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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710448634.7 (22)申请日 2017.06.14 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 卢建军 董信阳 姚静宜 王友明 胡彩虹 (74)专利代理机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 代理人 郑海峰 (51)Int.Cl. A23K 50/30(2016.01) A23K 50/60(2016.01) A23K 50/75(2016.01) A23K 10/20(2016.01) A23K 4。
2、0/00(2016.01) (54)发明名称 一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养 修复剂的方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种鸡胚EGF分离提取制备动 物肠黏膜营养修复剂的方法及应用。 本发明从快 速生长发育的鸡胚中分离提取表皮生长因子 EGF， 方法是根据调节匀浆液的pH值使EGF带阳电 荷， 利用不溶于水的苯甲酸吸附EGF， 使其从匀浆 液中分离出来， 再利用丙酮不溶解EGF的性质， 将 EGF从苯甲酸上解析出来的原理设计， 制备出一 种含鸡源EGF的促进动物肠黏膜修复的营养修复 剂。 本发明的动物肠黏膜EGF营养修复剂， 每吨畜 禽全价饲料中添加0.05-0.3公斤， 可显著。
3、改善动 物肠黏膜结构功能， 提高畜禽采食量和生长性 能， 显著降低断奶仔猪腹泻率。 权利要求书1页 说明书4页 CN 107252001 A 2017.10.17 CN 107252001 A 1.一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法， 其特征在于其步骤如下： 1)取15-20日龄孵化鸡胚， 去壳， 添加0.05mol/L乙酸溶液高速匀浆10-30分钟， 1500转/ 分钟， 其中去壳鸡胚与乙酸溶液质量比为1： 5-10， 离心20-30分钟， 取上清液； 2)沉淀继续加0.05mol/L乙酸溶液匀浆， 1500转/分钟离心， 其中沉淀与乙酸溶液质量 比为1： 5-10， 离心。
4、20-30分钟， 合并两次上清液， 去除上清液表面脂肪， 3)上清液加苯甲酸钠， 充分搅拌， 使其全部溶解， 用3mol/L的NH4OH溶液调pH至5.5-6.5， 搅拌半小时， 静置， 经减压过滤， 取出沉淀； 4)待沉淀干燥后， 加预冷丙酮， 搅拌形成悬浊液， 4下静置4-12h， 则有蛋白样絮状沉 淀， 减压过滤； 将沉淀再用丙酮洗涤， 加入沸石粉， 洗涤后沉淀与沸石粉的质量比为1： 5-10， 搅拌混合10-20分钟， 50干燥粉碎即制成动物肠黏膜EGF营养修复剂。 2.根据权利要求1所述的鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法， 其特征 在于， 所述的鸡胚是指15-20日龄。
5、的健康发育的白羽AA鸡或三黄鸡鸡胚。 3.根据权利要求1所述的鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法， 其特征 在于所述的EGF为一条由53个氨基酸组成的单链多肽， 二级结构为致密的球状结构。 4.根据权利要求1所述的鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法， 其特征 在于所述的乙酸溶液的浓度为0.05mol/L， 温度为4。 5.根据权利要求1所述的鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法， 其特征 在于所述的苯甲酸钠加入量为每升上清液加入20-30g。 6.根据权利要求1所述的鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法， 其特征 在于所述步骤4)中加入预冷丙。
6、酮后， 沉淀在预冷丙酮溶液中的质量浓度为0.04-0.1g/ml， 预冷丙酮温度为4。 7.根据权利要求1所述的鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法， 其特征 在于所述的沸石粉pH在7-7.5之间， 含水量3.0-8.0， 吸氨量为120-140毫摩尔/100g， 目数 为30-60目。 8.一种根据权利要求1所述方法制备的动物肠黏膜EGF营养修复剂在畜禽全价饲料中 的应用， 其特征在于， 每吨畜禽全价饲料中添加0.05-0.3公斤所述动物肠黏膜EGF营养修复 剂。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于： 21-28日龄断奶仔猪每吨全价饲料中添加 0.1-0.3公斤所述动物肠。
7、黏膜EGF营养修复剂， 母猪每吨全价饲料中添加0.05-0.2公斤所述 动物肠黏膜EGF营养修复剂， 肉鸡每吨全价饲料中添加0.05-0.1公斤所述动物肠黏膜EGF营 养修复剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107252001 A 2 一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法及 应用 技术领域 0001 本发明涉及一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修复剂的方法及应用。 背景技术 0002 动物肠道不仅是营养物质消化吸收的场所， 也是重要的免疫器官， 维护正常的肠 道机能对动物生长发育至关重要。 动物在营养素缺乏、 感染、 应激及病理等情况下， 均可导 致肠道结构。
8、和功能损伤、 细菌和内毒素移位以及肠道黏膜屏障功能障碍等， 严重影响动物 健康和生产性能， 给养殖生产带来重大的经济损失。 表皮生长因子(epidermal growth factor， EGF)属于促生长因子家族成员， 具有广泛的生物活性， 具有促进胃肠组织生长和发 育、 修复受损的黏膜组织、 调节肠道各种酶活性、 提高营养物质消化吸收等重要作用。 外源 供给EGF是改善动物肠道结构和功能、 修复损伤肠道、 促进动物健康生长的重要途径， EGF作 为新型动物肠黏膜营养调控剂在畜牧业生产上有十分广阔的应用前景。 0003 EGF是一条由53个氨基酸组成的单链多肽， 二级结构为致密的球状结构， 。
9、特殊空间 结构使EGF具有较高稳定性， 对酸、 热具有耐受性， 能抵抗胰蛋白酶、 胃蛋白酶和糜蛋白酶的 消化。 EGF具有许多生物学作用， 可促进细胞内DNA、 RNA和蛋白质合成； 刺激多种组织细胞分 裂、 增殖和分化； 抑制胃酸分泌， 促进溃疡愈合及上皮组织再生； 增加体内物质转运和代谢； 促进细胞外基质以及机体一些物质(果酸、 前列腺素)合成， 具有调节精子、 卵巢发育和生殖 功能的作用， EGF是促进新生动物胃、 肠道发育的重要生长因子， 但是EGF有限的来源、 昂贵 的价格制约着其在畜牧领域的广泛应用。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种鸡胚EGF分离提取制备动物肠黏膜营养修。
10、复剂的方法， 其特征在于其步骤如下： 0005 1)取15-20日龄孵化鸡胚， 去壳， 添加0.05mol/L乙酸溶液高速匀浆10-30分钟， 1500转/分钟， 其中去壳鸡胚与乙酸溶液质量比为1： 5-10， 离心20-30分钟， 取上清液； 0006 2)沉淀继续加0.05mol/L乙酸溶液匀浆， 1500转/分钟离心， 其中沉淀与乙酸溶液 质量比为1： 5-10， 离心20-30分钟， 合并两次上清液， 去除上清液表面脂肪， 0007 3)上清液加苯甲酸钠， 充分搅拌， 使其全部溶解， 用3mol/L的NH4OH溶液调pH至 5.5-6.5， 搅拌半小时， 静置， 经减压过滤， 取出沉淀。
11、； 0008 4)待沉淀干燥后， 加预冷丙酮， 搅拌形成悬浊液， 4下静置4-12h， 则有蛋白样絮 状沉淀， 减压过滤； 将沉淀再用丙酮洗涤， 加入沸石粉， 洗涤后沉淀与沸石粉的质量比为1： 5-10， 搅拌混合10-20分钟， 50干燥粉碎即制成动物肠黏膜EGF营养修复剂。 0009 优选的， 所述的鸡胚是指15-20日龄的健康发育的白羽AA鸡或三黄鸡鸡胚。 0010 本发明所述的EGF为一条由53个氨基酸组成的单链多肽， 二级结构为致密的球状 结构。 说 明 书 1/4 页 3 CN 107252001 A 3 0011 优选的， 所述的步骤1)和步骤2)中的乙酸溶液的浓度为0.05mo。
12、l/L， 温度为4。 0012 优选的， 所述的苯甲酸钠加入量为每升上清液加入20-30g。 0013 优选的， 所述步骤4)中加入预冷丙酮后， 沉淀在预冷丙酮溶液中的质量浓度为 0.04-0.1g/ml， 预冷丙酮温度为4。 0014 优选的， 所述的沸石粉pH在7-7.5之间， 含水量3.0-8.0， 吸氨量为120-140毫摩 尔/100g， 目数为30-60目。 0015 本发明还公开了一种所述方法制备的动物肠黏膜EGF营养修复剂在畜禽全价饲料 中的应用， 具体为： 每吨畜禽全价饲料中添加0.05-0.3公斤所述动物肠黏膜EGF营养修复 剂。 0016 进一步的， 21-28日龄断奶仔。
13、猪每吨全价饲料中添加0.1-0.3公斤所述动物肠黏膜 EGF营养修复剂， 母猪每吨全价饲料中添加0.05-0.2公斤所述动物肠黏膜EGF营养修复剂， 肉鸡每吨全价饲料中添加0.05-0.1公斤所述动物肠黏膜EGF营养修复剂。 0017 本发明之动物肠黏膜EGF营养修复剂制备方法， 由于采用了通过调节溶液pH值使 鸡胚匀浆EGF带阳电荷， 利用不溶于水的苯甲酸吸附EGF， 使其从上清夜中分离出来， 再利用 丙酮不溶解EGF的性质， 将EGF从苯甲酸上解析出来的原理， 可使鸡胚EGF分离提取得产率大 于85， EGF粗粉得率为0.1-0.2mg/g鸡胚， 它有效地解决了现有饲料工业中EGF来源有限。
14、、 价格昂贵的问题。 0018 本发明的动物肠黏膜EGF营养修复剂， 可使仔猪平均日增重提高30-40， 料重 比降低10-20， 腹泻率下降80-85， 空肠绒毛高度提高70-90， 隐窝深度下降 20-30， 十二指肠肠激酶活性提高50-55， 空肠黏膜乳糖酶的活性提高35-40， 蔗糖酶活性提高40-60； 使试验组肉鸡日增重提高8-12， 采食量提高6-10， 十二指 肠绒毛长度提高10-20， 十二指肠绒毛长度/隐窝深度提高20-30； 回肠绒毛长度/隐窝 深度提高10-18， 十二指肠胰蛋白酶、 淀粉酶、 脂肪酶和总蛋白水解酶活性分别提高了40- 55、 80-100、 30-45。
15、和25-35。 本发明的动物肠黏膜EGF营养修复剂， 具有保护和促进 黏膜上皮细胞生长的作用， 提高畜禽采食量和生长性能， 显著降低仔猪断奶后腹泻率的作 用。 具体实施方式 0019 本发明结合以下实例作进一步的说明。 0020 实施例1 0021 取100个15日龄孵化健康鸡胚， 去壳， 称重， 按1： 6(g/g)的比例加入0.05mol/L乙酸 (4)， 高速匀浆30分钟， 1500转/分钟离心20分钟， 取上清液； 沉淀继续加0.05mol/L的乙酸 (4)匀浆15分钟， 1500转/分钟离心20分钟， 取上清液， 合并两次上清液， 去除上清液表面 脂肪， 上清液中加入苯甲酸钠(25g。
16、/L)， 充分搅拌， 使其全部溶解， 加3mol/L的NH4OH调PH至 6.0， 搅拌半小时， 静置， 减压过滤， 取出沉淀， 沉淀干燥后， 加预冷丙酮(0.05g/ml丙酮4)， 搅拌形成悬浊液， 4下静置12h， 出现蛋白样絮状沉淀， 减压过滤， 将沉淀再用丙酮洗涤3 次， 留下的沉淀以1： 5的比例加入沸石粉(30目)， 搅拌混合10分钟， 50干燥粉碎制成动物 肠黏膜EGF营养修复剂。 0022 实施例2 说 明 书 2/4 页 4 CN 107252001 A 4 0023 25日龄仔猪断奶开始， 对照组饲喂对照日粮(配方见表1)。 试验组全价饲料在每吨 对照组日粮基础上添加动物肠。
17、黏膜EGF营养修复剂200克， 饲喂上述饲料至46日龄， 测定仔 猪生长性能。 0024 表1试验饲粮组成和营养指标 0025 0026 试验结果表明， 与对照组相比， 试验组仔猪平均日增重提高31(P0.05)， 料重比 降低12(P0.05)， 腹泻率下降85(P0.05)， 空肠绒毛高度提高72(P0.05)， 隐窝深度 下降21(P0.05)， 十二指肠肠激酶活性提高58(P0.05)， 空肠粘膜乳糖酶的活性提高 39(P0.05)， 蔗糖酶活性提高42(P0.05)。 0027 实施例3 0028 21日龄健康AA肉鸡， 对照组饲喂对照日粮(配方见表2)， 试验组全价饲料在每吨对 照。
18、组日粮基础上添加动物肠黏膜EGF营养修复剂100克， 饲喂上述饲料至35日龄， 测定肉鸡 生长性能。 0029 表2试验饲粮组成和营养指标 说 明 书 3/4 页 5 CN 107252001 A 5 0030 0031 试验结果表明， 与对照组相比， 试验组肉鸡日增重和采食量分别提高了9.17(P 0.05)和7.74(P0.05)， 十二指肠绒毛长度提高14.20(P0.05)， 十二指肠绒毛长度/隐 窝深度提高25.53(P0.01)； 回肠绒毛长度/隐窝深度提高13.63(P0.05)， 十二指肠胰 蛋白酶、 淀粉酶、 脂肪酶和总蛋白水解酶活性分别提高了44.61(P0.05)、 98.34(P 0.01)、 36.47(P0.05)和28.36(P0.05)。 说 明 书 4/4 页 6 CN 107252001 A 6 。