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1、(10)申请公布号 CN 103503772 A (43)申请公布日 2014.01.15 CN 103503772 A (21)申请号 201210212829.9 (22)申请日 2012.06.26 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 佛山市粤山生物科技有限公司 地址 528000 广东省佛山市顺德区陈村镇花 卉世界国际兰花交易中心内 A42、 43、 44 号 (72)发明人 周国权 陈樟烁 邱欣敏 张林杰 黄镇茂 (54) 发明名称 澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法 (57) 摘要 本发明涉及一种澳洲袋鼠爪花种苗的组培快 繁方法， 包括以下步骤 ： 1) 外植体取材与。
2、消毒 ； 2) 愈伤组织诱导 ； 3) 愈伤组织增殖和分化 ； 4) 诱导 生根。本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方 法以组培快繁为方法对袋鼠爪花植物进行扩繁， 在较短时间内获得大量性状稳定统一的优质种 苗， 可达到每年扩繁速度为 1000-10000 倍， 组培 苗生长健壮， 根系发达， 移栽成活率高， 是一种理 想的快繁技术， 可满足国内袋鼠爪花规模化引种 种植的需要。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 (10)申请公布号 CN 103503772 A CN 10350377。
3、2 A 1/1 页 2 1. 一种澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： 1)外植体取材与消毒 ： 于每年3-5月份对处于生长季节的盆栽袋鼠爪花取材， 取材前1 周用 1500 倍恶霉灵杀菌， 并作控水处理 ； 取材时， 工具用 75的酒精浸泡消毒 1 分钟， 剪取 母株幼嫩茎段， 约 2-3cm， 剥开外层， 加适量的洗衣粉， 流水冲洗 15 分钟后用吸水纸吸干水 分， 最后将茎段小心放入消毒烧杯中备用 ； 在超净工作台上， 先用 75酒精对茎段进行预 消毒， 时间 15-30 秒， 倒出酒精后用 5次氯酸钠溶液消毒 5-8 分钟， 倒出消毒液， 无菌水清 洗 1 。
4、次， 再加入 0.1升汞溶液， 1-2 滴表面活性剂， 消毒 8-10 分钟， 无菌水冲洗材料 5 次以 上 ； 消毒过程中要注意轻轻摇匀， 以提高消毒效果 ； 2) 愈伤组织诱导 ： 消毒处理完毕， 在超净工作台上， 将茎段外层剩余叶片剥除， 只留顶 芽， 接种于 1/2MS+BA 1.0-2.0mg/L+NAA0.05-0.1mg/L+ 卡拉胶 7g/L+Ad 1 + 蔗糖 20g/L， pH 5.8 的培养基上 ； 前 7-15 天为暗室培养， 培养温度 25， 后转为见光培养， 光照强度 2000lux， 光周期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22 ；。
5、 3) 愈伤组织增殖和分化 ： 外植体接种至诱导培养基 1 个月后产生愈伤组织， 并产生蓝 色分泌物， 愈伤组织转接至增殖培养基上， 能够实现快速增殖， 并同时分化出不定芽 ； 之后 每 20 天左右进行一次继代增殖， 增殖系数 5.0 ； 培养条件为光照强度 2000lux， 光周期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22 ； 4) 诱导生根 ： 切取愈伤组织上 1-2cm 的不定芽， 将其接种到生根培养基上， 培养条件 为光照强度 2000lux， 光周期 16h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22 ； 培 养 15 天后， 根系长至。
6、 2-3 条， 根长 0.5-1.0cm 之间， 可移植日光温室炼苗 1 周， 光照强度 3000-4000lux ； 炼苗后， 出瓶种植于0-10mm泥炭和珍珠岩比例为41的混合基质中， 成活 率超过 90。 2. 根据权利要求 1 所述的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 其特征在于， 在步骤 1) 中 ： 所述外植体取材的还通过以下步骤获取 ： 选取性状稳定 ( 特别是花色 ) 的母株种子， 用 孔径较小的纱布包裹种子两层， 加适量的洗衣粉， 自来水冲洗30分钟， 75酒精消毒30秒， 然后用0.1升汞消毒12-15分钟， 最后用无菌水冲洗5次， 接种于空白1/2MS培养基中， 培 养 4。
7、5-60 天可获得无菌实生苗， 发芽率约 30； 培养条件为光照强度 2000lux， 光周期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22。 3. 根据权利要求 1 所述的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 其特征在于， 在步骤 3) 中 ： 所述增殖培养基为 1/2MS+BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.05-0.1mg/L+ 卡拉胶 7g/L+Ad 1 + 蔗糖 30g/L， pH 5.8 的培养基。 4. 根据权利要求 1 所述的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 其特征在于， 在步骤 4) 中 ： 所述生根培养基为 1/2MS+NAA0.2-0.5mg/L。
8、+Ad 5 + 卡拉胶 7g/L+ 蔗糖 20g/L， pH 5.8 的培养基。 权 利 要 求 书 CN 103503772 A 2 1/3 页 3 澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法 技术领域 0001 本发明属于植物组培育苗技术领域， 具体涉及一种澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁 方法。 背景技术 0002 袋鼠爪花 (Anigozanthus flavidus)， 又名袋鼠花， 苦苣苔科袋鼠花属多年生草本 植物， 是澳大利亚特产的珍贵花卉。因为像袋鼠的爪子又因为生长在澳大利亚而得名。在 西澳洲分布广泛， 生长于多种土壤与气候条件下。属多年生草本植物， 共两个属， 12 个种， 40 多个园艺品种。
9、， 为澳大利亚第二大出口花卉， 被出口到全球的许多地方， 同时在美国、 以 色列和日本等国进行种植。 袋鼠花因其特有的型态和花色使它成为澳大利亚最具代表性的 庭院植物， 既可以制作切花， 也可以盆栽观赏， 同时也是制作干花的优良材料。袋鼠爪花多 以播种为繁育手段， 周期长效率低， 且会产生性状分离， 不适合大规模生产的需要。虽然袋 鼠爪花盆花观赏价值较高， 但由于进口种子价格较高， 且存在性状不稳定性， 国内尚未见有 大规模种植。 发明内容 0003 为解决上述技术问题， 本发明提供一种澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 克服 有性繁殖 ( 播种 ) 植株变异与整齐度差的缺点， 实现快速获得大量。
10、性状稳定的优质袋鼠爪 花种苗。 0004 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 包括以下步骤 ： 0005 1) 外植体取材与消毒 ： 于每年 3-5 月份对处于生长季节的盆栽袋鼠爪花取材， 取 材前 1 周用 1500 倍恶霉灵杀菌， 并作控水处理 ； 取材时， 工具用 75的酒精浸泡消毒 1 分 钟， 剪取母株幼嫩茎段， 约 2-3cm， 剥开外层， 加适量的洗衣粉， 流水冲洗 15 分钟后用吸水纸 吸干水分， 最后将茎段小心放入消毒烧杯中备用 ； 在超净工作台上， 先用 75酒精对茎段 进行预消毒， 时间 15-30 秒， 倒出酒精后用 5次氯酸钠溶液消毒 5-8 分钟， 倒出消毒液。
11、， 无 菌水清洗 1 次， 再加入 0.1升汞溶液， 1-2 滴表面活性剂， 消毒 8-10 分钟， 无菌水冲洗材料 5 次以上 ； 消毒过程中要注意轻轻摇匀， 以提高消毒效果 ； 0006 2) 愈伤组织诱导 ： 消毒处理完毕， 在超净工作台上， 将茎段外层剩余叶片剥除， 只留顶芽， 接种于 1/2MS+BA 1.0-2.0mg/L+NAA0.05-0.1mg/L+ 卡拉胶 7g/L+Ad 1 + 蔗糖 20g/L， pH5.8的培养基上 ； 前7-15天为暗室培养， 培养温度25， 后转为见光培养， 光照 强度 2000lux， 光周期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培。
12、养时 19-22 ； 0007 3) 愈伤组织增殖和分化 ： 外植体接种至诱导培养基 1 个月后产生愈伤组织， 并产 生蓝色分泌物， 愈伤组织转接至增殖培养基上， 能够实现快速增殖， 并同时分化出不定芽 ； 之后每 20 天左右进行一次继代增殖， 增殖系数 5.0 ； 培养条件为光照强度 2000lux， 光周 期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22 ； 0008 4) 诱导生根 ： 切取愈伤组织上 1-2cm 的不定芽， 将其接种到生根培养基上， 培养 说 明 书 CN 103503772 A 3 2/3 页 4 条件为光照强度 2000lux， 光周期 1。
13、6h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22 ； 培养 15 天后， 根系长至 2-3 条， 根长 0.5-1.0cm 之间， 可移植日光温室炼苗 1 周， 光照强度 3000-4000lux ； 炼苗后， 出瓶种植于0-10mm泥炭和珍珠岩比例为41的混合基质中， 成活 率超过 90。 0009 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 在步骤 1) 中 ： 所述外植体取材的还 通过以下步骤获取 ： 选取性状稳定 ( 特别是花色 ) 的母株种子， 用孔径较小的纱布包裹种 子两层， 加适量的洗衣粉， 自来水冲洗 30 分钟， 75酒精消毒 30 秒， 然后用 0.1升汞消。
14、毒 12-15分钟， 最后用无菌水冲洗5次， 接种于空白1/2MS培养基中， 培养45-60天可获得无菌 实生苗， 发芽率约 30 ； 培养条件为光照强度 2000lux， 光周期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22。 0010 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 在步骤 3) 中 ： 所述增殖培养基为 1/2MS+BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.05-0.1mg/L+ 卡拉胶 7g/L+Ad 1 + 蔗糖 30g/L， pH 5.8 的培养基。 0011 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 在步骤 4) 中 ： 所述生根培养基为 1/2。
15、MS+NAA0.2-0.5mg/L+Ad 5 + 卡拉胶 7g/L+ 蔗糖 20g/L， pH 5.8 的培养基。 0012 与现有技术相比本发明的有益效果为 ： 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁 方法以组培快繁为方法对袋鼠爪花植物进行扩繁， 在较短时间内获得大量性状稳定统一的 优质种苗， 可达到每年扩繁速度为 1000-10000 倍， 组培苗生长健壮， 根系发达， 移栽成活率 高， 是一种理想的快繁技术， 可满足国内袋鼠爪花规模化引种种植的需要。 具体实施方式 0013 下面结合实施例， 对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于 说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。 0。
16、014 实施例 1 0015 一种本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 包括以下步骤 ： 0016 1) 外植体取材与消毒 ： 于每年 3-5 月份对处于生长季节的盆栽袋鼠爪花取材， 取 材前 1 周用 1500 倍恶霉灵杀菌， 并作控水处理 ； 取材时， 工具用 75的酒精浸泡消毒 1 分 钟， 剪取母株幼嫩茎段， 约 2-3cm， 剥开外层， 加适量的洗衣粉， 流水冲洗 15 分钟后用吸水纸 吸干水分， 最后将茎段小心放入消毒烧杯中备用 ； 在超净工作台上， 先用 75酒精对茎段 进行预消毒， 时间 15-30 秒， 倒出酒精后用 5次氯酸钠溶液消毒 5-8 分钟， 倒出消毒液， 无 。
17、菌水清洗 1 次， 再加入 0.1升汞溶液， 1-2 滴表面活性剂， 消毒 8-10 分钟， 无菌水冲洗材料 5 次以上 ； 消毒过程中要注意轻轻摇匀， 以提高消毒效果 ； 0017 2) 愈伤组织诱导 ： 消毒处理完毕， 在超净工作台上， 将茎段外层剩余叶片剥除， 只留顶芽， 接种于 1/2MS+BA 1.0-2.0mg/L+NAA0.05-0.1mg/L+ 卡拉胶 7g/L+Ad 1 + 蔗糖 20g/L， pH5.8的培养基上 ； 前7-15天为暗室培养， 培养温度25， 后转为见光培养， 光照 强度 2000lux， 光周期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 1。
18、9-22 ； 0018 3) 愈伤组织增殖和分化 ： 外植体接种至诱导培养基 1 个月后产生愈伤组织， 并产 生蓝色分泌物， 愈伤组织转接至增殖培养基上， 能够实现快速增殖， 并同时分化出不定芽 ； 之后每 20 天左右进行一次继代增殖， 增殖系数 5.0 ； 培养条件为光照强度 2000lux， 光周 说 明 书 CN 103503772 A 4 3/3 页 5 期 12h/ 天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22 ； 0019 4) 诱导生根 ： 切取愈伤组织上 1-2cm 的不定芽， 将其接种到生根培养基上， 培养 条件为光照强度 2000lux， 光周期 16h/ 。
19、天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22 ； 培养 15 天后， 根系长至 2-3 条， 根长 0.5-1.0cm 之间， 可移植日光温室炼苗 1 周， 光照强度 3000-4000lux ； 炼苗后， 出瓶种植于0-10mm泥炭和珍珠岩比例为41的混合基质中， 成活 率超过 90。 0020 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 在步骤 3) 中 ： 所述增殖培养基为 1/2MS+BA 0.5-1.0mg/L+NAA 0.05-0.1mg/L+ 卡拉胶 7g/L+Ad 1 + 蔗糖 30g/L， pH 5.8 的培养基。 0021 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法。
20、， 在步骤 4) 中 ： 所述生根培养基为 1/2MS+NAA0.2-0.5mg/L+Ad 5 + 卡拉胶 7g/L+ 蔗糖 20g/L， pH 5.8 的培养基。 0022 实施例 2 0023 与实施例 1 不同之处在于 ： 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法， 所述外 植体取材的还可通过以下步骤获取 ： 选取性状稳定 ( 特别是花色 ) 的母株种子， 用孔径较 小的纱布包裹种子两层， 加适量的洗衣粉， 自来水冲洗 30 分钟， 75酒精消毒 30 秒， 然后 用 0.1升汞消毒 12-15 分钟， 最后用无菌水冲洗 5 次， 接种于空白 1/2MS 培养基中， 培养 45-60天可获。
21、得无菌实生苗， 发芽率约30； 培养条件为光照强度2000lux， 光周期12h/天， 培养温度光培养时 25-28， 暗培养时 19-22。 0024 本发明的澳洲袋鼠爪花种苗的组培快繁方法以组培快繁为方法对袋鼠爪花植 物进行扩繁， 在较短时间内获得大量性状稳定统一的优质种苗， 可达到每年扩繁速度为 1000-10000 倍， 组培苗生长健壮， 根系发达， 移栽成活率高， 是一种理想的快繁技术， 可满足 国内袋鼠爪花规模化引种种植的需要。 0025 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明技术原理的前提下， 还可以做出若干改进和变型， 这些改进和变型 也应视为本发明的保护范围。 说 明 书 CN 103503772 A 5 。