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1、(10)申请公布号 CN 102871123 A (43)申请公布日 2013.01.16 CN 102871123 A *CN102871123A* (21)申请号 201210382355.2 (22)申请日 2012.10.10 A23L 1/29(2006.01) A23L 1/312(2006.01) (71)申请人 天狮集团有限公司 地址 301700 天津市武清区新技术产业园区 武清开发区新源道北 18 号 (72)发明人 吴益群 赵健 郁正刚 黄永亮 崔卜东 (54) 发明名称 一种骨钙的制备方法及骨钙素 (57) 摘要 本发明公开了一种骨钙的制备方法及由该方 法制得的骨钙素。。
2、包括如下步骤 ： 三次脱脂、 两次 离心、 两次发酵和蛋白酶二次水解。 采用本发明的 脱脂工艺制得的骨粉中， 脂肪基本被完全去除， 使 得酶解获得的钙剂中脂肪含量低于 0.1。产品 对有心血管疾病的消费者来说更加安全和健康， 但是又未因此而增加经济负担。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 8 页 1/1 页 2 1. 一种骨钙的制备方法， 包括如下步骤 ： (1) 将骨粉碎， 浸提去骨油， 弃上清液 ； (2) 将浸提后的骨料浸泡漂洗、 离心， 弃上清液 ； (3) 离心后的骨料加。
3、水， 调 PH 值， 加碱性脂肪酶水解， 离心， 弃上清液 ； (4) 将步骤 (3) 中离心后的骨料加水， 加入乳酸菌发酵， 高温灭活 ； (5) 步骤 (4) 中的发酵液再加入蛋白酶二次水解 ； (6) 步骤 (5) 中的水解液中再加入乳酸菌发酵， 高温灭活， 即得。 2. 根据权利要求 1 所述的骨钙制备方法， 其特征在于， 所述的步骤 (1) 骨料颗粒 5 40mm 加入乙醇， 60 80， 45 75min。 3.根据权利要求1所述的骨钙制备方法， 其特征在于， 所述的步骤(2)中将骨料颗粒热 水漂洗， 然后 4000 8000r/min， 离心 30min。 4.根据权利要求1所述。
4、的骨钙制备方法， 其特征在于， 所述的步骤(3)中骨料与水重量 体积比 1 3 5， 调 PH 值 8 10， 加入碱性脂肪酶 A、 B 混合的复合脂肪酶。 5. 根据权利要求 4 所述的骨钙制备方法， 其特征在于， 所述的复合脂肪酶中碱性脂肪 酶 A、 B 重量比为 1.5 3 1。 6.根据权利要求4或5所述的骨钙制备方法， 其特征在于， 所述的复合脂肪酶占骨料重 量比 0.1 0.4。 7.根据权利要求1所述的骨钙制备方法， 其特征在于， 步骤(4)所述的发酵是乳双歧杆 菌(B.lactis)、 保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)， 三种乳。
5、酸 菌重量比 1 3 2 ； 骨料与水重量体积比 1 3 5， 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占 骨料重量比为 0.01 0.04， 35 50， 发酵 12h， 120灭菌 30min。 8. 根据权利要求 7 所述的骨钙制备方法， 其特征在于， 步骤 (5) 所述的酶解是调 PH 值 1 3， 加入胃蛋白酶， 水解温度 35 40， 1 2h ； 调 PH 值 6 7， 加入木瓜蛋白酶， 40 60， 搅拌 1 2h。 9. 根据权利要求 8 所述的骨钙制备方法， 其特征在于， 所述的水解骨料所用的两种蛋 白酶各占骨料重量比为 0.04 0.08。 10. 根据权利要求 1 所述的骨钙制。
6、备方法， 其特征在于， 步骤 (6) 所述的发酵是加入乳 脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为 0.02 0.06， 乳脂明串珠菌和柠檬 酸重量比 1 20 30， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭菌 30min， 干 燥即得。 权 利 要 求 书 CN 102871123 A 2 1/8 页 3 一种骨钙的制备方法及骨钙素 技术领域 0001 本发明涉及骨钙提取工艺， 属于食品加工领域。 背景技术 0002 随着社会的老龄化， 在西方国家， 骨质疏松症的患病率居代谢性骨病的第一位。 骨 质疏松病症带给患者及家庭的痛苦是不言而喻的。据统计， 我国目前约。
7、有超过 1 亿的骨质 疏松症患者， 预计到 2050 年将增加到 2 亿 1 千万人。造成越来越多的人们钙缺乏的因素 ： 生活和工作节奏加快， 工作压力大以及生活无规律， 不注意饮食结构的合理搭配， 每日钙摄 入少于 600 毫克者可认为是钙摄入不足， 易造成体内钙的缺乏 ； 一些中年人工作紧张， 缺乏 自我保健意识， 不重视室外活动， 使得体内合成的维生素 D 减少， 影响钙的吸收和利用 ； 营 养摄入不均衡或缺乏人体所必需的营养元素。 0003 目前市场的钙剂多为工业合成的钙。工业合成的钙剂营养成分单一， 很难满足骨 骼生长代谢过程中多方面的营养需求， 补钙效果不理想。动物骨富含钙、 磷、。
8、 铁、 镁等多种 矿物元素， 而且与人骨相似， 人体骨骼细胞对相同组织细胞有较强的亲和力， 因而利用率更 高。 0004 中国专利 CN1087793A 和美国专利 US6342252B1 公开了一种利用酶解方法从牛骨 中提取钙素的工艺。酶解骨钙具有钙磷比例适宜、 营养丰富、 钙质吸收利用率高等特点。从 市场销售情况看， 酶解骨钙深受广大消费者的喜爱， 服用后改善骨质疏松的效果明显， 取得 了显著的经济效益。 0005 但是， 上述工艺制得的骨钙中， 脱脂方法主要是以蒸煮方式实施， 难以去除骨质中 高含量的脂肪， 导致最终的产品脂肪含量较高。 对于具有心血管疾病的消费者， 过高的脂肪 摄入量显。
9、然会升高发病的危险因素。 因此， 从动物骨骼中提取钙素的过程中， 去除过多的脂 肪， 减少心血管疾病的发病风险， 成为技术人员急需解决的问题。 发明内容 0006 本发明的目的在于提供一种新的酶解骨钙的提取工艺， 所述的工艺能够较现有技 术更好的去除骨质中的脂肪。 0007 本发明的另一目的是提供一种更健康的补钙产品生产工艺， 所述的工艺制得的补 钙产品具有较低的脂肪含量。 0008 本发明的另一目的是提供一种具有市场竞争力的补钙产品， 所述的产品不因脱脂 工艺的设计而增加生产成本， 0009 为达到上述目的， 本发明采用下列技术方案实现。 0010 本发明采用三次蒸煮方式去除骨油， 第一次是。
10、 60 80， 45 75min ； 第二次 90100， 10min ； 第三次是在酶解后， 采用高温的方式去除最终可能残留的脂肪。 三次蒸 煮除具有除去骨质中的脂肪效果外， 同时还具有杀菌的功效。 为增强脱脂效果， 本发明优选 的将骨粉碎至 5 40mm 颗粒， 颗粒过小则增加生产成本， 颗粒过大去脂效果较差。发明人 说 明 书 CN 102871123 A 3 2/8 页 4 经过多次试验及经验， 最终确定 5 40mm 颗粒范围达到去骨脂和成本的最佳性价比。 0011 在蒸煮后， 本发明还采用冲洗方式去除骨料中存在的脂肪 ； 冲洗后再次以 4000 8000r/min， 离心 30mi。
11、n， 这样可以去除骨料中大部分的脂肪。 0012 为进一步去除残存的脂肪， 本发明的工艺选择在离心后再次加入碱性脂肪酶进行 酶解骨料中残存的脂肪。碱性脂肪酶 A、 B 按 1.5 3 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量 比 0.1 0.4， 20 30， 水解 40 60min。在酶解后， 二次离心， 进一步将残存的微量 脂肪去除。 0013 本发明采用发酵的方法对发酵前的骨料进行预处理， 然后再进行酶解提取钙素， 然后再次对提取液进行发酵处理， 去除提取物中的异味， 改善口感。 0014 为增强发酵效果， 本发明优选的将骨粉碎至 5 40mm 颗粒， 颗粒过小则增加生产 成本， 颗粒过大效果。
12、较差。发明人经过多次试验及经验， 最终确定 5 40mm 颗粒范围达到 钙素提取和成本的最佳性价比。 0015 本发明所述的酶解前发酵采用乳酸菌与骨料按一定的重量配比， 35 50， 发酵 12h。乳酸菌与骨料的重量配比、 乳酸菌在发酵液中的浓度、 发酵温度和时间对最终制得的 产物中游离钙含量具有重要的影响， 而乳酸菌与骨料的重量配比和乳酸菌在发酵液中的浓 度对游离钙的影响最大。发明人根据自己多年的工作经验， 反复试验后确定乳酸菌占骨料 重量比为 0.01 0.04， 骨料与水重量体积比 1 3 5 的条件下， 能够达到投入与产出 的最佳性价比。 0016 发明人提供大量实验， 意外发现多种乳。
13、酸菌按照一定的配比组合进行发酵， 最终的产物中游离钙含量较单独以某种乳酸菌发酵提高 8以上， 而采用乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus) 三种乳酸 菌进行发酵效果较好 ； 采用此三种乳酸菌配比后发酵效果最好， 当三种乳酸菌以重量比 1 3 2 进行组合时， 酶解液中游离钙含量较单一乳酸菌发酵后提高 10 30。 0017 本发明所述的二次发酵采用乳脂明串珠菌和柠檬酸， 而二者之间的配比对最终产 物的口味、 生产效率都具有重要的影响。发明人最终确定乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 20 30 的条件下， 发酵的。
14、最终产物效果较好。在上述条件下， 确定发酵温度为 39， 发酵时间为 12h 时， 可以达到生产效率的最优化。 0018 本发明采用高温灭菌的方法达到杀菌消毒的目的， 同时也去除酶解液中的乳酸 菌。 0019 本发明的酶解采用二次酶解方法， 经过筛选后， 最终发现用胃蛋白酶和木瓜蛋白 酶进行酶解较其他蛋白酶具有更好的效果。当然， 选用其他蛋白酶进行酶解也能够实现本 发明的目的。 本发明的提取工艺中最佳的酶解方案是PH值13， 加入胃蛋白酶， 水解温度 35 40， 1 2h ； 调 PH 值 6 7， 加入木瓜蛋白酶， 40 60， 搅拌 1 2h。 0020 水解骨料所用的两种蛋白酶各占骨料。
15、重量比为 0.04 0.08为佳。 0021 碱性脂肪酶A由福建师范大学生物工程学院研制的扩展青霉PF868产生的碱性脂 肪酶， 由深圳绿微康生物工程有限公司提供 ； 碱性脂肪酶 B 采用生物技术由真菌发酵精制 而产生的碱性脂肪酶， 由海宁金潮实业有限公司提供。 0022 本发明的组合物与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、 糊精、 乳糖、 微晶纤 维素、 羟丙甲基纤维素、 聚乙二醇、 硬脂酸镁、 微粉硅胶、 木糖醇、 乳糖醇、 葡萄糖、 甘氨酸、 甘 说 明 书 CN 102871123 A 4 3/8 页 5 露醇、 甘氨酸等混合制成的各种剂型， 例如， 可制成片剂、 缓释片、 滴丸、 。
16、颗粒剂、 胶囊剂、 微 粒剂。优选剂型为片剂或颗粒剂。 0023 采用本发明所述工艺制得的骨粉中， 脂肪基本被完全去除， 使得酶解获得的钙剂 中脂肪含量低于0.1。 产品对有心血管疾病的消费者来说更加安全和健康， 但是又未因此 而增加经济负担。 0024 试验例 0025 以下通过一些具体的实验数据进一步说明本发明的有益效果， 本发明所有的实施 例均能做出与此相近的实验效果， 以下数据只是举例说明。 0026 1、 材料与方法 0027 1.1 牛骨 ： 购于河北福成五丰食品股份有限公司 0028 1.2 样品 1 ： 依照中国专利 CN1087793A 使用牛骨获得的样品 ； 样品 2 ： 。
17、依照美国专 利 US6342252B1 使用牛骨获得的样品 ； 样品 3 ： 依照 超微粉碎牦牛骨泥经发酵和酶解后游 离钙和氨基酸态氮的变化 ( 陈丹， 张传林等，中国酿造 2008 年第 1 期总第 178 期 ) 中 “1.5 乳酸菌发酵处理牦牛骨泥牛骨泥用蒸馏水稀释为 10的浓度发酵 36 小时” 使用牛骨获得的样品 ； 样品 4 ： 依照本发明实施例 4 使用牛骨获得的样品。 0029 1.3 方法 ： 采用原子吸收分光光度法测定游离钙含量。 0030 2、 结果 0031 2.1 样 品 1 的 游 离 钙 含 量 为 170.80mg/100g，样 品 2 的 游 离 钙 含 量 。
18、为 343.13mg/100g， 样 品 3 的 游 离 钙 含 量 为 1997.01mg/100g， 样 品 4 的 游 离 钙 含 量 为 2387.45mg/100g。 0032 2.2 经数据对比分析， 本发明所制得的产品的游离钙含量， 与样品 1、 样品 2 相比， 具有非常显著的提高 ； 与样品 3 相比， 具有显著的提高， 提高幅度达到 19.55。 具体实施方式 0033 配制培养基 ： MRS培养基 ： 蛋白胨1， 牛肉膏1， 酵母膏0.5， 葡萄糖2， 磷酸 氢二钾 0.2， 醋酸钠 0.5， 硫酸镁 0.02， 硫酸锰 0.005， 吐温 -80 0.1， 柠檬酸三铵 。
19、0.2， PH5.5 6.0， 115， 灭菌 30min。 0034 实施例 1 0035 取动物骨骼粉碎至 40mm 颗粒， 加入乙醇， 80， 浸提 75min， 弃上清液 ； 90热水 浸泡漂洗 30min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与 水重量体积比 1 5， 调 PH 值 10， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 1.5 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量比 0.4， 30， 水解 60min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞。
20、士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌 重量比 1 3 2 ； 骨料与水重量体积比 1 5， 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料 重量比为 0.04， 50， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值 3， 加入胃蛋白酶， 占骨 料重量比为 0.08， 水解温度 40， 2h ； 加热去盐酸至 PH 值 7， 加入木瓜蛋白酶， 占骨料重 量比为 0.08， 60， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨 料重量比为 0.06， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 30， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 。
21、120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法 说 明 书 CN 102871123 A 5 4/8 页 6 对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.01。 0036 实施例 2 0037 取动物骨骼粉碎至 5mm 颗粒， 加入乙醇， 60， 浸提 45min， 弃上清液 ； 80热水浸 泡漂洗 30min， 将骨料 4000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重 量体积比 1 3， 调 PH 值 8， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 3 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量 比 0.1， 20， 水解 4。
22、0min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌重量比 1 3 2 ； 骨料与水重量体积比 1 3， 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料重量比 为 0.01， 35， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值 1， 加入胃蛋白酶， 占骨料重量 比为 0.04， 水解温度 35， 1h ； 加热去盐酸至 PH 值 6， 加入木瓜蛋白酶， 占骨料重量比为 0.04， 40， 搅拌 1h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 。
23、乳脂明串珠菌占骨料重量 比为 0.02， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 20， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加 碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法对骨粉 进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.02。 0038 实施例 3 0039 取动物骨骼粉碎至 20mm 颗粒， 加入乙醇， 70， 浸提 60min， 弃上清液 ； 85热水浸 泡漂洗 30min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重 量体积比 1 4， 调 PH 值 9， 加入碱性脂肪酶 A、 。
24、B 按 2 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量 比 0.3， 25， 水解 50min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌重量比 1 3 2 ； 骨料与水重量体积比 1 4， 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料重量比 为 0.03， 40， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值 2， 加入胃蛋白酶， 占骨料重量 比为 0.06， 水解温度 37， 1.5h ； 加热去盐酸至 PH 值 6.5， 加入木瓜蛋白酶， 占骨料。
25、重量 比为 0.06， 50， 搅拌 1.5h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨 料重量比为 0.04， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 25， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法 对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.02。 0040 实施例 4 0041 取动物骨骼粉碎至 10mm 颗粒， 加入乙醇， 80， 浸提 75min， 弃上清液 ； 90热水 浸泡漂洗 30min， 将骨料 6000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心。
26、后的骨料加水， 骨料 与水重量体积比 1 3.5， 调 PH 值 8.5， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 2 1 混合的复合脂肪 酶， 占骨料重量比 0.2， 30， 水解 60min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧 杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种 乳酸菌 ； 骨料与水重量体积比 1 5， 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料重量比为 0.04， 50， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值 1， 加入胃蛋白酶， 占骨料重量比 为 0.08， 水解温度。
27、 37， 1 2h ； 加热去盐酸至 PH 值 6 7， 加入木瓜蛋白酶， 占骨料重 量比为 0.06， 45， 搅拌 1h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨 料重量比为 0.03， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 30， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法 说 明 书 CN 102871123 A 6 5/8 页 7 对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.03。 0042 实施例 5 0043 取动物骨骼粉碎至 25mm 颗粒， 加入乙醇， 75，。
28、 浸提 65min， 弃上清液 ； 86热水 浸泡漂洗 30min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与 水重量体积比 1 4， 调 PH 值 9.5， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 2.8 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量比 0.3， 30， 水解 50min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌 重量比 1 3 2 ； 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料重量比为 0.04， 40， 。
29、发酵 12h， 120灭菌 30min ； 调 PH 值 3， 加入胃蛋白酶， 占骨料重量比为 0.08， 水解温度 40， 2h ； 加热去盐酸至 PH 值 7， 加入木瓜蛋白酶， 占骨料重量比为 0.08， 60， 搅拌 1h， 分离液 体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为 0.05， 乳脂明串珠菌和 柠檬酸重量比 1 25， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。 采用 “GB/T5009.6食品中脂肪的测定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂 肪含量为 0.01。 0044 实施例 6 0045 取动物骨。
30、骼粉碎至 35mm 颗粒， 加入乙醇， 78， 浸提 70min， 弃上清液 ； 87热水浸 泡漂洗 30min， 将骨料 7000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重 量体积比15， 调PH值8， 加入碱性脂肪酶A、 B按1.81混合的复合脂肪酶， 占骨料重量 比 0.25， 20， 水解 50min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌 ； 骨料与水重 量体积比 1 5， 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸。
31、菌占骨料重量比为 0.04， 45， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值 1， 加入胃蛋白酶， 水解温度 35 40， 1 2h ； 加热去盐 酸至 PH 值 7， 加入木瓜蛋白酶， 55， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂 明串珠菌占骨料重量比为0.05， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比122， 发酵温度为39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.02。 0046 实施例 7 0047 取动物骨骼粉碎至 1。
32、0mm 颗粒， 加入乙醇， 60， 浸提 75min， 弃上清液 ； 88热水浸 泡漂洗 30min， 将骨料 5000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重 量体积比 1 4， 调 PH 值 10， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 3 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量 比 0.35， 24， 水解 45min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌加入总重量 的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料重量比为 0.03， 。
33、50， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值 1 3， 加入胃蛋白酶， 水解温度 35 40， 2h， 加热去盐酸至 PH 值 7， 加入木瓜蛋白 酶， 40 60， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量 比为 0.04， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 30， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加 碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法对骨粉 进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.02。 0048 实施例 8 说 明 书 CN 102871123 A 7。
34、 6/8 页 8 0049 取动物骨骼粉碎至 15mm 颗粒， 加入乙醇， 80， 浸提 75min， 弃上清液 ； 89热水 浸泡漂洗 30min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与 水重量体积比 1 5， 调 PH 值 8.5， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 2.6 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量比 0.14， 30， 水解 60min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌 重量比1。
35、32， 加入总重量的5的蔗糖， 3550， 发酵12h， 120灭菌30min ； 加盐酸 调 PH 值 1 3， 加入胃蛋白酶， 水解温度 35 40， 1 2h ； 加热去盐酸至 PH 值 6， 加入木 瓜蛋白酶， 40， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重 量比为 0.05， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 30， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法对骨 粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.03。 0050 实施例 9 0051 取。
36、动物骨骼粉碎至 30mm 颗粒， 加入乙醇， 75， 浸提 55min， 弃上清液 ； 85热水浸 泡漂洗 30min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重 量体积比 1 5， 调 PH 值 8， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 3 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量 比 0.35， 28， 水解 60min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳酸菌加入到骨料中， 乳 酸菌占骨料重量比为 0.04， 骨料与水重量体积比 1 3， 加入总重量的 5的蔗糖， 50， 发酵12h， 120灭菌30min ； 加盐酸调PH值3， 加。
37、入胃蛋白酶， 水解温度3540， 2h ； 加热 去盐酸至 PH 值 7， 加入木瓜蛋白酶， 50， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为 0.03， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 28， 发酵温度为 39， 发酵时间为12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。 采用 “GB/T5009.6食品中脂肪的测 定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.02。 0052 实施例 10 0053 取动物骨骼粉碎至 20mm 颗粒， 加入乙醇， 80， 浸提 60min， 弃上清液 ； 84热水浸 泡漂洗 30min， 将骨料。
38、 6000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重 量体积比 1 5， 调 PH 值 10， 加入碱性脂肪酶 A、 B 按 3 1 混合的复合脂肪酶， 占骨料重量 比 0.3， 30， 水解 60min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞士乳杆菌 (L.helviticus)， 三种乳酸菌重量比 1 3 2 加入骨料中， 加入总重量的 5的蔗糖， 40， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸 调 PH 值 2， 加入胃蛋白酶， 占骨料重量比为 0。
39、.05， 水解温度 38， 2h ； 加热去盐酸至 PH 值 6， 加入木瓜蛋白酶， 占骨料重量比为 0.07， 55， 搅拌 1h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌 和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.05， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比126， 发 酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品 中脂肪的测定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.03。 0054 实施例 11 0055 将骨骼粉碎至 40mm 颗粒， 加入乙醇， 80， 浸提 75min， 弃上清液 ； 83热水浸泡漂 洗 30。
40、min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重量体 积比15， 调PH值10， 加入碱性脂肪酶A、 B混合的复合脂肪酶， 占骨料重量比0.1， 30， 水解 60min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳酸菌加入骨料中， 骨料与水重量体积比 说 明 书 CN 102871123 A 8 7/8 页 9 1 5， 加入总重量的 5的蔗糖， 42， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 调 PH 值， 加入蛋白酶， 占骨料重量比为 0.08， 水解 2h ； 调 PH 值， 再加入蛋白酶， 占骨料重量比为 0.06， 5。
41、5， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为 0.02， 乳 脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 20， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭 活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂肪的测定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测 定， 测得产品脂肪含量为 0.02。 0056 实施例 12 0057 将骨骼粉碎至 30mm 颗粒， 加入乙醇， 75， 浸提 60min， 弃上清液 ； 81热水浸泡漂 洗 30min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重量体。
42、 积比 1 4， 调 PH 值 9， 加入复合脂肪酶， 占骨料重量比 0.4， 30， 水解 60min， 离心， 去上 清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus) 和瑞 士乳杆菌(L.helviticus)， 三种乳酸菌重量比132 ； 骨料与水重量体积比13.5， 加 入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料重量比为 0.04， 50， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值， 加入蛋白酶， 占骨料重量比为 0.06， 水解温度 40， 2h ； 调 PH 值， 再次加 入蛋白酶， 占骨料重量比为 0.。
43、08， 60， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为 0.05， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比 1 30， 发酵温度为 39， 发酵时间为12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。 采用 “GB/T5009.6食品中脂肪的测 定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.03。 0058 实施例 13 0059 将骨骼粉碎至 10mm 颗粒， 加入乙醇， 80， 浸提 75min， 弃上清液 ； 84热水浸泡漂 洗 30min， 将骨料 8000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重。
44、量体 积比15， 调PH值10， 加入碱性脂肪酶A、 B混合的复合脂肪酶， 占骨料重量比0.4， 30， 水解 60min， 离心， 去上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳双歧杆菌 (B.lactis)、 保加利亚乳杆菌 (L.bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L.helviticus)， 三种乳酸菌重量比132 ； 骨料与水重 量体积比 1 5， 加入总重量的 5的蔗糖， 乳酸菌占骨料重量比为 0.04， 50， 发酵 12h， 120灭菌 30min ； 加盐酸调 PH 值， 加入胃蛋白酶， 水解温度 37， 2h ； 加热去盐酸至 PH 值 67， 加入中性蛋白酶， 占骨料重量比为0.0。
45、8， 50， 搅拌2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠 菌和柠檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.06， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比126， 发酵温度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食 品中脂肪的测定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.01。 0060 实施例 14 0061 将骨骼粉碎至 25mm 颗粒， 加入乙醇， 80， 浸提 65min， 弃上清液 ； 84热水浸泡漂 洗 30min， 将骨料 6000r/min， 离心 30min， 弃上清液 ； 将离心后的骨料加水， 骨料与水重量体 。
46、积比 1 4， 调 PH 值 8.5， 加入复合脂肪酶， 占骨料重量比 0.3， 30， 水解 60min， 离心， 去 上清液 ； 离心后骨料加水， 取乳酸菌加入骨料中， 乳酸菌占骨料重量比为 0.02， 骨料与水 重量体积比14， 加入总重量的5的蔗糖， 50， 发酵12h， 120灭菌30min ； 加盐酸调PH 值 3， 加入胃蛋白酶， 占骨料重量比为 0.08， 水解温度 40， 1h ； 加热去盐酸至 PH 值 7， 加 入中性蛋白酶， 占骨料重量比为 0.08， 45， 搅拌 2h， 分离液体 ； 加入乳脂明串珠菌和柠 檬酸， 乳脂明串珠菌占骨料重量比为0.03， 乳脂明串珠菌和柠檬酸重量比130， 发酵温 说 明 书 CN 102871123 A 9 8/8 页 10 度为 39， 发酵时间为 12h， 加碱中和， 120灭活， 干燥即得。采用 “GB/T5009.6 食品中脂 肪的测定” 规定检测方法对骨粉进行脂肪含量测定， 测得产品脂肪含量为 0.03。 说 明 书 CN 102871123 A 10 。