利用枯草芽孢杆菌PTS394可湿性粉剂防治作物土传病害的方法.pdf

本发明公开一种利用枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂防治作物土传病害的方法，步骤如下：播种时，将枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂与育苗基质按质量比1:10-100混合后播种；定植时，在定植沟或穴中均匀撒施PTS-394可湿性粉剂；定植后10-15天，再用PTS-394可湿性粉剂稀释后灌根，用以防治作物土传病害；本发明打破现有生物药剂田间使用混乱的现状，针对枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂，构建田间高效使用技术，达到既稳定高效防治作物土传病害，又能防止药害，降低用药成本，改善生态环境。

1.一种利用枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂防治作物土传病害的方法，其特征在于，具体步骤如下：A）播种时，将枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂与育苗基质按质量比1:10-100混合后播种；B）定植时，在定植沟或穴中均匀撒施PTS-394可湿性粉剂，4-6克/棵；C）定植后10-15天，PTS-394可湿性粉剂用水按1:100-1000的质量比稀释后灌根，500ml/棵。 2.根据权利要求1所述利用枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂防治作物土传病害的方法，其特征在于，所述作物土传病害是指：茄果类蔬菜青枯病、枯萎病、辣椒立枯病、草莓根腐病。

技术领域

本发明涉及生防菌剂田间使用技术，特别是一种利用枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂 防治作物土传病害的方法。

背景技术

设施蔬菜在我国农业及农村经济发展中的有着重要的地位，是现代农业生产中的支柱产 业和农民增收的主要途径。江苏省近几年设施蔬菜种植面积稳定在400万亩左右，占蔬菜种 植总面积的20％。然而高产、连作的设施蔬菜种植布局同时也为各种病害提供了充裕的营养 和繁殖条件，近年来由设施蔬菜土传病害(茄果类蔬菜青枯病、枯萎病、辣椒立枯病、草莓 根腐病等)频繁暴发，严重威胁设施蔬菜生产的可持续发展。

土传病害发生的主要原因是设施蔬菜连续耕作导致根际土壤微生物种群结构被破坏，土著 有益菌大幅度减少，土壤中病原菌菌量逐年增加，进而导致土壤养分比例和数量严重失调(杨 秀荣等,2008)。目前，生产上防治设施蔬菜土传病害主要依靠化学农药，但防治效果一直不 理想，土传病害发生依然严重，同时化学防治易造成设施生态环境污染，增加蔬菜农产品有 毒化学物质的残留，对人类健康带来严重危害。近年来使用生物防治技术控制土传病害，达 到生态修复的策略越来越受到国内外科研人员的关注，并初见成效。Janvier等(2007年)研 究表明，土壤中有益微生物的群落分布和抑制病原菌能力呈正相关；随着土壤中有益菌密度 的增加，香蕉枯萎病菌Fusariumoxysporumf.sp.cubense的繁殖受到抑制，病害发生率 明显下降；Pankhurst等(2008年)发现根际土壤中若存在大量有益细菌和真菌，对小麦纹枯 菌(Rhizoctoniasolani)有显著的抑制作用；吴凤芝(2009年)等研究发现，提高土壤微生 物群落的多样性可降低黄瓜角斑病、白粉病、霜霉病和枯萎病的病情指数和尖孢镰刀菌的数 量，提高黄瓜产量。

江苏省农业科学院植物保护研究所2006年以来开展设施环境中重要土传病害病原菌的 种类、生物学特性和发病规律的研究，以几种重要土传病害(茄果类蔬菜青枯病、枯萎病、 辣椒立枯病、草莓根腐病等)为靶标，建立生防菌资源库，获得一株高效生防菌-枯草芽孢杆 菌(Bacillussubtilis)PTS-394(中国专利201110339098.X)，并制备相应的生防菌剂， 同时在此基础上，研制开发枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂，优化其发酵工艺(中国专利 201310081080.3)；目前该菌株已于2013年保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.8085。该菌株在实验室，对枯萎病和青枯病等多种 病原菌均表现出较好的防治作用，但是近年来在田间推广应用时，农户往往各自凭经验使用 PTS-394可湿性粉剂，用药时期、用药方式和用药剂量混乱，没有统一标准，多数情况下只 在定植时灌根或拌土或喷雾处理，播种时和定植后一般不用药，亩用药量10-40公斤均有， 造成各地田间土传病害防治效果不稳定(40-85％)，甚至还发生苗期药害。目前，如何田间高 效使用枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂已成为制约该菌剂推广应用的重要因素。

发明内容

针对目前枯草芽孢杆菌PTS-394缺乏实际可行的田间高效使用技术(用药时期、用药方 式和用药剂量)，造成其田间防治土传病害效果不稳定的问题，提供一种利用枯草芽孢杆菌 PTS-394可湿性粉剂防治作物土传病害的方法，本发明是这样实现的：

A)播种前，将枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂与育苗基质按质量比1:10-100混合后，再 按照常规方法进行播种；

B)定植前，在定植沟或穴中均匀撒施PTS-394可湿性粉剂，4-6克/棵；

C)定植后10-15天，PTS-394可湿性粉剂用水按1:100-1000的质量比稀释后灌根，500ml/ 棵；

本发明所述可湿性粉剂为200亿枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂。

本发明所述的PTS-394可湿性粉剂田间使用技术可用于防治茄果类蔬菜青枯病、枯萎病、 辣椒立枯病、草莓根腐病等多种作物土传病害。

本发明的优点在于：在作物播种至收获期间，构建枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂防 治多种作物土传病害田间高效使用技术，达到利用枯草芽孢杆菌PTS-394稳定高效防治作物 土传病害；减少化学药剂用药量、降低用药成本；同时改善生态环境、减少化学药剂在农产 品中残留量的目的。

具体实施方式

实施例1枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂活菌量检测

制备方法采用中国专利201110339098.X说明书实施例4所公开的方法，即按照下列重量 百分比备料：枯草芽孢杆菌PTS-394活菌原粉：40％；NNO(亚甲基二萘磺酸钠)：7％；聚 乙二醇：3％；十二烷基苯磺酸钠：5％；轻质碳酸钙：45％；

制备过程：将枯草芽孢杆菌PTS-394活菌原粉等按上述比例置于混合器中，混合均匀后， 经气流粉碎机粉碎至325目过筛，包装，即成200亿枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂。

将成品置于常温下、阴凉处保藏，分别于当天、6个月、12个月、18个月和24个月后采 用平板稀释法，检测可湿性粉剂中活菌含量。每次取样5份，每稀释处理重复3皿；检测结 果如表1所示：

表1枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂产品活菌量检测

104cfu/g 106cfu/g 108cfu/g 109cfu/g 1010cfu/g

当天 多 多 250 31 2 6个月 多 多 249 29 2 12个月 多 多 213 28 2 18个月 多 多 181 19 2 24个月 多 多 127 13 1

由表1可见，枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂1年贮藏期内菌落数变化不大,但超过1 年，菌落数开始缓慢减少；两年后菌落数下降为1.3×1010cfu/g；这一表明：枯草芽孢杆 菌PTS-394可湿性粉剂保质期可长达两年，符合中华人民共和国农药检定所对生物农药“贮 存稳定性及温度、贮存条件对产品生物活性的影响” (http://www.chinapesticide.gov.cn/nydjzlgd/view.html，农业部第10号令第四章：特 殊新农药登记(微生物农药))。

实施例2枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间防治设施番茄青枯病试验

试验时间：2010-2012，两次重复。

试验地点：江苏省连云港市赣榆县沙河镇设施番茄大棚内进行。

试验品种：当地主栽品种，京番一号。

试验药剂：实施例1获得的枯草芽孢杆菌PTS-394；对照药剂为50％多菌灵，购自江苏辉丰 农化股份有限公司。

育苗基质：蔬菜育苗基质(连云港恒奥达肥料科技有限公司)。

试验方法：选取番茄青枯病自然发病较重的4个温室大棚为试验大棚，试验用苗按常规操 作，经穴盘育苗和定植两个阶段。播种时将枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂和育苗基质分 别按1:5、1:10、1:50、1:100和1:200的五个不同质量比进行混合，同时设清水对照，常规 穴盘落种；穴盘规格10x5孔，0.8厚度，底径3.2x1.7；落种后40天调查出苗率、苗长和苗 鲜重。

定植时在定植沟中分别按照2克/棵苗、4克/棵苗、6克/棵苗、8克/棵苗和10克/棵 苗五个不同用量撒施枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂，然后再移栽番茄苗；定植后10-15 天，分别按照质量比1:50、1:100、1:1000、1:2000四个比例用水稀释枯草芽孢杆菌PTS-394 可湿性粉剂进行灌根，每棵苗灌根500毫升；每个处理小区约400棵苗，重复2次，处理小 区随机分布；同时设立清水对照；当对照小区番茄苗发病时调查各处理的发病情况，计算防 效。

发病率＝调查小区发病株数/调查总株数x100；

防效＝(处理小区的发病率-对照小区的发病率)/对照小区的发病率；

试验结果见表2和表3：

表2枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂和育苗基质不同比例混合后番茄苗的出苗率和生长

影响

处理 种子数 出苗数 出苗率 苗长(cm) 苗鲜重(g) 1:5 105 71 67.62b 18.6b 3.9b 1:10 105 90 85.71a 26.8a 5.0a 1:50 105 95 90.48a 27.5a 5.4a 1:100 105 94 89.52a 25.1a 5.1a 1:200 105 95 90.48a 20.4ab 3.9b 清水对照 105 95 90.48a 20.5ab 3.8b

注：同一列不同小写字母表明呈显著性差异。

表3枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂定植及定植后不同施用量对番茄青枯病的防治

效果

处理 1:50 1:100 1:1000 1:2000 2克/棵苗 66.07b 60.53b 42.22b 21.72b 4克/棵苗 85.57a 85.21a 79.53a 67.08a 6克/棵苗 87.95a 87.34a 81.59a 71.44a 8克/棵苗 88.19a 87.95a 81.93a 72.14a 10克/棵苗 87.99a 87.20a 80.05a 69.27a

注：同一列不同小写字母表明呈显著性差异。

由表2可见，枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂和育苗基质进行混合时，1:5比例的处理 有药害，出苗率仅为67.62％，与清水对照处理相比呈显著性差异。1:200比例的处理出苗率、 苗长和苗鲜重均与清水对照处理相当；1:10、1:50和1:100的3个处理出苗率在 85.71-90.48％，也与清水对照处理相当，但是苗长和苗鲜重均呈显著性增长，表明枯草芽孢 杆菌PTS-394可湿性粉剂和育苗基质进行混合时1:10、1:50和1:100比例对番茄植株具有显 著的促生作用。

表3的结果表明：定植时以2克/棵苗的用量撒施枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂，防 治番茄青枯病的效果较低，仅为21.72-66.07％。施用量8-10克/棵苗的处理与4-6克/棵苗 的处理相比防效增加不显著，考虑生产者用药成本负担，优选4-6克/棵苗的用量；定植后 10-15天，1:50-1:1000的三个比例用水稀释枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂进行灌根，防 治青枯病效果显著；而以1:2000比例稀释枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂进行灌根，防效 下降很多。考虑生产者用药成本负担，优选使用1:100-1000的比例稀释枯草芽孢杆菌PTS-394 可湿性粉剂后灌根。

因此：A、播种前，将实施例1获得的枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂与育苗基质按照 1:10-100的比例均匀混合；

B、定植前在起好的定植沟或穴中按照4-6克/棵苗的比例均匀撒施枯草芽孢杆菌PTS-394 可湿性粉剂，本实施例中定植密度为3000棵/亩，因此定植时枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性 粉剂每亩用量12-18公斤；

C、定植后10-15天，按照1:100-1000的比例用水稀释枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂 进行灌根，每棵苗灌根500毫升。

实施例3枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间防治设施辣椒青枯病和番茄枯萎病试验

试验时间：2012-2015三年试验；

试验地点：江苏省宿迁市沭阳县华冲镇设施辣椒、番茄大棚内进行；

试验品种：当地主栽品种，苏椒17号和京番一号；

试验药剂：实施例1获得的枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂；对照药剂为50％多菌灵， 购自江苏辉丰农化股份有限公司。

育苗基质：播种育苗有机基质(镇江培蕾基质科技发展有限公司)。

试验方法：选取辣椒青枯病和番茄枯萎病自然发病较重的2个温室大棚为试验大棚，试验 用苗按常规操作，经穴盘育苗和定植两个阶段。播种时将枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂 和育苗基质按1:50的比例进行混合，常规落种；定植时在定植沟中按照6g/棵的用量撒施 枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂后，再移栽辣椒或番茄苗；定植后隔15天，按照1:100的 比例用水稀释枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂进行灌根，每棵苗灌根500毫升；每个处理 小区约400棵苗，重复2次，处理小区随机分布；对比药剂50％多菌灵使用方法相同，按产 品说明书推荐剂量使用；同时设立清水对照组。

对照小区辣椒或番茄苗发病时调查发病情况，计算防效，

发病率＝调查小区发病株数/调查总株数x100；

防效＝(处理小区的发病率-对照小区的发病率)/对照小区的发病率；

试验结果如表4所示：

表4枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间对辣椒青枯病和番茄枯萎病的防效测定

注：同一列不同小写字母表明呈显著性差异。

由表4可见，对照病田中辣椒青枯病和番茄枯萎病的发病率高，分别为62.13％和54.08％。 枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间使用技术对辣椒青枯病和番茄枯萎病田间防效分别为 81.81％和85.98％，而化学药剂多菌灵的防效分别为21.68％和48.72％，枯草芽孢杆菌PTS-394 可湿性粉剂田间使用技术的防效明显高于常规化学药剂多菌灵。

试验结果表明：枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间使用技术能有效防治辣椒青枯病和 番茄枯萎病。

实施例4枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间对辣椒立枯病苗期防效测定试验

试验时间：2013年1月；

试验地点：江苏省淮安市清浦区黄码镇进行；

试验品种：当地主栽品种，苏椒15号；

试验药剂：实施例1获得的枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂；对照药剂为50％百菌清， 购自江苏百灵农化有限公司；

育苗基质：长农有机基质，购自淮安市清浦区长农有机基质肥厂；

试验方法：试验用苗按常规操作，播种时将枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂和育苗基质 分别按质量比1:1、1:10、1:100和1:200的比例进行混合；同时设立对照药剂组和清水对照 组；药剂组使用50％百菌清，使用方法同PTS-394可湿性粉剂，按产品说明书推荐剂量与基 质混合。

常规穴盘落种，穴盘规格96孔，0.6厚度，底径4.8x2.1；落种后40天调查发病率，计算 防效；

发病率＝发病株数/调查总株数x100；

防效＝(处理发病率-对照发病率)/对照发病率；

试验结果见表5：

表5枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间对苗期辣椒立枯病防效测定结果

注：同一列不同小写字母表明呈显著性差异。

由表5可见，PTS-394可湿性粉剂与基质1:1混合对植株有药害，虽然辣椒立枯病发病率 很低，但是植株受药害影响，生长停滞，失去价值；PTS-394可湿性粉剂与基质1:200混合 处理对辣椒立枯病的防效与对照药剂百菌清相当；PTS-394可湿性粉剂与基质1:10-1:100混 合，对辣椒立枯病的防效为74.70-85.30％，明显高于对照化学药剂百菌清的防效(54.66％)； 试验结果表明：PTS-394可湿性粉剂与基质按质量比1:10-100混合处理能有效防治苗期辣椒 立枯病。

实施例5枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间防治草莓根腐病的效果试验

试验时间:2015年8月；

试验地点：江苏省农业科学院溧水植物基地；

试验品种：红颊，由江苏省农业科学院园艺研究所直接提供草莓苗；

试验药剂：实施例1获得的枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂；对照药剂为10％苯醚甲环唑水 分散粒剂，购自先正达股份有限公司，是生产上防治根腐病的常见化学药剂。

试验方法：定植时在定植沟中分别按照4g/棵和6g/棵的用量撒施枯草芽孢杆菌PTS-394 可湿性粉剂，移栽草莓苗；定植后隔15-20天，再分别按照1:100和1:500的两个比例用水 稀释枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂进行灌根，每棵苗灌根500毫升；同时设立对照药剂 和清水对照；对照药剂为10％苯醚甲环唑水分散粒剂，使用方法同枯草芽孢杆菌PTS-394可 湿性粉剂，按产品说明书推荐剂量使用；每个处理小区约300棵苗，重复2次，处理小区随 机分布；对照小区辣椒或番茄苗发病时调查发病情况，计算防效：

发病率＝调查小区发病株数/调查总株数x100；

防效＝(处理小区的发病率-对照小区的发病率)/对照小区的发病率；

试验结果见表6：

表6枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间对草莓根腐病的田间防效测定结果

注：同一列不同小写字母表明呈显著性差异。

由表6可见，定植时枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂4-6g/棵、定植后1:100的比例 灌根处理对草莓根腐病的防效为73.21-79.88％，明显高于化学药剂10％苯醚甲环唑水分散粒 剂的防效。定植后1:500的比例灌根处理，防效下降为67.33-76.39％，仍与对照化学药剂呈 显著性差异。试验结果表明：构建的枯草芽孢杆菌PTS-394可湿性粉剂田间使用技术可有效 防治草莓根腐病。