《一种芹菜茎叶提取物的用途.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种芹菜茎叶提取物的用途.pdf（7页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610854349.0 (22)申请日 2016.09.27 (71)申请人 浙江省农业科学院 地址 310021 浙江省杭州市江干区石桥路 198号浙江省农业科学院 (72)发明人 阮美颖 叶青静 程远 王荣青 杨悦俭 周国治 李志邈 姚祝平 万红建 钟洋敏 (74)专利代理机构 杭州杭诚专利事务所有限公 司 33109 代理人 尉伟敏 赵越剑 (51)Int.Cl. A01N 65/10(2009.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(200。
2、6.01) (54)发明名称 一种芹菜茎叶提取物的用途 (57)摘要 本发明公开了一种芹菜茎叶提取物的用途， 芹菜茎叶提取物作为番茄病害抑制剂的应用。 本 发明发现了芹菜茎叶提取物的新用途， 能有效抑 制番茄青枯病菌、 根腐病菌的生长速率， 显著降 低生产中青枯病菌、 根腐病菌对番茄植株的危 害。 芹菜茎叶提取物使用方便， 成本低廉， 纯天 然， 不存在残留和抗药性问题。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 106538610 A 2017.03.29 CN 106538610 A 1.一种芹菜茎叶提取物的用途， 其特征在于， 芹菜茎叶提取物作为番茄病害抑制剂的 应用。 2.根据权利要。
3、求1所述的一种芹菜茎叶提取物的用途， 其特征在于， 所述番茄病害为番 茄青枯病或番茄根腐病。 3.根据权利要求1或2所述的一种芹菜茎叶提取物的用途， 其特征在于， 所述芹菜茎叶 提取物的制备方法为： 将芹菜茎叶洗净切碎后， 放入榨汁机中榨汁， 所得汁液过滤后， 4低 温保存。 4.根据权利要求3所述的一种芹菜茎叶提取物的用途， 其特征在于， 汁液过滤为先经过 滤纸粗过滤， 所得滤液然后再经过0.22微米滤头过滤除菌。 5.根据权利要求1或2所述的一种芹菜茎叶提取物的用途， 其特征在于， 所述芹菜茎叶 提取物的制备方法为： 将芹菜茎叶洗净切碎后， 放入榨汁机中榨汁， 所得汁液先经过滤纸粗 过滤，。
4、 所得滤液真空减压浓缩至原体积的20， 最后再经过0.22微米滤头过滤除菌， 4低 温保存。 6.根据权利要求1或2所述的一种芹菜茎叶提取物的用途， 其特征在于， 所述芹菜茎叶 提取物的制备方法为： 将芹菜茎叶洗净切碎后， 用研磨棒磨碎， 滤纸过滤后收集滤液， 滤液 在-50条件下冷冻蒸发， 浓缩至原体积的20， 最后再经过0.22微米滤头过滤除菌， 4低 温保存。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106538610 A 2 一种芹菜茎叶提取物的用途 技术领域 0001 本发明涉及番茄抗病栽培技术领域， 特别涉及一种芹菜茎叶提取物的用途。 背景技术 0002 番茄(Solanum l。
5、ycopersicum)以其丰富的维生素和营养成分深受广大消费者的 喜爱。 作为我国设施栽培面积最大的蔬菜之一， 番茄受病害的影响巨大， 设施园艺的快速发 展使得各种病毒性、 细菌性和真菌性病害的发展更为猖獗， 严重影响了我国番茄的产量和 品质， 造成了极为严重的经济损失。 0003 目前， 番茄青枯病、 番茄根腐病在我国长江以南， 尤其是华南地区发生日益严重， 造成番茄种植的减产甚至绝收， 严重制约了我国南方地区番茄种植产业的健康发展。 常规 的处理方法通常是使用化学药剂进行灭杀， 这样长期使用会导致病菌的抗药性增强， 效果 降低， 其次， 长期大量使用化学药剂容易在植物体内残留， 不利于健。
6、康。 发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种芹菜茎叶提取物的用途， 能有效抑制番茄青枯病菌、 根腐病菌的生长速率， 显著降低生产中青枯病菌、 根腐病菌对番茄植株的危害。 芹菜茎叶提 取物使用方便， 成本低廉， 纯天然， 不存在残留和抗药性问题。 0005 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 一种芹菜茎叶提取物的用途， 芹菜 茎叶提取物作为番茄病害抑制剂的应用。 0006 发明人在研究中意外发现芹菜茎叶提取物能有效抑制番茄青枯病菌、 根腐病菌的 生长速率， 显著降低生产中青枯病菌、 根腐病菌对番茄植株的危害。 而芹菜茎叶提取物使用 方便， 成本低廉， 纯天然， 不存在残留和抗药性问题。
7、。 青枯病为细菌病， 根腐病为真菌病， 芹 菜茎叶提取物同时对细菌、 真菌均有抑制作用。 本发明发现芹菜茎叶提取物能有效抑制番 茄青枯病菌、 根腐病菌， 能为农业生产带来显著的经济、 生态效益。 0007 作为优选， 所述番茄病害为番茄青枯病或番茄根腐病。 0008 作为优选， 所述芹菜茎叶提取物的制备方法为： 将芹菜茎叶洗净切碎后， 放入榨汁 机中榨汁， 所得汁液过滤后， 4低温保存。 0009 作为优选， 汁液过滤为先经过滤纸粗过滤， 所得滤液然后再经过0.22微米滤头过 滤除菌。 0010 作为优选， 所述芹菜茎叶提取物的制备方法为： 将芹菜茎叶洗净切碎后， 放入榨汁 机中榨汁， 所得汁。
8、液先经过滤纸粗过滤， 所得滤液真空减压浓缩至原体积的20， 最后再经 过0.22微米滤头过滤除菌， 4低温保存。 浓缩后的芹菜茎叶提取物使用效果更佳。 0011 作为优选， 所述芹菜茎叶提取物的制备方法为： 将芹菜茎叶洗净切碎后， 用研磨棒 磨碎， 滤纸过滤后收集滤液， 滤液在-50条件下冷冻蒸发， 浓缩至原体积的20， 最后再经 过0.22微米滤头过滤除菌， 4低温保存。 0012 本发明的有益效果是： 本发明发现了芹菜茎叶提取物的新用途， 能有效抑制番茄 说 明 书 1/4 页 3 CN 106538610 A 3 青枯病菌、 根腐病菌的生长速率， 显著降低生产中青枯病菌、 根腐病菌对番茄。
9、植株的危害。 芹菜茎叶提取物使用方便， 成本低廉， 纯天然， 不存在残留和抗药性问题。 附图说明 0013 图1是加入芹菜茎叶提取物与不加芹菜茎叶提取物的番茄的生长对照图。 具体实施方式 0014 下面通过具体实施例， 对本发明的技术方案作进一步的具体说明。 0015 本发明中， 若非特指， 所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。 下述实施例中的方法， 如无特别说明， 均为本领域的常规方法。 0016 实施例1： 芹菜茎叶抽提物对番茄青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)的抑制 作用 0017 1.通过研磨法和超低温蒸发法搜集茎叶抽提物， 具体步骤如下： 0。
10、018 1)芹菜品种为 津南实芹一号 ， 采用营养钵(草炭： 蛭石3:1)， 每钵均匀撒播种 子20粒， 人工气候室内培养(12小时人工光照， 昼夜温度25/20)； 2)60天后， 将培养芹菜 (高约40-50cm)地上部茎叶用剪刀搜集， 洗净后切碎， 用研磨棒磨碎， 滤纸过滤后收集滤 液， -50条件下冷冻蒸发， 浓缩至原体积的1/5， 即为芹菜茎叶提取物的浓缩液， 0.22微米 滤头过滤灭菌后4低温保存。 0019 2.采用青枯假单胞菌Pseudomonas solanacearum(race1)(番茄抗青枯病筛选方 法及其在抗青枯病育种中的应用， 王荣青等， 2007)作为本次评价菌种。
11、。 该菌种的扩繁条件 如下： 0020 523培养基制备： 七水合硫酸镁(0.3g)、 磷酸氢二钾(2.0g)、 酵母提取物(4.0g)、 酪 蛋白水解物(8.0g)、 蔗糖(10.0g)、 琼脂(15.0g)。 上述组分混合并加入蒸馏水， 形成1升溶液 制剂， 所述的溶液制剂进行高温高压(121， 15分钟)后， 放于4待用； 0021 扩繁培养条件： 高温融化固体培养基， 20ml倒入90mm一次性灭菌培养皿， 凝固后接 种环接种Pseudomonas solanacearum(race1)。 28黑暗培养2天， 待用。 0022 芹菜茎叶抽提物抑制番茄青枯病菌生长与繁殖： 0023 1)。
12、从523培养基刮取扩繁的Pseudomonas solanacearum(race1)菌体， 无菌水溶解 稀释到OD6000.1； 2)配置分别含有芹菜茎叶抽提物0微升,200微升,400微升,800微升的 523固体培养基(20ml/培养皿)； 3)在步骤2)中的4种含有不同浓度芹菜茎叶抽提物的固体 培养基上接种OD6000.1的Pseudomonas solanacearum(race1)菌液2微升； 4)三个不同时 间点(48h、 72h和96h)利用标尺分别测量固体培养基上的菌斑直径。 0024 如表1所示， 在523固体培养基上， 不同浓度的芹菜茎叶抽提物对Pseudomonas s。
13、olanacearum(race1)均有抑制作用， 芹菜茎叶抽提物浓度越高， 抑制作用越明显。 0025 在人工气候室穴盘中种植番茄野生型株系 Alisa 。 待番茄植株长至5叶1心时， 3 株移栽至正常基质中(对照)， 3株移栽至拌有芹菜茎叶提取物的基质中(处理)， 同时在处理 和对照的基质中加入番茄青枯病菌Pseudomonas solanacearum(race1)200ml(OD600 0.1)， 高湿环境下观察。 结果表明5天后， 对照组中3株番茄均发生青枯病症状， 而处理组中 的番茄生长正常(图1)。 说明芹菜茎叶提取物有效抑制了基质中青枯病菌的活性， 从而延缓 说 明 书 2/4。
14、 页 4 CN 106538610 A 4 甚至阻止了番茄植株的发病。 0026 实施例2： 芹菜茎叶抽提物对番茄根腐病的抑制作用 0027 1、 芹菜茎叶提取物的制备为： 将芹菜(津南实芹一号)茎叶洗净切碎后， 放入榨汁 机中榨汁， 所得汁液先经过滤纸粗过滤， 所得滤液真空减压浓缩至原体积的20， 最后再经 过0.22微米滤头过滤除菌， 4低温保存。 0028 2.采用番茄根腐病菌尖孢镰刀菌Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1) (浙江省农业科学院提供)作为本次评价菌种。 该菌种的扩繁条件如下： 0029 PDA培养基制备： ： 新鲜马铃薯200g。
15、， 加蒸馏水煮沸， 继续加热30分钟后， 4层纱布过 滤， 滤液加葡萄糖18g， 琼脂20g， 溶解后加蒸馏水定容至1000ml， 然后进行高温高压(121， 15分钟)灭菌， 自然pH； 0030 扩繁培养条件： 高温融化固体培养基， 20ml倒入90mm一次性灭菌培养皿， 凝固后接 种环接种Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1)。 25黑暗培养7-10天， 待用。 0031 芹菜茎叶抽提物抑制番茄根腐病菌生长与繁殖： 0032 1)从PDA培养基刮取扩繁的Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race1)菌体， 无菌。
16、水溶解稀释， 置于摇床中以25、 120rmin-1振荡30分钟， 过滤除去菌体， 配制浓度为 3x106-5x106个mL-1的孢子悬浮液； 2)配置分别含有芹菜茎叶抽提物0微升,200微升,400 微升,800微升的PDA固体培养基(20ml/培养皿)； 3)在步骤2)中的4种含有不同浓度芹菜茎 叶 抽 提 物 的 固 体 培 养 基 上 接 种 3 1 0 6 - 5 1 0 6 个 孢 子m L - 1 的 Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1)菌液2微升； 4)三个不同时间点(24h、 48h和 72h)利用标尺分别测量固体培养基上的菌斑直。
17、径。 0033 如 表 2 所 示 ， 在 P D A 固 体 培 养 基 上 ， 不 同 浓 度 的 芹 菜 茎 叶 抽 提 物 对 Fusariumoxysporumf.sp.Lycopersici(race 1)均有抑制作用， 芹菜茎叶抽提物浓度越高， 抑制作用越明显。 0034 表1.不同剂量芹菜茎叶抽提物对青枯病菌斑的抑制效果 0035 0036 表2.不同剂量芹菜茎叶抽提物对根腐病菌斑的抑制效果 说 明 书 3/4 页 5 CN 106538610 A 5 0037 0038 以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案， 并非对本发明作任何形式上的 限制， 在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。 说 明 书 4/4 页 6 CN 106538610 A 6 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 7 CN 106538610 A 7 。