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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610236911.3 (22)申请日 2016.04.15 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105830582 A (43)申请公布日 2016.08.10 (73)专利权人 成都大学 地址 610106 四川省成都市外东十陵镇 (72)发明人 王跃华 刘媛媛 刘曼 周欢 罗晴方 钟若兰 陈燕 何新友 胥华 何诗红 刘洪明 昝加志 罗倩 (74)专利代理机构 成都科奥专利事务所(普通 合伙) 51101 代理人 王蔚 (51)Int.Cl. A01C 1/。
2、00(2006.01) A01C 1/08(2006.01) A01G 31/00(2018.01) A01G 24/15(2018.01) A01G 24/28(2018.01) A01G 24/22(2018.01) (56)对比文件 CN 105123529 A,2015.12.09, CN 103314855 A,2013.09.25, CN 104782485 A,2015.07.22, CN 105075861 A,2015.11.25, JP 特开平5148115 A,1993.06.15, 审查员 江笑丹 (54)发明名称 一种白及种子的快速回土培育方法 (57)摘要 本发明公。
3、开了一种白及种子快速回土培育 方法， 包括如下步骤： 种子的选择及消毒培养 基质的选取和处理种子的萌发幼苗的回土 栽培， 本发明能大大缩短白及苗的无菌培养时 间， 使白及种子在萌发40天内就可回土栽培， 从 而可大大降低白及种苗的生产成本。 另外， 本发 明通过采用具有特殊功效的液体培养基， 可使回 土栽培的白及组培苗的生根率和存活率大大提 高。 权利要求书1页 说明书4页 CN 105830582 B 2018.05.01 CN 105830582 B 1.一种白及种子的快速回土培育方法， 其特征在于包括如下步骤： (1)种子的选择及消毒： 选取已成熟且果皮已开裂的白及种子， 将白及种子按白。
4、及种 子:升汞溶液1： 10的体积比放入0.1的升汞溶液中消毒715分钟， 再用无菌水清洗8 15分钟； (2)培养基质的选取和处理： 选取毛边纸作为培养基质， 将该毛边纸灭菌后粗糙面向上 放入培养盘中， 并用含有甜荞胚芽添加物的无菌水浸湿； (3)种子的萌发： 将白及种子置于浸湿的毛边纸上， 在相对湿度85100、 温度2028 、 每天光照1224小时和光照强度为15003000lx的条件下使其萌发； (4)幼苗的回土栽培： 将长出真叶的白及无根苗与毛边纸同时放入液体培养基1/4MS+ 6-BA0.51.5mg/L+IBA1.03.0mg/L+甜荞胚芽添加物2040g/L中， 使白及无根苗。
5、从毛边 纸上自然脱落， 然后取出毛边纸将含有白及无根苗的液体培养基均匀地撒在已消毒且由草 炭、 蛭石、 珍珠岩按(35)： (01)： (0.52)的重量比配制的土壤的表面， 无根苗在温度22 26、 遮光5070、 土壤湿度为7085的条件下生长； 所述甜荞胚芽添加物是将宁荞1号荞麦种子经48小时的萌发生长后， 去掉其胚芽上的 种皮， 将胚芽用粉碎机粉碎后制成的。 2.根据权利要求1所述的白及种子的快速回土培育方法， 其特征在于： 步骤(2)中毛边 纸的灭菌是指将毛边纸在121灭菌3050分钟。 3.根据权利要求1所述的白及种子的快速回土培育方法， 其特征在于： 步骤(2)中甜荞 胚芽添加物。
6、按1L无菌水添加1030g甜荞胚芽添加物加入。 4.根据权利要求1所述的白及种子的快速回土培育方法， 其特征在于： 步骤(4)中土壤 采用浓度为0.051的地菌灵进行消毒处理。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105830582 B 2 一种白及种子的快速回土培育方法 技术领域 0001 本发明涉及一种白及种子的快速回土培育方法。 背景技术 0002 白及是一种兰科多年生草本植物， 现已经列入国家的珍稀濒危保护植物， 并且还 收载于国际贸易公约(GITES)附录二中， 受到国际保护。 0003 白及不仅是一种观赏植物， 同时也是一种重要的药用植物。 研究发现， 白及含有多 种化学成分。
7、， 主要有联苄类、 菲类、 二氢菲类、 黄酮类、 2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类、 多酚类等。 具有收敛止血、 消肿生肌、 保护胃黏膜、 抗菌、 抗癌的作用。 0004 目前野生白及已遭到过度采挖， 数量急剧减少。 又由于白及种子非常细小且无胚 乳， 在自然条件下很难自主萌发生长， 因此急需开展人工繁育和栽培。 目前已有人就白及种 子的萌发及种苗的培育进行了研究， 如专利申请号为201510173823.9的 “一种白芨的种子 组织快繁育苗方法” 、 专利申请号为201310282939.7的 “白芨的种子组培繁殖方法” 等， 但这 些方法都是采用在无菌条件下培育白及组培苗， 生产成本较高。。
8、 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种能大大缩短白及苗无菌培养时间的白及种子的快速 回土培育方法。 0006 本发明提供的白及种子的快速回土培育方法包括下列步骤： 0007 (1)种子的选择及消毒： 选取已成熟且果皮已开裂的白及种子， 将其进行消毒处 理； 0008 (2)培养基质的选取和处理： 选取毛边纸作为培养基质， 将该毛边纸灭菌后粗糙面 向上放入培养盘中， 并用含有甜荞胚芽添加物的无菌水浸湿； 0009 (3)种子的萌发： 将白及种子置于浸湿的毛边纸上， 在相对湿度85100、 温度20 28、 每天光照1224小时和光照强度为15003000lx的条件下使其萌发； 0010 。
9、(4)幼苗的回土栽培： 将长出真叶的白及无根苗与毛边纸同时放入液体培养基1/ 4MS+6-BA0.51.5mg/L+IBA1.03.0mg/L+甜荞胚芽添加物2040g/L中， 使白及无根苗从 毛边纸上自然脱落， 然后取出毛边纸将含有白及无根苗的液体培养基均匀地撒在已消毒且 由草炭、 蛭石、 珍珠岩按(35)： (01)： (0.52)的重量比配制的土壤的表面， 无根苗在温 度2226、 遮光5070、 土壤湿度为7085的条件下生长； 0011 所述甜荞胚芽添加物是将宁荞1号荞麦种子经48小时的萌发生长后， 去掉其胚芽 上的种皮， 将胚芽用粉碎机粉碎后制成的。 0012 进一步地， 步骤(1。
10、)中所述消毒处理是指将白及种子按白及种子:升汞溶液1： 10 的体积比放入0.1的升汞溶液中消毒715分钟， 再用无菌水清洗815分钟。 0013 进一步地， 步骤(2)中毛边纸的灭菌是指将毛边纸在121灭菌3050分钟。 0014 进一步地， 步骤(2)中甜荞胚芽添加物按1L无菌水添加1030g甜荞胚芽添加物加 说 明 书 1/4 页 3 CN 105830582 B 3 入。 0015 进一步地， 步骤(4)中土壤采用浓度为0.051的地菌灵进行消毒处理。 0016 本发明能大大缩短白及苗的无菌培养时间， 使白及种子在萌发40天内就可回土栽 培， 从而可大大降低白及种苗的生产成本。 另外，。
11、 本发明通过采用具有特殊功效的液体培养 基， 可使回土栽培的白及组培苗的生根率和存活率大大提高。 具体实施方式 0017 实施例1 0018 (1)种子的选择及消毒： 选取已完全成熟且果皮刚开裂的白及种子， 将白及种子及 0.1的升汞溶液按体积比1： 10放入离心管中消毒11分钟， 再用无菌水清洗12分钟； 0019 (2)培养基质的选取和处理： 选取由老竹子和嫩竹子浆液按1： 1比例制作的毛边纸 作为培养基质， 将该毛边纸在121灭菌40分钟后放入培养盘中， 共放3层， 放入时毛边纸的 粗糙面向上； 0020 (3)种子的萌发： 将经消毒处理后的白及种子播种在毛边纸上， 并保持用含有20g/。
12、 L甜荞胚芽添加物的无菌水(即每1L无菌水中添加有20g甜荞胚芽添加物)浸湿毛边纸， 在温 度25、 空气湿度90、 每天光照18小时和光照强度为2000lx的条件下使白及种子萌发， 培 养35天， 有98的白及种子萌发并长出了绿色真叶； 0021 (4)幼苗的回土栽培： 将长出真叶的白及无根苗与毛边纸同时放入液体培养基1/ 4MS+6-BA1.0mg/L+IBA2.0mg/L+甜荞胚芽添加物30g/L中， 使白及无根苗从毛边纸上自然脱 落， 然后取出毛边纸， 将含有白及无根苗的液体培养基均匀撒在已用0.5的地菌灵消毒且 由草炭、 蛭石、 珍珠岩按4： 0.5： 1的重量比配制的土壤的表面， 。
13、在温度24， 遮光60、 土壤 湿度为80的条件下培养45天， 有95的幼苗长出了新根； 0022 上述甜荞胚芽添加物是将宁荞1号甜荞种子经48小时萌发生长后， 去掉其胚芽上 的种皮， 将胚芽用粉碎机粉碎制成的。 0023 实施例2 0024 (1)种子的选择及消毒： 选取已完全成熟且果皮刚开裂的白及种子， 将白及种子及 0.1的升汞溶液按体积比1： 10放入离心管中消毒7分钟， 再用无菌水清洗8分钟； 0025 (2)培养基质的选取和处理： 选取由老竹子和嫩竹子浆液按1： 1比例制作的毛边纸 作为培养基质， 将该毛边纸在121灭菌30分钟后放入培养盘中， 共放2层， 放入时毛边纸的 粗糙面向。
14、上； 0026 (3)种子的萌发： 将经消毒处理后的白及种子播种在毛边纸上， 并保持用含有10g/ L甜荞胚芽添加物的无菌水(即每1L无菌水中添加有10g甜荞胚芽添加物)浸湿毛边纸， 在温 度20、 空气湿度85、 每天光照12小时和光照强度为1500lx的条件下使白及种子萌发， 培 养35天， 有90的白及种子萌发并长出了绿色真叶； 0027 (4)幼苗的回土栽培： 将长出真叶的白及无根苗与毛边纸同时放入液体培养基1/ 4MS+6-BA0.5mg/L+IBA1.0mg/L+甜荞胚芽添加物20g/L中， 使白及无根苗从毛边纸上自然脱 落， 然后取出毛边纸， 将含有白及无根苗的液体培养基均匀撒在。
15、已用0.05的地菌灵消毒 且由草炭、 珍珠岩按3： 0.5的重量比配制的土壤的表面， 在温度22， 遮光50、 土壤湿度为 70的条件下培养45天， 有92的幼苗长出了新根； 说 明 书 2/4 页 4 CN 105830582 B 4 0028 上述甜荞胚芽添加物是将宁荞1号甜荞种子经48小时萌发生长后， 去掉其胚芽上 的种皮， 将胚芽用粉碎机粉碎制成的。 0029 实施例3 0030 (1)种子的选择及消毒： 选取已完全成熟且果皮刚开裂的白及种子， 将白及种子及 0.1的升汞溶液按体积比1： 10放入离心管中消毒13分钟， 再用无菌水清洗13分钟； 0031 (2)培养基质的选取和处理： 。
16、选取由老竹子和嫩竹子浆液按1： 1比例制作的毛边纸 作为培养基质， 将该毛边纸在121灭菌50分钟后放入培养盘中， 共放4层， 放入时毛边纸的 粗糙面向上； 0032 (3)种子的萌发： 将经消毒处理后的白及种子播种在毛边纸上， 并保持用含有30g/ L甜荞胚芽添加物的无菌水(即每1L无菌水中添加有30g甜荞胚芽添加物)浸湿毛边纸， 在温 度28、 空气湿度100、 每天光照24小时和光照强度为3000lx的条件下使白及种子萌发， 培养35天， 有96.2的白及种子萌发并长出了绿色真叶； 0033 (4)幼苗的回土栽培： 将长出真叶的白及无根苗与毛边纸同时放入液体培养基1/ 4MS+6-BA1。
17、.5mg/L+IBA3.0mg/L+甜荞胚芽添加物40g/L中， 使白及无根苗从毛边纸上自然脱 落， 然后取出毛边纸， 将含有白及无根苗的液体培养基均匀地撒在已用0.05的地菌灵消 毒且由草炭、 珍珠岩按5： 1： 2的重量比配制的土壤的表面， 在温度26， 遮光70、 土壤湿度 为85的条件下培养45天， 有93.6的幼苗长出了新根； 0034 上述甜荞胚芽添加物是将宁荞1号甜荞种子经48小时萌发生长后， 去掉其胚芽上 的种皮， 将胚芽用粉碎机粉碎制成的。 0035 实施例4 0036 在实施例1步骤(3)中， 改用含有10g/L甜荞胚芽添加物的无菌水浸湿毛边纸， 其它 步骤同实施例1， 在。
18、培养35天， 有89的白及种子萌发并长出了绿色真叶。 0037 实施例5 0038 在实施例1步骤(3)中， 改为在空气湿度95、 温度20、 每天光照12小时和光照强 度为2800lx的条件下使白及种子萌发， 其它步骤同实施例1， 有82的白及种子萌发并长出 了绿色真叶。 0039 实施例6 0040 在实施例1步骤(4)中， 将液体培养基改为1/4MS+6-BA0.5mg/L+IBA3.0mg/L+甜荞 胚芽添加物40g/L， 其它步骤同实施例1， 培养45天， 有90的幼苗长出了新根。 0041 比较实施例1 0042 在实施例1步骤(1)中， 改选为外观成熟但未开裂的白及果实， 其它步。
19、骤同实施例 1， 白及种子在萌发培养35天后， 仅有49的白及种子长出了绿色真叶。 0043 比较实施例2 0044 在实施例1步骤(1)中， 将白及种子按1： 5的体积比加入到升汞溶液中消毒15分钟， 其它步骤同实施例1， 白及种子萌发培养35天后， 仅有43的白及种子长出了绿色真叶。 0045 比较实施例3 0046 在实施例1步骤(2)中， 将培养基质改选为滤纸、 信签纸或餐巾纸， 其它步骤同实施 例1； 培养35天后， 无任何白及种子萌发长出绿色真叶。 0047 比较实施例4 说 明 书 3/4 页 5 CN 105830582 B 5 0048 在实施例1步骤(2)中， 改为将毛边纸。
20、的粗糙面向下放在培养盘中， 其它步骤同实 施例1， 培养35天后， 仅有49的白及种子长出了绿色真叶。 0049 比较实施例5 0050 在实施例1步骤(3)中， 改为不含有甜荞胚芽添加物的无菌水浸湿毛边纸， 其它步 骤同实施例1， 培养35天后， 仅有38的白及种子长出了黄绿色真叶， 并且长出的无根苗与 实施例1相比， 明显矮小。 0051 比较实施例6 0052 在实施例1步骤(4)中， 将液体培养基改为MS+6-BA1.0mg/L+IBA2.0mg/L， 其它步骤 同实施例1， 培养45天， 仅有29的幼苗长出了新根。 0053 比较实施例7 0054 在实施例1步骤(4)中， 将配制的土壤改为营养土， 其它步骤同实施例1， 在培养45 天后， 仅有37的幼苗长出了新根。 说 明 书 4/4 页 6 CN 105830582 B 6 。