一种清火速溶茶.pdf

摘要
申请专利号：	CN201611128816.8	申请日：	20161209
公开号：	CN106720764A	公开日：	20170531
当前法律状态：		有效性：	审查中
法律详情：
IPC分类号：	A23F3/34	主分类号：	A23F3/34
申请人：	北京市绿友食品有限公司
发明人：	赵娇,李国金,温凯
地址：	101109 北京市通州区漷县开发区
优先权：	CN201611128816A
专利代理机构：		代理人：
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内容摘要

本发明属于属于食品加工技术领域，具体涉及一种速溶清火茶及其制备方法。为了克服现有现有技术中的清火茶产品有效成分含量较低，或辅助成分过多使产品丧失其原有的香气与口味的问题，本发明提供一种茶香浓郁，且具有复合功能、成本低廉的速溶清火茶，所述清火茶是通过将超声浸提、高压脉冲电场浸提以及酶解浸提相结合，增加提取产物中的有效成分的同时在原料残渣中加入可发酵生产谷胱甘肽的酿酒酵母，以达到降低产品含糖量的同时生产谷胱甘肽，提高产品的抗氧化能力的目的。

权利要求书

1.一种速溶清火茶，由以下重量份数组成的原料制备：百合15-20份，麦芽18-20份，莲子12-15份，山楂3-5份，金银花20-30份，菊花20-30份，其特征在于，所述速溶清火茶的制备方法如下：(1)将进过挑选、去核、清洗并烘干的百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花按照重量份数要求进行称取；(2)将各原料分别粉碎至80-140目后混合，添加原料总重量5-10倍的水在40-50℃下浸泡1-2h；之后进行超声浸提，超声条件为200-300W，频率30-40KHz、40-50℃、1-2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz，0.5-1h；(3)4000rpm,离心5-10min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B；(4)向料渣B中添加原料总重3-5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量0.05％的纤维素酶，0.02％的α-淀粉酶，0.03％的β-淀粉酶，0.005％的麦芽糖酶，0.005％糖化酶，于30-40℃酶解30-50min，之后升温至90℃灭酶10min得酶解液C；(5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200-300W,频率30-40KHz、40-50℃、20-40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz，10-20min得二次浸提液D；(6)向二次浸提液D中按5-8％的接种量接入酿酒酵母种子液进行发酵，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18-24h；(7)发酵结束后离心分离上清E；(8)合并浸提液A及上清E，45℃下真空浓缩，得到至固形物含量约为30-40％的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶。 2.如权利要求1所述的一种速溶清火茶，其特征在于，所述的种子液培养条件如下：取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；摇瓶培养基：以g/L计，(NH)SO6、葡萄糖35、KHPO·3HO3、KHPO0.5、酵母粉11、MnSO0.1、KCL0.1、FeSO0.1、MgSO·7HO0.1，pH6.0。 3.如权利要求1或2所述的一种速溶清火茶，其特征在于，接种酿酒酵母种子液时向二次浸提液D中添加终浓度为100g/L的葡萄糖。 4.如权利要求1所述的一种速溶清火茶，其特征在于，所述酿酒酵母具体为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789。 5.一种制备权利要求1所述速溶清火茶的方法，其特征在于，步骤如下：(1)将进过挑选、去核、清洗并烘干的百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花按照如下重量份数组成称取：百合15-20份，麦芽18-20份，莲子12-15份，山楂3-5份，金银花20-30份，菊花20-30份，；(2)将各原料分别粉碎至80-140目后混合，添加原料总重量5-10倍的水在40-50℃下浸泡1-2h；之后进行超声浸提，超声条件为200-300W，频率30-40KHz、40-50℃、1-2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz，0.5-1h；(3)4000rpm,离心5-10min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B；(4)向料渣B中添加原料总重3-5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量0.05％的纤维素酶，0.02％的α-淀粉酶，0.03％的β-淀粉酶，0.005％的麦芽糖酶，0.005％糖化酶，于30-40℃酶解30-50min，之后升温至90℃灭酶10min得酶解液C；(5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200-300W,频率30-40KHz、40-50℃、20-40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz，10-20min得二次浸提液D；(6)向二次浸提液D中按5-8％的接种量接入酿酒酵母种子液进行发酵，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18-24h；所述酿酒酵母具体为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789；所述的种子液培养条件：取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；摇瓶培养基：以g/L计，(NH)SO6、葡萄糖35、KHPO·3HO3、KHPO0.5、酵母粉11、MnSO0.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO·7HO0.1，pH6.0；(7)发酵结束后离心分离上清E；(8)合并浸提液A及上清E，45℃下真空浓缩，得到至固形物含量约为30-40％的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶。 6.如权利要求5所述的制备速溶清火茶的方法，其特征在于，接种酿酒酵母种子液时向二次浸提液D中添加终浓度为100g/L的葡萄糖。

说明书

技术领域：

本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种清火速溶茶。

背景技术：

“上火”为民间俗语，又称“热气”，可以从中医理论解释，属于中医热证范畴。中医认为人体阴阳失衡，内火旺盛，即会上火。因此所谓的“火”是形容身体内某些热性的症状，而上火也就是人体阴阳失衡后出现的内热证候，具体症状如眼睛红肿、口角糜烂、尿黄、牙痛、咽喉痛等。“上火”在干燥气候及连绵湿热天气时更易发生。解决方法是“去火”，即中医的清热泻火法，可服用滋阴、清热、解毒消肿的食物或药物。

百合，又名强蜀、番韭、山丹、倒仙、重迈、中庭、摩罗、重箱、中逢花、百合蒜、大师傅蒜、蒜脑薯、夜合花等，中医学认为，百合味甘微苦，性平，入心、肺经，有润肺止咳、清心安神之功，可用于热病后余热未消、虚烦惊悸、神志恍惚和肺痨久咳、咯血、肺脓疡等症；或因过食煎、炒、油炸食品后觉得燥热时食用。

麦芽，为禾本科植物大麦的成熟果实经发芽干燥的炮制加工品。将麦粒用水浸泡后，保持适宜温、湿度，待幼芽长至约5mm时，晒干或低温干燥。麦芽，性甘，平。归脾、胃经、肝经，可用于肝郁气滞，胸胁胀闷，及肝脾不各，嗳气少食等症。

莲子，是睡莲科水生草本植物莲的种子。又称白莲、莲实、莲米、莲肉。莲，又称荷芙蓉、水芝。莲子具有清心醒脾，补脾止泻，养心安神明目、补中养神，止泻固精，益肾涩精止带，滋补元气的功效。莲子作为保健药膳食疗时，一般是不弃莲子芯的，莲子芯是莲子中央的青绿色胚芽，味苦，有清热、固精、安神、强心之功效。

山楂，也叫山里红、红果、胭脂果，为蔷薇科植物山里红或山楂的干燥成熟果实，质硬，果肉薄，酸甜适中，风味独特。山楂味酸性温，气血并走，化瘀而不伤新血，行滞气而不伤正气，应用于肉食积滞证，泻痢腹痛、疝气痛、瘀滞腹痛胸痛、恶露不尽、痛经、吐血、便血等。山楂含有大量的维生素C与微量元素，能够扩张血管，降低血压，降低血糖，能够改善和促进胆固醇排泄而降低血脂，预防高血脂的发生，山楂能够开胃促进消化，山楂所含有的脂肪酶也能够促进脂肪的消化。山楂所含有的黄酮类与维生素c、胡萝卜素等物质能够阻断并减少自由基的生成，可增强机体的免疫力，延缓衰老，防癌抗癌。山楂能够活血化瘀，帮助消除瘀血状态，辅助治疗跌打损伤。近几年来，山楂在降血脂、降血压、抗脑血及其作用机制方面取得了重大进展。

金银花，又名忍冬，自古被誉为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，均效果显著。

菊花，是菊科植物，性甘、微寒，是中国常用中药，具有散风热、平肝明目、消咳止痛的功效，用于治疗头痛眩晕、目赤肿痛、风热感冒、咳嗽等病症效果显著。

而上述成分也常出现在现有的清火产品中。

公布号为CN 102144694 A的中国发明专利《一种山楂麦芽茶》公布了一种山楂麦芽茶，由生山楂、炒麦芽、炒谷芽和炒莱菔子加工而成，所述蒲公英、菊花、桑叶、夏枯草、紫花地丁、野菊花的重量比为3∶1∶1∶1，分别将净选的所述原料干燥、筛选，再将加工过的原料按比例称量配齐、混合均匀、灭菌消毒、装纸袋、灌装及包装后，即为本发明产品。它具有消食化积之功效。

公布号为CN 105724675 A的中国发明专利《清火茶》提供了一种清火茶，由以下重量份数的原料配制而成：金银花2份、菊花1份、胖大海1份、麦冬3份、藏青果1份、罗汉果1份、射干1份、枸杞子1份和甘草1份。本发明的优点在于采用科学方法与传统中医药理论相结合，具有清热解毒、滋阴润燥的功效，常饮可防治声音嘶哑、咽喉肿痛、各类疮疖肿毒等，其制备方法简单，成本低，适合规模化工业生产。

公布号为CN 105456677 A的中国发明专利《一种芦荟清火排毒胶囊》，以芦荟、莲子、百合、青木香、槐花作为原料，按适宜的配比制备成的保健排毒胶囊。该胶囊含多种营养成分和有益人体健康的成分，长期食用该胶囊，能清宿便、清热解毒、清除人体多种毒素、使人口、胃舒适，口气清新，促进身体健康。可作为一种新的保健品供长期宿便不清、体内毒素较多的人群服用，起到美容保健的效果，特别受到爱美女士的欢迎。

但是现有技术中的产品要么有效成分含量较低，要么过多的追求复合功能而添加其他的辅助成分，使得现有的产品逐渐丧失了其原有的香气与口味。此外，麦芽、莲子以及山楂等成分都有较高的含糖量，不适于所有人群食用。本发明为了克服上述问题将提供一种茶香浓郁，且具有复合功能、成本低廉的速溶清火茶。

发明内容：

为了解决上述技术问题，本发明将提供一种速溶清火茶，所述速溶清火茶由以下重量份数的原料制备而成：百合15-20份，麦芽18-20份，莲子12-15份，山楂3-5份，金银花20-30份，菊花20-30份；

所述速溶清火茶的制备方法如下：

(1)将进过挑选、去核、清洗并烘干的百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花按照重量份数要求进行称取；

(2)将各原料分别粉碎至80-140目后混合，添加原料总重量5-10倍的水在40-50℃下浸泡1-2h；之后进行超声浸提，超声条件为200-300W，频率30-40KHz、40-50℃、1-2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz，0.5-1h；

(3)4000rpm,离心5-10min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B；

(4)向料渣B中添加原料总重3-5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量0.05％的纤维素酶，0.02％的α-淀粉酶，0.03％的β-淀粉酶，0.005％的麦芽糖酶，0.005％糖化酶，于30-40℃酶解30-50min，之后升温至90℃灭酶10min得酶解液C；

(5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200-300W,频率30-40KHz、40-50℃、20-40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz，10-20min得二次浸提液D；

(6)向二次浸提液D中按5-8％的接种量接入酿酒酵母种子液进行发酵，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18-24h；

(7)发酵结束后离心分离上清E；

(8)合并浸提液A及上清E，45℃下真空浓缩，得到至固形物含量约为30-40％的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶；

进一步地，接种酿酒酵母种子液时向二次浸提液D中添加终浓度为100g/L的葡萄糖；

所述的种子液培养条件：

取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；

摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；

所述酿酒酵母菌株具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，该菌株已于保藏于2016年7月15日中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12789，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101；

所述酿酒酵母tlj2016是从一株宁夏果园中分离得到的酿酒酵母出发菌株经以下步骤得到：

原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→高渗平板筛选→亚硝基胍(NTG)诱变筛选→高渗平板初筛→摇瓶筛选→发酵复筛(产GSH能力)→传代稳定性试验。

经过诱变后获得的菌株tlj2016其葡萄糖耐受能力以及L-半胱氨酸耐受能力均得到提高，一方面，tlj2016对葡萄糖的耐受能力达到300g/L，在高浓度葡萄糖培养下能够提高细胞密度，另一方面L-半胱氨酸耐受能力的提高将有利于GSH在胞内大量合成，从而提高菌株大规模生产GSH的能力。

由于所述酿酒酵母tlj2016是一株可在外源添加L-半胱氨酸条件下大量合成谷胱甘肽的酵母菌，将经过初步浸提之后的料渣经酶解后作为发酵基质，充分利用其酶解产物，使用酿酒酵母tlj2016在添加L-半胱氨酸的条件下发酵生产谷胱甘肽，发酵完成后，将发酵液分离，并于之前获得的浸提液进行合并，浓缩后冻干的速溶清火茶产品，所得产品不仅具有较高的有效成分，而且含有谷胱甘肽，增加了产品的抗氧化功能，降低了产品的含糖量。

有益效果：

1、本发明所提供的速溶清火茶，将超声浸提、高压脉冲电场浸提以及酶解浸提相结合，能够增加提取产物中的有效成分，茶香浓郁，营养丰富；此外本产品仅以优质百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花为提取原料，不添加任何辅助成分，充分保留了原有的风味；

2、本发明将经过初次浸提的原料渣经过酶解后作为发酵基质，生产谷胱甘肽，一方面充分利用原料酶解产生的葡萄糖，实现了废物利用，节省成本，提高了经济效益，同时降低产品的含糖量，另一方面发酵生成的谷胱甘肽，谷胱甘肽作为重要的抗氧化剂和自由基清除剂，可以与体内的自由基、重金属等结合，从而将机体内的有害物质转化为无害物质排出体外，此外，还可以提高人体免疫力，维护健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上发挥功效；

3、本发明可提供该两种风味的产品，发酵过程中添加葡萄糖的产品中谷胱甘肽含量高，且成品口味微甜，适合健康人群饮用；未添加葡萄糖的产品中谷胱甘肽含量略低，茶香更浓郁，糖分含量低，适合三高病人等对糖摄入量有要求或有减肥需求的人群饮用。

具体实施方式：

实施例1一种低糖速溶清火茶及其制备方法

一种速溶清火茶，其制备方法包括如下步骤：

(1)将百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花经过挑选、去核、清洗并烘干后，按以下重量份数组成进行称取：百合15份，麦芽18份，莲子12份，山楂3份，金银花20份，菊花30份；

(2)将各原料分别粉碎至80目后混合，添加原料总重量5倍的水在50℃下浸泡1h；之后进行超声浸提，超声条件为200W,频率40KHz、40℃、2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25kV/cm，脉冲频率1000Hz，0.5h；

(3)4000rpm，离心5min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B；

(4)向料渣B中添加原料3倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量0.05％的纤维素酶，0.02％的α-淀粉酶，0.03％的β-淀粉酶，0.005％的麦芽糖酶，0.005％糖化酶，于30℃酶解50min，之后升温至90℃灭酶10min得酶解液C；

(5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200W,频率40KHz、40℃、40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25kV/cm，脉冲频率1000Hz，10min得二次浸提液D；

(6)向二次浸提液D中按5％的接种量接入酿酒酵母tlj2016种子液进行发酵，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18h；发酵结束后经检测，发酵液中含有375.3mg/L谷胱甘肽；

所述的种子液培养条件：

取酿酒酵母tlj2016斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；

摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；

(7)发酵结束后离心分离上清E；

(8)合并浸提液A及上清E，45℃下真空浓缩，得到至固形物含量为30％的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶，此产品为实验组。

对照组：步骤(1)-(8)完全相同，仅将步骤(6)中酿酒酵母tlj2016种子液经过121℃，30min灭菌后再加入二次浸提液D中。

经检测，实验组速溶清火茶中总糖含量为对照组的46.96％。

实施例2一种含糖速溶清火茶及其制备方法

一种速溶清火茶，其制备方法包括如下步骤：

(1)将百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花经过挑选、去核、清洗并烘干后，按以下重量份数组成进行称取：百合18份，麦芽19份，莲子13份，山楂4份，金银花25份，菊花25份；

(2)将各原料分别粉碎至100目后混合，添加原料重量10倍的水在40℃下浸泡2h；之后进行超声浸提，超声条件为300W,频率30KHz、50℃、1h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度35kV/cm，脉冲频率200Hz，0.5h；

(3)4000rpm,离心10min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B；

(4)向料渣B中添加原料5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料重量0.05％的纤维素酶，0.02％的α-淀粉酶，0.03％的β-淀粉酶，0.005％的麦芽糖酶，0.005％糖化酶，于40℃酶解30min，之后升温至90℃灭酶10min得酶解液C；

(5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为300W,频率30KHz、50℃、20min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度35kV/cm，脉冲频率200Hz，20min得二次浸提液D；

(6)向二次浸提液D中按8％的接种量接入酿酒酵母tlj2016种子液进行发酵，同时添加终浓度为100g/L的葡萄糖，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵24h，发酵结束后测定发酵液中的谷胱甘肽含量为932.7mg/L；

所述的种子液培养条件：

取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；

摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；

(7)发酵结束后离心分离上清E；

(8)合并浸提液A及上清E，45℃下真空浓缩，得到至固形物含量约为40％的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶,此产品为实验组。

对照组：步骤(1)-(8)完全相同，仅将步骤(6)中酿酒酵母tlj2016种子液经过121℃，30min灭菌后再加入二次浸提液D中。

经检测，实验组速溶清火茶中总糖含量为对照组的55.74％。

实施例3一种低糖速溶清火茶及其制备方法

一种速溶清火茶，其制备方法包括如下步骤：

(1)将百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花经过挑选、去核、清洗并烘干后，按以下重量份数组成进行称取：百合20份，麦芽20份，莲子15份，山楂5份，金银花30份，菊花20份；

(2)将各原料分别粉碎至140目后混合，添加原料重量8倍的水在45℃下浸泡1.5h；之后进行超声浸提，超声条件为250W,频率35KHz、45℃、1.5h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度30kV/cm，脉冲频率500Hz，0.8h；

(3)4000rpm,离心8min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B；

(4)向料渣B中添加原料4倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料重量0.05％的纤维素酶，0.02％的α-淀粉酶，0.03％的β-淀粉酶，0.005％的麦芽糖酶，0.005％糖化酶，于35℃酶解40min，之后升温至90℃灭酶10min得酶解液C；

(5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为250W,频率35KHz、45℃、30min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度30kV/cm，脉冲频率500Hz，15min得二次浸提液D；

(6)向二次浸提液D中按6％的接种量接入酿酒酵母tlj2016种子液进行发酵，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20h，发酵结束后测定发酵液中的谷胱甘肽含量为556.8mg/L；

所述的种子液培养条件：

取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；

摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；

(7)发酵结束后离心分离上清E；

(8)合并浸提液A及上清E，45℃下真空浓缩，得到至固形物含量约为35％的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶,此产品为实验组。

对照组：步骤(1)-(8)完全相同，仅将步骤(6)中酿酒酵母tlj2016种子液经过121℃，30min灭菌后再加入二次浸提液D中。

经检测，实验组速溶清火茶中总糖含量为对照组的37.95％。

实施例4高糖条件下tlj2016发酵产GSH能力实验

(1)摇瓶培养

取tlj2016斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；

摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；

(2)5L发酵罐培养

将种子液按10％接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中，30℃,通气量6L/min,500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，总发酵时间为50h；

发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO4 10、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O 8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1,pH6.0；

发酵结束后，测定发酵液中GSH的含量为3308mg/L.

实施例5L-半胱氨酸耐受力实验

将出发菌株以及tlj2016斜面菌种各一环，分别接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养进行培养，在培养至12h时，向摇瓶中加入不同终浓度的L-半胱氨酸，再培养10h，测定细胞干重，结果表1、2；

摇瓶培养基(g/L)：(NH4)2SO4 6、葡萄糖20、K2HPO4·3H2O 3、KH2PO4 0.5、酵母粉11、MnSO4 0.1、KCL 0.1、FeSO4 0.1、MgSO4·7H2O 0.1，pH6.0；

表1：出发菌株L-半胱氨酸耐受力

L-半胱氨酸浓度mmol/L 0 5 10 15 20 40 出发菌株干重g/L 22.6 15.7 10.2 4.3 2.2 0.8 GSH浓度(mg/L) 35.6 46.7 43.2 40.7 37.9 25.3

表2tlj2016L-半胱氨酸耐受力

L-半胱氨酸浓度mmol/L 0 5 10 15 20 40 tlj2016干重g/L 25.7 28.5 23.6 21.2 20.6 18.7 GSH浓度(mg/L) 73.2 98.3 113.5 121.7 127.5 135.8

从表1、2的结果可以看出，对于出发菌株，培养基中添加L-半胱氨酸，细胞停止生长，并且开始自溶，导致GSH增长率随着L-半胱氨酸浓度的升高而降低；而低浓度L-半胱氨酸下，tlj2016仍能够缓慢生长，随着L-半胱氨酸浓度的提高，tlj2016菌株的细胞干重缓慢下降，而GSH浓度持续增长，这一结果将有利于GSH生产过程中通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸提促进GSH的生产。

实施例6耐盐能力实验

取tlj2016菌液1mL接种菌种于含有不同NaCl浓度的(含量梯度为0％、2％、5％、10％、15％、18％)的10mL YPD液体培养基(pH＝6.5)，置于30℃下分别培养24h，每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀，制备稀释度溶液，取0.1ml稀释液于YPD固体平板中涂布，于30℃生化培养箱中倒置培养36小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表3，可知该菌的耐盐浓度为18％，说明tlj2016不仅可以在常规环境中生存，在高盐条件下依然具有活力，可应用于酱油、腌制品等高盐食品加工过程中耗糖产谷胱甘肽。

表3耐盐能力检测(×107cfu/ml)

NaCl含量 0％ 2％ 5％ 10％ 15％ 18％原始菌株 5.16±0.42 4.38±0.42 2.15±0.21 0.12±0.11 0 0 tlj2016 5.33±0.28 5.10±0.71 4.83±0.42 3.98±0.33 2.57±0.48 0.83±0.15

资源描述

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611128816.8 (22)申请日 2016.12.09 (83)生物保藏信息 CGMCC No.12789 2016.07.15 (71)申请人北京市绿友食品有限公司地址 101109 北京市通州区漷县开发区 (72)发明人赵娇李国金温凯 (51)Int.Cl. A23F 3/34(2006.01) (54)发明名称一种清火速溶茶 (57)摘要本发明属于属于食品加工技术领域，具体涉及一种速溶清火茶及其制备方法。为了克服现有现有技术中的清火茶产品有。

2、效成分含量较低，或辅助成分过多使产品丧失其原有的香气与口味的问题，本发明提供一种茶香浓郁，且具有复合功能、成本低廉的速溶清火茶，所述清火茶是通过将超声浸提、高压脉冲电场浸提以及酶解浸提相结合，增加提取产物中的有效成分的同时在原料残渣中加入可发酵生产谷胱甘肽的酿酒酵母，以达到降低产品含糖量的同时生产谷胱甘肽，提高产品的抗氧化能力的目的。权利要求书2页说明书7页 CN 106720764 A 2017.05.31 CN 106720764 A 1.一种速溶清火茶，由以下重量份数组成的原料制备：百合15-20份，麦芽18-20份，莲子12-15份，山楂。

3、3-5份，金银花20-30份，菊花20-30份，其特征在于，所述速溶清火茶的制备方法如下： (1)将进过挑选、去核、清洗并烘干的百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花按照重量份数要求进行称取； (2)将各原料分别粉碎至80-140目后混合，添加原料总重量5-10倍的水在40-50下浸泡1-2h；之后进行超声浸提，超声条件为200-300W，频率30-40KHz、 40-50、 1-2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz， 0.5-1h； (3)4000rpm,离心5-10min分别收集上清浸。

4、提液A，及沉淀料渣B； (4)向料渣B中添加原料总重3-5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量0.05的纤维素酶， 0.02的 -淀粉酶， 0.03的 -淀粉酶， 0.005的麦芽糖酶， 0.005糖化酶，于 30-40酶解30-50min，之后升温至90灭酶10min得酶解液C； (5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200-300W,频率30-40KHz、 40-50、 20- 40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200- 1000Hz， 10-20min得二次浸提液D； (6)向二次浸提液D中按5-8的接种量接入。

5、酿酒酵母种子液进行发酵， 30,通气量 6L/min,罐压0.03MPa， 500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养， 30h后一次性添加终浓度为 25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18-24h； (7)发酵结束后离心分离上清E； (8)合并浸提液A及上清E， 45下真空浓缩，得到至固形物含量约为30-40的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶。 2.如权利要求1所述的一种速溶清火茶，其特征在于，所述的种子液培养条件如下：取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30培养 30h得种子液；摇瓶培养基：以g/L计， (NH4。

6、)2SO4 6、葡萄糖35、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0。 3.如权利要求1或2所述的一种速溶清火茶，其特征在于，接种酿酒酵母种子液时向二次浸提液D中添加终浓度为100g/L的葡萄糖。 4.如权利要求1所述的一种速溶清火茶，其特征在于，所述酿酒酵母具体为酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。 5.一种制备权利要求1所述速溶清火茶的方法，其特征在于，步骤如下：。

7、 (1)将进过挑选、去核、清洗并烘干的百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花按照如下重量份数组成称取：百合15-20份，麦芽18-20份，莲子12-15份，山楂3-5份，金银花20-30份，菊花20-30份，； (2)将各原料分别粉碎至80-140目后混合，添加原料总重量5-10倍的水在40-50下浸泡1-2h；之后进行超声浸提，超声条件为200-300W，频率30-40KHz、 40-50、 1-2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz， 0.5-1h； (3)4000rpm,离心5-。

8、10min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B； (4)向料渣B中添加原料总重3-5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量0.05的权利要求书 1/2 页 2 CN 106720764 A 2 纤维素酶， 0.02的 -淀粉酶， 0.03的 -淀粉酶， 0.005的麦芽糖酶， 0.005糖化酶，于 30-40酶解30-50min，之后升温至90灭酶10min得酶解液C； (5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200-300W,频率30-40KHz、 40-50、 20- 40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-。

9、 1000Hz， 10-20min得二次浸提液D； (6)向二次浸提液D中按5-8的接种量接入酿酒酵母种子液进行发酵， 30,通气量 6L/min,罐压0.03MPa， 500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养， 30h后一次性添加终浓度为 25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18-24h；所述酿酒酵母具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，保藏编号为 CGMCCNo.12789；所述的种子液培养条件：取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30培养 30h得种子液；摇瓶培养基：以g/L。

10、计， (NH4)2SO4 6、葡萄糖35、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0； (7)发酵结束后离心分离上清E； (8)合并浸提液A及上清E， 45下真空浓缩，得到至固形物含量约为30-40的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶。 6.如权利要求5所述的制备速溶清火茶的方法，其特征在于，接种酿酒酵母种子液时向二次浸提液D中添加终浓度为100g/L的葡萄糖。权利要求书 2/2 页 3 CN 106720764 A 3 一种清火速溶茶技。

11、术领域： 0001 本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种清火速溶茶。背景技术： 0002 “上火” 为民间俗语，又称 “热气” ，可以从中医理论解释，属于中医热证范畴。中医认为人体阴阳失衡，内火旺盛，即会上火。因此所谓的 “火” 是形容身体内某些热性的症状，而上火也就是人体阴阳失衡后出现的内热证候，具体症状如眼睛红肿、口角糜烂、尿黄、牙痛、咽喉痛等。“上火” 在干燥气候及连绵湿热天气时更易发生。解决方法是 “去火” ，即中医的清热泻火法，可服用滋阴、清热、解毒消肿的食物或药物。 0003 百合，又名强蜀、番韭、山丹、倒仙、重迈、中庭。

12、、摩罗、重箱、中逢花、百合蒜、大师傅蒜、蒜脑薯、夜合花等，中医学认为，百合味甘微苦，性平，入心、肺经，有润肺止咳、清心安神之功，可用于热病后余热未消、虚烦惊悸、神志恍惚和肺痨久咳、咯血、肺脓疡等症；或因过食煎、炒、油炸食品后觉得燥热时食用。 0004 麦芽，为禾本科植物大麦的成熟果实经发芽干燥的炮制加工品。将麦粒用水浸泡后，保持适宜温、湿度，待幼芽长至约5mm时，晒干或低温干燥。麦芽，性甘，平。归脾、胃经、肝经，可用于肝郁气滞，胸胁胀闷，及肝脾不各，嗳气少食等症。 0005 莲子，是睡莲科水生草本植物莲的种。

13、子。又称白莲、莲实、莲米、莲肉。莲，又称荷芙蓉、水芝。莲子具有清心醒脾，补脾止泻，养心安神明目、补中养神，止泻固精，益肾涩精止带，滋补元气的功效。莲子作为保健药膳食疗时，一般是不弃莲子芯的，莲子芯是莲子中央的青绿色胚芽，味苦，有清热、固精、安神、强心之功效。 0006 山楂，也叫山里红、红果、胭脂果，为蔷薇科植物山里红或山楂的干燥成熟果实，质硬，果肉薄，酸甜适中，风味独特。山楂味酸性温，气血并走，化瘀而不伤新血，行滞气而不伤正气，应用于肉食积滞证，泻痢腹痛、疝气痛、瘀滞腹痛胸痛、恶露不尽、痛经、吐血、。

14、便血等。山楂含有大量的维生素C与微量元素，能够扩张血管，降低血压，降低血糖，能够改善和促进胆固醇排泄而降低血脂，预防高血脂的发生，山楂能够开胃促进消化，山楂所含有的脂肪酶也能够促进脂肪的消化。山楂所含有的黄酮类与维生素c、胡萝卜素等物质能够阻断并减少自由基的生成，可增强机体的免疫力，延缓衰老，防癌抗癌。山楂能够活血化瘀，帮助消除瘀血状态，辅助治疗跌打损伤。近几年来，山楂在降血脂、降血压、抗脑血及其作用机制方面取得了重大进展。 0007 金银花，又名忍冬，自古被誉为清热解毒的良药。它性甘寒气芳香，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。。

15、金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，均效果显著。 0008 菊花，是菊科植物，性甘、微寒，是中国常用中药，具有散风热、平肝明目、消咳止痛的功效，用于治疗头痛眩晕、目赤肿痛、风热感冒、咳嗽等病症效果显著。 0009 而上述成分也常出现在现有的清火产品中。 0010 公布号为CN 102144694 A的中国发明专利一种山楂麦芽茶公布了一种山楂麦说明书 1/7 页 4 CN 106720764 A 4 芽茶，由生山楂、炒麦芽、炒谷芽和炒莱菔子加工而成，所述蒲公英、菊花、桑叶、。

16、夏枯草、紫花地丁、野菊花的重量比为3 1 1 1，分别将净选的所述原料干燥、筛选，再将加工过的原料按比例称量配齐、混合均匀、灭菌消毒、装纸袋、灌装及包装后，即为本发明产品。它具有消食化积之功效。 0011 公布号为CN 105724675 A的中国发明专利清火茶提供了一种清火茶，由以下重量份数的原料配制而成：金银花2份、菊花1份、胖大海1份、麦冬3份、藏青果1份、罗汉果1份、射干1份、枸杞子1份和甘草1份。本发明的优点在于采用科学方法与传统中医药理论相结合，具有清热解毒、滋阴润燥的功效，常饮可防治声音嘶哑、咽喉肿痛、各类疮疖肿毒。

17、等，其制备方法简单，成本低，适合规模化工业生产。 0012 公布号为CN 105456677 A的中国发明专利一种芦荟清火排毒胶囊，以芦荟、莲子、百合、青木香、槐花作为原料，按适宜的配比制备成的保健排毒胶囊。该胶囊含多种营养成分和有益人体健康的成分，长期食用该胶囊，能清宿便、清热解毒、清除人体多种毒素、使人口、胃舒适，口气清新，促进身体健康。可作为一种新的保健品供长期宿便不清、体内毒素较多的人群服用，起到美容保健的效果，特别受到爱美女士的欢迎。 0013 但是现有技术中的产品要么有效成分含量较低，要么过多的追求复合功能而添加其他的辅。

18、助成分，使得现有的产品逐渐丧失了其原有的香气与口味。此外，麦芽、莲子以及山楂等成分都有较高的含糖量，不适于所有人群食用。本发明为了克服上述问题将提供一种茶香浓郁，且具有复合功能、成本低廉的速溶清火茶。发明内容： 0014 为了解决上述技术问题，本发明将提供一种速溶清火茶，所述速溶清火茶由以下重量份数的原料制备而成：百合15-20份，麦芽18-20份，莲子12-15份，山楂3-5份，金银花 20-30份，菊花20-30份； 0015 所述速溶清火茶的制备方法如下： 0016 (1)将进过挑选、去核、清洗并烘干的百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、。

19、菊花按照重量份数要求进行称取； 0017 (2)将各原料分别粉碎至80-140目后混合，添加原料总重量5-10倍的水在40-50 下浸泡1-2h；之后进行超声浸提，超声条件为200-300W，频率30-40KHz、 40-50、 1-2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200-1000Hz， 0.5-1h； 0018 (3)4000rpm,离心5-10min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B； 0019 (4)向料渣B中添加原料总重3-5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量 0.05的纤维素酶， 0.02的 -淀粉酶， 0。

20、.03的 -淀粉酶， 0.005的麦芽糖酶， 0.005 糖化酶，于30-40酶解30-50min，之后升温至90灭酶10min得酶解液C； 0020 (5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200-300W,频率30-40KHz、 40-50、 20- 40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25-35kV/cm，脉冲频率200- 1000Hz， 10-20min得二次浸提液D； 0021 (6)向二次浸提液D中按5-8的接种量接入酿酒酵母种子液进行发酵， 30,通气量6L/min,罐压0.03MPa， 500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养， 30h后一。

21、次性添加终浓度为 25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18-24h；说明书 2/7 页 5 CN 106720764 A 5 0022 (7)发酵结束后离心分离上清E； 0023 (8)合并浸提液A及上清E， 45下真空浓缩，得到至固形物含量约为30-40的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶； 0024 进一步地，接种酿酒酵母种子液时向二次浸提液D中添加终浓度为100g/L的葡萄糖； 0025 所述的种子液培养条件： 0026 取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30 培养30h得种子液； 0027 摇瓶培养基(g/L。

22、)： (NH4)2SO4 6、葡萄糖35、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0； 0028 所述酿酒酵母菌株具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，该菌株已于保藏于2016年7月15日中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.12789，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101； 0029 所述酿酒酵母tlj2016是从一株宁夏果。

23、园中分离得到的酿酒酵母出发菌株经以下步骤得到： 0030 原始出发菌种试管活化硫酸二乙酯(DES)诱变高渗平板筛选亚硝基胍 (NTG)诱变筛选高渗平板初筛摇瓶筛选发酵复筛(产GSH能力)传代稳定性试验。 0031 经过诱变后获得的菌株tlj2016其葡萄糖耐受能力以及L-半胱氨酸耐受能力均得到提高，一方面， tlj2016对葡萄糖的耐受能力达到300g/L，在高浓度葡萄糖培养下能够提高细胞密度，另一方面L-半胱氨酸耐受能力的提高将有利于GSH在胞内大量合成，从而提高菌株大规模生产GSH的能力。 0032 由于所述酿酒酵母tlj2016是一株可在外源添加L-半胱氨酸条件下大量合成。

24、谷胱甘肽的酵母菌，将经过初步浸提之后的料渣经酶解后作为发酵基质，充分利用其酶解产物，使用酿酒酵母tlj2016在添加L-半胱氨酸的条件下发酵生产谷胱甘肽，发酵完成后，将发酵液分离，并于之前获得的浸提液进行合并，浓缩后冻干的速溶清火茶产品，所得产品不仅具有较高的有效成分，而且含有谷胱甘肽，增加了产品的抗氧化功能，降低了产品的含糖量。 0033 有益效果： 0034 1、本发明所提供的速溶清火茶，将超声浸提、高压脉冲电场浸提以及酶解浸提相结合，能够增加提取产物中的有效成分，茶香浓郁，营养丰富；此外本产品仅以优质百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、。

25、菊花为提取原料，不添加任何辅助成分，充分保留了原有的风味； 0035 2、本发明将经过初次浸提的原料渣经过酶解后作为发酵基质，生产谷胱甘肽，一方面充分利用原料酶解产生的葡萄糖，实现了废物利用，节省成本，提高了经济效益，同时降低产品的含糖量，另一方面发酵生成的谷胱甘肽，谷胱甘肽作为重要的抗氧化剂和自由基清除剂，可以与体内的自由基、重金属等结合，从而将机体内的有害物质转化为无害物质排出体外，此外，还可以提高人体免疫力，维护健康，抗衰老，在老人迟缓化的细胞上发挥功效； 0036 3、本发明可提供该两种风味的产品，发酵过程中添加葡萄糖的产品中谷胱甘肽。

26、含量高，且成品口味微甜，适合健康人群饮用；未添加葡萄糖的产品中谷胱甘肽含量略低，茶说明书 3/7 页 6 CN 106720764 A 6 香更浓郁，糖分含量低，适合三高病人等对糖摄入量有要求或有减肥需求的人群饮用。具体实施方式： 0037 实施例1一种低糖速溶清火茶及其制备方法 0038 一种速溶清火茶，其制备方法包括如下步骤： 0039 (1)将百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花经过挑选、去核、清洗并烘干后，按以下重量份数组成进行称取：百合15份，麦芽18份，莲子12份，山楂3份，金银花20份，菊花30份； 0040 (2)将各原料分。

27、别粉碎至80目后混合，添加原料总重量5倍的水在50下浸泡1h；之后进行超声浸提，超声条件为200W,频率40KHz、 40、 2h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25kV/cm，脉冲频率1000Hz， 0.5h； 0041 (3)4000rpm，离心5min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B； 0042 (4)向料渣B中添加原料3倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料总重量0.05的纤维素酶， 0.02的 -淀粉酶， 0.03的 -淀粉酶， 0.005的麦芽糖酶， 0.005糖化酶，于30 酶解50min，之后升温至90灭酶10min得酶解液C； 0043。

28、 (5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为200W,频率40KHz、 40、 40min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度25kV/cm，脉冲频率1000Hz， 10min得二次浸提液D； 0044 (6)向二次浸提液D中按5的接种量接入酿酒酵母tlj2016种子液进行发酵， 30 ,通气量6L/min,罐压0.03MPa， 500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养， 30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵18h；发酵结束后经检测，发酵液中含有 375.3mg/L谷胱甘肽； 0045 所述的种子液培养条件： 0046 取酿酒酵母tl。

29、j2016斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中 150rpm,30培养30h得种子液； 0047 摇瓶培养基(g/L)： (NH4)2SO4 6、葡萄糖35、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0； 0048 (7)发酵结束后离心分离上清E； 0049 (8)合并浸提液A及上清E， 45下真空浓缩，得到至固形物含量为30的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶，此产品为实验组。 0050 对照组：步骤(1)-(8)完全相同，仅。

30、将步骤(6)中酿酒酵母tlj2016种子液经过121 ， 30min灭菌后再加入二次浸提液D中。 0051 经检测，实验组速溶清火茶中总糖含量为对照组的46.96。 0052 实施例2一种含糖速溶清火茶及其制备方法 0053 一种速溶清火茶，其制备方法包括如下步骤： 0054 (1)将百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花经过挑选、去核、清洗并烘干后，按以下重量份数组成进行称取：百合18份，麦芽19份，莲子13份，山楂4份，金银花25份，菊花25份； 0055 (2)将各原料分别粉碎至100目后混合，添加原料重量10倍的水在40下浸泡2h；之后进行超声浸提，。

31、超声条件为300W,频率30KHz、 50、 1h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度35kV/cm，脉冲频率200Hz， 0.5h； 0056 (3)4000rpm,离心10min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B；说明书 4/7 页 7 CN 106720764 A 7 0057 (4)向料渣B中添加原料5倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料重量0.05的纤维素酶， 0.02的 -淀粉酶， 0.03的 -淀粉酶， 0.005的麦芽糖酶， 0.005糖化酶，于40 酶解30min，之后升温至90灭酶10min得酶解液C； 0058 (5)将酶解液C进行二次。

32、浸提，超声条件为300W,频率30KHz、 50、 20min；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度35kV/cm，脉冲频率200Hz， 20min得二次浸提液D； 0059 (6)向二次浸提液D中按8的接种量接入酿酒酵母tlj2016种子液进行发酵，同时添加终浓度为100g/L的葡萄糖， 30,通气量6L/min,罐压0.03MPa， 500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养， 30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵24h，发酵结束后测定发酵液中的谷胱甘肽含量为932.7mg/L； 0060 所述的种子液培养条件： 0061 取酿。

33、酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30 培养30h得种子液； 0062 摇瓶培养基(g/L)： (NH4)2SO4 6、葡萄糖35、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0； 0063 (7)发酵结束后离心分离上清E； 0064 (8)合并浸提液A及上清E， 45下真空浓缩，得到至固形物含量约为40的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶,此产品为实验组。 0065 对照组：步骤(1)-(8)完全相同，仅将。

34、步骤(6)中酿酒酵母tlj2016种子液经过121 ， 30min灭菌后再加入二次浸提液D中。 0066 经检测，实验组速溶清火茶中总糖含量为对照组的55.74。 0067 实施例3一种低糖速溶清火茶及其制备方法 0068 一种速溶清火茶，其制备方法包括如下步骤： 0069 (1)将百合、麦芽、莲子、山楂、金银花、菊花经过挑选、去核、清洗并烘干后，按以下重量份数组成进行称取：百合20份，麦芽20份，莲子15份，山楂5份，金银花30份，菊花20份； 0070 (2)将各原料分别粉碎至140目后混合，添加原料重量8倍的水在45下浸泡1.5h；之后进行超声浸提，。

35、超声条件为250W,频率35KHz、 45、 1.5h；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度30kV/cm，脉冲频率500Hz， 0.8h； 0071 (3)4000rpm,离心8min分别收集上清浸提液A，及沉淀料渣B； 0072 (4)向料渣B中添加原料4倍重量的水，搅拌均匀，同时加入原料重量0.05的纤维素酶， 0.02的 -淀粉酶， 0.03的 -淀粉酶， 0.005的麦芽糖酶， 0.005糖化酶，于35 酶解40min，之后升温至90灭酶10min得酶解液C； 0073 (5)将酶解液C进行二次浸提，超声条件为250W,频率35KHz、 45、 30mi。

36、n；之后进行高压脉冲电场浸提，脉冲条件为电场强度30kV/cm，脉冲频率500Hz， 15min得二次浸提液D； 0074 (6)向二次浸提液D中按6的接种量接入酿酒酵母tlj2016种子液进行发酵， 30 ,通气量6L/min,罐压0.03MPa， 500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养， 30h后一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20h，发酵结束后测定发酵液中的谷胱甘肽含量为556.8mg/L； 0075 所述的种子液培养条件： 0076 取酿酒酵母斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30 说明书 5/。

37、7 页 8 CN 106720764 A 8 培养30h得种子液； 0077 摇瓶培养基(g/L)： (NH4)2SO4 6、葡萄糖35、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0； 0078 (7)发酵结束后离心分离上清E； 0079 (8)合并浸提液A及上清E， 45下真空浓缩，得到至固形物含量约为35的浓缩液，继而进行冷冻干燥，得速溶清火茶,此产品为实验组。 0080 对照组：步骤(1)-(8)完全相同，仅将步骤(6)中酿酒酵母tlj2016种子液。

38、经过121 ， 30min灭菌后再加入二次浸提液D中。 0081 经检测，实验组速溶清火茶中总糖含量为对照组的37.95。 0082 实施例4高糖条件下tlj2016发酵产GSH能力实验 0083 (1)摇瓶培养 0084 取tlj2016斜面菌种一环，接入装有30mL摇瓶培养基的250mL摇瓶中150rpm,30 培养30h得种子液； 0085 摇瓶培养基(g/L)： (NH4)2SO4 6、葡萄糖35、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0； 0086 。

39、(2)5L发酵罐培养 0087 将种子液按10接种量，接入装有3L发酵培养基的发酵罐中， 30,通气量6L/ min,500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的 L-半胱氨酸，总发酵时间为50h； 0088 发酵培养基(g/L)： (NH4)2SO4 10、葡萄糖100、 K2HPO43H2O 8、 KH2PO40.5、酵母粉 11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1,pH6.0； 0089 发酵结束后，测定发酵液中GSH的含量为3308mg/L. 0090 实施例5L。

40、-半胱氨酸耐受力实验 0091 将出发菌株以及tlj2016斜面菌种各一环，分别接入装有30mL摇瓶培养基的250mL 摇瓶中150rpm,30培养进行培养，在培养至12h时，向摇瓶中加入不同终浓度的L-半胱氨酸，再培养10h，测定细胞干重，结果表1、 2； 0092 摇瓶培养基(g/L)： (NH4)2SO4 6、葡萄糖20、 K2HPO43H2O 3、 KH2PO4 0.5、酵母粉11、 MnSO4 0.1、 KCL 0.1、 FeSO4 0.1、 MgSO47H2O 0.1， pH6.0； 0093 表1：出发菌株L-半胱氨酸耐受力 0094 L-半胱氨酸浓度mmol。

41、/L0510152040 出发菌株干重g/L22.615.710.24.32.20.8 GSH浓度(mg/L)35.646.743.240.737.925.3 0095 表2tlj2016L-半胱氨酸耐受力 0096 L-半胱氨酸浓度mmol/L0510152040 tlj2016干重g/L25.728.523.621.220.618.7 GSH浓度(mg/L)73.298.3113.5121.7127.5135.8 0097 从表1、 2的结果可以看出，对于出发菌株，培养基中添加L-半胱氨酸，细胞停止生说明书 6/7 页 9 CN 106720764 A 9 长，并且开始自溶，。

42、导致GSH增长率随着L-半胱氨酸浓度的升高而降低；而低浓度L-半胱氨酸下， tlj2016仍能够缓慢生长，随着L-半胱氨酸浓度的提高， tlj2016菌株的细胞干重缓慢下降，而GSH浓度持续增长，这一结果将有利于GSH生产过程中通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸提促进GSH的生产。 0098 实施例6耐盐能力实验 0099 取tlj2016菌液1mL接种菌种于含有不同NaCl浓度的(含量梯度为0、 2、 5、 10、 15、 18)的10mL YPD液体培养基(pH6.5)，置于30下分别培养24h，每个处理3 个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀，制备稀释度。

43、溶液，取0.1ml稀释液于YPD固体平板中涂布，于30生化培养箱中倒置培养36小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表3，可知该菌的耐盐浓度为18，说明tlj2016不仅可以在常规环境中生存，在高盐条件下依然具有活力，可应用于酱油、腌制品等高盐食品加工过程中耗糖产谷胱甘肽。 0100 表3耐盐能力检测(107cfu/ml) 0101 NaCl含量025101518 原始菌株5.160.424.380.422.150.210.120.1100 tlj20165.330.285.100.714.830.423.980.332.570.480.830.15 说明书 7/7 页 10 CN 106720764 A 10 。

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