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一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法.pdf

上传人：a1 文档编号：7003727 上传时间：2019-09-19 格式：PDF 页数：12 大小：519.88KB
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摘要
申请专利号：

CN201210502941.6

 申请日：

20121130
公开号：

CN102960250B

 公开日：

20140226
当前法律状态：

有效性：

有效
法律详情：

IPC分类号：

A01H4/00

 主分类号：

A01H4/00
申请人：

通化师范学院
发明人：

顾地周,杨丽娟,朱俊义,姜云天,冯颖,郭志欣,陆爽,潘雨,禚玲玲,张学士
地址：

134002 吉林省通化市东昌区育才路950号
优先权：

CN201210502941A
专利代理机构：

通化旺维专利商标事务所有限公司

 代理人：

王伟
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内容摘要

本发明涉及一种植物繁殖，即利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。以牛皮杜鹃为例，其步骤如下：10月下旬采集牛皮杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，水培促其侧芽萌发生长，处理后切割成1叶1段作为外植体备用；牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为：基本培养基＋KT?0.13～0.14mg·L-1＋IBA0.05～0.08mg·L-1＋NAA?0.02～0.05mg·L-1＋GA3?2.70～2.90mg·L-1；具有步骤简捷、成本低、可操作性强，提高种苗生产效率，可直接应用于杜鹃花工厂化育苗。

权利要求书

1.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以牛皮杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为：基本培养基＋KT  0.13～0.14 mg·L＋IBA 0.05～0.08 mg·L＋NAA  0.02～0.05 mg·L＋GA  2.70～2.90 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·LNaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 2.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以短果杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）短果杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT  0.09～0.12 mg·L＋IBA 0.03～0.07 mg·L＋NAA 0.04～0.06 mg·L＋GA 2.80～3.00 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 3.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以照白杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）照白杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.17～0.25 mg·L＋IAA 0.20～0.25 mg·L＋NAA 0.02～0.05 mg·L＋GA 2.30～2.60 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 4.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以小叶杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）小叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT  0.08～0.12 mg·L＋IBA 0.15～0.20 mg·L＋NAA 0.03～0.05 mg·L＋GA 2.00～2.30 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 5.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以大字杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）大字杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT  0.07～0.10 mg·L＋IAA 0.20～0.25 mg·L＋NAA 0.01～0.03 mg·L＋GA 2.20～2.50 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 6.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以兴安杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）兴安杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.04～0.07 mg·L＋NAA 0.02～0.04 mg·L＋GA 1.00～1.50 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 7.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以迎红杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）迎红杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.03～0.06 mg·L＋NAA 0.03～0.07 mg·L＋GA 0.09～1.30 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 8.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以毛毡杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）毛毡杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.08～0.12 mg·L＋IAA 0.12～0.15 mg·L＋NAA 0.05～0.07 mg·L＋GA 1.80～2.00 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。 9.一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其特征在于步骤如下：（1）以苞叶杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用；（2）苞叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.17～0.20 mg·L＋IAA 0.14～0.18 mg·L＋GA 1.30～1.80 mg·L；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L，添加蔗糖10.0 g·L，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L(NH)SO，375 mg·LNHNO，180 mg·LKNO，320 mg·LCaCl·2HO，245 mg·LMgSO·7HO，436 mg·LKHPO；18.4 mg·LFeSO·7HO，24.9 mg·LNa·EDTA·2HO；12.4 mg·LMnSO·4HO，7.2 mg·LZnSO·7HO，5.7 mg·LHBO，0.32 mg·LKI，0.05 mg·L NaMoO·2HO；0.3 mg·L盐酸硫胺素VB，0.25 mg·L烟酸，75 mg·L肌醇，0.25 mg·L甘氨酸。

说明书

技术领域　

本发明涉及一种，即利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。 

背景技术

在现有技术中，长白山杜鹃花属植物包括牛皮杜鹃(Rhododendron chrysanthum Pall.)、短果杜鹃(Rhododendron brachycarpum D. Don)、照白杜鹃(Rhododendron micranthum Turcz.)、小叶杜鹃(Rhododendron parvifolium Adams.)、大字杜鹃(Rhododendron schlippenbachii Maxim.)、兴安杜鹃(Rhododendron dauricum L.)、迎红杜鹃(Rhododendron mucronulatum Turcz.)、毛毡杜鹃(Rhododendron confertissimum Nakai)和苞叶杜鹃(Rhododendron redowskianum Maxim.)等共有9个种，均为吉林省重点保护植物，其中牛皮杜鹃和苞叶杜鹃为我国国家三级保护的珍贵稀有植物，短果杜鹃为长白山区珍贵稀有植物，牛皮杜鹃、毛毡杜鹃、照白杜鹃和小叶杜鹃是常绿灌木，短果杜鹃为常绿小乔木，兴安杜鹃为半常绿灌木。牛皮杜鹃、苞叶杜鹃和毛毡杜鹃分布海拔达2500米高，属高山杜鹃。牛皮杜鹃、大字杜鹃、照白杜鹃、小叶杜鹃、迎红杜鹃和兴安杜鹃全株挥发油含量较高，为精油和药用植物。这9种杜鹃均可通过人工引种驯化为园林绿化植物。

以上9种杜鹃对水土保持和维持生态平衡起重要作用，是杜鹃花育种的种质资源。但其在我国分布甚狭，仅在长白山有较大种群分布，其它地区仅为零星分布，由于人们乱采乱挖，野生资源遭到极大威胁。这9种杜鹃花种子细小，萌发率低，萌发后形成的小苗成活率极低；扦插繁殖需要大量的野生杜鹃枝条，对野生资源破坏极大，且生根率和移栽成活率极低，开发和利用受到极大限制。

目前，9种杜鹃花的离体繁殖报道较多，通过愈伤组织再分化芽苗、腋芽丛生和直接再生等途径具有增殖系数高等优点，但仍存在外植体诱导愈伤组织再分化、腋芽丛生和直接再生周期较长，获得不定芽再进一步生根速度较慢、步骤复杂、成本高、可操作性差，长期连续增殖极易发生退化和变异等缺点。

发明内容

本发明的目的是针对上述不足而提供一种方法可行、步骤简捷、成本低和繁殖速度快的利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。

本发明的技术解决方案是：一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集牛皮杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为：基本培养基＋KT  0.13～0.14 mg·L-1＋IBA 0.05～0.08 mg·L-1＋NAA  0.02～0.05 mg·L-1＋GA3  2.70～2.90 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集短果杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）短果杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT  0.09～0.12 mg·L-1＋IBA 0.03～0.07 mg·L-1＋NAA 0.04～0.06 mg·L-1＋GA3 2.80～3.00 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集照白杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）照白杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.17～0.25 mg·L-1＋IAA 0.20～0.25 mg·L-1＋NAA 0.02～0.05 mg·L-1＋GA3 2.30～2.60 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集小叶杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）小叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT  0.08～0.12 mg·L-1＋IBA 0.15～0.20 mg·L-1＋NAA 0.03～0.05 mg·L-1＋GA3 2.00～2.30 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集大字杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）大字杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT  0.07～0.10 mg·L-1＋IAA 0.20～0.25 mg·L-1＋NAA 0.01～0.03 mg·L-1＋GA3 2.20～2.50 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集兴安杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）兴安杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.04～0.07 mg·L-1＋NAA 0.02～0.04 mg·L-1＋GA3 1.00～1.50 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集迎红杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）迎红杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.03～0.06 mg·L-1＋NAA 0.03～0.07 mg·L-1＋GA3 0.09～1.30 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集毛毡杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）毛毡杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.08～0.12 mg·L-1＋IAA 0.12～0.15 mg·L-1＋NAA 0.05～0.07 mg·L-1＋GA3 1.80～2.00 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

（1）10月下旬采集苞叶杜鹃枝条，将枝条进行低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长；待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用体积分数的75%乙醇涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用；

（2）苞叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT 0.17～0.20 mg·L-1＋IAA 0.14～0.18 mg·L-1＋GA3 1.30～1.80 mg·L-1；培养基中附加琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度23±2 ℃条件下培养茎段35 d；基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素VB1，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。

本发明的优点是：1、而相对于愈伤组织再分化芽苗、腋芽丛生和直接再生等途径，嫩茎生根和腋芽萌发生长同步进行的繁殖方式不仅成苗速度快、繁殖系数高，而且遗传稳定、步骤简捷、成本低、可操作性强，可大大提高种苗生产效率，属一步成苗，可直接应用于杜鹃花工厂化育苗。2、经统计计算，9种杜鹃花小植株成活率可达到90.3%～98.5%。 

下面将结合实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。 

具体实施方式

利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法，其步骤如下：

以牛皮杜鹃一步成苗开展的实验为例：

1  材料与方法

1.1 材料及处理

10月下旬，于长白山国家级自然保护区采牛皮杜鹃枝条，并将枝条用塑料袋包好后放入冰柜内低温休眠，温度控制在-10～-5 ℃，60 d后取出并将顶芽去除，在300倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长。待侧芽萌发长至2.50 cm时，将鲜嫩的侧芽剪下，去除嫩叶及叶柄，用75%乙醇（体积分数）涮洗60 s，移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡8 min，无菌水冲洗10次，无菌滤纸吸干表面水分，去除被乙醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成1叶1段作为外植体备用。

1.2 牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长、高频植株再生和炼苗

基本培养基成分和含量：87 mg·L-1(NH4)2SO4，375 mg·L-1NH4NO3，180 mg·L-1KNO3，320 mg·L-1CaCl2·2H2O，245 mg·L-1MgSO4·7H2O，436 mg·L-1KH2PO4；18.4 mg·L-1FeSO4·7H2O，24.9 mg·L-1Na2·EDTA·2H2O；12.4 mg·L-1MnSO4·4H2O，7.2 mg·L-1ZnSO4·7H2O，5.7 mg·L-1H3BO3，0.32 mg·L-1KI，0.05 mg·L-1 Na2MoO4·2H2O；0.3 mg·L-1盐酸硫胺素(VB1)，0.25 mg·L-1烟酸，75 mg·L-1肌醇，0.25 mg·L-1甘氨酸。培养基中附加激动素KT(0.03～0.010 mg·L-1)、吲哚丁酸IBA(0.10～0.45 mg·L-1)、萘乙酸NAA(0.06～0.13 mg·L-1)和赤霉素GA3(1.40～2.60 mg·L-1)，琼脂粉7.8 g·L-1，添加蔗糖10.0 g·L-1，调节pH值至5.6，牛皮杜鹃嫩茎段在光照周期9 h·d-1、光照强度1000 lx和温度(23±2) ℃条件下培养。为提高牛皮杜鹃嫩茎段生根的速度及生根率和腋芽萌发生长速度及长度，通过均匀设计法设计实验，选用U13(134)均匀表，每个处理接种10个嫩茎段，重复3次，筛选牛皮杜鹃茎段生根和腋芽萌发生长的激动素、吲哚丁酸、萘乙酸和赤霉素最佳浓度配比。茎段培养35 d统计生根率和腋芽萌发后生长长度。生根率=(生根的茎段数/接种的茎段总数)×100%，茎段腋芽长度为1个培养周期过程中，茎段腋芽萌发生长后的长度（不包括原茎段长度）。

待茎段生根和腋芽萌发生长至3.50 cm，腋芽发出6～8个叶时，在超净工作台上打开培养瓶，将腋芽留1叶剪下苗干，再将苗干切割成1叶1段后，再次将小茎段转接到茎段生根和腋芽萌发生长培养基中，计算出每瓶中每个茎段生根和腋芽萌发生长的平均增殖倍数和周期。

当牛皮杜鹃试管苗增殖到需要的数量且小植株长至2.00～2.50 cm时，将小植株从培养瓶中取出，放在杀毒矾溶液（浓度为2 mg·L-1）中洗净根上的琼脂，将小植株栽植到经多菌灵（150倍液）消毒过的草炭土、腐烂松针和河砂 (2: 3: 1)的混合基质中，覆盖透光性能好的无滴塑料薄膜进行保湿保温，控制温度为(18±2) ℃，保持相对湿度在70%～75%之间，13 h·d-1的自然光照，湿度过高或中午温度升高时，将薄膜打开小口进行换气通风，湿度降低时，可在早上喷洒适量清水。

2  结果与分析

2.1 KT、IBA、NAA和GA3浓度交叉配比对牛皮杜鹃茎段生根的影响

数据(表1)经均匀设计软件分析处理后可得回归方程为Y=81.8＋221X1－17.5X2－111X3，显著性水平α＝0.05，复相关系数R＝0.9536，剩余标准差S＝2.0600，检验值Ft＝30.12﹥临界值F(0.05,3,9)＝3.863，回归方程具有显著性，激动素、吲哚丁酸和萘乙酸对茎段的生根影响具有显著性，赤霉素对茎段的生根影响不显著。通过计算激动素、吲哚丁酸和萘乙酸对生根的贡献值和贡献率可知，U1＝256，U1/U＝66.4%；U2＝29.5，U2/U＝7.66%；U3＝48.7，U3/U＝12.6%，但从贡献率数值来看，激动素远大于吲哚丁酸和萘乙酸对茎段生根的影响，吲哚丁酸和萘乙酸差距不大，说明吲哚丁酸和萘乙酸均在牛皮杜鹃茎段生根起不可缺少的重要作用。因激动素与生根率呈正相关，而吲哚丁酸和萘乙酸与生根率呈负相关。猜测质量浓度高于0.10 mg·L-1的激动素，吲哚丁酸和萘乙酸质量浓度分别低于0.10 mg·L-1和0.06 mg·L-1时，生根率可能更高。为验证此猜测的可能性，又以激动素为0.10、0.11、0.12、0.13、0.14和0.15 mg·L-1，吲哚丁酸质量浓度为0.10、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01和0.00 mg·L-1，萘乙酸质量浓度为0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01和0.00 mg·L-1开展11个水平的验证试验，重复3次。具体操作按1.1和1.2方法，结果发现，激动素质量浓度为(0.12～0.14 mg·L-1)、吲哚丁酸质量浓度为(0.03～0.08 mg·L-1) 和萘乙酸质量浓度为(0.02～0.05 mg·L-1)时，牛皮杜鹃嫩茎段生根率最高，平均生根率达99.9%。均高于表1所列13个处理的生根率。

表1  牛皮杜鹃嫩茎段生根和腋芽萌发生长激素筛选的U13(134)试验设计与结果

Table1  U13(134)test design and result of hormone for rooting and axillary bud growing of stems of Rhododendron chrysanthum

2.2 KT、IBA、NAA和GA3浓度交叉配比对牛皮杜鹃茎段腋芽萌发生长的影响

数据(表1)经均匀设计软件分析处理后可得回归方程为Y=－0.270＋13.7X1-－1.27X2－0.729X4，显著性水平α＝0.05，复相关系数R＝0.8996，剩余标准差S＝0.1860，检验值Ft＝12.73﹥临界值F(0.05,3,9)＝3.863，回归方程具有显著性，激动素、吲哚丁酸和赤霉素对牛皮杜鹃嫩茎段腋芽萌发生长的影响具有显著性，萘乙酸茎段腋芽萌发生长的影响不显著。同理，计算激动素、吲哚丁酸和赤霉素对茎段腋芽萌发生长的贡献值和贡献率可知，U1＝0.947，U1/U＝71.5%；U2＝0.193，U2/U＝14.5%；U4＝0.779，U4/U＝58.8%，说明激动素大于赤霉素，且远大于吲哚丁酸对茎段腋芽萌发生长的贡献，而吲哚丁酸又是牛皮杜鹃茎段腋芽萌发生长不可缺少的重要因素，因激动素和赤霉素与茎段腋芽萌发生长呈正相关，而吲哚丁酸与茎段腋芽萌发生长呈负相关。由此推测，激动素和赤霉素的质量浓度分别高于0.10 mg·L-1和2.60 mg·L-1，以及低于0.10 mg·L-1的吲哚丁酸可能茎段腋芽萌发生长更好。为验证推测，又以激动素为0.10、0.11、0.12、0.13、0.14和0.15 mg·L-1，吲哚丁酸质量浓度为0.10、0.09、0.08、0.07、0.06、0.05、0.04、0.03、0.02、0.01和0.00 mg·L-1，赤霉素为2.60、2.70、2.80、2.90和3.00 mg·L-1开展11个水平的验证试验，重复3次。结果发现，经过35 d的培养，激动素质量浓度在0.13～0.15 mg·L-1、吲哚丁酸质量浓度在0.05～0.09 mg·L-1和赤霉素质量浓度在2.70～2.90 mg·L-1范围内，牛皮杜鹃茎段腋芽萌发生长均较好，腋芽萌发后的平均生长长度为3.06 cm，比表1所列13个处理的腋芽长度均大。

由以上实验结果可知，由于影响牛皮杜鹃嫩茎段生根的因素和含量范围是基本培养基、激动素质量浓度为(0.12～0.14 mg·L-1)、吲哚丁酸质量浓度为(0.03～0.08 mg·L-1)和萘乙酸质量浓度为(0.02～0.05 mg·L-1)；而茎段腋芽萌发生长的的主要影响因素和含量范围为培养基、激动素(0.13～0.15 mg·L-1)、吲哚丁酸质量浓度为(0.05～0.09 mg·L-1) 和赤霉素质量浓度为(2.70～2.90 mg·L-1)。

因此，可以确定牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为：基本培养基＋KT(0.13～0.14 mg·L-1)＋IBA(0.05～0.08 mg·L-1)＋NAA(0.02～0.05 mg·L-1)＋GA3(2.70～2.90 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.9%，腋芽萌发后的平均生长长度为3.06 cm。

同理，可得其它8种杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基分别如下：

短果杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.09～0.12 mg·L-1)＋IBA(0.03～0.07 mg·L-1)＋NAA(0.04～0.06 mg·L-1)＋GA3(2.80～3.00 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.7%，腋芽萌发后的平均生长长度为3.17 cm。

照白杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.17～0.25 mg·L-1)＋IAA(0.20～0.25 mg·L-1)＋NAA(0.02～0.05 mg·L-1)＋GA3(2.30～2.60 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.4%，腋芽萌发后的平均生长长度为3.22 cm。

小叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.08～0.12 mg·L-1)＋IBA(0.15～0.20 mg·L-1)＋NAA(0.03～0.05 mg·L-1)＋GA3(2.00～2.30 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.5%，腋芽萌发后的平均生长长度为2.96 cm。

大字杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.07～0.10 mg·L-1)＋IAA(0.20～0.25 mg·L-1)＋NAA(0.01～0.03 mg·L-1)＋GA3(2.20～2.50 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.9%，腋芽萌发后的平均生长长度为2.87 cm。

兴安杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.04～0.07 mg·L-1)＋NAA(0.02～0.04 mg·L-1)＋GA3(1.00～1.50 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.5%，腋芽萌发后的平均生长长度为3.30 cm。

迎红杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.03～0.06 mg·L-1)＋NAA(0.03～0.07 mg·L-1)＋GA3(0.09～1.30 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.0%，腋芽萌发后的平均生长长度为3.37 cm。

毛毡杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.08～0.12 mg·L-1)＋IAA(0.12～0.15 mg·L-1)＋NAA(0.05～0.07 mg·L-1)＋GA3(1.80～2.00 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.6%，腋芽萌发后的平均生长长度为2.80 cm。

苞叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是：基本培养基＋KT(0.17～0.20 mg·L-1)＋IAA(0.14～0.18 mg·L-1)＋GA3(1.30～1.80 mg·L-1)。嫩茎段平均生根率99.8%，腋芽萌发后的平均生长长度为2.77 cm。

2.3  9种杜鹃高频植株再生体系建立

按1.2方法，9种杜鹃平均按每瓶接种12个茎段，平均28天为1个周期，每个茎段在1个培养周期内平均可平均切割成7段计算，每年有n个周期（9种杜鹃每年均为12个周期）进行扩繁，年生产杜鹃种苗数为：∑年产试管苗=12×7n株，可见本发明可以满足长白山9种杜鹃花工厂化育苗的需要。 

2.4  9种杜鹃小植株的炼苗和移栽

根据1.2中的方法，当种苗扩繁到需要数量后，均选取3.00 cm以上的健壮小植株进行炼苗移栽，经统计计算，9种杜鹃花小植株成活率可达到85.3%～88.5% 。

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1、(10)授权公告号 CN 102960250 B (45)授权公告日 2014.02.26 CN 102960250 B (21)申请号 201210502941.6 (22)申请日 2012.11.30 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 通化师范学院 地址 134002 吉林省通化市东昌区育才路 950 号 (72)发明人 顾地周 杨丽娟 朱俊义 姜云天 冯颖 郭志欣 陆爽 潘雨 禚玲玲 张学士 (74)专利代理机构 通化旺维专利商标事务所有 限公司 22205 代理人 王伟 SU 1630711 A1,1991.02.28, 全文 . JP 特开平 6-189643 。

2、A,1994.07.12, 全文 . CN 101292628 A,2008.10.29, 全文 . CN 102090337 A,2011.06.15, 全文 . CN 101044840 A,2007.10.03, 全文 . 顾地周等 .“基于均匀设计法优化照白杜鹃 高效快繁体系” .林业实用技术 .2008,( 第 12 期 ), 第 1.1、 1.2、 2.1 节 . (54) 发明名称 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高 效成苗方法 (57) 摘要 本发明涉及一种植物繁殖， 即利用长白山杜 鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。以牛皮 杜鹃为例， 其步骤如下 ： 10 月下旬采集牛皮。

3、杜鹃 枝条， 将枝条进行低温休眠， 水培促其侧芽萌发生 长， 处理后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 牛皮 杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为 ： 基 本培养基 KT 0.13 0.14mg L-1 IBA0.05 0.08mgL-1 NAA 0.02 0.05mgL -1 GA 3 2.70 2.90mgL-1； 具有步骤简捷、 成本低、 可操 作性强， 提高种苗生产效率， 可直接应用于杜鹃花 工厂化育苗。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 陈仕高 权利要求书 3 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书3页 说明书8。

4、页 (10)授权公告号 CN 102960250 B CN 102960250 B 1/3 页 2 1. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以牛皮杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2）牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为 ： 基本培养基 KT 0.13 0.14 mgL-1 IBA 0.05 0.08 mgL-1 NAA 0.02 0.05 mgL-1 GA3 2.70 2.90 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光。

5、照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mgL-1MgSO47H2O， 436 mgL-1KH2PO4； 18.4 mgL-1FeSO47H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1Na2MoO42H2O ； 0.3 。

6、mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 2. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以短果杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 短果杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.09 0.12 mg L-1IBA 0.030.07 mg L-1NAA 0.040.06 mg L-1GA3 2.803.00 mg L-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周 期 9 。

7、hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和 含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mg L-1Na2 EDTA 2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 N。

8、a2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 3. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以照白杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 照白杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.17 0.25 mg L-1IAA 0.200.25 mg L-1NAA 0.020.05 mg L-1GA3 2.302.60 mg L-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 。

9、5.6， 嫩茎段在光照周 期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和 含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mg L-1Na2 EDTA 2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-。

10、1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 4. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以小叶杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 小叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.08 0.12 mg L-1IBA 0.150.20 mg L-1NAA 0.030.05 mg L-1GA3 2.002.30 mg L-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.。

11、0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周 期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和 权 利 要 求 书 CN 102960250 B 2 2/3 页 3 含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mg L-1Na2 EDTA 2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO。

12、44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 5. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以大字杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 大字杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.07 0.10 mg L-1IAA 0.200.25 mg L-1NAA 0.010.03 mg 。

13、L-1GA3 2.202.50 mg L-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周 期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和 含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mg L-1Na2 EDTA 2H2O。

14、 ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 6. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以兴安杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 兴安杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.04 0.07 mgL-1 NAA 0.02 0.04 mgL-。

15、1 GA3 1.00 1.50 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mgL-1MgSO47H2O， 436 mgL-1KH2PO4； 18.4 mgL-1FeSO47H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL。

16、-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO4 2H2O ； 0.3 mg L-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mg L-1烟酸， 75 mg L-1肌醇， 0.25 mg L-1 甘氨酸。 7. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以迎红杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 迎红杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.03 0.06 mgL-1 NAA 0.03 0.07 mgL-1 GA3。

17、 0.09 1.30 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mgL-1MgSO47H2O， 436 mgL-1KH2PO4； 18.4 mgL-1FeSO47H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL-1MnS。

18、O44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO4 2H2O ； 0.3 mg L-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mg L-1烟酸， 75 mg L-1肌醇， 0.25 mg L-1 甘氨酸。 8. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： 权 利 要 求 书 CN 102960250 B 3 3/3 页 4 （1） 以毛毡杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 毛毡杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.08 0.12。

19、 mg L-1IAA 0.120.15 mg L-1NAA 0.050.07 mg L-1GA3 1.802.00 mg L-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周 期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和 含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 。

20、mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mg L-1Na2 EDTA 2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 9. 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其特征在于步骤如下 ： （1） 以苞叶杜鹃枝条水培侧芽嫩茎段作为外植体备用 ； （2） 苞叶杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基。

21、本培养基 KT 0.17 0.20 mgL-1 IAA 0.14 0.18 mgL-1 GA3 1.30 1.80 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mgL-1MgSO47H2O， 436 mgL-1KH2PO4； 18.4 mgL-1F。

22、eSO47H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO4 2H2O ； 0.3 mg L-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mg L-1烟酸， 75 mg L-1肌醇， 0.25 mg L-1 甘氨酸。 权 利 要 求 书 CN 102960250 B 4 1/8 页 5 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法 0001 技术领域 0002 本发明涉及一种， 即利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效。

23、成苗方法。 背景技术 0003 在现有技术中， 长白山杜鹃花属植物包括牛皮杜鹃 (Rhododendron chrysanthum Pall.)、 短 果 杜 鹃 (Rhododendron brachycarpum D. Don)、 照 白 杜 鹃 (Rhododendron micranthum Turcz.)、小 叶 杜 鹃 (Rhododendron parvifolium Adams.)、大 字 杜 鹃 (Rhododendron schlippenbachii Maxim.)、 兴安杜鹃 (Rhododendron dauricum L.)、 迎红 杜鹃 (Rhododendron。

24、 mucronulatum Turcz.)、 毛毡杜鹃 (Rhododendron confertissimum Nakai)和苞叶杜鹃(Rhododendron redowskianum Maxim.)等共有9个种， 均为吉林省重点 保护植物， 其中牛皮杜鹃和苞叶杜鹃为我国国家三级保护的珍贵稀有植物， 短果杜鹃为长 白山区珍贵稀有植物， 牛皮杜鹃、 毛毡杜鹃、 照白杜鹃和小叶杜鹃是常绿灌木， 短果杜鹃为 常绿小乔木， 兴安杜鹃为半常绿灌木。牛皮杜鹃、 苞叶杜鹃和毛毡杜鹃分布海拔达 2500 米 高， 属高山杜鹃。牛皮杜鹃、 大字杜鹃、 照白杜鹃、 小叶杜鹃、 迎红杜鹃和兴安杜鹃全株挥发 油含。

25、量较高， 为精油和药用植物。这 9 种杜鹃均可通过人工引种驯化为园林绿化植物。 0004 以上 9 种杜鹃对水土保持和维持生态平衡起重要作用， 是杜鹃花育种的种质资 源。但其在我国分布甚狭， 仅在长白山有较大种群分布， 其它地区仅为零星分布， 由于人们 乱采乱挖， 野生资源遭到极大威胁。这 9 种杜鹃花种子细小， 萌发率低， 萌发后形成的小苗 成活率极低 ； 扦插繁殖需要大量的野生杜鹃枝条， 对野生资源破坏极大， 且生根率和移栽成 活率极低， 开发和利用受到极大限制。 0005 目前， 9 种杜鹃花的离体繁殖报道较多， 通过愈伤组织再分化芽苗、 腋芽丛生和直 接再生等途径具有增殖系数高等优点，。

26、 但仍存在外植体诱导愈伤组织再分化、 腋芽丛生和 直接再生周期较长， 获得不定芽再进一步生根速度较慢、 步骤复杂、 成本高、 可操作性差， 长 期连续增殖极易发生退化和变异等缺点。 发明内容 0006 本发明的目的是针对上述不足而提供一种方法可行、 步骤简捷、 成本低和繁殖速 度快的利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法。 0007 本发明的技术解决方案是 ： 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方 法， 其步骤如下 ： 0008 （1） 10月下旬采集牛皮杜鹃枝条， 将枝条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水。

27、培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.50 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min， 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0009 （2） 牛皮杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基为 ： 基本培养基 KT 0.13 说 明 书 CN 102960250 B 5 2/8 页 6 0.14 mgL-1 IBA 0.05 0.08 mgL-1 NAA 0.02 0.05 mgL-1 GA3 2.70 2.90 mgL-1；。

28、 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mg L-1CaCl2 2H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.。

29、2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟 酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 0010 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其步骤如下 ： 0011 （1） 10月下旬采集短果杜鹃枝条， 将枝条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.50 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶。

30、柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min， 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0012 （2） 短果杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.09 0.12 mgL-1 IBA 0.03 0.07 mgL-1 NAA 0.04 0.06 mgL-1 GA3 2.80 3.00 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000。

31、 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mg L-1CaCl2 2H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 。

32、mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟 酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 0013 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其步骤如下 ： 0014 （1） 10月下旬采集照白杜鹃枝条， 将枝条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.50 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min， 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸。

33、钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0015 （2） 照白杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.17 0.25 mgL-1 IAA 0.20 0.25 mgL-1 NAA 0.02 0.05 mgL-1 GA3 2.30 2.60 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 1。

34、80 mgL-1KNO3， 320 mg L-1CaCl2 2H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟 酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 0016 一种利用长白山杜鹃花属植物茎。

35、段试管内高效成苗方法， 其步骤如下 ： 说 明 书 CN 102960250 B 6 3/8 页 7 0017 （1） 10月下旬采集小叶杜鹃枝条， 将枝条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.50 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min， 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0018 （2） 小叶杜鹃茎段生根同。

36、时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.08 0.12 mgL-1 IBA 0.15 0.20 mgL-1 NAA 0.03 0.05 mgL-1 GA3 2.00 2.30 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mg L-1CaCl2 2H2O， 245 mg L-1。

37、MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟 酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 0019 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其步骤如下 ： 0020 （1） 10月下旬采集大字杜鹃枝条， 将枝。

38、条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.50 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min， 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0021 （2） 大字杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.07 0.10 mgL-1 IAA 0.20 0.25 mgL-1 NAA 0.01 0.03 mgL。

39、-1 GA3 2.20 2.50 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mg L-1CaCl2 2H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 。

40、12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟 酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 0022 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其步骤如下 ： 0023 （1） 10月下旬采集兴安杜鹃枝条， 将枝条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.5。

41、0 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min， 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0024 （2） 兴安杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.04 0.07 mgL-1 NAA 0.02 0.04 mgL-1 GA3 1.00 1.50 mgL-1； 培养基中附加琼 脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 。

42、1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 说 明 书 CN 102960250 B 7 4/8 页 8 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mg L-1Na2 EDTA 2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mg。

43、L-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 0025 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其步骤如下 ： 0026 （1） 10月下旬采集迎红杜鹃枝条， 将枝条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.50 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min，。

44、 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0027 （2） 迎红杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 基本培养基 KT 0.03 0.06 mgL-1 NAA 0.03 0.07 mgL-1 GA3 0.09 1.30 mgL-1； 培养基中附加琼 脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 37。

45、5 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mgL-1CaCl22H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mg L-1Na2 EDTA 2H2O ； 12.4 mgL-1MnSO44H2O， 7.2 mgL-1ZnSO47H2O， 5.7 mgL-1H3BO3， 0.32 mgL-1KI， 0.05 mgL-1 Na2MoO42H2O ； 0.3 mgL-1盐酸硫胺素 VB1， 0.25 mgL-1烟酸， 75 mgL-1肌醇， 0.25 mgL-1甘氨酸。 002。

46、8 一种利用长白山杜鹃花属植物茎段试管内高效成苗方法， 其步骤如下 ： 0029 （1） 10月下旬采集毛毡杜鹃枝条， 将枝条进行低温休眠， 温度控制在-10-5 ， 60 d 后取出并将顶芽去除， 在 300 倍液的赤霉素溶液中水培促其侧芽萌发生长 ； 待侧芽萌 发长至2.50 cm时， 将鲜嫩的侧芽剪下， 去除嫩叶及叶柄， 用体积分数的75%乙醇涮洗60 s， 移至饱和次氯酸钠溶液中浸泡 8 min， 无菌水冲洗 10 次， 无菌滤纸吸干表面水分， 去除被乙 醇和次氯酸钠毒伤的组织后切割成 1 叶 1 段作为外植体备用 ； 0030 （2） 毛毡杜鹃茎段生根同时腋芽萌发生长的培养基是 ： 。

47、基本培养基 KT 0.08 0.12 mgL-1 IAA 0.12 0.15 mgL-1 NAA 0.05 0.07 mgL-1 GA3 1.80 2.00 mgL-1； 培养基中附加琼脂粉 7.8 gL-1， 添加蔗糖 10.0 gL-1， 调节 pH 值至 5.6， 嫩茎段在光照周期 9 hd-1、 光照强度 1000 lx 和温度 232 条件下培养茎段 35 d ； 基本培养基成分和含量 ： 87 mgL-1(NH4)2SO4， 375 mgL-1NH4NO3， 180 mgL-1KNO3， 320 mg L-1CaCl2 2H2O， 245 mg L-1MgSO4 7H2O， 436 mg L-1KH2PO4； 18.4 mg L-1FeSO4 7H2O， 24.9 mgL-1Na2EDTA2H2O ； 12.4 mgL。

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