一种提取用于增强免疫力与缓解疲劳的虾蛋白营养素方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201510697817.3

申请日:

20151023

公开号:

CN105248833A

公开日:

20160120

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:

IPC分类号:

A23J1/04,A23J3/34

主分类号:

A23J1/04,A23J3/34

申请人:

天津核生科技生物工程有限公司

发明人:

赵永泉,张斌

地址:

300000 天津市静海县静海经济开发区天宇园长安路5号

优先权:

CN201510697817A

专利代理机构:

代理人:

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内容摘要

本发明涉及虾蛋白提取技术领域,具体涉及一种提取用于增强免疫力与缓解疲劳的虾蛋白营养素方法,步骤如下:(1)将卤虾通过热风干燥;(2)干燥后粉碎,经过筛分处理;(3)粉碎筛分后,加水浸泡;(4)添加复合酶有限酶解,制得酶解液;(5)浓缩制得的酶解液;(6)加入5%的活性炭,进行脱色脱臭处理,之后滤去活性炭;(7)最后,喷雾干燥处理后得到营养素;所述步骤(4)中的添加复合酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶组合;所述步骤(4)的添加复合酶的比例木瓜蛋白酶:碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5-2.5:1:1.5-2.0。本发明使用有限酶解技术,控制酶解程度,因而并未完全酶解彻底,含有易于人体吸收利用合适比例的丰富的氨基酸、多肽、蛋白,总蛋白质提取率达76.3%。

权利要求书

1.一种提取用于增强免疫力与缓解疲劳的虾蛋白营养素方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:(1)将卤虾通过热风干燥;(2)干燥后粉碎,经过筛分处理;(3)粉碎筛分后,加水浸泡;(4)添加复合酶有限酶解,制得酶解液;(5)浓缩制得的酶解液;(6)加入5%的活性炭,进行脱色脱臭处理,之后滤去活性炭;(7)最后,喷雾干燥处理后得到营养素;所述步骤(1)中的热风干燥温度为85℃;所述步骤(2)中筛分的目数为40;所述步骤(4)中的添加复合酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶的组合;所述步骤(4)中的添加复合酶的比例木瓜蛋白酶:碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5-2.5:1:1.5-2.0;所述步骤(4)中的添加复合酶量为0.5%-1.0%(以卤虾粉质量计算);所述步骤(4)中的酶解温度50℃-55℃,PH为7.0-7.5,酶解时间为5h-7h;所述步骤(4)中的有限酶解是将蛋白质从卤虾中提取出来,将提取率控制在大于75%的水平,同时将酶解率(氨基酸/总蛋白质)控制在35%-40%,制成总蛋白含量高,同时含有易于吸收比例的氨基酸、多肽、蛋白质的复合营养素。 2.如权利要求1所述的一种提取用于增强免疫力与缓解疲劳的虾蛋白营养素方法,其特征在于,所述步骤(1)中的卤虾质量为50KG。

说明书

技术领域

本发明涉及虾蛋白提取技术领域,具体涉及一种提取用于增强免疫力与缓解疲劳的虾蛋白营养素方法。

背景技术

现代人随着工作压力的增强,人们的身体免疫力低下,疲劳感日趋明显,越来越多的人处于亚健康状态。因此针对增强免疫力、缓解疲劳等作用的药物方法研究也不少。

如中国文献的《食品工程》于2012年6月刊登的《虾加工副产物酶解工艺研究》,通过比较不同的水解酶水解虾加工副产物的效率,确定碱性蛋白酶为水解虾加工副产物用酶。考察了料液比、时间、温度、起始pH值、酶添加量对蛋白提取率的影响,确定最优的酶解工艺条件为:酶添加量为虾粉质量的0.8%、温度60℃、料液比4g:100mL、起始pH9.0、时间2.0h、蛋白提取率为65.3%。另外,在《食品添加剂》于2005年第12月刊登的《酶解虾加工下脚料工艺的研究》,本试验以水解度为指标,研究了5种蛋白酶酶解虾加工下脚料的能力,确定了Flavourzyme和Alcalase为最佳复合酶。利用响应曲面法,得到了复合酶的最适酶解参数:起始pH值6.74,酶解温度48.3℃,底物浓度7.3%。在此优化条件下,重复试验3次,平均水解度达23.16%。虽然都对蛋白酶酶解虾进行了一些研究,但上述两类技术中没有进一步对营养素在增强免疫力和缓解体力疲劳作用方面的研究。

发明内容

针对上述现有技术中存在的技术问题,本发明旨在提供一种提取用于增强免疫力与缓解疲劳的虾蛋白营养素方法。

为实现该技术目的,本发明的方案是:以卤虾为原料,利用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶的配比组合,通过控制酶解条件、酶解时间与酶添加量及比例,进行有限酶解,再经脱色、脱臭处理可以的到香味浓郁、无腥味、无苦味、无臭味的营养素。

本发明的制备方法具体如下:

(1)将卤虾通过热风干燥;

(2)干燥后粉碎,经过筛分;

(3)粉碎筛分后加水浸泡;

(4)添加复合酶有限酶解,制得酶解液;

(5)浓缩制得的酶解液;

(6)加入5%的活性炭,进行脱色脱臭处理,之后滤去活性炭;

(7)最后,喷雾干燥处理后得到营养素。

进一步,所述步骤(4)中的添加复合酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和风味蛋白酶组合;

进一步,所述步骤(4)中的添加复合酶量为0.5%-1.0%(以卤虾粉质量计算);

进一步,所述步骤(4)中的添加复合酶的比例木瓜蛋白酶:碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5-2.5:1:1.5-2.0;

进一步,所述步骤(4)中的酶解温度50℃-55℃,PH为7.0-7.5,酶解时间为5h-7h;

进一步,所述步骤(4)中的有限酶解是将蛋白质从卤虾中提取出来,将提取率控制在大于75%的水平,同时将酶解率(氨基酸/总蛋白质)控制在35%-40%,制成总蛋白含量高,同时含有易于吸收比例的氨基酸、多肽、蛋白质的复合营养素;

进一步,所述步骤(2)中筛分目数为40;

进一步,所述步骤(1)中的热风干燥温度为85℃;

进一步,所述步骤(1)中的卤虾质量为50KG。

有益效果:

1、本发明使用有限酶解技术,控制酶解程度,因而并未完全酶解彻底,含有易于人体吸收利用合适比例的丰富的氨基酸、多肽、蛋白,总蛋白质提取率达76.3%。

2、与现有产品相比,原料来源丰富,价格低廉,原料制取的营养素营养更加丰富全面,且易于人体吸收;选用的木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶配比合理,蛋白提取率更高,达76.3%。

3、本产品天然健康,不添加防腐剂,质量稳定,品质优良,用保健食品功能学评价中增强免疫力与环节体力疲劳的动物模型进行功效实验,证明本产品的吸收利用率明显高于未加工的卤虾和常规蛋白粉产品,且经过动物功效验证,同时具有增强免疫力与缓解体力疲劳的功能。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实例一:

1、将50kg卤虾使用85℃热风干燥、粉碎过40目筛,加酶量(以卤虾粉质量计算)0.5%,添加复合酶的比例木瓜蛋白酶:碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5:1:1.5,酶解温度50℃,pH为7.0,酶解时间为5h。经测定,酶解后蛋白质提取率达75.2%,水解度为35.5%,加入5%的活性炭,进行脱色脱臭处理,之后滤去活性炭,进行喷雾干燥得到营养素,得到低聚肽含量(10000d)=21.2g/100g。

2、产品动物饲养实验:将大鼠喂食基础性料适应性饲养一周后,处于生长期的雄性SD大鼠50只,随机分为5组:①酪蛋白组;②无氮组;③未酶解组(喂食卤虾粉配置成的饲料);④产品组(喂食本产品配置成的饲料);⑤蛋白粉产品组(喂食市售蛋白粉配置成的饲料)。

为了保证每只鼠在试验期间的饲料摄入量相同,即氮的摄入量相同,本实验将每只大鼠分别放入一个氮代谢笼中,采用对喂法饲养,自由饮水。环境参数:温度(20±1)℃,相对湿度(40±5)%。

每日9:00称量、投料,并记录大鼠的体重和饲料的添加量。实验的前15天,①②组均喂食酪蛋白饲料,从第16天开始,②组开始改喂无氮饲料,从17天起,每天收集②大鼠的粪便和尿液,测定氮含量,氮的排出量恒定后,①③④⑤大鼠进行七天代谢实验。在进行氮代谢实验期间,每天清晨收集大鼠的粪便和尿液,利用凯氏定氮测定氮含量。实验结束后,所有大鼠禁食12h,腿动脉取血后,脱臼致死,取肝脏组织待测。

3、营养素营养学评价指标计算方法及结果:

吸收氮=食物中氮总摄入量-(粪氮-粪代谢氮)

储留氮=吸收氮-(尿氮-尿内源性氮)=食物氮-(总氮排出量-总内源性氮)

表1-1:大鼠氮平衡及营养评价指标

氮平衡能够反映机体蛋白质代谢的情况。在生长发育期,蛋白质合成代谢的速度超过分解代谢的速度,所以处于生长发育期的动物通常表现为正氮平衡。实验结果表明,四组大鼠均属正氮平衡状态,说明配制的各种饲料均可满足大鼠生长发育的需要。

未酶解组粪便与尿液的排泄量明显高于产品组和蛋白粉组,其中粪氮含量高于两个蛋白酶酶解组2-3倍,尿氮却明显低于其他组。证明卤虾自身含有的天然大分子量蛋白质,在体内消化吸收的程度一般,摄入体内的大分子量蛋白质大部分都未被机体吸收利用,而是直接随着废物经尿液和粪便排出体内。其中,产品组储留氮最高,说明该组大鼠体内的蛋白质合成代谢最旺盛,蛋白质的净利用率也是最高的。

为了达到在不增加食物体积的情况下,满足机体的需要的目的,人们就需要对蛋白质的营养功效进行评价。食物蛋白质的营养价值主要取决于其蛋白质含量和蛋白质在机体内的被吸收利用的程度。蛋白质真消化率、净利用率、生物价等指标,是营养学中最常用的蛋白质营养价值评价指标。

产品组的大鼠蛋白质真消化率和蛋白质净利用率都高于未酶解组与蛋白粉组,这说明利用复合蛋白酶酶解卤虾制得的酶解液中所含的小分子量肽类较卤虾体内天然大分子量蛋白质更加易于机体吸收利用。

通过对比也可看出,产品组较市面蛋白粉组在各项指标中也有明显的优势。

4、增强免疫力功能评价

4.1剂量与分组:选用近交系小鼠80只,体重为20g±1g,实验按人体每日推荐量(以成人体重70kg计,推荐量为0.05g/kg·BW)的5倍(0.25g/kg·BW)、10倍(0.5g/kg·BW)和30倍(1.5g/kg·BW)分成对照组和低、中、高剂量组共四组。对照组喂食白砂糖,给予时间30天。

4.2小鼠迟发型变态反应实验(足跖厚度增加法)

实验结束前的第4天免疫动物,用2%(v/v)绵羊红细胞腹腔注射0.2mL致敏动物,5天后测定左后足跖部厚度,接着于该处皮下注射20%(v/v)绵羊红细胞20μL/每鼠),注射后24小时测定左后足跖部厚度三次,得平均值。

4.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)

淋巴细胞增殖反应:将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1mL,一孔75μLConA液(相当于7.5μg/mL),另一孔作为对照,置5%CO2,37℃培养72h。培养结束前4小时,每孔吸去上清液0.7mL,加入0.7mL无血清RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1mL异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶溶解,分加于96孔培养板中,作3个孔的平行样,以570nm波长测定光密度值。

4.4实验结果

表1-2对小鼠胸腺、脾脏重量的影响(n=10,x+s)

各剂量组脏器/体重比值与对照组比较,差异均无显著性意义(见上表)。表明产品对小鼠的脾脏重量和胸腺重量无明显影响。

表1-3对小鼠迟发型变态反应的影响(x+s)

由上表可以看出绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应试验(足跖增厚法),其中、高剂量组足跖增厚值与对照组比较,差异有显著性意义。

表1-4剂对小鼠脾淋巴细胞转化反应的影响(x+s)

从上表可见,对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化反应,其高剂量组光密度差值高于对照组,差异有显著性意义。表明产品的脾淋巴细胞转化试验结果为阳性,受试样品具有增强细胞免疫功能作用。

依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中增强免疫力功能评价标准判断,本营养素具有增强免疫力功能作用。

5、缓解体力疲劳功能评价

5.1剂量与分组:与增强免疫力功能评价同时进行。选用近交系小鼠80只,体重为20g±1g,实验按人体每日推荐量(以成人体重70kg计,推荐量为0.05g/kg·BW)的5倍(0.25g/kg·BW)、10倍(0.5g/kg·BW)和30倍(1.5g/kg·BW)分成对照组和低、中、高剂量组共四组。对照组喂食白砂糖,给予时间30天。

5.2负重游泳实验:末次灌胃30min后,每组取10只,将其尾根部负荷5%体质量铅皮后置于水深30cm,水温(25.0±1.0)℃的游泳箱中游泳。记录自游泳开始至头部全部沉入水中8s不能浮出水面的时间为小鼠负重游泳时间。

5.3常压耐缺氧实验:末次灌胃1h后,每组取10只放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶中(每瓶1只),瓶口用凡士林密封后,记录小鼠因缺氧而死亡的时间。

5.4实验结果

表1-5小鼠负重游泳时间和常压耐缺氧时间的测定结果(n=10)

由上表可知,小鼠灌胃本营养素后,负重游泳时间和常压耐缺氧时间较对照组均有显著性差异,产品对于缓解体力疲劳具有作用。

依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中缓解体力疲劳功能评价标准判断,本营养素具有缓解体力疲劳功能作用。

经过上述动物实验说明,本产品较加工前的卤虾和大豆蛋白粉,具有更好的吸收利用价值。具有同时增强免疫力与缓解体力疲劳的功能。

实例二

1、将50kg卤虾使用85℃热风干燥、粉碎过40目筛,加酶量(以卤虾粉质量计算)0.75%,添加复合酶的比例木瓜蛋白酶:碱性蛋白酶:风味蛋白酶=1.5:1:2.0,酶解温度52℃,pH为7.5,酶解时间为6h。

经测定,酶解后蛋白质提取率达76.0%,水解度为36.8%,加入5%的活性炭,进行脱色脱臭处理,之后滤去活性炭,进行喷雾干燥得到营养素,得到低聚肽含量(10000d)=22.1g/100g。

2、产品动物饲养实验:将大鼠喂食基础性料适应性饲养一周后,处于生长期的雄性SD大鼠50只,随机分为5组:①酪蛋白组;②无氮组;③未酶解组(喂食卤虾粉配置成的饲料);④产品组(喂食本产品配置成的饲料);⑤蛋白粉产品组(喂食市售蛋白粉配置成的饲料)。

为了保证每只鼠在试验期间的饲料摄入量相同,即氮的摄入量相同,本实验将每只大鼠分别放入一个氮代谢笼中,采用对喂法饲养,自由饮水。环境参数:温度(20±1)℃,相对湿度(40±5)%。

每日9:00称量、投料,并记录大鼠的体重和饲料的添加量。实验的前15天,①②组均喂食酪蛋白饲料,从第16天开始,②组开始改喂无氮饲料,从17天起,每天收集②大鼠的粪便和尿液,测定氮含量,氮的排出量恒定后,①③④⑤大鼠进行七天代谢实验。在进行氮代谢实验期间,每天清晨收集大鼠的粪便和尿液,利用凯氏定氮测定氮含量。实验结束后,所有大鼠禁食12h,腿动脉取血后,脱臼致死,取肝脏组织待测。

3、营养素营养学评价指标计算方法及结果:

吸收氮=食物中氮总摄入量-(粪氮-粪代谢氮)

储留氮=吸收氮-(尿氮-尿内源性氮)=食物氮-(总氮排出量-总内源性氮)

表2-1大鼠氮平衡及营养评价指标

氮平衡能够反映机体蛋白质代谢的情况。在生长发育期,蛋白质合成代谢的速度超过分解代谢的速度,所以处于生长发育期的动物通常表现为正氮平衡。实验结果表明,四组大鼠均属正氮平衡状态,说明配制的各种饲料均可满足大鼠生长发育的需要。

未酶解组粪便与尿液的排泄量明显高于产品组和蛋白粉组,其中粪氮含量高于两个蛋白酶酶解组2-3倍,尿氮却明显低于其他组。证明卤虾自身含有的天然大分子量蛋白质,在体内消化吸收的程度一般,摄入体内的大分子量蛋白质大部分都未被机体吸收利用,而是直接随着废物经尿液和粪便排出体内。其中,产品组储留氮最高,说明该组大鼠体内的蛋白质合成代谢最旺盛,蛋白质的净利用率也是最高的。

为了达到在不增加食物体积的情况下,满足机体的需要的目的,人们就需要对蛋白质的营养功效进行评价。食物蛋白质的营养价值主要取决于其蛋白质含量和蛋白质在机体内的被吸收利用的程度。蛋白质真消化率、净利用率、生物价等指标,是营养学中最常用的蛋白质营养价值评价指标。

产品组的大鼠蛋白质真消化率和蛋白质净利用率都高于未酶解组与蛋白粉组,这说明利用复合蛋白酶酶解卤虾制得的酶解液中所含的小分子量肽类较卤虾体内天然大分子量蛋白质更加易于机体吸收利用。

通过对比也可看出,产品组较市面蛋白粉组在各项指标中也有明显的优势。

4、增强免疫力功能评价

4.1剂量与分组:选用近交系小鼠80只,体重为20g±1g,实验按人体每日推荐量(以成人体重70kg计,推荐量为0.05g/kg·BW)的5倍(0.25g/kg·BW)、10倍(0.5g/kg·BW)和30倍(1.5g/kg·BW)分成对照组和低、中、高剂量组共四组。对照组喂食白砂糖,给予时间30天。

4.2小鼠迟发型变态反应实验(足跖厚度增加法)

实验结束前的第4天免疫动物,用2%(v/v)绵羊红细胞腹腔注射0.2mL致敏动物,5天后测定左后足跖部厚度,接着于该处皮下注射20%(v/v)绵羊红细胞20μL/每鼠),注射后24小时测定左后足跖部厚度三次,得平均值。

4.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)

淋巴细胞增殖反应:将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1mL,一孔75μLConA液(相当于7.5μg/mL),另一孔作为对照,置5%CO2,37℃培养72h。培养结束前4小时,每孔吸去上清液0.7mL,加入0.7mL无血清RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1mL异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶溶解,分加于96孔培养板中,作3个孔的平行样,以570nm波长测定光密度值。

4.4实验结果

表2-2对小鼠胸腺、脾脏重量的影响(n=10,x+s)

各剂量组脏器/体重比值与对照组比较,差异均无显著性意义(见上表)。表明产品对小鼠的脾脏重量和胸腺重量无明显影响。

表2-3对小鼠迟发型变态反应的影响(x+s)

由上表可以看出绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应试验(足跖增厚法),其中、高剂量组足跖增厚值与对照组比较,差异有显著性意义。

表2-4剂对小鼠脾淋巴细胞转化反应的影响(x+s)

从上表可见,对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化反应,其高剂量组光密度差值高于对照组,差异有显著性意义。表明产品的脾淋巴细胞转化试验结果为阳性,受试样品具有增强细胞免疫功能作用。

依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中增强免疫力功能评价标准判断,本营养素具有增强免疫力功能作用。

5、缓解体力疲劳功能评价

5.1剂量与分组:与增强免疫力功能评价同时进行。选用近交系小鼠80只,体重为20g±1g,实验按人体每日推荐量(以成人体重70kg计,推荐量为0.05g/kg·BW)的5倍(0.25g/kg·BW)、10倍(0.5g/kg·BW)和30倍(1.5g/kg·BW)分成对照组和低、中、高剂量组共四组。对照组喂食白砂糖,给予时间30天。

5.2负重游泳实验:末次灌胃30min后,每组取10只,将其尾根部负荷5%体质量铅皮后置于水深30cm,水温(25.0±1.0)℃的游泳箱中游泳。记录自游泳开始至头部全部沉入水中8s不能浮出水面的时间为小鼠负重游泳时间。

5.3常压耐缺氧实验:末次灌胃1h后,每组取10只放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶中(每瓶1只),瓶口用凡士林密封后,记录小鼠因缺氧而死亡的时间。

5.4实验结果

表2-5小鼠负重游泳时间和常压耐缺氧时间的测定结果(n=10)

由上表可知,小鼠灌胃本营养素后,负重游泳时间和常压耐缺氧时间较对照组均有显著性差异,产品对于缓解体力疲劳具有作用。

依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中缓解体力疲劳功能评价标准判断,本营养素具有缓解体力疲劳功能作用。

经过上述动物实验说明,本产品较加工前的卤虾和大豆蛋白粉,具有更好的吸收利用价值。具有同时增强免疫力与缓解体力疲劳的功能。

实例三:

1、将50kg卤虾使用85℃热风干燥、粉碎过40目筛,加酶量(以卤虾粉质量计算)1.0%,添加酶的比例木瓜蛋白酶:碱性蛋白酶:风味蛋白酶=2.0:1:2.0,酶解温度55℃,pH为7.5,酶解时间为6h。

经测定,酶解后蛋白质提取率达76.0%,水解度为38.8%,加入5%的活性炭,进行脱色脱臭处理,之后滤去活性炭,进行喷雾干燥得到营养素。低聚肽含量(10000d)=23.0g/100g。2、产品动物饲养实验:将大鼠喂食基础性料适应性饲养一周后,处于生长期的雄性SD大鼠50只,随机分为5组:①酪蛋白组;②无氮组;③未酶解组(喂食卤虾粉配置成的饲料);④产品组(喂食本产品配置成的饲料);⑤蛋白粉产品组(喂食市售蛋白粉配置成的饲料)。

为了保证每只鼠在试验期间的饲料摄入量相同,即氮的摄入量相同,本实验将每只大鼠分别放入一个氮代谢笼中,采用对喂法饲养,自由饮水。环境参数:温度(20±1)℃,相对湿度(40±5)%。

每日9:00称量、投料,并记录大鼠的体重和饲料的添加量。实验的前15天,①②组均喂食酪蛋白饲料,从第16天开始,②组开始改喂无氮饲料,从17天起,每天收集②大鼠的粪便和尿液,测定氮含量,氮的排出量恒定后,①③④⑤大鼠进行七天代谢实验。在进行氮代谢实验期间,每天清晨收集大鼠的粪便和尿液,利用凯氏定氮测定氮含量。实验结束后,所有大鼠禁食12h,腿动脉取血后,脱臼致死,取肝脏组织待测。

3、营养素营养学评价指标计算方法及结果:

吸收氮=食物中氮总摄入量-(粪氮-粪代谢氮)

储留氮=吸收氮-(尿氮-尿内源性氮)=食物氮-(总氮排出量-总内源性氮)

表3-1大鼠氮平衡及营养评价指标

氮平衡能够反映机体蛋白质代谢的情况。在生长发育期,蛋白质合成代谢的速度超过分解代谢的速度,所以处于生长发育期的动物通常表现为正氮平衡。实验结果表明,四组大鼠均属正氮平衡状态,说明配制的各种饲料均可满足大鼠生长发育的需要。

未酶解组粪便与尿液的排泄量明显高于产品组和蛋白粉组,其中粪氮含量高于两个蛋白酶酶解组2-3倍,尿氮却明显低于其他组。证明卤虾自身含有的天然大分子量蛋白质,在体内消化吸收的程度一般,摄入体内的大分子量蛋白质大部分都未被机体吸收利用,而是直接随着废物经尿液和粪便排出体内。其中,产品组储留氮最高,说明该组大鼠体内的蛋白质合成代谢最旺盛,蛋白质的净利用率也是最高的。

为了达到在不增加食物体积的情况下,满足机体的需要的目的,人们就需要对蛋白质的营养功效进行评价。食物蛋白质的营养价值主要取决于其蛋白质含量和蛋白质在机体内的被吸收利用的程度。蛋白质真消化率、净利用率、生物价等指标,是营养学中最常用的蛋白质营养价值评价指标。

产品组的大鼠蛋白质真消化率和蛋白质净利用率都高于未酶解组与蛋白粉组,这说明利用复合蛋白酶酶解卤虾制得的酶解液中所含的小分子量肽类较卤虾体内天然大分子量蛋白质更加易于机体吸收利用。

通过对比也可看出,产品组较市面蛋白粉组在各项指标中也有明显的优势。

4、增强免疫力功能评价

4.1剂量与分组:选用近交系小鼠80只,体重为20g±1g,实验按人体每日推荐量(以成人体重70kg计,推荐量为0.05g/kg·BW)的5倍(0.25g/kg·BW)、10倍(0.5g/kg·BW)和30倍(1.5g/kg·BW)分成对照组和低、中、高剂量组共四组。对照组喂食白砂糖,给予时间30天。

4.2小鼠迟发型变态反应实验(足跖厚度增加法)

实验结束前的第4天免疫动物,用2%(v/v)绵羊红细胞腹腔注射0.2mL致敏动物,5天后测定左后足跖部厚度,接着于该处皮下注射20%(v/v)绵羊红细胞20μL/每鼠),注射后24小时测定左后足跖部厚度三次,得平均值。

4.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)

淋巴细胞增殖反应:将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1mL,一孔75μLConA液(相当于7.5μg/mL),另一孔作为对照,置5%CO2,37℃培养72h。培养结束前4小时,每孔吸去上清液0.7mL,加入0.7mL无血清RPMI1640培养液,同时加入MTT(5mg/mL)50μL/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入1mL异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶溶解,分加于96孔培养板中,作3个孔的平行样,以570nm波长测定光密度值。

4.4实验结果

表3-2对小鼠胸腺、脾脏重量的影响(n=10,x+s)

各剂量组脏器/体重比值与对照组比较,差异均无显著性意义(见上表)。表明产品对小鼠的脾脏重量和胸腺重量无明显影响。

表3-3对小鼠迟发型变态反应的影响(x+s)

由上表可以看出绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应试验(足跖增厚法),其中、高剂量组足跖增厚值与对照组比较,差异有显著性意义。

表3-4剂对小鼠脾淋巴细胞转化反应的影响(x+s)

从上表可见,对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化反应,其高剂量组光密度差值高于对照组,差异有显著性意义。表明产品的脾淋巴细胞转化试验结果为阳性,受试样品具有增强细胞免疫功能作用。

依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中增强免疫力功能评价标准判断,本营养素具有增强免疫力功能作用。

5、缓解体力疲劳功能评价

5.1剂量与分组:与增强免疫力功能评价同时进行。选用近交系小鼠80只,体重为20g±1g,实验按人体每日推荐量(以成人体重70kg计,推荐量为0.05g/kg·BW)的5倍(0.25g/kg·BW)、10倍(0.5g/kg·BW)和30倍(1.5g/kg·BW)分成对照组和低、中、高剂量组共四组。对照组喂食白砂糖,给予时间30天。

5.2负重游泳实验:末次灌胃30min后,每组取10只,将其尾根部负荷5%体质量铅皮后置于水深30cm,水温(25.0±1.0)℃的游泳箱中游泳。记录自游泳开始至头部全部沉入水中8s不能浮出水面的时间为小鼠负重游泳时间。

5.3常压耐缺氧实验:末次灌胃1h后,每组取10只放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶中(每瓶1只),瓶口用凡士林密封后,记录小鼠因缺氧而死亡的时间。

5.4实验结果

表3-5小鼠负重游泳时间和常压耐缺氧时间的测定结果(n=10)

由上表可知,小鼠灌胃本营养素后,负重游泳时间和常压耐缺氧时间较对照组均有显著性差异,产品对于缓解体力疲劳具有作用。

依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中缓解体力疲劳功能评价标准判断,本营养素具有缓解体力疲劳功能作用。

经过上述动物实验说明,本产品较加工前的卤虾和大豆蛋白粉,具有更好的吸收利用价值。具有同时增强免疫力与缓解体力疲劳的功能。

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本发明涉及虾蛋白提取技术领域,具体涉及一种提取用于增强免疫力与缓解疲劳的虾蛋白营养素方法,步骤如下:(1)将卤虾通过热风干燥;(2)干燥后粉碎,经过筛分处理;(3)粉碎筛分后,加水浸泡;(4)添加复合酶有限酶解,制得酶解液;(5)浓缩制得的酶解液;(6)加入5的活性炭,进行脱色脱臭处理,之后滤去活性炭;(7)最后,喷雾干燥处理后得到营养素;所述步骤(4)中的添加复合酶为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和风味。

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