技术领域
本发明涉及生脉散方剂在制药中的新用途，具体涉及生脉散方剂在制备抗衰老药物中的应用，属于中药领域。
背景技术
生脉散方剂是中医千古名方，首载于金代医家张元素所著《医学启源·卷下》“麦门冬”条内；内外伤辨惑论及医方考中也有记载。由人参、麦冬、五味子组成，意在取“人参之甘补气，麦门(即麦冬)苦寒泻热补水之源，五味子之酸清肃燥金”。
生脉散方剂最早用于治疗暑热汗多，气阴两伤之证，表现为汗多、身疲、体倦、气短、咽干、脉虚等症状。古代医家也用于金叶耗伤，脉微欲绝等症状，又用作气阴两虚病人的补益剂。此方经过几百年的长期使用，安全有效，经久不衰。随着现代医学的发展，生脉散方剂的临床应用不断扩大，其剂型除散剂外，还有生脉饮、生脉注射液；该方剂经加减变化后还发展了参麦饮和生脉散方剂党参方等。现在主要用于治疗心血管病中的抗休克、抗心衰、抗心肌缺血等症状、糖尿病、慢性支气管炎，各类心源性休克、冠心病、心律失常等。
衰老是生命的自然过程，主要指随年龄增加，机体功能减退，内环境稳定能力与应激能力下降，机体的细胞、组织、器官在结构与功能上表现出来的种种退化。衰老的结果是常常产生与衰老相关的疾病，直至死亡。面对庞大的老年群体、早衰群体，要从根本上提高他们的生存质量，就要找到改善身体机能、延缓衰老的方法，使他们能够健康衰老。
然而多数药物的功能和疗效不明确，产品寿命周期较短，其中即适合于老年人，又适合于早衰患者的抗衰老药物则少之又少，目前尚不能够同时满足这两类人群迫切的健康需求。衰老是由机体综合水平调控的复杂的、多因素的过程，相应地要求抗衰老药物对机体的作用应是整体水平的调节。而中药复方具有的多环节、多靶点的整体调节作用，这也正是中药抗衰老的特色和优势，在延缓衰老方面有着巨大的潜力。本发明摆脱了现有抗衰老功效验证思路的束缚，采用线虫模型直接证明了生脉散方剂具有抗衰老的生物活性，可在制备抗衰老药物中应用。
发明内容
本发明的目的是提供生脉散方剂在制药中的新用途，具体涉及生脉散方剂制备抗衰老药物中的应用，以期提供一种功效明确的抗衰老药物。
所述生脉散方剂含有人参、麦冬、五味子。
所述生脉散方剂中的人参、麦冬、五味子的质量比为9：9：6。
本发明所述的生脉散方剂，其组方比例可以根据中药组方原则合理改动，而不改变该方剂在制备抗衰老药物中的用途，这是本领域技术人员可以理解的。
本发明所述的生脉散方剂在制备抗衰老药物中的应用，可以将生脉散方剂添加药学上可接受的载体如填充剂、润滑剂、湿润剂、促进吸收剂、吸附载体、稀释剂、赋形剂等，必要时可加入甜味剂、香味剂等，制备成注射剂、散剂、颗粒剂、粉剂、丸剂、口服液、片剂等药物的多种剂型，这是本领域技术人员可以理解的。
本发明采用了秀丽隐杆线虫作为模式生物直接评价药物的抗衰老活性，秀丽隐杆线虫用于抗衰老模型具有以下优点：
1.由于线虫60-80％的基因与人类的相关基因高度保守，而且至今发现的17条信号传导途径，线虫具有其中12条，因此本发明利用秀丽隐杆线虫作为筛选抗衰老药物的模型生物。可利用线虫丰富的遗传资源，根据研究目的选择合适的突变体，研究衰老及抗衰老机制，实质上衰老机制的几大理论都是在线虫中被证明。因此，对线虫有抗衰老作用的药物，通常也被认为对人类也具有同样功效。
2.秀丽隐杆线虫被用于寿命分析，至今已有30年的历程。因其独特的优势，成为衰老研究的首推模型。线虫世代周期短，通常为3天左右；寿命短，通常为3周左右。这使实验的重复稳定性成为可能。为了确保实验方法的可靠性和实验结果的准确性、药物筛选能得到更多准确的、可信的信息，重复实验是必要的。
由于秀丽隐杆线虫具有以上独特的优势，而成为衰老研究的首推模型。因此线虫可以被用于评价组合物的抗衰老作用，进而判断组合物被用于制备抗衰老药物的可能性。
本发明提供一种生脉散方剂在制备抗衰老药物的新用途,生脉散方剂既可以显著延长正常群体的寿命，又可以显著延长早衰群体的寿命，有望开发成新一代的抗衰老药物。
附图说明
图1为本发明中药复方对突变体TK22早衰线虫寿命的影响的寿命分析图。
其中图中的实线为空白对照组，虚线为生脉散方剂低剂量药物组、半虚半实线为生脉散方剂高剂量药物组。
图2为本发明中药复方对正常型N2线虫寿命的影响的寿命分析图。
其中图中的实线为空白对照组，虚线为生脉散方剂低剂量药物组。
具体实施方式
以下提供具体实施例以实现本发明所述的生脉散方剂在制备抗衰老药物中应用，但不限于这些实施例。
实验材料
1.实验生物
秀丽隐杆线虫株系：正常型秀丽隐杆线虫N2，突变体早衰秀丽隐杆线虫TK22购自CaenorhabditisGeneticsCenter(CGC)。秀丽隐杆线虫N2为正常型线虫，用于评价药物对于正常群体的抗衰老效果；秀丽隐杆线虫TK22为早衰线虫，该株系线虫的寿命通常要比正常株系线虫少15％-20％，TK22用于评价药物对于早衰模型的抗衰老疗效。
细菌株：尿嘧啶渗漏突变型大肠杆菌OP50(E.coli)，购自CaenorhabditisGeneticsCenter(CGC)。
2.培养基、药品
NGM培养基：NaCl1.5g，K2HPO41.3g，KH2PO48.5g，蛋白胨1.4g，琼脂粉8.5g，蒸馏水500mL。灭菌后加入过滤除菌的500μL胆固醇(5mg/ml，无水乙醇配制)，高压蒸汽灭菌的500μL1mol/LMgSO4，500μL1mol/LCaCl2。
M9缓冲液：NaCl1.98g，Na2HPO42.38g，KH2PO41.20g，MgSO40.048g，蒸馏水400mL。
LB液体培养基：NaCl2g，蛋白胨2g，酵母膏1g，蒸馏水200mL。溶解后用1MNaOH调节pH为7.0，高压蒸汽灭菌。
药品：人参、麦冬、五味子药材购自兰州惠仁堂大药房。
3.仪器
高压灭菌锅(上海申安医疗器械厂)
单人单面超净工作台(苏州净化设备厂)
生化培养箱(宁波江南仪器厂)
隔水式恒温培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)
连续变倍体视显微镜(上海一恒科学仪器有限公司)
电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)
台式离心机(CT15E，日立)
实施例一中药复方生脉散方剂水提液的制备
红参9g、麦冬9g、五味子6g。先用蒸馏水浸泡20分钟，然后文火煮沸，煎熬30min，将终体积定容至50mL，离心，弃去沉淀，将上清无菌过滤，至4℃冰箱待用。
实施例二中药复方生脉散方剂对对突变体早衰秀丽隐杆线虫TK22寿命的影响
1.秀丽隐杆线虫同步化
将秀丽隐杆线虫的孵卵成虫用M9缓冲液冲洗到1.5mL离心管中，静置或离心弃掉上请，每个离心管中加入500μL1MNaOH和500μL6.4％NaClO，于涡旋仪上震荡裂解约7min，4000rpm离心4min，吸去上清后，用M9冲洗2次后加500μL的M9，置于20℃培养箱孵化后，将其接种于涂有OP50的NGM固体培养皿中，经20℃培养可得到同步生长的秀丽隐杆线虫。
本发明使用的N2、TK22株系秀丽隐杆线虫都采用上述方法进行同步化处理。
2.含中药复方生脉散方剂NGM板的制备
将实施例一制备好的中药复方生脉散的提取液按下列方法配制：
生脉散方剂低剂量药物组：将0.1mL原液加入1.9mL蒸馏水后，加入18mLNGM中，摇匀，倒板。
生脉散方剂高剂量药物组：将0.2mL原液加入1.8mL蒸馏水后，加入18mLNGM中，摇匀，倒板。
空白对照组：2mL蒸馏水加入18mLNGM中，摇匀，倒板。
3.寿命分析实验方法
将L4期同步化的秀丽隐杆线虫，用铂丝挑针转移到空白对照组、生脉散方剂低剂量药物组、生脉散方剂高剂量药物组培养皿中，每组三个平行，每个平行25条秀丽隐杆线虫，置于20℃培养，每天观察并计数存活数和死亡数，至线虫全部死亡。为防止世代交叠，NGM培养基中含有浓度为50μM的氟脲苷。秀丽隐杆线虫死亡的判断标准是用挑针轻触，线虫无反应。爬到培养皿边缘或皿盖干死、钻到琼脂里面的线虫从实验中排除。
本发明使用的N2、TK22株系秀丽隐杆线虫都采用上述方法进行寿命分析实验。
4.结果
实验数据分析采用SPSS17.0软件的SurvivalAnalysis处理、分析。结果如下：
图1为本发明中药复方对突变体TK22早衰线虫寿命影响的寿命分析图。
其中图中的实线为空白对照组，虚线为生脉散方剂低剂量药物组、半虚半实线为生脉散方剂高剂量药物组。
从图1可以看出(E)可以看出生脉散方剂低、高剂量组都显著延长了早衰模型TK22线虫的寿命(P<0.01)。
表1中药复方作用下TK22线虫的半数存活时间和平均寿命
从表1中可以得出，生脉散方剂显著延长了早衰模型TK22线虫的寿命(P<0.01)。在本实验的最佳浓度作用下，将早衰模型TK22线虫的平均寿命延长了44.3％；将早衰模型TK22线虫的半数存活天数延长了41.1％。
实施例三中药复方生脉散方剂对正常型N2线虫寿命的影响
图2为本发明中药复方对正常型N2线虫寿命的影响的寿命分析图。
其中图中的实线为空白对照组，虚线为生脉散方剂低剂量药物组。
表2中药复方作用下N2线虫的半数存活时间和平均寿命
从图2、表2可以看出，生脉散方剂显著延长了正常型N2线虫的寿命(P<0.05)，相比空白组分别将正常型N2线虫的平均寿命延长了47.2％，相比空白组分别将正常型N2线虫的半数存活天数延长了53.7％。
从以上实施例可以看出，生脉散方剂不仅可以显著延长正常群体的寿命，而且可以显著延长早衰模型的寿命，直接证明了生脉散方剂具有抗衰老的生物活性，可在制备抗衰老药物中应用，有望开发成新一代的抗衰老药物。