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1、(10)授权公告号 CN 101564050 B (45)授权公告日 2013.06.19 CN 101564050 B *CN101564050B* (21)申请号 200910015474.2 (22)申请日 2009.05.23 A01N 65/03(2006.01) A01P 13/00(2006.01) A01P 17/00(2006.01) C09D 5/16(2006.01) (73)专利权人 中国船舶重工集团公司第七二五 研究所 地址 266071 山东省青岛市市南区金湖路 12 号甲 (72)发明人 郑纪勇 蔺存国 段东霞 (74)专利代理机构 青岛高晓专利事务所 37104。
2、 代理人 于正河 CN 101336940 A,2009.01.07, 说明书第 1-2 页 . CN 1850631 A,2006.10.25, 全文 . 南春容等 . 孔石莼水溶性抽提液抑制 3 种海 洋赤潮藻的生长 .环境科学学报 .2004, 第 24 卷 ( 第 4 期 ),703-706. 狄兰兰等 .HPLC 在海洋船舶涂料防污剂检测 中的应用 .涂料工业 .2008, 第 38 卷 ( 第 12 期 ),56-59. (54) 发明名称 一种海洋防污剂用孔石莼提取物的制备方法 (57) 摘要 本发明涉及海洋环境及防污技术领域中人造 材料表面防除生物污损用的生物防污剂的制备， 特。
3、别涉及一种海洋防污剂用孔石莼提取物的制备 方法， 先将新鲜孔石莼经风干、 破碎后放入容器 中， 加溶剂至完全浸没， 在 30 80恒温条件下 加热回流 1 50 小时， 然后过滤得到溶剂提取物 液体 ； 再将提取物液体经浓缩除去溶剂后得到膏 状提取物 A ； 再将提取物 A 经柱层析分离， 分别用 石油醚、 乙酸乙酯和乙醇进行梯度洗脱， 依次得到 混合分离产物 B， 将分离产物 B 再次经柱层析分 离， 用乙酸乙酯与乙醇按1 20 到 20 1的重量 比例的混合溶液进行洗脱， 得到分离产物 C 为孔 石莼提取物产品， 具有无毒环保， 原料易取， 制备 简单， 质量好， 防污作用强等优点。 (5。
4、1)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 白小琳 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书3页 (10)授权公告号 CN 101564050 B CN 101564050 B *CN101564050B* 1/1 页 2 1. 一种海洋防污剂用孔石莼提取物的制备方法， 其特征在于先将新鲜孔石莼经风干、 破碎后放入容器中， 加溶剂至完全浸没， 在 30 80恒温条件下加热回流 1 50 小时， 然 后过滤得到滤液， 即为溶剂提取物液体 ； 再将提取物液体经浓缩除去溶剂后得到膏状提取 物 A ； 再将提取物 A 经柱层析。
5、分离， 分别用石油醚、 乙酸乙酯和乙醇进行梯度洗脱， 依次得到 混合分离产物 B， 将分离产物 B 再次经柱层析分离， 用乙酸乙酯与乙醇按 1 20 到 20 1 的重量比例的混合溶液进行洗脱， 得到分离产物 C， 即为孔石莼提取物产品。 2. 根据权利要求 1 所述的海洋防污剂用孔石莼提取物的制备方法， 其特征在于所用溶 剂包括乙酸乙酯。 3. 根据权利要求 1 所述的海洋防污剂用孔石莼提取物， 其特征在于孔石莼提取物的用 量占防污涂料的 5至 80的重量百分比， 颜料或填料的用量占涂料重量的 5 -50， 树 脂的用量为 2-70， 均为重量百分比。 权 利 要 求 书 CN 101564。
6、050 B 2 1/3 页 3 一种海洋防污剂用孔石莼提取物的制备方法 技术领域 ： 0001 本发明涉及一种海洋环境中人造材料表面防除生物污损用的生物防污剂的制备， 特别涉及一种海洋防污剂用孔石莼提取物的制备方法， 属于海洋生物防污技术领域。 背景技术 ： 0002 海洋生物污损是指海洋结构物表面的生物附着对浸海材料造成的不利影响。 这种 附着在结构物表面的生物， 称为海洋污损生物， 包括藤壶、 贻贝、 海鞘、 苔藓虫、 水螅、 海绵、 绿藻、 硅藻等。 上述结构物表面包括船舶、 船坞、 码头、 石油平台、 海底电缆、 浮标、 水雷、 电厂 冷却管道、 渔网等。 海洋生物污损导致严重危害， 。
7、如造成船舶航行阻力增大， 通海管道阻塞， 热电冷却设备导热性降低， 养殖业渔获量降低等。而解决海洋生物污损的最常用方法是涂 刷含有防污剂的涂料。 英国国际油漆公司发明了一种含三苯基锡的防污涂料(GB1457590)， 自此有机锡防污涂料得到应用， 其防污效果可以达到 5 年以上。然而， 这种防污涂料是通过 释放有毒防污剂的方式， 毒杀污损生物达到防污目的。 同时对其它非目标生物如鱼类、 贝类 等也有强毒性， 且易在生物体内和海水、 淤泥中累积， 对海洋生态环境造成严重影响。目前 国际海事组织 (IMO) 已禁止有机锡在防污涂料中的应用。另外， 其它有毒防污剂， 如滴滴涕 (DDT， 二氯二苯三。
8、氯乙烷 ) 等也因同样的问题逐渐被禁止使用， 因此需要发明新型防污剂。 其中从生物体中提取活性物质是研制新型防污剂的重要途径。 国内外已公开了一些相关的 发明专利。 0003 美国专利US2008/0095871 A1公开了一种海洋交替单胞菌Alteromonas sp.的细 胞提取物， 对海洋污损性的微藻、 大型藻和无脊椎动物有较强的生长抑制作用。世界专利 WO0218500A1 公开了一种褐藻铁钉菜 Ishige sinicola 提取物， 对海洋污损藻类孢子和贻 贝有明显的抑制活性。美国专利 US6346252 B1 公开了一种红藻 Asparagopsis Armata 提 取物， 具。
9、有良好的抗菌和抗真菌活性。 0004 中国专利 CN200710092627 公开了一种含有植物提取物植物单宁和茶多酚的生物 防污涂料， 通过天然防污剂的释放达到防污效果。中国专利 CN200510013553.1 公开了一种 辣椒碱防污涂料， 从天然辣椒中提取的生物活性物质， 作为驱赶剂， 防止海生物附着。中国 专利 CN1238447C 公开了一种海洋大叶藻提取物和海绵提取物作为防污剂的防污涂料， 以 生物碱和肽类化合物作为活性成分， 结合低表面能的氟树脂防止海洋生物的附着。中国专 利 CN1820603A 的公开了一种除虫菊花提取物， 作为海洋防污剂， 对大型污损生物藤壶有较 强的抑制能。
10、力。上述现有的天然提取物作为海洋防污剂使用及其制备提取技术， 均未能达 到有机锡防污剂的防污性能， 且对海洋环境影响较大， 防污效果差， 提取工艺复杂， 成本高。 发明内容 ： 0005 本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点， 针对海洋防污剂如有机锡、 DDT 等严 重破坏环境、 急需环保替代品的问题， 设计提供一种利用天然海洋绿藻孔石莼提取物配制 防污剂的方法， 能很好地抑制硅藻、 贻贝等海生物的附着， 达到无毒环保的防污目的。孔石 说 明 书 CN 101564050 B 3 2/3 页 4 莼 (Ulvapertusa) 是一种大型海洋绿藻， 俗称海白菜、 海菠菜、 海葛芭等， 属绿藻。
11、门石药科 石莼属， 它幼体绿色， 成体碧绿色， 生活在潮间带， 广泛分布于西太平洋沿海， 在野生藻类中 资源极为丰富， 是产量最大的一种绿藻。 0006 为了实现上述目的， 本发明以海洋绿藻孔石莼为原料制备溶剂提取物和柱层析分 离产物 ； 溶剂提取物是指孔石莼经溶剂萃取后得到的产物， 溶剂是指水、 甲醇、 乙醇、 乙酸乙 酯、 氯仿、 甲苯、 石油醚等， 提取是指在一定温度下用溶剂浸泡一定时间， 然后过滤， 滤液浓 缩除去溶剂后得到产物 ； 采用单溶剂提取， 或多种溶剂顺次提取 ； 柱层析分离产物是指孔 石莼溶剂提取物经层析柱分离出的产物， 层析柱的固定相包括硅胶、 氧化铝、 聚酰胺、 离子 。
12、交换树脂等， 流动相为水、 甲醇、 乙醇、 乙酸乙酯、 氯仿、 甲苯、 石油醚等溶剂， 进行单溶剂或 混合溶剂或梯度等方式洗脱， 对洗脱液进行收集， 浓缩后即可得到柱层析分离产物。 0007 本发明涉及的孔石莼提取物的制备方法， 先将新鲜孔石莼经风干、 破碎后， 称取一 定量放入容器中， 加溶剂至完全浸没， 在 30 80恒温条件下加热回流 1 50 小时， 然后 过滤得到滤液， 即为溶剂提取物液体 ； 再将提取物液体经浓缩除去溶剂后得到膏状提取物 A ； 再将提取物 A 经柱层析分离， 分别用石油醚、 乙酸乙酯和乙醇进行梯度洗脱， 依次得到混 合分离产物 B， 将分离产物 B 再次经柱层析分。
13、离， 用乙酸乙酯与乙醇按 1 20 到 20 1 的 重量比例的混合溶液进行洗脱， 得到分离产物 C， 即为孔石莼提取物产品。 0008 本发明所用溶剂为极性有机溶剂或非极性有机溶剂， 单独使用或多种混合使用 ； 极性有机溶剂包括 ： 蒸馏水、 甲醇、 乙醇、 氯仿、 丙酮、 乙腈、 四氢呋喃、 N， N- 二甲基甲酰胺和 二甲基亚砜及其两种以上的混合溶剂 ； 非极性有机溶剂包括苯、 甲苯、 正己烷、 环己烷、 四氯 化碳、 石油醚和乙酸乙酯 ； 优选使用的有机溶剂为氯仿、 乙酸乙酯、 乙醇、 蒸馏水， 更优选使 用乙酸乙酯、 乙醇 ； 浓缩方式包括旋转蒸发、 冷冻干燥、 喷雾干燥。 0009。
14、 本发明的孔石莼提取物产品作为防污剂使用时可以单独或与其它防污剂复配， 或 添加到防污涂料体系中， 均可制备海洋环境下防污剂或防污涂料 ； 防污涂料的制备遵从常 规涂料的生产工艺或 0010 过程， 包括树脂的制备或选用、 颜 ( 填 ) 料等固体物料的研磨分散、 防污剂的加入 和分散、 配制涂料、 最后反复研磨得到防污涂料 ； 其中树脂指常用沥青系、 丙烯酸系树脂、 乙 烯系树脂、 氯化橡胶系树脂、 酚醛树脂等， 不同的树脂基料需使用不同的溶剂进行溶解， 根 据树脂的用量、 树脂的溶解程度、 涂料施工性的要求而选择适量溶剂 ； 孔石莼提取物的用量 占防污涂料的 5至 80的重量百分比， 优选。
15、 20至 60， 颜 ( 填 ) 料的用量占涂料重量 的 5 -50， 树脂的用量为 2-70， 均为重量百分比。 0011 本发明以孔石莼提取物作为新型防污剂， 实验室内对常见污损生物硅藻和贻贝的 抑制试验结果表明， 对硅藻和贻贝具有较强的生长抑制作用， 有效抑制浓度小于 1mg/ml ； 实海静态挂板显示， 具有明显的防污效果 ； 与现有技术产品相比具有无毒环保， 原料易取， 制备简单， 产品质量好， 防污作用强等优点。 具体实施方式 ： 0012 下面通过实施例作进一步说明。 0013 实施例 1 ： 一种孔石莼提取物 A 的制备 0014 从潮间带采集新鲜孔石莼， 自然风干， 用粉碎机。
16、粉碎成约 1cm2大小， 称取 250g 放 说 明 书 CN 101564050 B 4 3/3 页 5 入烧瓶中， 加入乙酸乙酯至完全浸没孔石莼， 水浴 50加热， 浸泡 48 小时， 过滤， 滤渣仍留 存在烧瓶中， 再加入乙酸乙酯至完全浸没， 重复提取三次， 滤液经旋转蒸发除去溶剂， 得到 黑色膏状物， 即为孔石莼溶剂提取物 A。 0015 实施例 2 ： 一种孔石莼提取物 B 的制备 0016 取 60g 200 目硅胶于烘箱中 110活化 2 小时， 然后用石油醚湿法装柱， 取实施例 1 制得的孔石莼提取物 A 0.5g， 溶于少量乙酸乙酯中， 湿法上样， 分别用石油醚、 乙酸乙酯、。
17、 乙醇进行梯度洗脱， 按照分层颜色收集流出液， 依此收集得到 6 种分离产物， 其中第 5 种分 离产物收集后， 经旋蒸蒸发， 除去溶剂后， 即得到孔石莼提取物 B。 0017 实施例 3 ： 一种孔石莼提取物 C 的制备 0018 取 50g 300 目硅胶于烘箱中 110活化 2 小时， 然后用石油醚湿法装柱， 取实施例 2 制得的孔石莼提取物 B 0.5g， 溶于少量乙酸乙酯中， 湿法上样， 用乙酸乙酯和乙醇混合溶 液(混合比例为120)进行洗脱， 按照分层颜色收集流出液， 依此收集得到4种分离产物， 其中第 2 种分离产物收集后， 经旋蒸蒸发， 除去溶剂后， 即得到孔石莼提取物 C。 。
18、0019 实施例 4 ： 以孔石莼提取物单独作为防污剂常规方法制备防污涂料。 0020 各原料在涂料中所占的重量百分比为 ： 0021 M133 丙烯酸树脂 30 0022 孔石莼提取物 A 或 B 或 C 10 0023 石灰松香 15 0024 氧化锌 16 0025 铁红 10 0026 氢化蓖麻油 ( 防沉剂 ) 2 0027 膨润土 2 0028 正丁醇 5 0029 二甲苯 10 0030 所述丙烯酸树脂用二甲苯和正丁醇溶解， 氧化锌加入到丙烯酸树脂溶液中， 反复 研磨分散均匀后， 再分别加入孔石莼提取物 A、 B 和 C、 石灰松香的溶液， 氢化蓖麻油， 进一步 研磨， 形成均匀。
19、分散的涂料， 即分别得到三种孔石莼提取物防污涂料。 0031 实施例 5 ： 室内防污活性测试 0032 取实施例 1 的孔石莼提取物 A 36mg， 加入 6ml 乙醇超声溶解， 分别取 50、 100、 150、 200、 250、 300、 350、 400、 450、 500l 至 24 孔培养板中， 挥发除去乙醇后， 在每个孔中加入 2.8ml 营养液和 0.2ml 硅藻溶液 ； 配置成了浓度分别为 0.1 1.0mg/ml 浓度梯度的药液 ； 于 20、 1900lux 光照、 明暗周期为 12h 12h 条件下培养 ； 7 天后对底部附着硅藻计数， 根 据底部硅藻附着个数， 计算对硅藻得生长抑制情况， 结果表明， 孔石莼提取物 A 对硅藻的最 小抑制浓度为 0.5mg/ml。 说 明 书 CN 101564050 B 5 。