062 0063 生根培养基的pH值为5.55.6, 其包括(mg/L): 0064 0065 0066 实施例2单倍体育种 0067 1)外植体制备: 用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的, 选择符合育种目标 说 明 书 9/23 页 14 CN 109220778 A 14 的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂交后代, 待抽苔开花后取 其花药作为外植体; 用于。

28、雄性不育系即杂交新品种母本系选育的, 选择符合育种目标的现 有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂 交后代, 待抽苔开花后取其花药作为外植体; 0068 2)单倍体诱导: 将作为外植体的花药接种于萝 卜单倍体诱导培养基上, 在温度为33 38的条件下暗培养12天, 然后将其转入温度为2028的条件下暗培养至单倍体胚 状体出现为止; 0069 3)再生培养: 将所培养出的单倍体胚状体置于温度为2028的条件下光培养, 在单倍体胚状体绿化后转移到萝 卜生芽培养基上, 此后每2530天继代一次, 当五日滑均温 度低于28时将已分化出芽眼的单倍体再生苗转。

29、入到萝 卜生根培养基中继续发育; 0070 4)大田移植与染色体加倍: 将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培, 当长 出35片真叶时取其叶片下表皮镜检, 确定其染色体倍性, 对未发生染色体自然加倍的单 株进行人工染色体加倍; 0071 5)隔离授粉: 当大田里的单倍体再生苗抽苔后, 将其分单株套袋自交, 分单株采集 种籽; 0072 6)经济性状筛选: 对单株套袋自交所获得的种籽, 各取少量于育种目标季节播种, 观察并筛选出综合经济性状优良的纯系; 0073 7)后期育种程序: 用于常规新品种选育的, 取上述综合经济性状优良的恢复型纯 系, 扩大繁殖, 即可获得萝 卜新优品种; 用于杂交新。

30、品种选育的, 取上述综合经济性状优良的 保持型和父本型纯系, 人工剥蕾去雄配制杂交组合, 所获杂交后代播种后进行组合力测定, 对于特殊配合力强的组合, 取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交, 选育出相 应的不育系, 大量繁殖上述优良组合的不育系和父本系, 即可获得萝 卜新优杂交品种。 0074 诱导培养基包括(mg/L): 说 明 书 10/23 页 15 CN 109220778 A 15 0075 0076 0077 生芽培养基的pH值为5.55.6, 其包括(mg/L): 说 明 书 11/23 页 16 CN 109220778 A 16 0078 0079 生根培养基的pH值。

31、为5.55.6, 其包括(mg/L): 0080 0081 0082 实施例3单倍体育种 0083 1)外植体制备: 用于常规新品种或杂交新品种父本系选育的, 选择符合育种目标 说 明 书 12/23 页 17 CN 109220778 A 17 的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂交后代, 待抽苔开花后取 其花药作为外植体; 用于雄性不育系即杂交新品种母本系选育的, 选择符合育种目标的现 有雄性不育保持系与相应的互补型育种材料剥蕾去雄杂交, 获得萝 卜的杂交后代, 播种其杂 交后代, 待抽苔开花后取其花药作为外植体; 0084 2)单倍体诱导: 将作为外植体的花药。

32、接种于萝 卜单倍体诱导培养基上, 在温度为33 38的条件下暗培养12天, 然后将其转入温度为2028的条件下暗培养至单倍体胚 状体出现为止; 0085 3)再生培养: 将所培养出的单倍体胚状体置于温度为2028的条件下光培养, 在单倍体胚状体绿化后转移到萝 卜生芽培养基上, 此后每2530天继代一次, 当五日滑均温 度低于28时将已分化出芽眼的单倍体再生苗转入到萝 卜生根培养基中继续发育; 0086 4)大田移植与染色体加倍: 将根系发育良好的单倍体再生苗移入大田栽培, 当长 出35片真叶时取其叶片下表皮镜检, 确定其染色体倍性, 对未发生染色体自然加倍的单 株进行人工染色体加倍; 0087。

33、 5)隔离授粉: 当大田里的单倍体再生苗抽苔后, 将其分单株套袋自交, 分单株采集 种籽; 0088 6)经济性状筛选: 对单株套袋自交所获得的种籽, 各取少量于育种目标季节播种, 观察并筛选出综合经济性状优良的纯系; 0089 7)后期育种程序: 用于常规新品种选育的, 取上述综合经济性状优良的恢复型纯 系, 扩大繁殖, 即可获得萝 卜新优品种; 用于杂交新品种选育的, 取上述综合经济性状优良的 保持型和父本型纯系, 人工剥蕾去雄配制杂交组合, 所获杂交后代播种后进行组合力测定, 对于特殊配合力强的组合, 取其中的保持型纯系与其近缘不育系进行多代回交, 选育出相 应的不育系, 大量繁殖上述优。

34、良组合的不育系和父本系, 即可获得萝 卜新优杂交品种。 0090 诱导培养基的pH值为5.86.0, 其包括(mg/L): 说 明 书 13/23 页 18 CN 109220778 A 18 0091 0092 生芽培养基的pH值为5.55.6, 其包括(mg/L): 0093 说 明 书 14/23 页 19 CN 109220778 A 19 0094 0095 生根培养基的pH值为5.55.6, 其包括(mg/L): 0096 0097 实施例4萝 卜新品种的育种 0098 “梅花春萝 卜” 为母本、“白玉春萝 卜” 为父本, 配制互补组合, 利用实施例13提供 的萝 卜单倍体育种技术。

35、创制DH系928个, 再经田间性状综合评价获得9个优良DH系, 对这9个 优良DH系进行雄性不育保持力测定, 获得保持型DH系4个(ED0108、 ED0126、 ED0152、 ED0198), 再以这四个DH保持系为轮回亲本(是指在回交时的亲本。 回交是指个亲本杂交产 生的杂种再与亲本之一进行杂交。 一般在第一次杂交时选具有优良特性的品种作母本, 而 在以后各次回交时作父本, 这亲本在回交时叫轮回亲本)获得了DH雄性不育系四个 (ED0108A、 ED0126A、 ED0152A、 ED0198A)。 0099 以 “广东春不老萝 卜” 为母本、“天鸿春萝 卜” 为父本, 配制互补组合, 。

36、利用实施例1 3提供的萝 卜单倍体育种技术创制DH系836个, 再经田间性状综合评价获得10个优良DH系 (ED5168、 ED5236、 ED5238、 ED5265、 ED5279、 ED5398、 ED5628、 ED5789、 ED5796、 ED5863), 用这 说 明 书 15/23 页 20 CN 109220778 A 20 些DH系作为父本材料。 0100 取上述两个配合力较强的晚抽薹雄性不育系ED0108A、 ED0198A作母本, 以上述 获得的获得的10份DH纯系ED5168、 ED5236、 ED5238、 ED5265、 ED5279、 ED5398、 ED562。

37、8、 ED5789、 ED5796、 ED5863作父本系, 进行双列杂交, 于2010年春季配制杂交组合, 共配组合20 个, 用于2011-2012年的配合力测定试验和多点品比试验。 0101 表1杂交组合表 0102 ED0108AED5168ED0108AED5236ED0108AED5265ED0108AED5279 ED0108AED5398ED0108AED5398ED0108AED5628ED0108AED5789 ED0108AED5796ED0108AED5863ED0198AED5168ED0198AED5236 ED0198AED5265ED0198AED5279ED0。

38、198AED5398ED0198AED5398 ED0198AED5628ED0198AED5789ED0198AED5796ED0198AED5863 0103 对上述20个试配组合进行多轮品比试验, 筛选出的最优组合为ED0108A ED5168。 0104 试配组合2010年高山秋茬品比试验 0105 试验材料: 上述春白萝 卜材料的双列杂交后代, 以白光为对照。 0106 试验地点: 恩施市板桥镇大山顶村。 0107 试验方法: 随机区组排列, 重复三次, 小区面积13.3m2, 行距30cm, 株距20cm, 7月25 日播种, 露地栽培。 0108 试验结果: 见表1。 0109 。

39、从表2中可以看出, 2010年高山秋茬试配组合ED0108AED5168、 ED0198A ED5398、 ED0108AED5236、 ED0198AED5265、 ED0108AED5398、 ED0198AED5279、 ED0108AED5628、 ED0198AED5628、 ED0108AED5279、 ED0198AED5789、 ED0108A ED5789产量高于对照, 其中组合ED0108AED5168、 ED0198AED5398、 ED0108AED5236、 ED0198AED5265、 ED0108AED5398、 ED0198AED5279与对照达到显著差异; 组。

40、合ED0108A ED5168、 ED0198AED5398、 ED0108AED5236、 ED0198AED5265与对照达到极显著差异 (p0.01)。 0110 表2试配组合2010年高山秋茬产量比较 说 明 书 16/23 页 21 CN 109220778 A 21 0111 0112 0113 差异。 根据试配组合2010年高山秋茬组合比试验结果筛选出四个最优组合, 分别 说 明 书 17/23 页 22 CN 109220778 A 22 为: ED0108AED5168、 ED0198AED5398、 ED0108AED5236、 ED0198AED5265。 这些组合产 量。

41、高于对照且达到显著差异。 0114 试配组合2011年平原早春茬品比试验 0115 试验材料: 上述春白萝 卜材料的双列杂交后代, 以白光为对照。 0116 试验地点: 荆州市李埠镇杨井村 0117 试验方法: 随机区组排列, 重复三次, 小区面积13.3m2, 行距30cm, 株距20cm, 2月28 日播种, 露地栽培。 0118 试验结果: 见表3。 0119 从表3中可以看出, 2011年平原早春组合ED0108AED5168、 ED0198AED5265、 ED0108AED5628、 ED0198AED5398、 ED0108AED5398、 ED0198AED5279、 ED01。

42、08A ED5236、 ED0198AED5628、 ED0108AED5279、 ED0198AED5789、 ED0108AED5398产量高 于对照, 其中组合ED0108AED5168、 ED0198AED5265、 ED0108AED5628、 ED0198A ED5398、 ED0108AED5398与对照达到显著差异; 组合ED0108AED5168、 ED0198AED5265、 ED0108AED5628、 ED0198AED5398与对照达到极显著差异。 0120 根据试配组合2011年平原早春品比试验结果筛选出四个最优组合, 分别为: ED0108AED5168、 ED0。

43、198AED5265、 ED0108AED5628、 ED0198AED5398。 这些组合产量 高于对照且达到显著差异。 0121 合并2008年高山秋茬和2009年平原春茬各4个最优组合, 得到5个优良组合: ED0108AED5168、 ED0198AED5398、 ED0198AED5265、 ED0108AED5236、 ED0108A ED5628。 0122 表3试配组合2011年平原早春产量比较 0123 说 明 书 18/23 页 23 CN 109220778 A 23 0124 0125 2011年高山夏茬组合比较试验 0126 试验材料: ED0108AED5168、 。

44、ED0198AED5398、 ED0198AED5265、 ED0108A ED5236、 ED0108AED5628五个优良组合参试, 以白光为对照。 0127 试验地点: 恩施市板桥镇大山顶村。 0128 试验方法: 随机区组排列, 重复三次, 小区面积13.3m2, 行距30cm, 株距20cm, 5月10 日播种, 地膜覆盖栽培。 0129 试验结果: 见表4。 0130 表4 0131 组合IXiP0.05P0.01 ED0108AED5168158160160159.3aA 说 明 书 19/23 页 24 CN 109220778 A 24 ED0198AED5398153155。

45、156153.7bB ED0198AED5265151154152152.3bcBC ED0108AED5236148150150149.3cBC ED0108AED5628147148146147.0cC 白光135138142138.3dD 0132 2011年高山秋茬组合比较试验 0133 试验材料: ED0108AED5168、 ED0198AED5398、 ED0198AED5265、 ED0108A ED5236、 ED0108AED5628五个优良组合参试, 以白光为对照。 0134 试验地点: 恩施市板桥镇大山顶村。 0135 试验方法: 随机区组排列, 重复三次, 小区面积1。

46、3.3m2, 行距30cm, 株距20cm, 7月10 日播种, 露地栽培。 0136 试验结果: 见表5 0137 表5 2011年高山秋茬组合比较试验 0138 组合IXiP0.05P0.01 ED0108AED5168169171171170.3aA ED0198AED5265165167167165.3bB ED0198AED5398162165163163.3bcBC ED0108AED5236158160160159.3cC ED0108AED5628158158156157.3cC 白光145149152148.7dD 0139 从表4可以看出, 2001年高山秋茬ED0108A。

47、ED5168、 ED0198AED5265、 ED0198A ED5398、 ED0108AED5236、 ED0108AED5628产量高于对照, 其中组合ED0108AED5168与 ED0198AED5265达到极显著差异, 0140 ED0198AED5265与ED0198AED5398差异不显著。 0141 2012年平原早春茬品比试验 0142 试验材料: ED0108AED5168、 ED0198AED5398、 ED0198AED5265、 ED0108A ED5236、 ED0108AED5628五个优良组合参试, 以白光为对照。 0143 试验地点: 荆州市李埠镇杨井村 0。

48、144 试验方法: 随机区组排列, 重复三次, 小区面积13.3m2, 行距30cm, 株距20cm, 2月28 日播种, 露地栽培。 0145 表6 2012年平原早春茬组合产量比较 0146 组合IXiP0.05P0.01 ED0108AED5168143145145144.3aA ED0198AED5398138140141139.7bB ED0198AED5265136139137137.3bcBC ED0108AED5236133135135134.3cBC ED0108AED5628132133131132.0cC 说 明 书 20/23 页 25 CN 109220778 A 25 白光121123127123.7dD 0147 从表6可以看出, 2010年平原早春茬ED0108AED5168、 0148 ED0198AED5398、 ED01。

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