技术领域
本发明涉及环丙烷衍生物、包括该化合物的药物组合物及其在治疗中的应用。
背景技术
主要是通过组蛋白组分的翻译后修饰确定的染色质的结构和功能状态的改变涉及多 种疾病的病理发生。这些可逆修饰赋予染色质重建的动力性，并且由相反活性的酶家族来 密切控制。主宰核小体上的这些翻译后修饰的酶过程已成为所谓的表观遗传学的潜在靶标 (Portela,A.etal.Nat.Biotechnol.2010,28,1057-1068)。
越来越多的组蛋白赖氨酸脱甲基酶的发现强调了组蛋白甲基化—参与真核基因组和 基因调控的关键的染色质修饰—的调控的动态性。组蛋白赖氨酸脱甲基酶对于表观遗传学 药物表现出活性靶标，因为其表达和/或活性在癌症中常常是错误调控的(Varier,R.A.et al.Biochim.Biophys.Acta.2011,1815,75-89)。赖氨酸可以是单、二和三甲基化的，并且 每个修饰(甚至在相同的氨基酸上)都可以产生不同的生物学效果。
组蛋白赖氨酸脱甲基酶可以分为具有不同酶机制的两个主要的家族((Anand,R.etal.J. Biol.Chem.2007,282,35425-35429；Metzger,E.etal.Nat.Struct.Mol.Biol.2007,14, 252-254)。一方面，我们发现包括JumonjiC(JmjC)结构域的蛋白质的大的蛋白家族， 其中脱甲基化反应通过JmjC结构域蛋白来进行，并且其中需要保守的JmjC结构域、Fe(II) 和α-酮戊二酸的存在，以产生甲醛和琥珀酸盐，并能够去除单、二和三甲基化的赖氨酸。 包括两种蛋白质的其他类的脱甲基化反应是基于黄素的氧化过程，并仅限于单和二甲基化 的底物。哺乳动物包括两种基于黄素的氧化酶组蛋白赖氨酸脱甲基酶：KDM1A(也称为 LSD1)和KDM1B(也称为LSD2)。KDM1A是几种染色质重建复合体中的组分，并常 伴随着共抑制蛋白CoREST。其以此形式募集其他组蛋白修饰酶，例如形成多酶单元的组 蛋白脱乙酰酶1/2(HDAC1/2)，其通常参与基因抑制调控(Ballas,N.etal.Neuron2001,31, 353-365)。KDM1A从组蛋白H3的单和二甲基Lys4两者特异性地去除甲基，这是描述得 非常清楚的基因活性标记。
KDM1A代表对于表观遗传学药物非常有意思的靶标，这由涉及其在实体瘤和血液肿 瘤中过表达(Schulte,J.H.etal.CancerRes.2009,69,2065-2071；Lim,S.etal.Carcinogenesis 2010,31,512–520；Hayami,S.etal.Int.J.Cancer2011,128,574–586；Schildhaus,H.U.et al.Hum.Pathol.2011,42,1667-1675；Bennani-Baiti,I.M.etal.Hum.Pathol.2012,43, 1300-1307)、其过表达与前列腺癌中肿瘤复发的关系(Kahl,P.etal.CancerRes.2006,66, 11341-11347)、其在多种分化过程如脂肪形成(Musri,M.M.etal.J.Biol.Chem.2010,285, 30034-30041)、骨骼肌分化(Choi,J.etal.Biochem.Biophys.Res.Commun.2010,401, 327-332)和造血作用(Hu,X.etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA2009,106,10141-10146；Li,Y.et al.Oncogene.2012,31,5007-18)中的作用、细胞能量消耗中它的调控(HinoS.Etal.Nat Commun.2012,doi:10.1038/ncomms1755)、其在有效和潜在感染中病毒基因表达的检查点 的控制中的作用(Roizman,B.J.Virol.2011,85,7474-7482)和更具体地在孢疹病毒感染(Gu, H.J.Virol.2009,83,4376-4385)和HIV转录(Sakane,N.etal.PLoSPathog.2011, 7(8):e1002184)的控制中的作用的数据支持。KDM1A在神经干细胞增殖的调控(Sun,G.et al.Mol.CellBiol.2010,30,1997-2005)以及在神经炎形态发生的控制(Zibetti,C.etal.J. Neurosci.2010,30,2521-2532)中的作用表明其可能参与神经退行性疾病。
此外，存在KDM1A与其他重要的细胞过程(例如DNA甲基化(Wang,J.etal.Nat.Genet. 2009,41(1):125-129)、细胞增殖(Scoumanne,A.etal.J.Biol.Chem.2007,282,15471-15475； Cho,H.S.etal.CancerRes.2011,71,655-660)、上皮-间充质转化(Lin,T.etal.Oncogene. 2010,29,4896-4904)以及染色体隔离(Lv,S.etal.Eur.J.CellBiol.2010,89,557-563)) 的控制的相关性的证据。此外，KDM1A的几种抑制剂在这些年中已被发现，并发现KDM1A 抑制剂能够重新活化沉默的肿瘤抑制剂基因(Huang,Y.etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 2007,104,8023-8028；Huang,Y.etal.Clin.CancerRes.2009,15,7217-7228)，选择性地靶 向具有多能干细胞性质的癌细胞(Wang,J.etal.CancerRes.2011,71,7238-7249)，以及在 急性骨髓性白血病中重新活化全-反式维甲酸分化通路(Schenk,T.etal.NatMed.2012,18, 605-611)。
最近发现的脱甲基酶KDM1B(LSD2)与KDM1A类似地表现出对于组蛋白H3的单 和二甲基化的Lys4的特异性。KDM1B不同于KDM1A，并不结合CoREST，并且至今在 任何包含KDM1A的蛋白质复合体中其并未被发现(Karytinos,A.etal.J.Biol.Chem.2009, 284,17775-17782)。相反，KDM1B与常染色质组蛋白甲基转移酶G9a和NSD3以及参与 转录延伸的细胞因子一起形成活性复合体。一致的是，KDM1B已被报道作为转录延伸的 调节剂而非如对KDM1A提出的转录抑制剂起作用(Fang,R.etal.Mol.Cell2010,39, 222-233)。
KDM1A和KDM1B两者均为香精氨基(flavoamino)氧化酶依赖性蛋白，其共有FAD 辅酶结合结构单元、SWIRM结构域和胺氧化酶结构域，这些都对KDM1家族成员的酶活 性是必需的。此外，KDM1A和KDM1B两者均显示出与单胺氧化酶MAO-A和MAO-B 类似的结构。
确实，反苯环丙胺(用作抗抑郁剂的MAO抑制剂)被发现也能够抑制LSD1。该化合 物作为可逆抑制剂与FAD辅助因子形成共价加合物(Lee,M.G.etal.Chem.Biol.2006,13, 563；Schmidt,D.M.Z.etal.Biochemistry2007,46,4408)。
反苯环丙胺类似物的合成及其LSD1抑制活性已被Gooden,D.M.etal在Bioorg.Med. Chem.Lett.2008,18,3047-3051中和被Benelkebir,H.etal在Bioorg.Med.Chem.2011,19, 3709-3716中描述。进一步的芳基环丙基胺和杂芳基环丙基胺衍生物作为LSD1、MAO-A 和/或MAO-B酶抑制剂在US2010/324147、WO2012/013727和WO2012/045883中披露。
OryzonGenomicsS.A.在WO2010/043721、WO2010/084160、WO2011/035941、 WO2011/042217和在WO2012/01372中披露了具有LSD1、MAO-A和/或MAO-B抑制活 性的环丙基氨基烷基酰胺、N-杂环基-、芳基-或者杂芳基烷基环丙烷胺，但是并没有披露 在环丙基的位点1处取代的2-芳基或杂芳基环丙基胺衍生物的例子。
另外，具有LSD1抑制活性和下列通式的环丙基胺已在WO2013/057320和 WO2013/057322中披露：
其中，RW、RX、RY和RZ独立地选自氢、氟和C1-4烷基，优选选自氢、氟和甲基。本 发明的一个更优选的实施方式为其中RZ是氢的化合物，。在这两篇PCT专利申请中并没 有披露RZ并非为氢的具体化合物。
GB950388披露了具有下列通式的作为单胺氧化酶抑制剂的苯基环丙基胺衍生物：
其中，R1和R2为氢或甲基，其具有厌食和抗抑郁活性。
WO1996/40126描述了1H-4(5)-取代的咪唑衍生物，其具有在诸如过敏、炎症、心血管 疾病或者脑血管疾病、胃肠道失调和涉及神经疾病的CNS失调的疾病(例)的治疗中有用 的H3组织胺受体激动剂活性。
取代的1-甲基-2-苯基或者1-乙基-2-苯基环丙基胺衍生物在WO2007/134799中作为用于合成杀微生物剂衍生物的中间体被描述。其他的在位点1处取代的环丙基胺被Patel,A.R.ActaChem.Scand.,1966,1424-1426、Huisgen,R.etal.Chem.Berichte,1972,1324-1339、Bertus,P.etal.Chem.Commun.(Camb.),2001,18,1792-1793、Shintani,R.etal.Chem.Commun.(Camb.),2011,47,3057-3059，以及Osipova,A.PhD“SynthesisofDiversePolyfunctionalAmidesasPrecursorstoPotentiallyInterestingPeptidomimetics”Thesis200描述。
本发明涉及取代的环丙基胺衍生物，其具有非常强的KDM1A酶和/或KDM1B酶的抑 制活性和低的单胺氧化酶(MAO)的抑制活性，其在与组蛋白脱甲基酶的活性相关的疾病 和病症的预防和治疗中有用。MAO是对于中枢神经系统的疾病(例如抑郁症或帕金森疾 病)的治疗非常知名的靶标。但是，抑制MAO伴随着副作用，其中有酪胺诱导的高压危 机或者血清素综合征，其在伴随使用MAO抑制剂和其他含血清素药物的情况下发生 (Wimbiscus,M.etal.Cleve.Clin.J.Med.,2010,859-882；Iqbal,M.M.Ann.Clin.Psychiatry, 2012,24,310-318)。
发明内容
根据本发明，提供了具有强有力的KDM1A(LSD1)抑制活性的通式(I)的化合物：
其中：
A是芳基或杂芳基，其中，芳基或杂芳基可任选地被独立地选自于由卤素、 C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、CN、硝基、NH2、叠氮基、 OH、C1-C6烷基氨基，和R-L-构成的组的一个或多个取代基取代；
R是芳基，其中，所述芳基可任选地被独立地选自于由卤素、C1-C6烷基、 C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、CN、硝基、NH2、叠氮基、任选地被 OH取代的C1-C6烷基氨基、任选地被C1-C6烷基取代的杂环氨基、OH、苯基、任选地被 C1-C6烷基取代的杂环基、任选地被氧取代的杂环基、杂芳基和苄氧羰基氨基构成的组的 一个、两个或多个取代基取代；或杂芳基。
L是单键；C1-C6亚烷基；C2-C6亚烯基；-(CH2)mX-(CH2)n-；-(CH2)o(SO2)NH-； -(CH2)p(CO)NR3-；-(CH2)qNR4(CO)-；被氧取代的杂环基；或杂芳基；
R1是任选地被芳基或杂芳基取代的C1-C6烷基；芳基；杂芳基；或 -(CH2)r-Y-R5；并且其中芳基或杂芳基可任选地被独立地选自于由卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、硝基、乙酰氨基和苯基构成的组中的一个或 多个取代基取代；
R2是氢；任选地被芳基、杂芳基或被杂环取代的C1-C6烷基，并且其中芳基 或杂芳基可任选地被独立地选自于由卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、 C1-C6卤代烷氧基和NH2构成的组中的一个或多个取代基取代；或者-CH2(CO)NR6R7；
m、n、o、p、q独立地为0或者1-6的整数；
r为1-6的整数；
X、Y独立地为NR8；O；或S；
R3、R4独立地为氢；或C1-C6烷基；
R5为氢、芳基或杂芳基，其中，所述芳基或杂芳基可任选地被独立地选自于 由卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和苯基构成的组中 的一个或多个取代基取代；
R6，R7独立地为氢、C1-C6烷基；或者R6和R7和与它们相连的氮一起形成C4-C10- 杂环，在所述环中其任选地包括独立地选自于NR9、O或S的一个或多个其他杂原子，并 且其任选地被NH2取代；
R8为氢；任选地被芳基或杂芳基取代的C1-C6烷基；或者C3-C6环烷基；
R9为氢或C1-C6烷基；
或者其立体异构体或药学上可接受的盐，其用于治疗被过量或不适当的KDM1A (LSD1)活性调节的疾病和病症。
用于治疗被过量或不适当的KDM1A(LSD1)活性调节的疾病和病症的通式(I)的 化合物的尤其优选的化合物选自于以下列表：
(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
(1R,2S)-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
(1R,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-丙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-异丙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-苯基-环丙胺；
(1S,2S)-1-苄基-2-苯基-环丙胺；
(1R,2R)-1-苄基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-苯乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-乙基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-(6-喹啉基)环丙胺；
反式-1-(2-萘基甲基)-2-苯基-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(4-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(4-氯代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-[3-(三氟甲基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-[4-(三氟甲基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-氟代苯基)-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-溴代苯基)-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(4-氯代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-[3-甲氧基苯基]环丙胺；
1-乙基-(反式)-2-[4-(三氟甲氧基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-氯代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-(1-萘基甲基)-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-(2-萘基甲基)环丙胺；
反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[2-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[3-[[2-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[3-[[2-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[3-[[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-丙酰胺；
2-(4-苄氧基苯基)-反式-1-乙基-环丙胺；
N-[4-[(2-氨基-反式-2-乙基-环丙基]苯基]苯磺酰胺；
反式-1-苄基-2-(4-苄氧基苯基)环丙胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[3-[[4-[(反式)-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]乙酰胺；
反式-4-(2-氨基-2-乙基-环丙基)苯胺；
反式-2-(3-叠氮苯基)-1-乙基-环丙胺；
1-氨基-(反式)-2-苯基-环丙基]甲醇；
1-氨基-(顺式)-2-苯基-环丙基]甲醇；
(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基苯基)甲基]2-苯基-环丙胺；
(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基-1-萘基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[(1S,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-[(3S)-3-氨基吡咯烷-1-基]-2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]乙酮；
反式-2-[[(1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
顺式-2-[[(1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
反式-1-乙基-N-甲基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1-乙基-N-甲基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-乙基-N-乙基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1-乙基-N-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-[[1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]乙酰胺；
反式-N-苄基-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(4,7-二甲氧基-1-萘基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(3,4-二甲氧基氨基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(2-氯-3-吡啶基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(2,2-二甲基苯并二氢吡喃-6-基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1,2-二苯基环丙胺；
反式-1,2-二苯基环丙胺；
反式-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴-3-氟-苯基)-1-乙基-环丙胺；
反式-2-(3-溴代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
(1R,2S)-1,2-二苯基环丙胺；
(1S,2R)-1,2-二苯基环丙胺；
反式-2-(4-氟代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(3-氯代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(3-溴代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
反式-2-(4-氟代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-氯代苯基)环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
顺式-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-4-苯基-苯甲酰胺；
2-(4-苄氧基苯基)-1-(2-萘基甲基)环丙胺；
N-[4-反式-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-反式-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(4-硝基苯基)乙酰胺；
N-[4-[[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-(反式-2-氨基-2-乙基-环丙基)苯基]萘-1-甲酰胺；
N-[4-(反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基)苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[4-(反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基)苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(2-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基)苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(3-呋喃基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-苯基-丙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(2-氧代恶唑烷-3-基)-苯甲酰胺；
N-[3-[(4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基)氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-吗啉代-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]萘-1-甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟代-苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
N-[5-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]-2-吗啉代-苯基]氨基甲酸苄 酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(4-吡啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-苯基-乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-(2-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[5-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基 甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(2-羟乙氨基)苯甲酰胺；
N-[3-[1-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸苄酯；
反式-1-乙基-2-[3-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
N-[3-[1-[4-[2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸苄酯；
反式-1-(2-萘基甲基)-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式1-乙基-2-[2-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式-1-苄基-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
N-[4-[(1S,2R)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[(1R,2S)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
反式-1-苄基-2-(3-甲氧苯基)环丙胺；
1-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-咪唑烷-2-酮；
反式-1-乙基-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式-1-[(苄基氨基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
反式-1-[(环丙基氨基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
反式-1-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
5-{[(反式-1-甲基-2-苯基-环丙基)氨基]甲基}嘧啶-2-胺；
反式-N-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二氧六环-6-基甲基)-1-基-2-苯基-环丙胺；
顺式-N,1-二甲基-2-苯基-环丙胺；
2-[[反式-1,2-二苯基环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-[[反式-1-(2-萘基甲基)-2-苯基-环丙基]氨基]乙酮；
2-[[(1R,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[(1R,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[顺式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
反式-N,1-二甲基-2-苯基-环丙胺；
2-[[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(1-哌啶基)乙酮；
反式-1-乙基-2-苯基-N-[2-(1-哌啶基)乙基]环丙胺；
5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-胺；
反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-苯基-环丙胺；
N-[4-(反式-1-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]乙酰胺；
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在另一个实施方式中，本发明提供如上限定的通式(I)的化合物，条件是当A是未 取代的苯基或咪唑基、R1是甲基时，R2则不能为氢或甲基；或者其立体异构体或药学上可 接受的盐，其用作药物。
用作药物的尤其优选的通式(I)的化合物包括：
(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
(1R,2S)-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-丙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-异丙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-苯基-环丙胺；
(1S,2S)-1-苄基-2-苯基-环丙胺；
(1R,2R)-1-苄基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-苯乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-乙基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(6-喹啉基)环丙胺；
反式-1-(2-萘基甲基)-2-苯基-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(4-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(4-氯代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-[3-(三氟甲基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-[4-(三氟甲基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-氟代苯基)-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-氯代苯基)-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-[3-甲氧基苯基]环丙胺；
1-乙基-(反式)-2-[4-(三氟甲氧基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-氯代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-(1-萘基甲基)-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-(2-萘基甲基)环丙胺；
反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[2-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[3-[[2-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[3-[[3-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[3-[[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-丙酰胺；
2-(4-苄氧基苯基)-反式-1-乙基-环丙胺；
N-[4-[(2-氨基-反式-2-乙基-环丙基]苯基]苯磺酰胺；
反式-1-苄基-2-(4-苄氧基苯基)环丙胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[3-[[4-[(反式)-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
反式-4-(2-氨基-2-乙基-环丙基)苯胺；
反式-2-(3-叠氮苯基)-1-乙基-环丙胺；
1-氨基-(反式)-2-苯基-环丙基]甲醇；
1-氨基-(顺式)-2-苯基-环丙基]甲醇；
(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基-1-萘基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[(1S,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-[(3S)-3-氨基吡咯烷-1-基]-2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]乙酮；
反式-2-[[(1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
顺式-2-[[(1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
反式-1-乙基-N-甲基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1-乙基-N-甲基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-乙基-N-乙基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1-乙基-N-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-[[1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]乙酰胺；
反式-N-苄基-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(4,7-二甲氧基-1-萘基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(2-氯-3-吡啶基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(2,2-二甲基苯并二氢吡喃-6-基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1,2-二苯基环丙胺；
反式-1,2-二苯基环丙胺；
反式-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴-3-氟-苯基)-1-乙基-环丙胺；
反式-2-(3-溴代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
(1R,2S)-1,2-二苯基环丙胺；
(1S,2R)-1,2-二苯基环丙胺；
反式-2-(4-氟代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(3-氯代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(3-溴代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
反式-2-(4-氟代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-氯代苯基)环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
顺式-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-4-苯基-苯甲酰胺；
2-(4-苄氧基苯基)-1-(2-萘基甲基)环丙胺；
N-[4-反式-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-反式-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(4-硝基苯基)乙酰胺；
N-[4-[[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-(反式-2-氨基-2-乙基-环丙基)苯基]萘-1-甲酰胺；
N-[4-(反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基)苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[4-(反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基)苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(2-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基)苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(3-呋喃基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-苯基-丙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(2-氧代恶唑烷-3-基)-苯甲酰胺；
N-[3-[(4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基)氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-吗啉代-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]萘-1-甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
N-[5-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]-2-吗啉代-苯基]氨基甲酸苄 酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(4-吡啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-(2-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[5-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基 甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(2-羟乙氨基)苯甲酰胺；
N-[3-[1-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸苄酯；
反式-1-乙基-2-[3-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
N-[3-[1-[4-[2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸苄酯；
反式-1-(2-萘基甲基)-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺氯化氢；
反式-1-乙基-2-[2-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式-1-苄基-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
N-[4-[(1S,2R)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[(1R,2S)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
反式-1-苄基-2-(3-甲氧基苯基)环丙胺；
1-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-咪唑烷-2-酮；
反式-1-乙基-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式-1-[(苄基氨基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
反式-1-[(环丙基氨基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
反式-1-[(4-苯基哌嗪-1-基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]嘧啶-2-胺；
反式-N-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二氧六环-6-基甲基)-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
2-[[反式-1,2-二苯基环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-[[反式-1-(2-萘基甲基)-2-苯基-环丙基]氨基]乙酮；
2-[[(1R,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[(1R,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[顺式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(1-哌啶基)乙酮；
反式-1-乙基-2-苯基-N-[2-(1-哌啶基)乙基]环丙胺；
5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-胺；
反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-苯基-环丙胺；
N-[4-(反式-1-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]乙酰胺；
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在另一个实施方式中，本发明提供如上限定的通式(I)的化合物，条件在于，当A 是未取代的苯基或咪唑基、R1是甲基时，R2则不能为氢或甲基；
当A是未取代的苯基、R1是正丙基、苯基、2-氟代-或4-氟代苯基、3-氯代、4-氯代或 2,4-二氯代苯基、2-甲氧基-、4-甲氧基或3,4-二甲氧基苯基、1-萘基、苄基或4-氯代苄基时， R2则不能为氢；
当A是4-氯代或2,4-二氯代苯基、4-氟代或2,4-二氟代苯基、2-氯-4-氟代苯基、2-氟 代-4-氯代苯基、4-三氟甲基苯基、4-三氟甲氧基苯基或4-(4-氯代苯基)苯基时，R1是甲基 或乙基；R2则不能为氢；除了下列化合物以外：
2-[2-氯-4-(4-氯代苯基)苯基]-1-甲基-环丙胺；
2-(4-氯代苯基)-1-苯基-环丙胺；
2-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-环丙胺；
[1-(苄基氨基)-2-苯基-环丙基]甲醇；
或者其立体异构体或药学上可接受的盐用作药物。
在一个优选的实施方式中，本发明提供如上限定的通式(I)的化合物，条件在于，当 A是被4-甲氧基、4-三氟甲基、4-三氟甲氧基、4-(4-氯代苯基)或者选自于氟或氯的一个或 两个卤素取代的苯基，且R1是甲基、乙基、正丙基、任选地被一个或两个氟、氯或甲氧基 取代的苯基、1-萘基或苄基时，R2则不能为氢；除了下列化合物以外：
2-[2-氯-4-(4-氯代苯基)苯基]-1-甲基-环丙胺；
[1-(苄基氨基)-2-苯基-环丙基]甲醇；
或者其立体异构体或药学上可接受的盐用作药物。
在一个优选的实施方式中，A是由R-L-取代的苯基，L是-(CH2)p(CO)NR3-，R2是氢。
在一个进一步优选的实施方式中，R1是被苯基取代的乙基。
在另一个优选的实施方式中，R2是任选地被芳基、杂芳基或杂环基取代的C1-C6烷基， 其中，芳基或杂芳基可被独立地选自于由卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷 基、C1-C6卤代烷氧基和NH2构成的组中的一个或多个取代基任选地取代；或者 -CH2(CO)NR6R7。
通式(I)的尤其优选的化合物包括：
(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
(1R,2S)-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-异丙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-苯乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-乙基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(6-喹啉基)环丙胺；
1-(2-萘基甲基)-2-苯基-环丙胺；
反式-1-乙基-2-[3-(三氟甲基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-氟代苯基)-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-氯代苯基)-环丙胺；
反式-1-乙基-2-(3-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-[3-甲氧基苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-氯代苯基)环丙胺；
反式-1-乙基-2-(2-溴代苯基)环丙胺；
反式-1-(1-萘基甲基)-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-(2-萘基甲基)环丙胺；
反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[2-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[3-[[2-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[3-[[3-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[3-[[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[(反式)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-丙酰胺；
2-(4-苄氧基苯基)-反式-1-乙基-环丙胺；
N-[4-[(2-氨基-反式-2-乙基-环丙基]苯基]苯磺酰胺；
反式-1-苄基-2-(4-苄氧基苯基)环丙胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[3-[[4-[(反式)-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-4-[(反式)-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
反式-4-(2-氨基-2-乙基-环丙基)苯胺；
反式-2-(3-叠氮苯基)-1-乙基-环丙胺；
1-氨基-(反式)-2-苯基-环丙基]甲醇；
1-氨基-(顺式)-2-苯基-环丙基]甲醇；
(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基-1-萘基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[(1S,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-[(3S)-3-氨基吡咯烷-1-基]-2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]乙酮；
反式-2-[[(1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
顺式-2-[[(1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
反式-1-乙基-N-甲基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1-乙基-N-甲基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-乙基-N-乙基-2-苯基-环丙胺；
顺式-1-乙基-N-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-[[1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]乙酰胺；
反式-N-苄基-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(4,7-二甲氧基-1-萘基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(2-氯-3-吡啶基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-[(2,2-二甲基苯并二氢吡喃-6-基)甲基]-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴-3-氟-苯基)-1-乙基-环丙胺；
反式-2-(3-溴苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
反式-2-(4-氟代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(3-氯代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(3-溴代苯基)-1-(2-萘基甲基)-环丙胺；
反式-2-(4-氯代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
反式-2-(4-氟代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-氟代苯基)环丙胺；
反式-1-苄基-2-(4-氯代苯基)环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-苯乙基-环丙胺；
顺式-1-乙基-2-苯基-环丙胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-[(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-4-苯基-苯甲酰胺；
2-(4-苄氧基苯基)-1-(2-萘基甲基)环丙胺；
N-[4-反式-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-反式-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(4-硝基苯基)乙酰胺；
N-[4-[[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-(反式-2-氨基-2-乙基-环丙基)苯基]萘-1-甲酰胺；
N-[4-(反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基)苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[4-(反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基)苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(2-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基)苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(3-呋喃基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-苯基-丙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(2-氧代恶唑烷-3-基)-苯甲酰胺；
N-[3-[(4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基)氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-吗啉代-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]萘-1-甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺；
N-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]氨基甲酰基]苯基]氨基甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]-2-氟-苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
N-[5-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]-2-吗啉代-苯基]氨基甲酸苄 酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(4-吡啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-氯-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-(1-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-苯基-乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-2-(2-萘基)乙酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]吡啶-4-甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-(1-甲基-4-哌啶基)苯甲酰胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺；
N-[5-[[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]氨基甲酰基]-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基 甲酸苄酯；
N-[4-[反式-2-氨基-2-苯乙基-环丙基]苯基]-3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺；
4-[反式-2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯胺；
N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-(2-羟乙氨基)苯甲酰胺；
N-[3-[1-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸苄酯；
反式-1-乙基-2-[3-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
N-[3-[1-[4-[2-氨基-2-(2-萘基甲基)环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸苄酯；
反式-1-(2-萘基甲基)-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式-1-乙基-2-[2-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式-1-苄基-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
N-[4-[(1S,2R)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
N-[4-[(1R,2S)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺；
反式-1-苄基-2-(3-甲氧苯基)环丙胺；
1-[3-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-咪唑烷-2-酮；
反式-1-乙基-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺；
反式-1-[(苄基氨基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
反式-1-[(环丙基氨基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
反式-1-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-2-苯基-环丙胺；
5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]嘧啶-2-胺；
反式-N-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
反式-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二氧六环-6-基甲基)-1-甲基-2-苯基-环丙胺；
2-[[反式-1,2-二苯基环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-[[反式-1-(2-萘基甲基)-2-苯基-环丙基]氨基]乙酮；
2-[[(1R,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[(1R,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[顺式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
2-[[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(1-哌啶基)乙酮；
反式-1-乙基-2-苯基-N-[2-(1-哌啶基)乙基]环丙胺；
5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-胺；
反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙胺；
反式-2-(4-溴代苯基)-1-苯基-环丙胺；
N-[4-(反式-1-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]乙酰胺；
或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在本发明中，“芳基”表示分别为6、9或10个原子的单或二环芳香环体系，该芳基 的例子为苯基、茚基、茚满基和萘基和四氢萘烯基。
“杂芳基”表示分别为5-10元的单或二环杂芳香环体系，其包含一个、两个、三个或 四个选自氮、氧或硫的杂原子以及一至九个碳原子。所述杂芳基的例子包括但不限于：吡 咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、恶唑基、噻唑基、1,2,3-噁二唑基、1,3,4-噻二 唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并[b]呋喃基、 苯并[b]噻吩基、苯并吡喃基、吲唑基、苯并咪唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉 基和喹喔啉基。
“杂环基”表示分别为4-12元的单或二环的饱和或部分饱和的非芳香环体系，其包含 一个、两个或三个选自于氮、氧和硫的杂原子以及3-11个碳原子。这样的杂环的例子包括 但不限于：吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、 四氢喹啉基、四氢异喹啉基、四氢喹喔啉基、苯并二唑基、2,3-二氢-苯并二唑基、苯并恶 唑基、氮杂卓基和二氮杂卓基。
“被氧取代的杂环基”表示分别为4-12元的单或二环的饱和或部分饱和的非芳香环体 系，其包含一个、两个或三个选自于氮、氧和硫的杂原子，并且被氧基取代。例子包括但 不仅限于2-氧代恶唑烷-3-基。
“杂环氨基”表示分别为4-12元的单或二环的饱和或部分饱和的非芳香环体系，其包 含一个、两个或三个选自于氮、氧和硫的杂原子，其被NH-取代。例子包括但不仅限于4- 哌啶氨基。
“C4-C10-杂环”表示分别为4-10元的单或二环的饱和或部分饱和的非芳香环体系，其 包含一个氮和任选地选自于氮、氧和硫的一个或多个杂原子。所述杂环的例子包括但不限 于吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、氮杂 卓基和二氮杂卓基。
术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
术语“C1-C6烷基”是指直链或支链的烃链基，仅由碳原子和氢原子构成，其具有1-6 个碳原子。
术语“C2-C6烷基”是指直链或支链的烃链基，仅由碳原子和氢原子构成，其具有2-6 个碳原子。
C1-C6烷基或C2-C6烷基的适宜的例子包括乙基、正丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊 基和己基。C1-C6烷基的更加适宜的例子是甲基。
术语“C3-6环烷基”是指具有3-6个碳原子的饱和单环烃环体系。C3-6环烷基的适宜的 例子包括环丙烷、环丁烷、环戊烷和环己烷。
术语“C1-C6烷氧基”是指直链或支链的O-C1-C6烷基，其中烷基如本文中所限定。 “C1-C6烷氧基”优选为直链或支链的C1-C4烷氧基，更优选为C1-C2烷氧基。
术语“C1-C6卤代烷基”是指直链或支链的烃链基，其被一个或多个卤素原子取代， 并具有1-6个碳原子。“C1-C6卤代烷基”优选为直链或支链的C1-C4卤代烷基，更优选为 C1-C2卤代烷基，尤其是CF3。
术语“C1-C6卤代烷氧基”是指直链或支链的O-C1-C6卤代烷基，其中卤代烷基如本文 所限定。“C1-C6卤代烷氧基”优选为直链或支链的C1-C4卤代烷氧基，更优选为C1-C2卤 代烷氧基，尤其是OCF3、OCHF2或OCH2F。
术语“C1-C6烷基氨基”是指直链或支链的-NH-C1-C6烷基，其中C1-C6烷基如本文所 限定。
术语“C1-C6亚烷基”是指如上限定的C1-C6烷基，其中烷基的氢原子之一被键取代， 并具有1-6个碳原子。
术语“C2-C6亚烯基”是指C2-C6烯基，其中烯基的氢原子之一被键取代，并具有2-6 个碳原子。术语“C2-C6烯基”是指直链或支链的烃链基，其仅由碳原子和氢原子构成， 其具有2-6个碳原子，并包括至少一个碳-碳双键。
药学上可接受的盐包括通过用无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸或磷酸)或有机酸(例 如醋酸、丙酸、丁二酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、乙醇酸、乳酸、草酸、苹果 酸、马来酸、丙二酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、对甲基苯磺酸、甲基磺酸、乙基磺酸或 萘磺酸)盐化式(I)的化合物得到的常规的非毒性盐。关于对适宜的药学上的盐，请参见 BergeS.M.etal.,J.Pharm.Sci.1977,66,1-19；GouldP.L.Int.J.Pharm1986,33,201-217；和 Bighleyetal.EncyclopediaofPharmaceuticalTechnology,MarcelDekkerInc,NewYork1996, Volume13,page453-497。不是药学上可接受的其他盐(例如三氟乙酸盐)可在本发明的化 合物的制备中有用，其形成本发明的进一步的方面。式(I)的化合物的盐的所有可能的立 体异构体和非立体异构体形式都包括在本发明的范围内。
此外，式(I)的化合物可以非溶剂化的形式以及用药学上可接受的溶剂(例如水、EtOH 等)而成溶剂化的形式存在。
式(I)的某些化合物可以立体异构体的形式存在(例如它们可包含一个或多个非对称 碳原子)。个体立体异构体(individualstereoisomers)(对映异构体和非对映异构体)及 其混合物包括在本发明的范围内。本发明还涵盖由式(I)表示的化合物的个体异构体，其 为与其中一个或多个手性中心是反向的其异构体的混合物。
同样，应理解，除了式中所示的以外，本发明的化合物可以互变异构的形式存在，并 且其也包括在本发明的范围内。
本发明还包括本发明的化合物的所有适宜同位素的变异体。本发明的化合物的同位素 的变异体定义为其中至少一个原子被替换成具有相同原子数但是原子量与自然界中通常 发现的不一样的原子量。可并入本发明的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、 磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、 18F和36Cl。本发明的某些同位素变异体(例如诸如3H或14C的放射性同位素被并入其中 的那些)在药物和/或底物组织分布研究中有用。氚标记的3H和碳1414C同位素，由于其 方便制备和检测是尤其优选的。进一步的，用同位素例如氘2H替换可提供由更强的代谢 稳定性导致的某些治疗优势，例如，增加的体内半衰期，或降低的剂量要求，因此在某些 情况下是优选的。本发明的化合物的同位素变异体通常可通过常规步骤制备，例如使用适 宜试剂的适宜同位素变异体通过示意性的方法或者被以下实施例中描述的制备方法来制 备。
本发明还提供了包括本发明的一种或多种化合物以及一种或多种药学上可接受的赋 形剂和/或稀释剂的药物组合物。包括活性成分的药物组合物可以为片剂、胶囊、口服制剂、 粉剂、颗粒剂、丸剂、可注射或可输液的液体、溶液、悬浮液、乳液、栓剂、软膏剂、乳 膏、洗剂、凝胶剂、糊剂、透皮输送设备的形式。
式(I)的化合物(其中R2是氢)可根据方案A制备：
其中，A和R1如以上对式(I)所限定的，R2是氢，PG和PG1是选自于本领域中已 知的保护基团的保护基团，例如对于PG是甲基、乙基等，对于PG1是苄氧羰基、叔丁氧 羰基(BOC)、9-芴甲氧羰基等。
式A1的化合物是已知的化合物，或者可通过已知方法制备(例如描述于J.Med.Chem. 1991,34,2638-2643orChem.Rev.1997,97,2341-2372)。式A2的化合物是已知的化合物， 或者可通过已知方法制备，例如通过2-二乙氧基磷酰乙酸乙酯在适宜的碱(例如NaH)的 存在下在适宜的溶剂(例如1,2-二甲氧乙烷)中在0-60摄氏度的温度下与R1-W反应，其 中，R1如上限定，W是卤素原子，例如氯或溴。
式A3的化合物可常规地通过将式A1的化合物与式A2的膦酸酯在适宜的碱(例如丁 基锂)的存在下在适宜的溶剂(例如DME)中在约室温至溶剂的沸点的温度范围下优选在 微波辐射的条件下反应来制备。
具体的，通式(I)的化合物可根据方案A1来制备，其中R2是氢，A是被R-L取代 的芳基或杂芳基，其中，R如上文对式(I)所限定的，L是-(CH2)p(CO)NH-；-(CH2)mX-； -(CH2)o(SO2)NH-或-(CH2)p(CO)NR3-；其中m、o、p、R、R3和X如对上文对式(I)所限 定)：
其中，R1如对式(I)所限定，PG和PG1如上限定，A1是芳基或杂芳基，LG是诸 如Br、I或Cl的离去基团
式A6的化合物在具体情况下对应于式A3的化合物，其中，A是被LG取代的芳基或 杂芳基。式A7的化合物可根据乌尔曼型反应通过将式A6的化合物与CuI、NaN3和2-氨 基乙醇在适宜的溶剂(例如二甲基乙酰胺)中在从室温到溶剂的沸点的温度范围下反应来 制备。
式A8的化合物(其中L是-(CH2)p(CO)NH-)可通过将式A7的化合物与 R-(CH2)p(CO)-W(其中R和W如上限定)在适宜的碱(例如三乙胺)的存在下在适宜的 溶剂(例如四氢呋喃)中在0摄氏度至溶剂的沸点的温度范围反应来制备。
或者，式A8的化合物(其中L是-(CH2)mX-、-(CH2)o(SO2)NH-或-(CH2)p(CO)NR3)可 通过将式A6的化合物与R-(CH2)p(CO)-NHR3、R-(CH2)o(SO2)NH2或R-(CH2)mXH，以及 CuI在适宜的碱(例如N,N’-二甲基乙烷-1,2-二胺或N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺、8-羟基 苯并吡啶)的存在下在适宜的溶剂(例如在二恶烷中)中在0摄氏度至溶剂的沸点的温度 范围反应来制备。
根据已知的方法(例如通过用LiOH、NaOH或KOH在适宜的溶剂例如在乙醇/水、甲 醇/水或二恶烷/乙醇/水混合物中处理乙酸乙酯)，可将式A3的化合物去保护以获得式A4 的化合物，将式A8的化合物去保护以获得式A9的化合物。水解乙酸乙酯可在从0摄氏度 至溶剂的沸点的温度范围下进行。
通过与适宜的叠氮化物(例如叠氮磷酸二苯酯)在适宜的碱(例如三乙胺)和适宜的 溶剂(例如叔丁醇)的存在下在从室温至溶剂的沸点温度的温度范围反应，可以分别转化 式A4或式A9的羧酸，以得到式A5或式A10的被保护的胺。
根据已知的方法，例如通过将BOC衍生物与HCl或TFA(三氟乙酸)在适宜的溶剂 (例如二恶烷、Et2O或二氯甲烷)中在从0摄氏度至室温的温度范围处理，可将式A5或 式A10的化合物去保护，以得到式(I)的化合物。
或者，可根据方案B制备通式(I)的化合物，其中R1是CH2OH，R2是氢：
其中，A如上文对式(I)所限定，PG1如上限定，PG2是选自于本领域已知的那些的 保护基团，例如乙基等。
式B1和式B2的化合物是已知化合物，或可通过已知方法制备。
式B3的化合物可通过将式B1的化合物与式B2的化合物在催化剂(例如乙酸铑)和 碘苯二乙酸酯的存在下在约为室温的温度下反应来制备。
式B4的胺可通过用合适的还原剂(例如锌粉和氯化氢)在合适溶剂(如i-PrOH)中 在室温下还原式B3的化合物来制备。式B4的化合物的氨基基团可是被保护的，根据已知 方法(例如用叔丁氧基羰基-碳酸叔丁酯在合适的碱(例如N,N-二异丙基乙基胺)的存在 下并在合适的溶剂(例如CH2Cl2)中)得到式B5的化合物。
式B6的化合物可通过用合适的还原剂(例如LiAlH4)在合适的溶剂(例如THF)中 在从0℃至室温的温度还原式B5的酯来制备。
去保护式B6的化合物以得到式(I)的化合物可通过已知方法实现，例如在BOC保 护基团的情况下，用HCl或TFA(三氟乙酸)在合适的溶剂(例如二氧六环、Et2O或二 氯甲烷)中、在从0℃至室温的温度。通式(I)的化合物(其中，R2是被芳基、杂芳基 或杂环基任选地取代的C1-C6烷基，其中芳基或杂芳基可被独立地选自于卤素、C1-C6烷基、 C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和NH2中的一个或多个取代基任选地取 代；或者-CH2(CO)NR6R7，R6和R7如对式(I)所限定)可根据方案C通过式C1的化合 物与式R10-W(C2)的化合物在合适的溶剂(例如DMF)中、在合适的碱(例如NaH) 的存在下反应来制备：
其中，A和R1如上文对式(I)所限定，其中R10是被芳基、杂芳基或杂环基任选地 取代的C1-C6烷基，其中芳基或杂芳基可被独立地选自于由卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧 基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和NH2构成的组中的一个或多个取代基任选地取代； 或者-CH2(CO)NR6R7，R6、R7和W如上定义。所述反应可以在0℃至溶剂的沸点的温度 下进行。在此情况下，有必要保护环丙氨基，所述化学基团可根据已知方法被保护和去保 护(例如保护基是叔丁氧羰基)。
或者，通式(I)的化合物(其中，R2是被芳基、杂芳基或杂环基任选地取代的C1-C6烷基，其中芳基或杂芳基可被独立地选自于由卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤 代烷基、C1-C6卤代烷氧基和NH2构成的组中的一个或多个取代基任选地取代)可根据方 案C通过式C1的化合物与式R11-CHO(C3)的化合物(其中R11是氢；被芳基、杂芳基 或杂环基任选地取代的C1-C5烷基；其中芳基或杂芳基可被独立地选自于由卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基和NH2构成的组中的一个或多个 取代基任选地取代)的反应来制备，优选在氮气气氛下、在合适的有机溶剂(例如CH2Cl2、 MeOH或四氢呋喃)中、在约0℃至70℃的温度、在还原剂(例如硼氢化钠、三乙酰氧 基硼氢化钠或氰基硼氢化钠)的存在下进行。式C1的化合物例如可根据方案A、A1或B 来制备。
在此情况下，有必要在进行前述反应之一之前，保护本发明的化合物和/或其中间体的 化学基团，所述化学基团可通过已知方法来被保护和去保护。对于保护基团和用于保护/ 去保护的步骤的方法的完整讨论可在例如GreeneandWuts(Greene,T.W.；Wuts,P.G.M. “ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis”,JohnWiley&SonsInc.,1991)或在Kocienski (Kocienski,P.J.“ProtectingGroups”,GeorgeThiemeVerlag,1994)中找到。
式(I)的化合物的盐化、不含其盐的式(I)的化合物的制备可通过已知常规方法实 现。
本发明还包括一种用于预防和/或治疗与组蛋白脱甲基酶KDM1A(LSD1)活性的调节 异常相关的疾病的方法，其特征在于，给病人施用药理学上有用剂量的一种或多种如前所 限定的式(I)的化合物。本发明包括用于预防或治疗前述疾病的式(I)的化合物。本发 明还提供式(I)的化合物在制备用于预防或治疗前述疾病的药物中的应用。
考虑到上述作用机理，本发明的化合物在预防或治疗肿瘤类型疾病中有用，所述肿瘤 类型疾病包括但不限于：急性和慢性白血病、急性和慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生异常 综合征、多发性骨髓瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、皮肤和周边T细胞淋巴瘤、成熟T 细胞白血病、大B细胞淋巴瘤；乳腺瘤；肺肿瘤和胸膜间皮瘤、腺癌、非小细胞肺癌、小 细胞肺癌、皮肤肿瘤包括基底细胞癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、角化棘皮瘤； 骨肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、成神经细胞瘤、恶性胶质瘤、脑肿瘤、头和颈癌、睾丸 癌和卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌和前列腺癌(例如晚期前列腺癌)、甲状腺癌(例如甲 状腺滤泡状癌)、结肠癌(例如结肠腺癌、大肠腺瘤)、胃肿瘤和胃肠腺癌、肝癌、胰腺 癌(例如外分泌胰脏癌)、肾肿瘤、畸胎癌和胚胎癌。
本发明的化合物还在感染的治疗或预防中有用，所述感染包括但不限于由原生生物、 真菌、植物毒素剂、病毒和寄生生物导致的感染，例如HIV或单纯疱疹病毒感染。
本发明的化合物还在其他依赖于能量消耗的疾病(例如肥胖症)的预防或治疗中有用。
式(I)的化合物还可与其他药剂(尤其是抗肿瘤剂或分化剂)通过分开的施用或者通 过在相同药物制剂中包括两种活性主要成分来联用。适宜的其他药剂的非限制性的例子包 括：
a)组蛋白脱甲基酶抑制剂(例如，但不限于：SAHA、PXD101、JNJ-26481585、SB939、 ITF-2357、LBH589、PCI-24781、丙戊酸、丁酸、MS-275、MGCD0103和FK-228)；
b)视黄素受体调节剂例如13-顺式-视黄酸、9-顺式-视黄酸、贝沙罗汀、阿利维A酸 或维甲酸；维生素D；
c)如用于内科肿瘤学的抗增殖/抗瘤形成药物和其组合，例如烷化剂(例如铂衍生物， 如顺铂、卡铂、奥沙利铂、洛铂、赛特铂、奈达铂、依铂；氮芥，例如苯丁酸氮芥、美法 仑、双氯乙基甲胺、环磷酰胺、异环磷酰胺、曲洛磷胺、乌拉莫司汀、苯达莫司汀、雌氮 芥；白消安、替莫唑胺或(亚硝基脲)；抗代谢物(例如叶酸拮抗物如氨喋呤、甲氨蝶呤、 培美曲塞、雷替曲塞)；嘌呤例如克拉屈滨、氯法拉滨、氟达拉滨、巯嘌呤、喷司他丁、 硫鸟嘌呤；嘧啶，例如卡培他滨、阿糖孢苷、氟尿嘧啶、氟尿苷、吉西他滨；阿扎胞苷、 地西他滨；胞嘧啶阿拉伯糖苷或羟基脲；抗肿瘤抗生素(例如氨茴环霉素如阿柔比星、氨 柔比星、道诺霉素、阿霉素、表柔比星、伊达比星(idarabicin)、戊柔比星、zorubicine； 米托蒽醌；或来自于链霉菌属的抗生素，如放线菌素、博来霉素、丝裂霉素或洁霉素)； 抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱、长春花碱、长春地辛或长春瑞滨；紫杉烷 类，例如多烯紫杉醇、紫杉醇或多西他赛；埃博霉素例如伊沙匹隆)和拓扑异构酶抑制剂 (例如鬼臼毒素类如依托泊苷和替尼泊苷；安吖啶、喜树碱、伊立替康、鲁比替康和拓扑 替康)；
d)细胞抑制剂，例如抗雌激素药(例如三苯氧胺、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬 和艾多昔芬)、雌二醇受体下调物(例如氟维司群)、抗雄激素(例如比卡鲁胺、氟他米 特、尼鲁米特、利阿唑或醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、 亮丙瑞林或布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香化酶抑制剂(例如阿那曲唑、 来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5-α-还原酶的抑制剂(例如非那雄胺)；
e)抑制癌细胞入侵的药剂(例如金属蛋白酶抑制剂和尿激酶血纤维蛋白溶酶原激活 子受体功能的抑制剂)；
f)生长因子功能的抑制剂，例如生长因子抗体、生长因子受体抗体(例如抗-erbb2 抗体曲妥单抗、抗-erbbl抗体西妥昔单抗和帕尼单抗、抗IGF1R抗体单株抗体)、法尼酰 转移酶抑制剂、MEK抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，例如礼来 肿瘤新药、达沙替尼、埃罗替尼、吉非替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼罗替尼、索拉非尼、 舒尼替尼、依维莫司、雷帕霉素、替西罗莫司；
g)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子的效果的抗血管生成剂，例如抗血管 内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗、雷利度胺或萨力多胺；
h)细胞周期抑制剂，包括例如CDK抑制剂(例如但不仅限于夫拉平度、细胞周期蛋 白B激酶抑制剂)和细胞周期检测点的其他抑制剂；极光激酶的抑制剂和其他涉及有丝分 裂和胞质分裂调节；
i)蛋白酶体抑制剂(例如乳胞素、硼替佐米、环氧甲酮四肽蛋白酶体抑制剂)；
j)HSP90抑制剂(例如但不限于AT-13387、KOS-953、KOS-1022、CNF-1010、 CNF-2024、SNX5422、STA-9090、NVP-HSP990、NVP-AUY922、PU-H17和XL-888)
k)选择性COX-2抑制剂(例如塞来昔布)，或非选择性NSAIDs(例如双氯芬酸、 氟联苯丙酸、异丁苯丙酸、酮基布洛芬或萘普生)。
另一方面，通式(I)的化合物可与辐射疗法联用。再一方面，通式(I)的化合物可 与标准化疗组合(例如但不限于CMF(环磷酰胺、甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶)、CAF(环磷 酰胺、阿霉素和5-氟尿嘧啶)、AC(阿霉素和环磷酰胺)、FEC(5-氟尿嘧啶、表柔比星 和环磷酰胺)、ACT或ATC(阿霉素、环磷酰胺和紫杉醇)或CMFP(环磷酰胺、甲氨蝶 呤、5-氟尿嘧啶和强的松))联合施用。
可根据已知方法从药学上配制式(I)的化合物。可基于治疗要求选择药物组合物。该 组合物可通过混合来制备，并适于改进为口服施用，如此可以以片剂、胶囊、口服制剂、 粉剂、颗粒剂、丸剂、可注射或可输液的液体溶液、悬浮液或栓剂的形式来施用。
用于口服施用的片剂和胶囊剂通常以单位剂量形式呈现，包括常规的赋形剂，例如粘 合剂、填料(包括纤维素、甘露醇、乳糖)、稀释剂、片剂、润滑剂(包括硬脂酸镁)、 洗涤剂、崩解剂(例如聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠)、着色剂、 调味剂和润湿剂(例如十二醇硫酸钠)。
口服固体组合物可通过混合、填充或制锭的常规方法来制备。混合操作可重复，以将 主要活性成分在包括大量填料的组合物中分布。该操作是常规的。
口服液体制剂可以为例如水的或油性的悬浮液、溶液、乳液、糖浆剂或酏剂的形式， 或者可以作为用于在使用前用水或者合适的载剂冲调的干燥产品呈现。该液体制剂可包括 常规的添加剂，例如悬浮剂，例如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、 羧甲基纤维素、硬脂酸铝胶或氢化的可食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、山梨醇酐单油酸 或阿拉伯树胶；不含水载体(其可包括可使用油)，例如杏仁油、分馏的椰子油、油性酯 (例如甘油、丙二醇或乙基乙醇的酯)；防腐剂，例如对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯 或山梨酸，如需要，常规的调味剂或着色剂。口服制剂还包括常规的缓慢释放制剂，例如 肠道包裹的片剂或颗粒剂。
通过吸入施用的药物制剂可从吹入器或喷雾器加压包释放。
为了肠胃外施用，可以制备流体单位制剂，其包含所述化合物和无菌载剂。所述化合 物可以悬浮或溶解，这取决于载剂和浓度。肠胃外溶液通常通过将化合物溶解在载剂中、 通过过滤来除菌、填入适宜的小瓶并密封来制备。有利的是，例如局部麻醉剂、防腐剂和 缓冲剂的辅药也可以溶解在载剂中。为了增加稳定性，填入小瓶后冷冻组合物，在真空下 除水。肠胃外悬浮液以实质上相同的方式制备，不同之处仅在于所述化合物悬浮于载剂而 非被溶解，并且在悬浮于无菌载剂之前通过暴露于环氧乙烷来除菌。有利的是，可在组合 物中包括表面活性剂或湿润剂，以促进本发明的化合物的均匀分布。
对于口腔或者舌下施用，组合物可为片剂、喉糖、糖果锭剂或胶体。
可以从药学上制备化合物作为栓剂或停留灌肠，其例如包括常规的栓剂基础物，如可 可缓冲液、聚乙二醇或其他甘油酯，用于直肠施用。
施用本发明的化合物的其他方式涉及局部处理。局部制剂可包括例如软膏剂、乳膏、 洗剂、凝胶剂、溶液、糊剂和/或可包括脂质体、微胶粒或微球。软膏剂的例子包括油质软 膏剂，如植物油、动物油脂、半固体烃、可乳化的软膏剂，例如羟基硬脂酸硫酸酯、无水 羊毛脂、亲水石油、十六醇、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、包括多种分子量的聚乙二醇的可 溶于水的软膏剂。对于制剂专家已知的乳膏是粘性液体，或者半固体乳液，包括油相、乳 化剂和水相。油相通常包括凡士林和醇(例如十六醇和十八醇)。适用于对于眼睛局部施 用的制剂还包括滴眼液，其中，活性成分溶解或悬浮于合适的载体中，尤其是活性成分的 含水溶剂。
施用本发明的化合物的另一种方法涉及透皮给药。局部透皮制剂包括常规地含水和不 含水载体，例如乳膏、油、洗剂、糊剂或可以为膜或药用创可贴形式。
关于制剂的参考文献是Remington所著的书籍(“Remington:TheScienceandPracticeof Pharmacy”,LippincottWilliams&Wilkins,2000)。
本发明的化合物可以作为单独治疗来单独使用，或者与用于治疗上述病症的其他治疗 试剂联合使用。组合可作为治疗的单个组分的分开的组合物(同时，顺序)来施用，或者 作为包括两种制剂的单个药剂来施用。当本发明的化合物与气体活性成分联用时，活性成 分可以分开制成上述形式之一的单个成分制剂，然后作为联合的制剂提供，其同时或者在 不同时间提供，或者可能一起制成两个或多种成分制剂。
通式(I)的化合物可以例如0.001-1000mg/kg体重每天的全天每天剂量来对病人施用。 药剂单位组合物可包括其约数剂量，以补全每天剂量。对特定病人确定最佳剂量对本领域 技术人员来说是已知的。
作为常规做法，通常组合物伴有书写或打印的所讨论的治疗用法的说明。
下面列出实施例和生物学数据以进一步阐释本发明。
1.化学合成
除非另有说明，市售试剂和溶剂(HPLC级别)无需进一步纯化直接使用。特别的， 下列缩略语在试验方法的描述中使用：
除非另有说明，所有温度均以℃(摄氏度)或K(开尔文)表示。
1H-NMR谱用Varian500MHz仪器获得。化学位移以每百万分之一份(ppm，δ单位) 表示。耦合常数以赫兹(Hz)表示，裂分模式以s(单峰)、bs(宽单峰)、d(双峰)、 t(三峰)、q(四峰)、quint(五峰)、m(多峰)描述。
LC-MS分析用与SQD单四极(Waters)连接的WatersAcquityUPLC或WatersAcquity UPLCH-Class进行，其使用AcquityUPLCBEHC18(50x2.1mm,1.7μm)或Acquity UPLCHSST3(50x2.1mm,1.8μm)柱。A相由Milli-Q水/CH3CN95/5+0.07％甲酸或Milli-Q 水+0.07％甲酸构成；B相由CH3CN+0.05％甲酸；流速：0.6mL/min；UV检测(DIODE阵 列)从210至400nm；ESI+检测在100-2000m/z范围。如果没有另外说明，则假设产物是 100％纯的来计算产率。
中间体1：2-二乙氧基磷酰基-3-(2-萘基)丙酸乙酯
在40min中将13g(58mmol)磷酰基乙酸三乙酯(SigmaAldrich,CatNo.T61301)缓慢 逐滴加入至2.6g(64mmol)氢化钠的100ml干燥DME的冰冷悬浮液中。在25℃搅拌2 小时后，加入14g(64mmol)2-氯甲基萘(SigmaAldrich,CatNo.726419)，在60℃搅拌混 合物2小时。然后将反应混合物倒入200ml的冰水中，用EtOAc萃取，用水和盐水洗涤合 并的有机相，用Na2SO4干燥。然后，蒸发溶剂，用柱层析法纯化产物(洗脱液：己烷/EtOAc 1:1)，以得到无色油状的10.5g(50％)的2-二乙氧基磷酰基-3-(2-萘基)丙酸乙酯。1HNMR (CDCl3)(ppm):7.85–7.73(m,3H),7.69–7.64(m,1H),7.51–7.41(m,2H),7.37–7.30(m,1 H),4.29–4.17(m,4H),4.16–4.01(m,2H),3.50–3.31(m,3H),1.42–1.33(m,6H),1.12(t, J＝7.3Hz,3H).MS(ESI):m/z:365[M+H]+
中间体2：2-二乙氧基磷酰基-4-苯基-丁酸乙酯
将2.00g(8.92mmol)磷酰基乙酸三乙酯缓慢逐滴加入至0.43g(11mmol)氢化钠的 10ml干燥DME的冷却的悬浮液中。在25℃搅拌1小时后，加入1.25g(6.75mmol)2-溴 代乙基苯，在60℃搅拌混合物1.5小时。然后将反应混合物倒入20ml的冰水中，用EtOAc 萃取，用水和盐水洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发成油，将其用快速柱 层析法纯化(己烷/EtOAc1:1)，以得到无色油状的1.096g(37％)的2-二乙氧基磷酰基-4- 苯基-丁酸乙酯。1HNMR(CDCl3)(ppm):7.32–7.25(m,2H),7.23–7.15(m,3H),4.28–4.17 (m,2H),4.17–4.05(m,4H),3.02–2.90(m,1H),2.79–2.67(m,1H),2.65–2.51(m,1H), 2.41–2.26(m,1H),2.21–2.06(m,1H),1.37–1.23(m,9H).MS(ESI):m/z:351[M+H]+
2-膦酰丙酸三乙脂(SigmaAldrich,CatNo.174653)、2-膦酰丁酸三乙脂(SigmaAldrich, CatNo.417467)和2-膦酰戊酸三乙脂(AlfaAesar,Cat.No.30413)可商购获得。2-(二乙氧基 磷酰基)-3-甲基丁酸乙酯的制备描述于J.Org.Chem.1970,37,4396-4399，2-(二乙氧基磷酰 基)-3-苯基丙酸乙酯的制备描述于Eur.J.Org.Chem.2011,31,6314-6319，磷酰基苯基乙酸 三乙酯的制备描述于J.Org.Chem.1993,58,7009-7015。
中间体3：N-(5-氨基甲酰基-2-吗啉代-苯基)氨基甲酸苄酯
将0.26g(2.40mmol)Na2CO3和0.21ml(1.44mmol)氯甲酸苄酯加入0.213g(0.96mmol) 3-氨基-4-吗啉代-苯甲酰胺(Fluorochem,CatNo.57762)的3mlTHF/水(1:1)的溶液中。在室 温搅拌混合物2.5h，然后浓缩。加入水，过滤掉固体，用水洗涤，干燥，以得到0.303g浅 粉色固体的N-(5-氨基甲酰基-2-吗啉代-苯基)氨基甲酸苄酯。1HNMR(DMSO-d6) (ppm):8.55(s,1H),8.11(bs,1H),7.85(bs,1H),7.61(dd,J＝2.4,8.3Hz,1H),7.45–7.28(m,5 H),7.23(bs,1H),7.14(d,J＝8.3Hz,1H),5.17(s,2H),3.77–3.67(m,4H),2.89–2.76(m,4H). MS(ESI):m/z:356[M+H]+
中间体4：N-(5-氨基甲酰基-2-吗啉代-苯基)氨基甲酸苄酯
3-硝基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸叔丁酯
在90℃将0.3g4-氯-3-硝基-苯甲酸叔丁酯(1.16mmol，US5304644)、0.321gK2CO3(2.32mmol)和0.64mLN-甲基哌嗪(5.8mmol)的悬浮液搅拌过夜。反应混合物用50ml的 H2O淬灭，用EtOAc萃取。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，并用柱 层析法纯化(洗脱液：CH3Cl/MeOH40:1，v:v)，以得到0.25g的3-硝基-4-(4-甲基哌嗪-1- 基)-苯甲酸叔丁基酯(68％)。MS(ESI):m/z:322[M+H]+
3-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸叔丁酯
在帕尔振荡器中将20mL干燥MeOH中的0.25g3-硝基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸叔 丁基酯(0.78mmol)氢化5h(Pd/C(1/20mmol)压力3.44bar)。然后，过滤溶液，得到 的残余物用硅胶柱层析(洗脱液：CH3Cl/MeOH20:1，v:v)纯化。MS(ESI):m/z:292[M+H]+
3-(苄氧羰基氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸叔丁酯
将0.155mL(1.11mmol)TEA加入至0.162g(0.55mmol)3-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)- 苯甲酸叔丁酯和2.5mL冷却至0℃的干燥THF中的混合物中。然后，将0.48ml(3.32mmol) 氯甲酸苄酯和0.465mLTEA(3.33mmol)以四份的形式加入，让混合物达到室温。然后去 除溶剂，粗混合物在水和EtOAc之间分配，有机相用Na2SO4干燥，过滤，浓缩并用快速 柱层析法纯化(洗脱液CH2Cl2/MeOH，97:3)，得到了无色油状的0.096g3-(苄氧羰基氨 基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸叔丁酯。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):8.44–8.33(m,1H), 8.13(bs,1H),7.64–7.57(m,1H),7.44–7.28(m,5H),7.19–7.12(m,1H),5.17(s,2H), 2.91–2.82(m,4H),2.48–2.41(m,4H),2.21(s,3H),1.51(s,9H).MS(ESI):m/z:426[M+H]+
3-(苄氧羰基氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸
将0.078mL(1.058mmol)TFA加入至0.90g(0.211mmol)3-(苄氧羰基氨基)-4-(4-甲 基哌嗪-1-基)-苯甲酸叔丁酯的2mL干燥CH2Cl2溶液中，在室温下搅拌得到的混合物。4.5h 后，加入0.078mlTFA，继续搅拌直至完全转化(40h)。去除溶剂，在Et2O中粉碎白色 固体，洗涤，以得到77mg的3-(苄氧羰基氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸(98％)。1HNMR (DMSO-d6)(ppm):12.88(bs,1H),9.56(bs,1H),8.68(s,1H),8.35(s,1H),7.72–7.59(m,1 H),7.51–7.29(m,4H),7.27–7.06(m,1H),5.20(s,2H),3.80–3.37(m,2H),3.34–3.16(m,4 H),3.04–2.91(m,2H),2.85(s,3H).MS(ESI):m/z:370[M+H]+
N-[5-氨基甲酰基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基甲酸苄酯
将0.078g(0.21mmol)3-(苄氧羰基氨基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-苯甲酸在1ml干燥CH2Cl2中的混合物用0.019ml(0.26mmol)亚硫酰氯和2滴干燥DMF处理。然后，在回流下搅拌 混合物1.5h，然后将混合物冷却至室温，倒入1mLNH3(在水中28-30％)。1h后，得到 的混合物在CH2Cl2和10％Na2CO3溶液之间分配，用CH2Cl2萃取水相，用Na2SO4干燥 有机层，浓缩，以得到米黄色固体的N-[5-氨基甲酰基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]氨基甲酸 苄酯(74％)。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):8.36(s,1H),8.11(s,1H),7.85(bs,1H),7.59(dd, J＝2.0,8.3Hz,1H),7.45–7.30(m,5H),7.22(bs,1H),7.13(d,J＝8.3Hz,1H),5.17(s,2H), 2.87–2.81(m,4H),2.45(bs,4H),2.21(s,3H).MS(ESI):m/z:369[M+H]+
中间体5：3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺
将0.56g(2.7mmol)3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酸(WO2003/045913)在15ml干燥 CH2Cl2中的悬浮液用0.246mL(3.38mmol)亚硫酰氯和2滴干燥DMF处理。然后，在回 流下搅拌2h，然后将混合物冷却至室温，倒入4mLNH3(在水中28-30％)。1h后，过滤 得到的混合物以得到白色固体，将其用水洗涤。用CH2Cl2萃取水相，用Na2SO4干燥合并 的有机层并过滤，以得到米黄色固体的0.549g3-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺(98％)。1H NMR(DMSO-d6)(ppm):8.01(bs,1H),7.94–7.88(m,1H),7.84–7.78(m,1H),7.61(d, J＝7.8Hz,1H),7.52–7.34(m,2H),4.49–4.39(m,2H),4.14–3.98(m,2H).MS(ESI):m/z: 207[M+H]+
中间体6：4-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺
从4-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酸(Enamine,CatNo.EN300-39599)开始，根据中间体5 的方法来制备中间体6。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):88.01–7.79(m,3H),7.67–7.53(m,2 H),7.28(bs,1H),4.44(t,J＝7.6Hz,2H),4.08(t,J＝7.6Hz,2H).MS(ESI):m/z:207[M+H]+
苯甲酰胺(SigmaAldrich,CatNo.135828)、3-氯代苯甲酰胺(SigmaAldrich,CatNo. CDS003328)、2-苯基乙酰胺(Apollo,CatNo.OR0700)、3-苯基丙酰胺(TCI,CatNo.P1845)、 萘-1-甲酰胺(ABCR,CatNo.AB150028-0005.00-GRM)、萘-2-甲酰胺(ABCR,Cat No.AB178532-0010.00-G)、2-(1-萘基)乙酰胺(Alfa-Aesar,CatNo.B23986-22)、2-(2-萘 基)乙酰胺(Enamine,EN300-68829)、4-苯基苯甲酰胺(ABCR,Cat No.AB110526-0005.00-GRM)、苯磺酰胺(SigmaAldrich,CatNo.108146)、吡啶-4-甲酰 胺(SigmaAldrich,CatNo.I17451)可从市场上购得。
4-(4-吡啶基)苯甲酰胺和4-(3-呋喃基)苯甲酰胺在J.Comb.Chem.2009,11,576–586中 被描述，3-苯基苯甲酰胺在TetrahedronLett.1997,38,1197-1200中被描述，4-硝基苯甲酰 胺在WO1995/05363中被描述，4-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺的制备在WO2009055077中 被描述，4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺的合成在US2008146542中被描述，4-吗啉代苯甲酰 胺的制备在Eur.J.Med.Chem.2010,45,3709-3718中被描述，N-(4-氨基甲酰基氨基)氨基甲 酸苄酯和N-(3-氨基甲酰基氨基)氨基甲酸苄酯的制备在Biorg.Med.Chem.Lett.2007,17, 4670-4677中被描述。
实施例A-1(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙胺氯化氢
(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙基甲酸乙酯
在氮气气氛中、在室温下，将2.5mL(2.5mol/L)丁基锂加入至1.5g(5.4mmol)2-二 乙氧基磷酰基丁酸乙酯(SigmaAldrich)的5ml干燥DME溶液中。5分钟后，逐滴加入0.50g (4.2mmol)苯乙烯环氧化物(SigmaAldrich)。在室温下搅拌混合物20min，然后在MW辐 射下在130℃加热1h。加入NH4Cl水溶液，用EtOAc萃取产物。用MgSO4干燥合并的有 机层，并浓缩。用柱层析法纯化干燥的残余物(洗脱液：EtOAc/己烷0:100至10:100)， 以得到无色油状的(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙基甲酸乙酯(570mg，63％)。1HNMR(CDCl3) (ppm):7.35–7.16(m,5H),4.32–4.05(m,2H),2.89–2.75(m,1H),1.73–1.58(m,2H),1.30 (t,J＝7.1Hz,3H),1.20–1.14(m,1H),1.06–0.79(m,4H).
(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙基甲酸
将20mLEtOH/水加入至570mg(2.61mmol)(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙甲酸乙酯的 4mlTHF中。将溶液冷却至0℃，然后加入0.25g(10mmol)的LiOH，在回流下搅拌混合 物4h。浓缩溶液，用2MHCl淬灭，过滤形成的沉淀物，用水洗涤，并干燥，得到了0.33g (66.44％)的(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙基甲酸。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):12.25(s,1 H),7.34–7.26(m,2H),7.25–7.17(m,3H),2.74–2.65(m,1H),1.50–1.35(m,2H),1.34–1.25 (m,1H),0.98–0.85(m,1H),0.76(t,J＝1.0Hz,3H).MS(ESI):m/z:189[M-H]-.
N-[(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将0.43g(1.6mmol)叠氮磷酸二苯酯(SigmaAldrich)和0.19g(1.8mmol)TEA加入到 0.27g(1.4mmol)(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙甲酸的15mL干燥叔丁醇溶液中，在90℃ 搅拌得到的溶液16h。然后，浓缩混合物，残余物在10％Na2CO3水溶液和Et2O之间分配。 干燥合并的有机层(Na2SO4)，过滤，浓缩，然后用柱层析纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷， 1:100至20:100)，以得到N-[(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR (CDCl3)(ppm):7.40–7.16(m,5H),5.02(s,1H),2.57-2.31(m,1H),1.64–1.38(m,10H), 1.19–1.09(m,1H),1.05–0.98(m,1H),0.98–0.77(m,4H).MS(ESI):m/z:162[M-100]+
(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙胺氯化氢
将40mg(0.1530mmol)的N-[(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯的Et2O 溶液冷却至0℃。然后，加入4MHCl二氧六环溶液，并在室温下搅拌20h。然后，蒸发溶 剂，用Et2O粉碎残余物两次，得到白色固体的21mg(69％)(1S,2R)-1-乙基-2-苯基-环丙 胺氯化氢。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):8.35(s,3H),7.36–7.29(m,2H),7.27–7.18(m,3 H),2.58–2.50(m,1H),1.43–1.28(m,3H),1.26–1.13(m,1H),0.79(t,J＝7.6Hz,3H).MS (ESI):m/z:162[M+H]+
根据对于实施例A-1所述的方法，从合适的氧化苯乙烯和磷酰基乙酸酯开始合成了下 列化合物(表1)。可替代上述用HCl二氧六环溶液来水解BOC保护基团的是，使用4％TFA 的CH2Cl2溶液室温过夜以制备作为三氟乙酸盐的所需要的胺。
表1
实施例A-30：反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺氯化氢
反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙烷甲酰乙酯
在氮气气氛中、在室温下将2.4mL(2.5mol/L)丁基锂加入至1.5g(5.4mmol)2-二乙 氧基磷酰基丁酸乙酯(SigmaAldrich)的5ml干燥DME溶液中。5分钟后，逐滴加入1.0g (5.0mmol)2-(4-溴代苯基)环氧乙烷(SigmaAldrich)。在室温下搅拌混合物20min，然后 在MW辐射下在135℃下加热1h。加入NH4Cl水溶液，用CH2Cl2萃取产物。用MgSO4干燥合并的有机层，并浓缩。用柱层析法纯化干燥的残余物(洗脱液：EtOAc/己烷0:100 至10:100)，以得到无色油状的反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙烷甲酰乙酯(910mg，61％)。 1HNMR(CDCl3)(ppm):7.44–7.40(m,2H)7.10–7.06(m,2H),4.29–4.11(m,2H), 2.80–2.69(m,1H),1.70–1.63(m,1H),1.62–1.51(m,1H),1.30(t,J＝7.1Hz,3H),1.14–1.10 (m,1H)0.98–0.82(m,4H).
反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙烷羧酸
将20mLEtOH/水(1:1)加入至910mg(3.06mmol)反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙 烷甲酰乙酯中。将溶液冷却至0℃，然后加入0.29g(12.2mmol)LiOH，在回流下搅拌混 合物6h。然后，浓缩溶液，用2MHCl淬灭，过滤形成的沉淀物，用水洗涤，并干燥，得 到了0.77g(93％)的反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙烷羧酸。1HNMR(DMSO-d6) (ppm):7.48–7.41(m,2H),7.12–7.08(m,2H)2.93–2.79(m,1H),1.78-1.74(m,1H),1.69–1.54 (m,1H),1.26–1.16(m,1H),0.96–0.79(m,4H).MS(ESI):m/z:268[M-H]-.
N-[反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将0.87g(3.1mmol)叠氮磷酸二苯酯和0.38g(3.7mmol)TEA加入到0.77g(2.8mmol) 反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙烷羧酸的20mL干燥叔丁醇溶液中，在90℃下搅拌得到 的溶液20h。然后，浓缩混合物，残余物在10％Na2CO3水溶液和Et2O之间分配。干燥合 并的有机层(Na2SO4)，过滤，浓缩，然后用柱层析纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷，1:100 至20:100)，以得到0.47g(48％)的N-[反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙基]氨基甲酸叔 丁酯。1HNMR(CDCl3)(ppm):7.45–7.20(m,4H),5.01(br.s.,1H),2.40(t,J＝8.1Hz,1H), 1.70–1.22(m,10H),1.14–1.08(m,1H)0.98–0.93(m,1H)0.92–0.72(m,4H).MS(ESI):m/z: 240[M-100]+
反式N-[1-乙基-2-[4-(萘-2-羰基氨基)-苯基]-环丙基]-氨基甲酸叔丁酯
将CuI(2mg，0.01mmol)、N-[反式-1-乙基-2-(4-溴代苯基)-环丙基]氨基甲酸叔丁酯 (80mg，0.23mmol)、萘-2-甲酰胺(44mg，0.26mmol)和K2CO3(65mg，0.47mmol)放 在小瓶中，通入氮气。用注射器加入二氧六环(1mL)和N,N’-二甲基乙烷-1,2-二胺(2mg， 0.02mmol)，在110℃下加热小瓶20h。将得到的悬浮液冷却至室温，然后通过硅胶垫过 滤，通过柱层析纯化残余物(CH2Cl2比CH2Cl2/EtOAc95/5)，得到白色固体的80mg(79％) 反式N-[1-乙基-2-[4-(萘-2-羰基氨基)-苯基]-环丙基]-氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(CDCl3) (ppm):8.39(s,1H),8.04–7.29(m,11H),5.03(bs,1H),2.45(t,J＝7.8Hz,1H),1.61–1.43(m, 10H),1.19–1.09(m,1H),1.05–0.97(m,1H),0.97–0.77(m,4H).MS(ESI):m/z:431[M+H]+.
反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺氯化氢
0℃下将0.31ml的2M盐酸的Et2O溶液(0.6mmol)加入到N-[1-乙基-2-[4-(萘-2-羰基 氨基)-苯基]-环丙基]-氨基甲酸叔丁酯(27mg，0.06mmol)的1mLEt2O溶液中。允许在室 温下搅拌混合物20小时，然后过滤形成的固体，用Et2O洗涤，并干燥，以得到黄色固体 的17mg(74％)的反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]萘-2-甲酰胺氯化氢。1HNMR (DMSO-d6)(ppm):10.44(s,1H),8.57(s,1H),8.40(bs,3H),8.14–7.25(m,10H), 2.58–2.51(m,1H),1.45–1.20(m,4H),0.83(t,J＝7.3Hz,3H).MS(ESI):m/z:331[M+H]+.
根据对实施例A-30描述的乌尔曼型反应步骤，从合适的胺或酰胺以及合适的溴代苯 基中间体开始合成了下列化合物(表2)。根据如下修改的条件的乌尔曼型反应步骤，从 合适的溴代苯基中间产物和苄基醇开始，类似地合成苄氧基化合物A-41和A-43：所用的 Cu配体为8-羟基-喹啉，而非DMEDA，碱为K3PO4，而非K2CO3。苄基醇是反应物同时 也是反应溶剂。
表2
实施例A-47：N-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺氯化氢
N-[反式-2-(4-氨基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将干燥DMA(0.500mL)中的CuI(55mg，0.29mmol)、N-[反式-1-乙基-2-(4-溴代苯 基)-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.15mmol，实施例30，第三步)、2-氨基乙醇(0.005mL， 0.2mmol)和NaN3(10mg，0.147mol)的混合物在氮气气氛、在95℃下搅拌过夜。加热 反应混合物20h后，用EtOAc(15mL)稀释反应混合物，然后通过硅藻土垫过滤。在减压 下浓缩滤液，通过柱层析法纯化得到的残余物(洗脱液：正己烷/EtOAc95:05)，以得到 棕色油状的16mg(40％)的N-[反式-2-(4-氨基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。1H NMR(CDCl3)(ppm):7.22–6.94(m,2H),6.74–6.55(m,2H),5.00(s,1H),2.99(bs,2H), 2.44–2.22(m,1H),1.77–1.31(m,10H),1.15–1.01(m,1H),0.98–0.76(m,5H).MS(ESI): m/z:277[M+H]+.
N-[反式-2-(4-苯甲酰氨基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将干燥THF(1.500mL)中的N-[反式-2-(4-氨基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯 (25mg，0.090mmol)的溶液在氮气气氛中冷却至0℃。然后加入TEA(0.015mL，0.11mmol)， 5分钟后一次性加入苯甲酰氯(0.012mL，0.099mmol)。30分钟后，浓缩反应混合物，通 过柱层析法纯化得到的残余物(洗脱液：正己烷/EtOAc80:20)，以得到白色固体的N-[反 式-2-(4-苯甲酰氨基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(CDCl3) (ppm):7.93–7.86(m,2H),7.84(s,1H),7.67–7.53(m,3H),7.53–7.43(m,2H),7.40–7.30(m, 2H),5.01(s,1H),2.49–2.34(m,1H),1.67–1.41(m,10H),1.18–1.06(m,1H),1.03–0.96(m, 1H),0.96–0.81(m,4H).MS(ESI):m/z:381[M+H]+.
反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺氯化氢
将N-[反式-2-(4-苯甲酰氨基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(8mg，0.02mmol) 溶解于Et2O(1.0mL)中。将溶液冷却至0℃，然后加入0.053mL的Et2O中的1.25MHCl 溶液(0.10mmol)。在室温下搅拌混合物4h，然后蒸发溶剂，用甲醇和Et2O对残余物进 行结晶，获得黄色固体的4mg(60％)反式-N-[4-[2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]苯甲酰胺氯 化氢。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):10.26(s,1H),8.33(s,3H),8.02–7.85(m,2H), 7.79–7.68(m,2H),7.65–7.44(m,3H),7.34–7.08(m,2H),2.56–2.46(m,1H),1.49–1.11(m, 4H),0.81(t,J＝7.3Hz,3H).MS(ESI):m/z:281[M+H]+.
实施例A-48：反式-4-(2-氨基-2-乙基-环丙基)苯胺二氯化氢
如实施例47所述获得的N-[反式-2-(4-氨基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯 (10mg，0.028mmol)被溶解于Et2O(0.5mL)中。将溶液冷却至0℃，加入1.39mL的甲 醇(0.174mmol)中的1.25MHCl溶液。在室温下搅拌反应48h。蒸发溶剂，用Et2O粉碎 残余物，得到黄色固体的6mg(83％)反式-4-(2-氨基-2-乙基-环丙基)苯胺二氯化氢。1HNMR (DMSO-d6)(ppm):10.13–8.78(m,3H),8.50(s,3H),7.43–6.92(m,4H),2.62–2.45(m,1H), 1.54–1.04(m,4H),0.79(t,J＝1.0Hz,3H).MS(ESI):m/z:177[M+H]+.
实施例A-49：反式-2-(3-叠氮基苯基)-1-乙基-环丙胺氯化氢
N-[2-(3-叠氮基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将120mg(0.3526mmol)N-[(1S,2R)-2-(3-溴代苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯、 0.010g(0.053mmol)CuI、10mg(0.053mmol)(2R)-2-[(1S)-1,2-二羟基乙基]-4-羟基-5-氧代 -2H-呋喃-3-异丙醇钠、2ml乙醇中的12μl(0.078mmol)(1R,2R)-N,N’-二甲基氯代己烷-1,2- 二胺和25mg(0.39mmol)叠氮化钠放在小瓶中，通入氮气。在80℃下加热小瓶1h。将得 到的悬浮液冷却至室温，并浓缩。用Et2O粉碎残余物，然后通过柱层析纯化(洗脱液： EtOAc/己烷，5:100至30:100)，以得到80mg(75％)反式-2-(3-叠氮基苯基)-1-乙基-环丙 胺。1HNMR(CDCl3)(ppm):0.76–0.92(m,4H)0.93–1.05(m,1H)1.08–1.21(m,1H) 1.39–1.67(m,10H)2.34–2.52(m,1H)4.90–5.08(m,1H)6.82–7.33(m,4H).
反式-2-(3-叠氮基苯基)-1-乙基-环丙胺氯化氢
按照实施例48所述的步骤将反式N-[2-(3-叠氮基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯 水解，得到白色固体形式的反式-2-(3-叠氮基苯基)-1-乙基-环丙胺氯化氢。1HNMR (DMSO-d6)(ppm):8.48–8.15(m,3H),7.37(t,J＝7.83Hz,1H),7.13–6.91(m,3H), 2.58–2.42(m,1H),1.49–1.29(m,3H),1.27–1.11(m,1H),0.81(t,J＝7.34Hz,3H).MS(ESI): m/z:203[M+H]+.
实施例B-11-氨基-(反式)-2-苯基-环丙基]甲醇
1-硝基-2-苯基-环丙烷甲酸乙酯
将苯乙烯(4.32mL，37.6mmol)加入至含有乙酸铑(20mg，0.04mmol)和硝基乙酸 乙酯(1.0g，7.5mmol)的烧瓶中。然后一次加入碘代苯二乙酯(2.7g，8.3mmol)，允许 混合物敞空搅拌2h。将溶剂、过量的苯乙烯和碘代苯在减压下去除，得到棕色油状物，无 需任何进一步纯化即将其用于后续步骤。
1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸乙酯
将75.131mL的1MHCl(75.131mmol)加入粗制1-硝基-2-苯基-环丙烷甲酸乙酯的 100mLi-PrOH溶液中。然后以小份加入9.829g(150.26mmol)锌粉，15min加完，在室 温下允许溶液搅拌3h。用饱和NaHCO3淬灭悬浮液，搅拌15min，然后通过硅藻土垫过滤， 用EtOAc清洗。用CH2Cl2萃取水相，用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤，并在减压下蒸 发。由顺反异构体构成的粗制混合物无需进一步纯化即用于后续步骤。
1-(叔丁氧基羰基氨基)-2-苯基-环丙烷甲酸乙酯
将粗制的1-氨基-2-苯基环丙烷甲酸乙酯和0.971g(7.51mmol)DIPEA加入到1.640g (7.513mmol)叔丁氧羰基-叔丁基甲酸酯的20mLCH2Cl2溶液中。在室温下搅拌混合物20h。 加入水，用CH2Cl2萃取产物。用Na2SO4干燥合并的有机相，并蒸发。用柱层析法纯化粗 制的混合物(己烷/EtOAc9:1)。得到了无色油状的400mg的反式异构体和黄色固体形式 的180mg的顺式异构体。顺式类似物：1HNMR(CDCl3)(ppm):7.40–7.11(m,5H),4.59 (bs,1H),4.32–4.10(m,2H),2.94(t,J＝8.8Hz,1H),2.12(bs,1H),1.75(d,J＝6.8Hz,1H), 1.47–1.08(m,12H).MS(ESI):m/z:206[M-100+H]+.反式类似物：1HNMR(DMSO-d6) (ppm):＝7.79(s,1H),7.36–7.09(m,5H),3.81–3.55(m,2H),2.72(t,J＝8.8Hz,1H), 2.08–1.92(m,1H),1.47–1.20(m,10H),0.90–0.65(m,3H).MS(ESI):m/z:206[M-100+H]+.
N-[1-(羟基甲基)-(反式)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
在0℃下将0.100g(0.327mmol)1-(叔丁氧羰基氨基)-2-苯基-环丙烷甲酸乙酯溶解于 1mLTHF，逐滴加入到0.017g(0.46mmol)LiAlH4的2mLTHF悬浮液中。使得反应混合 物达到室温，搅拌6h。将悬浮物冷却至0℃，用饱和的硫酸氢钠淬灭。用EtOAc稀释悬浮 液，用硅藻土垫过滤。干燥溶液，浓缩，通过柱层析法纯化粗制的混合物(己烷/EtOAc从 8:2至1:1)，以得到无色油状的38mg(44％)的N-[1-(羟基甲基)-(反式)-2-苯基-环丙基] 氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(CDCl3)(ppm):7.44–7.15(m,5H),5.28(bs,1H),3.54–3.28(m, 2H),2.53(dd,J＝7.6,9.0Hz,1H),1.62–1.42(m,9H),1.35(t,J＝6.4Hz,1H),1.31–1.23(m,1 H).MS(ESI):m/z:286[M+Na]+.
[1-氨基-(反式)-2-苯基-环丙基]甲醇
将0.5mL二氧六环中的4MHCl加入到0.03g(0.1mmol)N-[1-(羟基甲基)-(反式)-2-苯 基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯的0.5mL二氧六环溶液中。在室温下搅拌反应混合物4h，然后 在真空下蒸发溶剂，用Et2O粉碎产物。从MeOH/Et2O结晶得到白色固体形式的16mg(70％， 氯化氢)的[1-氨基-(反式)-2-苯基-环丙基]甲醇。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):8.41(bs,3H), 7.39–7.16(m,5H),5.16(bs,1H),3.29(dd,J＝4.6,12.0Hz,1H),3.21–3.07(m,1H),2.57(t, J＝8.6Hz,1H),1.37(d,J＝7.3Hz,2H).MS(ESI):m/z:164[M+H]+.
实施例B-2[1-氨基-(顺式)-2-苯基-环丙基]甲醇
从1-(叔丁氧羰基氨基)-(顺式)-2-苯基-环丙烷甲酸乙酯开始类似地制备该化合物。1H NMR(DMSO-d6)(ppm):8.01(bs,3H),7.43–7.22(m,5H),5.44(t,J＝5.1Hz,1H),3.74(dd, J＝5.9,11.7Hz,1H),3.48(dd,J＝3.9,11.7Hz,1H),2.40(dd,J＝7.3,9.3Hz,1H),1.36(t,J＝6.8 Hz,1H),1.28(dd,J＝6.4,9.8Hz,1H).MS(ESI):m/z:164[M+H]+.
实施例C-1(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-环丙胺
将1.2mlCH2Cl2和0.05mL水中的0.030g(0.15mmol)(1R,2S)-1-乙基-2-苯基环丙胺氯 化氢和0.025g(0.18mmol)2-甲氧基苯甲醛(SigmaAldrich)的混合物在室温下剧烈搅拌10 分钟。然后，缓慢加入0.048g(0.23mmol)NaBH(OAc)3，允许反应再继续继续2h。用1ml 饱和的NaHCO3水溶液洗涤反应混合物，用CH2Cl2萃取。用Na2SO4干燥合并的有机层， 过滤，并蒸发。用柱层析法纯化粗制的混合物(洗脱液：CH2Cl2)，以得到白色油状的25mg (58％)(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-环丙胺。1HNMR(CDCl3)(ppm): 7.69-7.65(m,1H),7.40–7.30(m,1H),7.27–7.14(m,3H),7.04–6.88(m,4H),4.29–4.11(m,2 H),3.94(s,3H),3.01-2.97(m,1H),1.91-1.87(m,1H),1.63–1.53(m,1H),1.17–0.98(m,5H). MS(ESI):m/z:282[M+H]+.
实施例C-2(1R,2S)-1-乙基-N-[(2-甲氧基-1-萘基)甲基]-2-苯基-环丙胺
从(1R,2S)-1-乙基-2-苯基-环丙胺氯化氢和2-甲氧基萘-1-乙醛(SigmaAldrich)开始，与 实施例C-1类似地制备下列化合物。1HNMR(CDCl3)(ppm):8.13-8.09(m,1H),7.86–7.76 (m,2H),7.56-7.51(m,1H),7.38-7.34(m,1H),7.32–7.15(m,6H),4.44–4.28(m,2H),4.00 (s,3H),2.45(bs,1H),1.72–1.54(m,1H),1.25–1.07(m,2H),1.05–0.92(m,4H).MS (ESI):m/z:332[M+H]+.
实施例C-32-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮二氯化氢
N-[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将0.77g(2.8mmol)叠氮磷酸二苯酯和0.34g(3.3mmol)TEA加入0.45g(2.6mmol) (1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙烷甲酸的25mL干燥叔丁醇溶液中。将得到的溶液在90℃下搅 拌20h。然后将溶剂去除，残余物在10％Na2CO3水溶液和Et2O之间分配。用Na2SO4干燥 合并的有机层，浓缩，用柱层析法纯化(洗脱液：EtOAc/环己烷，1:100至20:100)，以 得到370mg(59％)的N-[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(CDCl3) (ppm):7.51–7.01(m,5H),5.02(s,1H),2.49–2.28(m,1H),1.74–1.36(m,9H),1.21– 1.15(m,1H),1.11–0.98(m,4H).
N-[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]-N-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁 酯
0℃下，将2mL无水DMF中的0.05g(0.20mmol)N-[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基] 氨基甲酸叔丁酯加入到0.012g(0.51mmol)NaH的3mL无水DMF悬浮液中。30分钟后， 加入0.047g(0.22mmol)2-氯-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮氯化氢(ChemBridgeCorp.)，在0℃ 下搅拌混合物1h。然后，在真空下浓缩溶液，通过柱层析法纯化残余物(洗脱液：CH2Cl2 和MeOH/NH3(99:0.1)95:5)，以得到无色油状的25mg(32％)N-[(1S,2R)-1-甲基-2-苯 基-环丙基]-N-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(DMSO-d6) (ppm):7.40–7.07(m,5H),4.09–4.01(m,2H),3.60–3.36(m,4H),2.47–2.38(m,1H), 2.37–2.26(m,4H),2.20(s,3H),1.50–1.34(m,9H),1.31–1.18(m,1H),1.09–0.83(m,4 H).MS(ESI):m/z:388[M+H]+.
2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮氯化氢
在0℃下将0.022g(0.057mmol)N-[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]-N-[2-(4-甲基哌嗪 -1-基)-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯悬浮于0.200mL干燥CH2Cl2，用1mL二氧六环中的4M HCl处理3h。蒸发溶剂，得到油，将其用干燥Et2O和CH2Cl2粉碎，以得到白色固体形式 的10mg(49％)的2-[[(1S,2R)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮氯化氢。 1HNMR(D2O)(ppm):7.31–7.24(m,2H),7.23–7.13(m,3H),4.49–4.37(m,1H),4.33– 4.13(m,2H),3.98–3.86(m,1H),3.56–3.39(m,3H),3.14–2.93(m,3H),2.82(s,3H), 2.69–2.56(m,1H),1.52–1.38(m,1H),1.32–1.22(m,1H),1.01(s,3H).MS(ESI):m/z: 288[M+H]+.
实施例C-42-[[(1S,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮
在实施例C-3的合成的最后一步期间形成约10％的顺式衍生物C-4。通过制备型HPLC 的纯化提供其三氟乙酸盐形式的2-[[(1S,2S)-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(4-甲基哌嗪-1- 基)乙酮。1HNMR(D2O)(ppm):7.57–7.17(m,5H),3.31(bs,8H),2.77(s,3H),2.52–2.41 (m,1H),1.62–1.53(m,1H),1.49(s,3H),1.27–1.06(m,1H).MS(ESI):m/z:288[M+H]+.
根据实施例C-3所述的方法，从合适的BOC保护的胺和合适的氯或溴-烷基衍生物来 合成下列化合物(表3)。根据实施例C-4所述的方法制备顺式化合物C-7。从其相应的 cis-Boc保护的中间产物(对于C-9是N-[顺式-1-乙基-2-苯基-环丙基]-N-甲基-氨基甲酸叔 丁酯，对于C-11是N-[顺式-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯)开始得到顺式化合物 C-9和C-11，其是根据对于实施例C-3的合成的第二步所述的条件(约10-20％相对于反式 类似物)通过用DMF和NaH处理反式-BOC中间体并通过柱层析法(洗脱液：EtOAc/己 烷，0:100至2:98)从其相应的反式类似物分离来形成的。
表3
根据实施例C-1所述的方法，从合适的胺和醛开始合成下列化合物(表4)：
表4
实施例D-1：顺式-1,2-二苯基环丙胺氯化氢
如ActaChem.Scand.,1966,1424-1426中所述制备顺式-1,2-二苯基环丙胺氯化氢。1H NMR(DMSO-d6)(ppm):＝8.57(s,3H),7.60–7.32(m,10H),2.68–2.61(m,1H),1.96– 1.90(m,1H),1.87–1.80(m,1H).MS(ESI):m/z:210[M+H]+.
实施例D-2：反式-1,2-二苯基环丙胺氯化氢
如ActaChem.Scand.,1966,1424-1426所述制备反式-1,2-二苯基环丙胺氯化氢。1H NMR(DMSO-d6)(ppm):＝8.94(s,3H),7.41–6.88(m,10H),2.93–2.82(m,1H),2.13– 2.06(m,1H),1.87–1.75(m,1H).MS(ESI):m/z:210[M+H]+.
根据实施例A-1所述的方法，从合适的苯乙烯氧化物和磷酰基乙酸酯来合成下列化合 物(表5)。通过制备型HPLC来纯化化合物A-62、A-70、A-81、A-84、A-88、A-89、 A-96、A-97、A-98、A-99、A-100、A-106、A-107、A-117。使用其相应的顺式-BOC-保护 的中间体N-[顺式-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯作为起始原料得到顺式化合物 A-63，其通过根据对于实施例C-3的合成的第二步所述的条件(约50％相对于反式类似物) 的处理，以及通过柱层析法(洗脱液：EtOAc/己烷，2:98至20:80)与反式类似物分离来 形成的。
表5
根据实施例A-30所描述的乌尔曼型反应步骤，从合适的胺或酰胺和合适的溴代苯基 中间体来合成下列化合物(表6)。根据如下修改的条件的乌尔曼型反应步骤，从合适的 溴代苯基中间体和苄基醇来类似地合成苄氧基化合物A-67：所用的Cu配体为8-羟基-喹啉， 而非DMEDA，碱为K3PO4，而非K2CO3。苄基醇是反应物同时也是反应溶剂。
表6
实施例A-119：4-[反式-2-氨基-2-(2-萘甲基)环丙基]苯胺2,2,2-三氟乙酸
从2-二乙氧基磷酰基-3-(2-萘基)丙酸乙酯开始，(中间体1)根据对实施例48所述来 制备该化合物，通过制备型HPCL来纯化。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):8.36–6.62(m,17 H),2.92(d,J＝15.2Hz,1H),2.56–2.51(m,2H),1.72–1.60(m,1H),MS(ESI):m/z: 289[M+H]+.
实施例A-120：N-[4-(反式-2-氨基-2-乙基-环丙基)苯基]-4-(羟乙基氨基)苯甲酰胺氯化 氢
根据对实施例30所述的乌尔曼型反应步骤，从4-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰胺和N-[反 式-2-(4-溴代苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。将H2O/EtOH(1:1)中的N-[反式-1- 乙基-[4-[[4-(2-氧代恶唑烷-3-基)苯甲酰]氨基]苯基]环丙基]氨基甲酸叔丁酯中间体在70℃ 下用LiOH处理3h。蒸发后，溶剂被蒸发，用H2O洗涤混合物并过滤，以得到N-[反式-1- 乙基-2-[4-[[4-(2-羟乙基氨基)苯甲酰]氨基]苯基]环丙基]氨基甲酸叔丁酯中间体，将其根据 对实施例30最后一步所述的步骤来用HCl水解，以得到N-[4-(反式-2-氨基-2-乙基-环丙基) 苯基]-4-(羟乙基氨基)苯甲酰胺氯化氢。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):9.78(s,1H),8.36(bs,3 H),7.83–7.59(m,4H),7.24–7.09(m,2H),6.70–6.55(m,2H),5.75(s,1H),3.58–3.54(m, 2H),3.16(t,J＝6.1Hz,2H),2.45–2.40(m,1H),1.44–1.17(m,4H),0.81(t,J＝7.6Hz,3H). MS(ESI):m/z:340[M+H]+.
实施例A-121：N-[3-[1-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸 苄酯
N-(3-乙炔基苯基)氨基甲酸苄酯
将1.810gNa2CO3(17.07mmol)和1.6g氯甲酸苄酯(9.4mmol，Sigma-Aldrich)加入 到1.00g3-乙炔基苯胺(8.54mmol，Sigma-Aldrich)的THF/水(1:1，v:v)溶液中。在室 温下2h之后，浓缩溶液，残余物在EtOAc和盐水之间分配。用盐水洗涤有机层并浓缩， 以得到2.100g油状的N-(3-乙炔基苯基)氨基甲酸苄酯(97.90％)。1HNMR(CDCl3) (ppm):7.58–7.48(m,1H),7.45–7.12(m,8H),6.65(s,1H),5.22(s,2H),3.07(s,1H).MS (ESI):m/z:252[M+H]+.
N-[反式-2-[4-[4-(3-苄氧基羰基氨基苯基)三唑-1-基]苯基]-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔 丁酯
将4ml螺丝杯瓶中充入25mgN-(3-乙炔基苯基)氨基甲酸苄酯(0.099mmol)、2mg 2-[(1,2-二羟乙基)-4-羟基-5-氧代-2H-呋喃基-3-醇钠(0.01mmol)、30mg反式N-[2-(4-叠氮 基苯基)-1-乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.099mmol，根据对实施例49第一步所述的方法 制备)，以及0.2mg硫酸铜(0.001mmol)。加入0.4mL叔丁醇：水(1:1，v:v)，向混合 物中通入氮气气泡约5min，在65℃下搅拌悬浮液3h。浓缩混合物，通过柱层析法(己烷 /EtOAc70:30)纯化，得到0.046gN-[反式-2-[4-[4-(3-苄氧基羰基氨基苯基)三唑-1-基]苯基]-1- 乙基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(84％)。1HNMR(CDCl3)(ppm):8.19(s,1H),7.97(s,1H), 7.76–6.63(m,13H),5.24(s,2H),5.06(s,1H),2.59–2.42(m,1H),1.90–1.39(m,10H), 1.24–1.16(m,1H),1.11–0.98(m,1H),0.96–0.74(m,4H).MS(ESI):m/z:554[M+H]+.
N-[3-[1-[4-[反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-1-乙基-环丙基]三唑-4-基]氨基甲酸叔丁 酯氯化氢
将0.035mgN-[反式-2-[4-[4-(3-苄氧基羰基氨基苯基)三唑-1-基]苯基]-1-乙基-环丙基]氨 基甲酸叔丁酯(0.063mmol)溶解于1.0mLEt2O中。在冰浴中冷却溶液，然后加入2MHCl (0.632mmol)的0.316mLEt2O溶液。在室温下过夜搅拌之后，浓缩反应混合物。加入Et2O， 过滤掉悬浮液。Et2O洗涤残余物2次，得到固体形式的22mgN-[3-[1-[4-[反式-2-氨基-2- 乙基-环丙基]苯基]三唑-4-基]苯基]氨基甲酸叔丁酯氯化氢(71％)。1HNMR(DMSO-d6) (ppm):9.93(s,1H),9.24(s,1H),8.51(s,3H),8.27–7.01(m,13H),5.18(s,2H),2.75–2.56 (m,1H),1.54–1.36(m,3H),1.34–1.22(m,1H),0.83(t,J＝7.3Hz,3H).MS(ESI):m/z:454 [M+H]+.
根据对实施例A-121所述的Click类型反应方法，从合适的叠氮化物和合适的炔烃中 间体开始来合成下列化合物(表7)。
表7
实施例A-127N-[4-[(1S,2R)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺氯化氢
根据为实施例A-30所描述的乌尔曼型反应步骤制备该化合物。1HNMR(DMSO-d6) (ppm):10.32(s,1H),8.36(bs,3H),8.09–8.00(m,2H),7.89–7.80(m,2H),7.79–7.71(m,4 H),7.56–7.47(m,2H),7.47–7.39(m,1H),7.27–7.19(m,2H),2.56–2.51(m,1H),1.43–1.19 (m,4H),0.82(t,J＝7.6Hz,3H).MS(ESI):m/z:357[M+H]+.
实施例A-128N-[4-[(1R,2S)-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-4-苯基-苯甲酰胺氯化氢
根据为实施例A-30所描述的乌尔曼型反应步骤制备该化合物。1HNMR(DMSO-d6) (ppm):10.31(s,1H),8.34(s,3H),8.09–7.97(m,2H),7.88–7.80(m,2H),7.78–7.72(m,4H), 7.56–7.47(m,2H),7.45–7.38(m,1H),7.28–7.18(m,2H),2.54–2.51(m,1H),1.45–1.18(m, 4H),0.82(t,J＝7.6Hz,3H).MS(ESI):m/z:357[M+H]+.
实施例A-129反式1-苄基-2-(3-甲氧基苯基)环丙胺氯化氢
从合适的苯乙烯氧化物和膦酰基乙酸酯开始，根据对实施例A-1所述的方法制备化合 物A-129。MS(ESI):m/z:254[M+H]+.
实施例A-1301-[3-[(反式-2-氨基-2-乙基-环丙基]苯基]-3-苯基-咪唑烷-2-酮氯化氢
根据对实施例A-30所述的方法制备化合物A-130。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):8.32 (bs,3H),7.53–7.77(m,3H),7.23–7.46(m,4H),7.07(s,1H),6.88–6.99(m,1H),3.85–4.06 (m,4H),2.52–2.60(m,1H),1.16–1.50(m,4H),0.83(t,J＝7.34Hz,3H).MS(ESI):m/z:322 [M+H]+.
实施例A-131反式-1-乙基-2-[4-(4-苯基三唑-1-基)苯基]环丙胺氯化氢
根据对实施例A-121所述的方法制备化合物A-131。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):9.31 (s,1H),8.36(bs,3H),7.93(s,4H),7.57–7.45(m,4H),7.43–7.35(m,1H),2.67–2.58(m,1 H),1.47(s,1H),1.44–1.36(m,2H),1.35–1.25(m,1H),0.83(t,J＝7.6Hz,3H).MS(ESI):m/z: 305[M+H]+.
实施例A-132反式1-乙基-2-苯基-环丙胺氯化氢
根据对实施例A-1所述的方法制备化合物A-132。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):8.40(s, 3H),7.37–7.29(m,2H),7.28–7.21(m,3H),2.58–2.51(m,1H),1.40–1.28(m,3H),1.26–1.17 (m,1H),0.79(t,J＝7.6Hz,3H).MS(ESI):m/z:162[M+H]+.
实施例B-3反式-1-(苯甲氨基)甲基-2-苯基-环丙胺二氢氯化物
N-[1-甲酰基-反式-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将1g活化的分子筛和910mg(2.4mmol)的PDC在室温下加入到488mg(1.85mmol)的N-[1-(羟甲基)-反式-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯的干燥CH2Cl2(12mL)溶液中(实施例B-1，步骤4)。7小时后，加入Et2O，通过硅藻土短垫过滤混合物，用CH2Cl2：Et2O(1:1)洗脱。蒸发溶剂，通过柱层析法(己烷、EtOAc从95:5至6:4)纯化，以得到无色固体形式的320mg(66％)的N-[1-甲酰基-反式-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(CDCl3)(ppm):8.71(bs,1H),7.51–7.17(m,5H),5.21(bs,1H),3.11(bs,1H),2.21–2.12(m,1H),1.80(bs,1H),1.51(s,9H).MS(ESI):m/z:162[M-100+H]+.
N-1-[(苯甲氨基)甲基-反式-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将100mg活化的分子筛在室温下加入到30mg(0.11mmol)的N-[1-甲酰基-反式-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯的0.5mL的DCE溶液中，然后加入0.013mL(0.230mmol)乙酸和0.015mL(0.14mmol)的苯甲胺。在室温下搅拌混合物约90分钟，然后在室温下分批加入37mg(0.17mmol)NaBH(OAc)3。90分钟后，用Na2CO3淬灭反应混合物，用CH2Cl2萃取水相。干燥合并的有机层，蒸发，通过柱层析法纯化粗制混合物(己烷/EtOAc4:6)，以得到浅黄色固体形式的30mg(74％)N-1-[(苯甲氨基)甲基-反式-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR(CDCl3)(ppm):7.35–7.01(m,10H),5.31(bs,1H),3.69–3.47(m,2H),2.67–2.31(m,3H),1.48(s,9H),1.32–1.20(m,2H).MS(ESI):m/z:353[M+H]+.
1-(苯甲氨基)甲基-反式-2-苯基-环丙基二氯化氢
在-78℃，将0.21mL(0.43mmol)2MHCl的Et2O溶液加入到30mg(0.085mmol)N-1-[(苯 甲氨基)甲基-反式-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯的1.6mL干燥MeOH/Et2O(4:6)溶液中。 将得到的混合物在-78℃搅拌约4小时。然后，加入0.107mL4MHCl的1,4-二氧六环溶液， 将混合物于4℃放置约40h。再加入0.054mL4MHCl的1,4-二氧六环溶液，先将反应混合 物于4℃放置48h，然后在室温放置额外的6h。然后，溶剂给出米黄色粉末形式的20mg (72％)1-(苯甲氨基)甲基-反式-2-苯基-环丙基二氯化氢。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):9.02 (bs,5H),7.60–7.21(m,10H),4.17–3.98(m,2H),3.48–3.37(m,1H),2.77–2.66(m,1H), 2.45–2.32(m,1H),1.98–1.54(m,2H).MS(ESI):m/z:253[M+H]+.
根据对化合物B-3所述的方法制备下列化合物(表8)。
表8
根据对实施例C-1所述的方法，从合适的胺和醛出发来合成下列化合物(表9)。根 据现已详知的方法，通过用Et2O中HCl处理化合物C-18得到化合物C-19。通过制备型 HPLC纯化化合物C-20。
表9
根据对实施例C-3所述的方法，从合适的BOC保护的胺和合适的氯或溴-烷基衍生物 来合成下列化合物(表10)。通过制备型HPLC来纯化化合物C-21、C-22、C-25和C-26。 根据对实施例C-4所述的方法制备顺式化合物C-26。使用其相应的顺式-Boc保护的中间 体(对于C-28是N-[顺式-1-甲基-2-苯基-环丙基]-N-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-氧-乙基]氨基甲 酸叔丁酯，对于C-22是顺式-N,1-二甲基-2-苯基-环丙胺氯化氢)作为起始材料，得到顺式 化合物C-28和C-22，其是根据对于实施例C-3的合成的第二步所述的条件(约10-20％相 对于反式类似物)通过用DMF和NaH处理反式-BOC中间体并通过柱层析法(洗脱液： 对于C-28是CH2Cl2/MeOH/NH396:4:0.4，对于C-22是EtOAc/环己烷)从其相应的反式类 似物分离来形成的。
表10
实施例C-302-[(反式-1-乙基-2-苯基-环丙基)氨基]-1-(1-哌啶基)乙酮氯化氢
2-[(反式-1-乙基-2-苯基-环丙基)氨基]乙酸乙酯
将0.34mLDIPEA(2mmol)加入到0.2g反式-1-乙基-2-苯基-环丙胺氯化氢(1mmol， 如对实施例A-1所述地制备)的4mLCH3CN溶液中。完成胺的溶解之后，加入0.12mL2- 溴代乙酸乙酯(1.1mmol，SigmaAldrich)，在室温下搅拌混合物。40h后，加入0.034mL 2-溴代乙酸乙酯(0.3mmol)，继续搅拌额外的5h。在真空下去除溶剂，通过用CH2Cl2洗 脱的快速柱层析法纯化粗产物，以得到无色油状的0.211g(84％)2-[(反式-1-乙基-2-苯基- 环丙基)氨基]乙酸乙酯。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):9.42(bs,2H),7.42–7.12(m,5H), 4.25(q,J＝7.3Hz,2H),4.15(bs,2H),2.71(bs,1H),1.57–1.39(m,2H),1.36–1.22(m,4H), 1.18–1.07(m,1H),0.77(t,J＝7.3Hz,3H).MS(ESI):m/z:248[M+H]+.
2-[叔丁氧羰基-(反式-1-乙基-2-苯基-环丙基)氨基]乙酸
将0.016gLiOH(0.68mmol)的1.1ml水溶液加入到0.140g2-[(反式-1-乙基-2-苯基-环 丙基)氨基]乙酸乙酯(0.56mmol)的4.5mLTHF溶液中，在室温下将其剧烈搅拌2h。加入 0.170mg碳酸二叔丁基酯(0.78mmol)，将混合物搅拌过夜。去除溶剂后，用EtOAc溶解 粗产物，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥有机层。将溶液过滤，干燥，通过用CH2Cl2/MeOH (100％CH2Cl2到90:100)洗脱的快速柱层析法纯化粗制混合物，以得到无色油状的2-[叔 丁氧羰基-(反式-1-乙基-2-苯基-环丙基)氨基]乙酸(62％)。MS(ESI):m/z:318[M-H]-.
N-[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]-N-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯
将0.028mgHOBt(0.21mmol)和0.048mgEDC(0.25mmol)加入0.068mg2-[叔丁氧 羰基-(反式-1-乙基-2-苯基-环丙基)氨基]乙酸(0.21mmol)的1.5mL干燥DMF溶液中，并 在冰浴中冷却。让混合物冷却至室温，搅拌1.5h。加入0.025mL哌啶(0.25mmol)，继续 搅拌额外的30min。将混合物倒入水中，用EtOAc萃取。用1MHCl、饱和的NaHCO3， 最后用盐水洗涤有机相。用Na2SO4干燥有机层，过滤，在真空下浓缩，以得到无色油状 的0.070g(85％)N-[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]-N-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]氨基甲酸叔 丁酯。MS(ESI):m/z:387[M+H]+.
2-[[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨基]-1-(1-哌啶基)乙酮氯化氢
向冰浴中冷却的0.041gN-[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]-N-[2-氧-2-(1-哌啶基)乙基]氨 基甲酸叔丁酯(0.106mmol)的0.8mLEt2O溶液中缓慢加入0.53mL2MHCl的Et2O溶液 (1.06mmol)。然后，让混合物达到室温。额外2h后，冷却混合物，加入0.53mL4MHCl (2.12mmol)二氧六环溶液，在室温下将溶液搅拌过夜。干燥粗制混合物，用Et2O粉碎， 过滤并洗涤，以得到白色固体形式的0.027g(79％)2-[[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]氨 基]-1-(1-哌啶基)乙酮氯化氢。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):9.03(bs,2H),7.40–7.20(m,5 H),4.17(s,2H),3.58–3.45(m,2H),3.40(bs,2H),2.76–2.68(m,1H),1.68–1.39(m,8H), 1.35–1.28(m,1H),1.26–1.15(m,1H),0.75(t,J＝7.3Hz,3H).MS(ESI):m/z:287[M+H]+.
实施例C-31反式-1-乙基-2-苯基-N-[2-(1-哌啶基)乙基]环丙胺二氯化氢
N-[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯
将0.043gN-[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]-N-[2-氧代-2-(1-哌啶基)乙基]氨基甲酸叔丁 酯(0.11mmol，实施例C-30，步骤3)的1mL干燥THF溶液加入经搅拌且冰冷的1MLiAlH4(0.132mmol)THF溶液中。在室温下继续搅拌2h，然后将混合物倒入水中，用EtOAc萃 取。分离有机相，用Na2SO4干燥并过滤。通过用CH2Cl2/MeOH(97:3)洗脱过的快速柱 层析法纯化粗制混合物，以得到无色油状的0.08mgN-[反式-1-乙基-2-苯基-环丙基]-N-[2- (1-哌啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(19％)。MS(ESI):m/z:373[M+H]+.
反式-1-乙基-2-苯基-N-[2-(1-哌啶基)乙基]环丙胺二氯化氢
将2MHCl的0.215mLEt2O溶液(0.43mmol)缓慢加入到0.016mgN-[反式-1-乙基-2- 苯基-环丙基]-N-[2-(1-哌啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.043mmol)的0.4mL冰冷干燥Et2O 溶液。先让混合物达到室温，1h后再将混合物冷却至0℃。加入0.215mLHCl(二氧六环 中4M，0.86mmol)，在室温下搅拌溶液72h。将粗制混合物进行真空处理，用Et2O粉碎， 过滤，洗涤，并干燥，以得到米黄色固体形式的0.009g反式-1-乙基-2-苯基-N-[2-(1-哌啶基) 乙基]环丙胺二氯化氢(60％)。1HNMR(DMSO-d6)(ppm):10.38(bs,1H),9.70(bs,2H), 7.43–7.14(m,5H),3.73–3.42(m,6H),3.11–2.92(m,2H),2.88–2.77(m,1H),1.88–1.68(m, 5H),1.65–1.33(m,4H),1.20–1.04(m,1H),0.85(t,J＝7.1Hz,3H).MS(ESI):m/z: 273[M+H]+.
实施例C-325-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-胺
N-[5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-基]氨基甲酸酯
在室温下，将340mg(2.46mmol)K2CO3和215mg(0.920mmol)N-[5-(氯代甲基)-1,3,4-恶二唑-2-基]氨基甲酸叔丁酯(如WO2012/013728所述制备)加入到181mg反式-1-甲基-2-苯基-环丙胺(1.23mmol)的3mLDMF溶液中。1h后将反应混合物倒入冰中，用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过先使用CH2Cl2/MeOH97:3作为洗脱液(columnKP-NH)的柱层析法来纯化残余物，然后用CH2Cl2/EtOAc(8:2至9:1)重新纯化，以得到浅黄色油状的18mg(4.2％)N-[5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-基]氨基甲酸酯。1HNMR(CDCl3)(ppm):7.31–7.25(m,2H),7.22–7.17(m,1H),7.16–7.11(m,2H),4.12(s,2H),2.28–2.18(m,1H),1.55(s,9H),1.18–1.09(m,1H),1.01(s,3H),0.97–0.91(m,1H)MS(ESI):m/z:345[M+H]+.
5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-胺
将50μL(0.65mmol)三氟乙酸加入到冷却至0℃的16mg(0.046mmol)N-[5-[[[反式 -1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-基]氨基甲酸酯的搅拌的0.3mL干燥 CH2Cl2溶液中。使反应混合物到达室温，搅拌3h。然后，去除溶剂，在MeOH中溶解粗 制混合物，通过SCX盒(PoraPakRxnCX,Waters)洗脱，以得到浅黄色固体形式的8.8mg (77％)5-[[[反式-1-甲基-2-苯基-环丙基]氨基]甲基]-1,3,4-恶二唑-2-胺。1HNMR(DMSO-d6) (ppm):7.29–7.20(m,2H),7.18–7.07(m,3H),6.92(bs,2H),ABSystem:VA＝3.8, VB＝3.78,JAB＝14.7Hz,2.79(bs,1H),2.04–1.95(m,1H),0.96–0.88(m,2H),0.87(s,3 H).MS(ESI):m/z:245[M+H]+.
实施例D-3反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙胺氯化氢
(E)-2-(4-硝基苯基)-3-苯基-2-丙烯酸甲酯
将HCl37％(0.050mL)和H2SO4(0.050mL)加入到的0.720g(2-(4-硝基苯基)-3-苯基 -2-丙烯酸(SigmaAldrich,cat.No.S337463,2.70mmol)的干燥MeOH(10mL)中。在回 流下加热7h后，在真空下浓缩反应混合物。在Et2O和Na2CO3水溶液中溶解粗制混合物， 用30mLEt2O萃取三次。用Na2SO4干燥得到的有机层，过滤并浓缩，以得到浅黄色固体 形式的所需的(E)-2-(4-硝基苯基)-3-苯基-2-丙烯酸甲酯(0.517g，1.83mmol，68％)。1HNMR (CDCl3)＝8.30–8.18(m,2H),7.98(s,1H),7.54–6.91(m,7H),3.82(s,3H).MS(ESI):m/z: 284[M+H]+.
(E)-2-(4-硝基苯基)-3-苯基-2-丙烯酸甲酯
在氮气气氛下分批将氢化钠(矿物油中60％)加入到三甲基氧化锍碘(0.486g， 2.21mmol)的干燥DMSO(12mL)溶液中。然后，逐滴加入(E)-2-(4-硝基苯基)-3-苯基-2- 丙烯酸甲酯(0.500g，1.76mmol)的干燥DMSO(6mL)溶液，在室温下先搅拌混合物2h， 然后加热至55℃1.5h。然后用水稀释溶液，用Et2O萃取(三次40mL)。用Na2SO4干燥 得到的有机层，过滤掉，蒸发，并通过快速柱层析法(洗脱液：正己烷/EtOAc90:10)纯 化，以得到无色油状的(E)-2-(4-硝基苯基)-3-苯基-2-丙烯酸甲酯(0.612mmol，35％)。1HNMR (CDCl3)＝8.04–7.94(m,2H),7.25–7.17(m,2H),7.13–7.05(m,3H),6.84–6.75(m,2H), 3.69(s,3H),3.29–3.18(m,1H),2.28–2.19(m,1H),2.00–1.90(m,1H).
反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙烷羧酸
将EtOH(0.500mL)、水(0.500mL)和氢氧化锂(0.045g，1.9mmol)加入到0.140g 反式-甲基-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙烷羧酸酯(0.471mmol)的THF(0.100mL)溶液中。 在MW辐射下将混合物加热至115℃70min。在真空下蒸发有机溶剂，将得到的含水混合 物冷却至0℃，用水稀释，用2MHCl熄灭。过滤掉沉淀物，用水洗涤得到的固体，干燥， 以得到0.123g反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙烷羧酸(0.434mmol，92％)。1HNMR (DMSO-d6)＝12.78(s,1H),8.05–7.85(m,2H),7.40–7.26(m,2H),7.12–6.98(m,3H), 6.95–6.85(m,2H),3.17–3.06(m,1H),2.22–2.12(m,1H),2.04–1.94(m,1H).MS(ESI):m/z: 284[M+H]+.
N-[反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将二苯基磷酰基叠氮化物(0.092mL，0.430mmol)和TEA(0.070mL，0.50mmol)加 入到0.110g(0.388mmol)反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙烷羧酸的干燥叔丁醇(3.00mL) 溶液中。在95℃下搅拌得到的溶液7h。然后，浓缩混合物，在10％Na2CO3水溶液和CH2Cl2之间分配，通过快速柱层析法(洗脱液：己烷/EtOAc95:5)纯化粗制混合物，以得到0.096g N-[反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.207mmol,70％)。1HNMR (DMSO-d6)＝8.19(s,1H),8.06–7.85(m,2H),7.43–7.25(m,2H),7.15–6.92(m,5H), 2.88–2.74(m,1H),2.28–2.11(m,1H),1.63–1.47(m,1H),1.43–1.19(m,9H).MS(ESI):m/z: 355[M+H]+.
反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙胺氯化氢
将0.015gN-[反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.042mmol)的 0.5mLEt2O溶液冷却至0℃，加入2.0MHCl(0.212mL，0.423mmol)Et2O溶液。在室温下 搅拌反应混合物16h。然后过滤形成的沉淀物，用Et2O洗涤2次，得到所需的反式-1-(4- 硝基苯基)-2-苯基-环丙胺氯化氢(0.005g,0.02mmol,41％)。1HNMR(DMSO-d6)＝9.05 (s,3H),8.15–8.05(m,2H),7.67–7.51(m,2H),7.18–6.92(m,5H),3.05–2.90(m,1H), 2.35–2.23(m,1H),1.98–1.83(m,1H).MS(ESI):m/z:255[M+H]+.
根据对实施例D-3所述的方法，从合适的肉桂酸开始合成下列化合物(表11)。起始 苯基肉桂酸可从市场上购得，或者如J.Med.Chem.1971,14,921-925所报道地来制备。
表11
实施例D-6N-[4-[反式-1-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]乙酰胺氯化氢
N-[反式-1-(4-氨基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
将0.025MN-[反式-1-(4-硝基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.030g， 0.085mmol)的MeOH溶液在H-立方装置(PtO2盒，1bar，20℃，流速0.5mL/min)中氢 化。浓缩混合物，通过快速柱层析法(洗脱液：正己烷/EtOAc70:30)纯化，以得到白色 固体形式的0.020gN-[反式-1-(4-氨基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯。1HNMR (CDCl3)＝7.19–6.34(m,9H),5.33(s,1H),3.66(bs,2H),2.84–2.68(m,1H),1.76–1.64(m,1 H),1.62–1.56(m,1H),1.52–1.37(m,9H).MS(ESI):m/z:325[M+H]+.
N-[反式-1-(4-乙酰胺基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯
在氮气下将N-[反式-1-(4-氨基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.020g， 0.061mmol)的干燥THF(0.5mL)溶液冷却至0℃。然后一次性加入TEA(0.017mL， 0.12mmol)和乙酰氯(0.0051g，0.065mmol)。在0℃30分钟后，浓缩反应混合物，通过 快速柱层析法(洗脱液：正己烷/EtOAc60:40)纯化，以得到0.022gN-[反式-1-(4-乙酰胺 基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.060mmol，97％)。1HNMR(CDCl3)＝7.53–6.65 (m,10H),5.43(s,1H),2.97–2.50(m,1H),2.11(s,3H),1.84–1.72(m,1H),1.66–1.60(m,1 H),1.44(s,9H).MS(ESI):m/z:367[M+H]+.
N-[4-[反式-1-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]乙酰胺氯化氢
将2MHCl(0.25mL，0.49mmol)Et2O溶液在0℃下加入到1.00mL中N-[反式-1-(4- 乙酰胺基苯基)-2-苯基-环丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.018g，0.049mmol)的溶液中，然后在 室温下将混合物过夜搅拌。过滤形成的沉淀物，用Et2O洗涤得到的固体，干燥，以得到作 为其盐酸盐形式的N-[4-[反式-1-氨基-2-苯基-环丙基]苯基]乙酰胺氯化氢(0.046mmol， 94％)。1HNMR(DMSO-d6)＝9.97(s,1H),8.85(s,3H),7.45–7.20(m,4H),7.14–7.01(m, 3H),6.93(d,J＝7.3Hz,2H),2.85–2.79(m,1H),2.05–2.00(m,1H),1.98(s,3H),1.80–1.74 (m,1H).MS(ESI):m/z:267[M+H]+.
2.生物学测试
2.1KDM1A(LSD1)的酶抑制测试
人重组KDM1A(LSD1)/CoRest蛋白的复合体在大肠杆菌中作为分开的蛋白来生产， 并通过前人报道过的方法(FornerisF.etal.TrendsBiochem.Sci.2008,33,181-189；Forneris F.etal.J.Biol.Chem.2007,282,20070-20074)来共纯化。使用包含21个氨基酸的单甲基化 的H3-K4肽(由ThermoScientific定制合成)作为底物，并在50mMTRIS，pH8，0.05mg/ml BSA缓冲液中进行实验。通过分析高压液相色谱和质谱检测，肽纯度大于90％。
在室温下和有氧条件下通过由与过氧化物酶测试偶联的UltraRed检测系统来测量在催化过程期间产生的H2O2的释放量来估测脱甲基酶活性。简单地说，固定量的HDM1A/CoRest复合体在多种浓度的抑制剂(例如从0-100μM，基于抑制剂强度)存在和/或不存在条件下和与过氧化物酶测试偶联的UltraRed检测系统的条件下在室温下孵育15分钟。在每种浓度下测试重复2次的抑制剂两次。反苯环丙胺(Sigma)被用作对照。将酶和抑制剂预孵育之后，加入4.5μM单甲基化的H3-K4肽，让实验再进行12min。UltraRed试剂到试卤灵的转化通过荧光(在540nm处激发，在590nm处发射)使用酶标仪(Infinite200,Tecan)连续监测。使用任意单位来测量存在和/或不存在抑制剂条件下产生的H2O2的水平。KDM1A/CoRest的最大脱甲基酶活性在不存在抑制剂的条件下得到，并对不存在KDM1A/CoRest条件下的背景荧光进行校正。使用GraphPad软件计算IC50。
得到的结果在表12中显示。IC50结果分配到下列三个范围之一：范围A：IC50从1.0 至5.0μM；范围B：从0.1至1.0μM；范围C：小于等于0.1μM。
表12：KDM1A抑制测验的结果
2.2细胞生长
(Promega)作为非裂解的、单试剂添加的荧光测验，其测量在实验操作之后培养种群中活细胞的相对数量。CellTiter-FluorTM细胞存活实验测量活细胞中保守的和组成型的蛋白酶活性，由此作为细胞活性的标记物。
将指数生长期的急性早幼粒细胞白血病NB4细胞(从DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturen获得)与不同浓度的抑制剂一起孵育48h。48h后，加入相当于细胞培养基的体积的五分之一的体积的将其混合，在37℃下孵育90分钟，以得到稳定的信号。用激发波长360nm和释放波长535nm来记录荧光。使用GraphPad软件计算IC50。
在表13中显示得到的结果。IC50结果分配到下列三个范围之一：范围A：IC5050-100 μM；范围B：10-50μM；范围C：IC50小于等于10μM。
表13：细胞生长抑制实验的结果
2.3对单胺氧化酶的生物发光偶联实验(MAO-Glo实验)
用来自Promega(cat.V1402,Promega,Ma二son,WI)的MAO-Glo实验来测量抑制剂对 于MAO-A和MAO-B活性的作用。
人重组MAOA和MAOB在毕赤酵母中表达和纯化，如所公开的(BindaC.etal.Proc. Natl.Acad.Sci.USA,2003,9750-9755)。在室温下以50μl(25μl反应溶液+25μl检测试剂) 在96孔半区域白板(cat.3693,Corning,Corning,NY)中进行实验。在黑暗中孵育20min之后 用酶标仪(InfiniteF200,TecanGroup,Switzerland)以0.25s每孔的整合时间来测量荧光。
在室温下在PromegaMAO缓冲液或者PromegaMAO-B缓冲液(MAO-GloAssaykit,产 品编号V1402,Promega,Ma二son,WI)中将50nMMAO-A或125nMMAO-B以5个不同抑 制剂浓度(0.004-100μM)孵育15分钟。PromegaMAO底物的浓度与计算的Km(对于 MAO-A是40μM，对于MAO-B是14μM)相同。孵育反应30分钟之后，用Promega检测 试剂停止。实验重复2次。使用GraphPadPrism版本4.0(GraphPadSoftware,Sandiego,CA) 计算IC50。表14报告了本发明的化合物和反苯环丙胺以及PCT申请WO2012/013728的两 种代表性化合物得到的抗MAO-B的IC50值与抗LSD1的比值。
为了确定化合物是否抑制荧光素检测试剂，在不存在MAO的情况下使用0.5μMD-荧 光素甲基酯作为底物(MichaelP.etal.CellNotes,2006,14,4-7,PromegaCorporationand PromegaBiosciences,Inc)来重新筛选化合物。
表14：MAO-B抑制试验的结果
*WO2012/013728
2.4体内活性
用由Minuccietal..(MinucciS.etal.Blood2002,100,2989–2995)表征的小鼠模型进行 体内活性实验。该模型的特征在于，白血病的发育类似于人类急性早幼粒细胞白血病，其 与几种器官例如骨髓、肝脏、尤其是脾脏的成母细胞渗透相关。在进行的实验中，研究脾 肿大作为母细胞渗透和白细胞发育的读取结果。
为了体内分析，将一百万白细胞(从129SvEv小鼠获得，MinucciS.etal.Blood2002,100, 2989–2995，从Taconic,OneHudsonCityCentreHudson,NY(USA)获得)静脉内注射入非辐 射的协同接受者。一旦在接受者的周边血(注射9天后)检测出母细胞，开始治疗。以10 和30mg/kg的剂量静脉内或口服地施用化合物4天。母细胞注射5天后，杀死小鼠并取出 脾脏。登记载药组以及处理组的小鼠的脾脏的重量，并用作对于母细胞渗透的效果的证据。 数据以平均数±标准中位误差报道。
以30mg/kg口服施用的化合物A-36确定了与单独用载药(40％PEG-400,60％包括5％ 葡萄糖的水溶液)处理的小鼠相比，减少约50％脾脏重量。