技术领域
本发明涉及饲料添加剂，特别指饲用肠溶微丸酶的生产方法。
背景技术
酶，其本质是蛋白质，蛋白质在酸、热等条件下容易变性，而酶蛋白变性 后其空间结果发生改变。但酶蛋白要发生其催化功能必须在其特定的空间条件 下才能发生其催化效果，故变性的酶蛋白就不具有其本身所具有的特定功能一 催化生化反应了。目前市场上所有的酶制剂绝大部分都是简单的包埋处理后的 产品，当然还有一部分包膜的产品，但这种包膜的产品只是用于部分隔热，以 消除饲料加工过程中的高温高湿对酶活性的影响。在畜禽的体内，特别是猪， 由于食糜在胃中停留的时间在两小时左右，其强酸性(pH2.0-3.0)环境会使很 多的酶蛋白变性，从而降低酶的生物效价。如某种酸性纤维素酶用pH为2.5的 缓冲液处理2小时，其酶活的损失达到86％，很大程度降低了纤维素酶的生物 学效价。
发明内容
本发明的目的是针对背景技术中存在的缺点和问题加以改进，提供一种能 够使酶制剂顺利通过胃的强酸环境，而到达小肠后迅速崩解发生作用，从而降 低酶活性的损失，提高酶制剂的生物效价的肠溶微丸酶的生产方法。
本发明的生产方法包括以下步骤：
1)将液态酶和玉米淀粉以3∶5的比例混合均匀；
2)将混合好的液态酶和玉米淀粉送入低温颗粒摇摆机进行摇摆造粒；
3)再将成型后的颗粒使用球形抛丸机抛圆；
4)将抛圆后的光滑小丸用离心振动筛分选出30-100目的小丸；
5)将分选出的小丸用50℃低温循环烘箱将小丸烘干；
6)准备肠溶包衣膜材：将树脂2和树脂3号用1∶1的比例配好，再取95％ 的酒精溶液，将配好的树脂与酒精溶液按1∶20的比例混合；
7)用旋流流化床包衣机对小丸进行包膜：取小丸1份、肠溶包衣膜材2份， 用包衣机把肠溶包衣膜材均匀喷洒到小丸，干燥后即为肠溶微丸酶成品。
本发明所述的微丸酶包括中性木聚糖酶、酸性木取糖酶、酸性纤维素酶、 中温α-淀粉酶、中性蛋酶等酶制剂。
利用本发明处理深层液态发酵生产的纤维素酶，可提高纤维素酶两小时对 pH＝2.5的酸性缓冲液的耐受性55.4％，即通过此技术处理的酶制剂的生物效价 提高55.4％，这将很大的减少酶制剂在使用过程中的浪费，产生巨大的经济、社 会效益。
本发明相对颗粒酶而言通过试验后得出以下优点和效果：
(一)溶出时间的试验
准确称取1.000g肠溶的纤维素酶和木聚糖酶，分别溶解在40mL 0.1mol/L 的pH＝5.50和pH＝6.80的柠檬酸-磷酸盐缓冲液，磁力搅拌10、15、20、25、30、 60分钟后按本公司企业标准测定纤维素酶和木聚糖酶酶活力。
在pH＝5.50条件下肠溶纤维素酶不同搅拌时间下的相对酶活力的试验结果： 溶出时间(min) 10 15 20 25 30 60 相对酶活力％ 66.1 84.5 88.7 96.4 100 100
在pH＝6.80条件下肠溶纤维素酶不同搅拌时间下的相对酶活力的试验结果： 溶出时间(min) 10 15 20 25 30 60 相对酶活力％ 100 100 100 100 100 100
在pH＝5.50条件下肠溶木聚糖酶不同搅拌时间下的相对酶活力的试验结果： 溶出时间(min) 10 15 20 25 30 60 相对酶活力％ 54.5 67.8 76.3 89.7 100 100
在pH＝6.80条件下肠溶木聚糖酶不同搅拌时间下的相对酶活力的试验结果： 溶出时间(min) 10 15 20 25 30 60 相对酶活力％ 100 100 100 100 100 100
该结果说明，该肠溶的纤维素酶和木聚糖酶在pH＝5.50时能在30分钟内完 全溶出，在十分钟内也有50％以上的溶出，而在pH＝6.80的情况下只需10分钟 就能完全溶出，这说明，在畜禽的消化道中，当肠溶纤维素酶和木聚糖酶到达 小肠段，能在较短的时间内完全溶出而发挥其功效。
(二)酸耐受性试验
分别取1.000g肠溶的纤维素酶和木聚糖酶样品，分别用pH为2.5、3.0、3.5、 4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的10mL柠檬酸-磷酸盐缓冲液于37℃下振荡 2小时后，再用pH＝6.80的缓冲液磁力搅拌10-15分钟后定溶至100mL，然后在 纤维素酶和木聚糖酶的最适条件下检测酶活力。同时，用相同的处理方法检测 颗粒状的纤维素酶和木聚糖酶的样品的酶活。
肠溶纤维素酶和颗粒酶处理后相对酶活的试验结果： pH值 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 肠溶酶％ 99 100 100 95.7 98.7 97.5 94.6 99.7 93.4 95.2 颗粒酶％ 43.6 46.4 47.2 46.4 46.7 47.9 47.6 47.8 47.8 47.8
肠溶木聚糖酶和颗粒酶处理后相对酶活的试验结果： pH值 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 肠溶酶％ 92.6 93.2 94.6 95.2 95.7 96.9 95.5 95.5 96.4 97.5 颗粒酶％ 39.6 71.4 74.3 74.7 75.6 84.8 80.5 82.7 84.5 82.1
从以上的结果可以看出，经过特殊加工工艺生产的肠溶酶，很大程度的提 高了纤维素酶和木聚糖酶对酸的耐受性，尤其是对强酸性的如pH＝2.5时的耐受 性，纤维素酶提高了55.4％，木聚糖酶提高了53％，而且肠溶酶的失活都在7 ％一下。因此，肠溶酶对于减少纤维素酶和木聚糖酶在畜禽消化道的前端如胃 中失活有很好的效果。
(三)高温高湿耐受性试验
准确称取肠溶纤维素酶和木聚糖酶各1.000g于70℃、80℃、85℃、90℃、 95℃、100℃下在恒温水浴震荡器中震荡处理10分钟，然后用pH6.80缓冲液磁 力搅拌10-15分钟后，测其活力。同时且颗粒状纤维素酶和木聚糖酶各1.000g 作同样处理(相对酶活＝处理后剩余酶活/处理前酶活)
肠溶纤维素酶和颗粒状纤维素酶处理后相对酶活的试验结果： 温度(℃) 70 80 85 90 95 100 颗粒酶 96 91.3 76.6 59.9 44.2 41 肠溶酶％ 97.1 94.6 94.1 75.8 61.4 44.0
肠溶木聚糖酶酶和颗粒状木聚糖酶处理后相对酶活的试验结果： 温度(℃) 70 80 85 90 95 100 肠溶酶％ 98.1 98.8 87.3 88.0 85.3 67.2 颗粒酶 86 76.1 67.6 64.7 45.3 41.5
从以上结果可以看出，肠溶纤维素酶在85℃时高温高湿的耐受性达到了94.1 ％，相对于颗粒酶耐受性提高了17.5％，肠溶木聚糖酶则提高了19.3％，但同 时也可以看出，该肠溶酶在100℃没有很多程度的提高其高温高湿的耐受性。
具体实施方式
中性木聚糖酶肠溶小丸的制作工艺如下：取40000IU/mL的中性木聚糖酶发 酵液600mL和950克玉米淀粉和50克的微晶纤维素酶充分混合后，使用摇摆式 颗粒机进行制丸，然后使用球形抛丸机将丸抛成光滑且有一定强度的小丸，制 成小丸后低温烘干。取中性木聚糖酶小丸1份用旋流流化床喷两份树脂2号和 树脂3号(1∶1)的5％的酒精溶液后干燥。
酸性木聚糖酶肠溶小丸的制作方法如下：取30000IU/mL的酸性木聚糖酶发 酵液600mL和950克玉米淀粉和50克的微晶纤维素充分混合后，使用摇摆式颗 粒机进行制丸，然后使用球形抛丸机将丸抛成光滑且有一定强度的小丸，制成 小丸后低温烘干。取酸性木聚糖酶小丸1份用旋流流化床喷两份树脂2号和树 脂3号(1∶1)的5％的酒精溶液后干燥。
酸性纤维素酶肠溶小丸的制作方法：取1800IU/mL的酸性木聚糖酶发酵液 600mL和950克玉米淀粉和50克的微晶纤维素酶充分混合后，使用摇摆式颗粒 机进行制丸，然后使用球形抛丸机将丸抛成光滑且有一定强度的小丸，制成小 丸后低温烘干。取酸性纤维素酶小丸1份用旋流流化床喷两份树脂2号和树脂3 号(1∶1)的5％的酒精溶液后干燥。
中性蛋白酶肠溶小丸的制作方法：取高浓缩的中性蛋白酶50、玉米淀粉10、 微晶纤维素10、30％聚乙二醇水溶液30充分混合后，使用摇摆式颗粒机进行制 丸，然后使用球形抛丸机将丸抛成光滑且有一定强度的小丸，制成小丸后低温 烘干。取中性蛋白酶小丸1份用旋流流化床喷两份树脂2号和树脂3号(1∶1) 的5％的酒精溶液后干燥。
中温α-淀粉酶肠溶小丸的制作方法：取高浓缩的中温α-淀粉酶50、玉 米淀粉10、微晶纤维素10、30％聚乙二醇水溶液30充分混合后，使用摇摆式 颗粒机进行制丸，然后使用球形抛丸机将丸抛成光滑且有一定强度的小丸，制 成小丸后低温烘干。取中温α-淀粉酶小丸1份用旋流流化床喷两份树脂2号 和树脂3号(1∶1)的5％的酒精溶液后干燥。
本发明上述各工艺制出的是小丸属于单酶，该小丸具有在强酸条件下不崩 解而在PH＝5.0以上以及一定的离子浓度条件下迅速崩解的特性。
本发明还可以制作成肠溶微丸复合酶，其各原料的重量份的组成是：0-40 ％；酸性木聚糖酶肠溶小丸0-40％；酸性纤维素酶肠溶小丸0-60％；中温α -淀粉酶肠溶小丸0-20％中性蛋白酶肠溶小丸0-20％，玉米淀粉空白小丸： 0-60％。猪胃的pH值为1.5-3.5，而营养物质消化吸收的主要场所-小肠的 pH值为5.0-6.5。
用本发明制作的复合酶制剂亦能顺利通过胃的强酸环境，而到达小肠后迅 速崩解发生作用，故可降低酶活性的损失，提高酶制剂的生物效价。