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1、(10)授权公告号 CN 102668990 B (45)授权公告日 2013.08.28 CN 102668990 B *CN102668990B* (21)申请号 201210194132.3 (22)申请日 2012.06.13 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 贵州省亚热带作物研究所 地址 562400 贵州省黔西南布依族苗族自治 州兴义市下五屯峰林东路 1 号 (72)发明人 卢加举 张正学 蒙秋伊 黄先群 张志勇 王健 刘鹏飞 査兰松 雷石富 李向勇 彭仕荣 (74)专利代理机构 贵阳中新专利商标事务所 52100 代理人 李亮 程新敏 CN 1214858 。
2、A,1999.04.28, CN 202160496 U,2012.03.14, JP 特开 2003-102299 A,2003.04.08, JP 特开平 11-275995 A,1999.10.12, JP 特开 2010-207233 A,2010.09.24, (54) 发明名称 植物组培方法及装置 (57) 摘要 本发明公开了一种植物组培方法及装置， 在 相对无菌的环境下， 配制 1L 培养基需称取琼脂粉 3.5 5.5g， 将琼脂加热至充分溶解， 然后按照培 养阶段加入除蔗糖以外的各种元素， 将培养基调 整 pH 值至 5.6 5.8， 定容、 分装， 获得无糖培养 基 ； 在接。
3、种室内， 用质量百分比浓度为 75% 的酒精 将接种台面和手擦干净， 将无糖培养基放入二氧 化碳气肥培养瓶中， 再将植物外植体接种到无糖 培养基上， 将二氧化碳气肥放入二氧化碳气肥培 养瓶后， 使二氧化碳气肥培养瓶密闭 ； 二氧化碳 气肥的用量为 0.5 1.0g/250ml。本发明利用二 氧化碳气体代替培养基中的蔗糖， 为植物提供光 合作用所需的碳源， 同时在培养基中添加抑菌剂 来抑制微生物的污染， 以达到抑菌杀菌、 简化操作 及提高组培苗质量的多重效果。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 杜玉娟 权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知。
4、识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书2页 附图1页 (10)授权公告号 CN 102668990 B CN 102668990 B *CN102668990B* 1/1 页 2 1. 一种植物组培方法， 其特征在于 ： 在相对无菌的环境下， 配制 1L 培养基需称取琼脂 粉 3.5 5.5g， 将琼脂粉加热至充分溶解， 然后按照培养阶段加入除蔗糖以外的 MS 培养基 各种元素， 根据不同培养阶段添加入对应的植物激素和抑菌剂35ml， 调整培养基pH值至 5.65.8， 定容、 分装， 获得无糖培养基 ； 在接种室内， 用质量百分比浓度为75%的酒精将接 种台面和手擦干净， 将无糖。
5、培养基放入二氧化碳气肥培养瓶中， 再将植物外植体接种到无 糖培养基上， 将二氧化碳气肥放入二氧化碳气肥培养瓶后， 使二氧化碳气肥培养瓶密闭 ； 二 氧化碳气肥的用量为 0.5 1.0g/250ml ； 所述的抑菌剂的包括烟碱 1 5%、 成熟蒜泥汁液 2% 6%、 50% 的多菌灵及水 ； 二氧化碳气肥培养瓶包括透明的瓶体 （4） 和瓶盖 （3） ， 在瓶盖 （3） 顶部设有气肥入孔 （1） ， 在气肥入孔 （1） 内装有气肥入孔旋盖 （2） ， 在气肥入孔 （1） 的下 方设有托盘 （5） ， 托盘 （5） 与瓶盖 （3） 底部连接 ； 所述的相对无菌环境是指， 在接种植物外植 体前， 将接。
6、种室用臭氧发生器在夜间消毒2小时， 在接种前用质量百分比为75%的乙醇进行 降尘处理， 并用紫外灯照射 15 20 分钟 ； 将培养室每隔 2 个月用甲醛熏蒸处理一次。 2. 根据权利要求 1 所述的植物组培方法， 其特征在于 ： 接种工具浸泡于无水乙醇中， 每 转接一瓶外植体就用酒精灯灼烧一次接种工具。 3. 根据权利要求 1 所述的植物组培方法， 其特征在于 ： 琼脂粉在加热过程中保持不沸 腾， 加热时间为 6 10 分钟。 权 利 要 求 书 CN 102668990 B 2 1/2 页 3 植物组培方法及装置 技术领域 0001 本发明涉及植物科学技术， 尤其是一种无糖式的组培方法及装。
7、置。 背景技术 0002 传统组培是在全封闭的无菌环境下进行， 传统组培需要用糖作为植物生长所需的 碳源， 且要求高压灭菌和超净工作台， 对操作技术和培养环境要求极其严格， 对工作人员的 业务素质要求也较高， 每个环节都可能增加微生物污染的机会， 造成植物生产缓慢， 组培苗 质量较差。为解决传统组培存在的这些问题， 许多科技工作者探索了开放组培和无糖组培 等新的组培方法。当前的无糖组培虽改进了传统组培的许多不足， 但无糖组培不仅需要高 压灭菌锅及超净工作台， 还需要昂贵的设备来控制 CO2气体的供给， 限制其广泛推广应用 ； 而植物开放组培虽然简化了传统组培繁琐的程序， 不需要高压灭菌锅及超净。
8、工作台， 但开 放式组培添加到培养基里的糖， 又为微生物的污染创造了有利条件， 仍然没能从根本上解 决污染问题。 发明内容 0003 本发明的目的是 ： 提供一种植物组培方法及装置， 它操作简单， 能抑菌杀菌， 能提 高组培苗质量， 以克服现有技术的不足。 0004 本发明是这样实现的 ： 植物组培方法， 在相对无菌的环境下， 配制 1L 培养基需称 取琼脂粉 3.5 5.5g， 将琼脂粉加热至充分溶解， 然后按照培养阶段加入除蔗糖以外的 MS 培养基各种元素， 根据不同培养阶段添加入对应的植物激素和抑菌剂 3 5ml， 调整培养基 pH 值至 5.6 5.8， 定容、 分装， 获得无糖培养基。
9、 ； 在接种室内， 用质量百分比浓度为 75% 的 酒精将接种台面和手擦干净， 将无糖培养基放入二氧化碳气肥培养瓶中， 再将植物外植体 接种到无糖培养基上， 将二氧化碳气肥放入二氧化碳气肥培养瓶后， 使二氧化碳气肥培养 瓶密闭 ； 二氧化碳气肥的用量为 0.5 1.0g/250ml。 0005 根据不同培养阶段添加不同浓度的植物激素是指， 植物愈伤组织的诱导、 增殖、 壮 苗和生根等 4 个阶段， 根据现有技术的方式加入相应的植物激素。 0006 接种工具浸泡于无水乙醇中， 每转接一瓶外植体就用酒精灯灼烧一次接种工具。 0007 在接种植物外植体前， 为不耽误白天的接种工作 , 将接种室用臭氧。
10、发生器在夜间 消毒 2 小时， 在接种前用质量百分比为 75% 的乙醇进行降尘处理， 并用紫外灯照射 15 20 分钟 ； 所述的相对无菌的环境是指将培养室每隔 2 个月用甲醛熏蒸处理一次。 0008 按质量百分比浓度计算， 所述的抑菌剂的包括烟碱 1 5%、 成熟蒜泥汁液 2% 6%、 50% 的多菌灵及水。其中烟碱、 成熟蒜泥汁液及多菌灵按质量百分比取量后， 再加入水， 使其均匀混合并定容。 0009 二氧化碳气肥培养瓶， 包括透明的瓶体和瓶盖， 在瓶盖顶部设有气肥入孔， 在气肥 入孔内装有气肥入孔旋盖， 在气肥入孔的下方设有托盘， 托盘与瓶盖底部连接。 0010 由于采用了上述技术方案，。
11、 与现有技术相比， 本发明选用二氧化碳气肥作为 “桥 说 明 书 CN 102668990 B 3 2/2 页 4 梁” ， 利用二氧化碳气体代替培养基中的蔗糖， 为植物提供光合作用所需的碳源， 同时在培养 基中添加抑菌剂来抑制微生物的污染， 将 “无糖组培” 和 “开放式组培” 的优点有机结合， 以达 到抑菌杀菌、 简化操作及提高组培苗质量的多重效果 ； 而且由于培养基不经高压灭菌， 无需 耗费培养基灭菌所需的大量电能， 所以营养成分几乎无损失 ； 同时由于不需要超净工作台， 直接在相对无菌的环境接种， 其接种速度是传统组培的 3 倍以上， 劳动力成本投入大大减少 ； 无糖抑菌培养基由于不含。
12、糖， 且添加有抑菌剂， 从很大程度上解决了微生物的污染问题 ； 二 氧化碳气肥在植物组培中的创新应用使组培苗进行自养光合， 不经过驯化， 可直接移植， 组培 苗质量优于传统组培苗 ； 因为不需高压灭菌锅和超净工作台 , 而且组培苗由异养转为自养， 所以固定资产投入、 基地建设及劳动力成本投入要比传统组培低 50% 左右， 组培苗质量提高。 本发明方法简单， 容易实施， 所使用的装置结构简单， 成本低廉， 使用效果好。 附图说明 0011 附图 1 为本发明的结构示意图。 具体实施方式 0012 本发明的实施例 ： 二氧化碳气肥培养瓶的结构如图1所示， 包括透明的瓶体4和瓶 盖 3， 在瓶盖 3。
13、 顶部设有气肥入孔 1， 在气肥入孔 1 内装有气肥入孔旋盖 2， 在气肥入孔 1 的 下方设有托盘 5， 托盘 5 与瓶盖 3 底部连接。 0013 植物组培方法， 在相对无菌的环境下， 配制1L培养基需称取琼脂粉3.55.5g， 将 琼脂粉加热至充分溶解， 然后按照培养阶段加入除蔗糖以外的 MS 培养基各种元素， 根据不 同培养阶段添加入对应的植物激素和抑菌剂 3 5ml， 按质量百分比浓度计算， 所述的抑菌 剂的包括烟碱15%、 成熟蒜泥汁液2%6%、 50%的多菌灵及水 ； 调整培养基pH值至5.6 5.8， 定容、 分装， 获得无糖培养基 7 ； 在接种室内， 用质量百分比浓度为 7。
14、5% 的酒精将接种台 面和手擦干净， 打开二氧化碳气肥培养瓶的瓶盖3， 将无糖培养基7放入瓶体4中， 平铺在瓶 体 4 底部， 再将植物外植体 6 接种到无糖培养基 7 上， 盖上瓶盖 3 并拧紧至密封状态， 将气 肥入孔旋盖 2 左旋或者右旋 90， 使气肥入孔 1 打开， 将粉状的二氧化碳气肥从气肥入孔 1 中加入， 二氧化碳气肥通过气肥入孔 1 落到托盘 5 上， 再将气肥入孔旋盖 2 旋回， 使气肥入 孔 1 关闭 ； 二氧化碳气肥的用量为 0.5 1.0g/250ml。最后将培养瓶置于培养室， 在光照 条件下， 二氧化碳气肥释放二氧化碳气体供植物进行光合作用。操作过程使用的接种工具 。
15、浸泡于无水乙醇中， 每转接一瓶外植体就用酒精灯灼烧一次接种工具 ； 并在接种植物外植 体前， 将接种室用臭氧在夜间消毒 2 小时， 然后用质量百分比为 75% 的乙醇进行降尘处理， 并用紫外灯照射 15 20 分钟 ； 所述的相对无菌的环境是指将培养室每隔 2 个月用甲醛熏 蒸处理一次。 0014 由于使用二氧化碳气肥释放的二氧化碳气体代替糖作为植物生长所需的碳源， 在 开放的环境下， 提供合适的光照、 温度、 水分和营养物质条件， 植物能够通过光合作用提供 自身生长发育所需的物质， 使植物在培养瓶内生长的环境更接近于自然环境。无糖抑菌培 养基由于不含糖， 且培养基里由抑菌物质， 在使各种微生物失去能源的同时， 还遭受抑菌剂 的抑制， 从而解决了传统组培、 开放组培和无糖组培过程中气体环境差、 易污染、 组培苗质 量差等问题。 说 明 书 CN 102668990 B 4 1/1 页 5 图 1 说 明 书 附 图 CN 102668990 B 5 。