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1、(10)授权公告号 CN 102668981 B (45)授权公告日 2013.07.10 CN 102668981 B *CN102668981B* (21)申请号 201210153169.1 (22)申请日 2012.05.17 A01H 4/00(2006.01) A01H 1/00(2006.01) (73)专利权人 云南自然谷生物开发有限公司 地址 650000 云南省昆明市西山区团结街道 办事处苏达开中草药研发基地 (72)发明人 兰振水 (74)专利代理机构 昆明正原专利商标代理有限 公司 53100 代理人 陈左 CN 101392234 A,2009.03.25, 汪洋 .。
2、 黑水缬草愈伤组织诱导及快速繁殖体 系的构建 .佳木斯大学硕士学位论文 .2008, (54) 发明名称 蜘蛛香繁育方法 (57) 摘要 一种蜘蛛香繁育方法， 其特征在于通过组织 培养繁育或种子繁育后移栽大田栽种 ； 组织培养 繁育育苗包括 ： 无菌系的建立， 采用培养基作愈 伤培养、 增殖培养和生根培养， 炼苗和驯化苗的处 理， 栽种后苗床及幼苗防病措施 ； 种子繁育育苗 包括 ： 种子采集时间、 打破休眠期、 诱导芽胞分化 和苗期防病虫害措施 ； 本发明重点解决了蜘蛛香 繁育产业化的问题， 为种植提供了可靠保障， 有效 地保护了濒危物种， 特别是在拯救濒危药材领域 有显著进步。 (51)I。
3、nt.Cl. (56)对比文件 审查员 贾涛 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书4页 (10)授权公告号 CN 102668981 B CN 102668981 B *CN102668981B* 1/1 页 2 1. 一种蜘蛛香繁育方法， 其特征在于采用组织培养繁育育苗后移栽大田， 步骤如下 ： （1） 、 采集发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体 ； （2） 、 将蜘蛛香外植体剥去外皮老叶、 冲洗后， 放入 70% 酒精中浸泡 30 60 秒， 再将材 料移入 0.1% 升汞水中消毒 10 分钟， 取出后冲洗 。
4、3 4 次 ； （3） 、 在无菌净化工作台上将外植体切成 1 3mm 小块后接种在装有愈伤组织培养基 中培养7天后转接到诱导分化培养基中， 所述的愈伤组织培养基由基本培养基MS加入蔗糖 3% 和琼脂 0.6% 构成， 调节愈伤组织培养基 pH6.0， 培养室温度 25 27， 光照度 2000 3000Lx， 每天光照时间 10 14h ； （4） 、 诱导生长 ： 在基本培养基 MS 中加入 6 BA 2.0mg/L、 IBA 0.2mg/L 和 LH800mg/L 的诱导分化培养基中， 7天芽孢开始萌动， 1520天分化出小芽， 待小芽长到11.5cm时， 切取芽茎段和愈伤组织， 无菌环。
5、境下， 接种到增殖培养基内 ； （5） 、 增殖及壮苗培养 ： 在基本培养基 MS 中加入 6 BA 1.5mg/L、 KT 0.5mg/L、 IBA 0.2mg/L 构成的增殖壮苗培养基中， 10 15 天形成芽丛， 15 20 天分化出芽苗， 继代培养 一次 ； （6） 、 生根培养与驯化 ： 取 1/2 基本培养基 MS 加入 2mg/L NAA 作为生根培养基， 将芽苗 转接到生根培养基中， 3035天之后产生数条根丛， 打开瓶盖， 炼苗34天之后取出洗净 培养基即是组培苗 ； 驯化是将组培苗放在 50% 多菌灵 1000 倍溶液中浸泡 10 分钟， 于 18 22温度下移栽入沙和腐殖。
6、土按 1:1 重量比例配制的育苗床上， 浇透水后用 50% 多菌灵 1000 倍溶液喷施杀菌， 隔日再喷施一次， 15 20 天长出新叶及新根 ； （7） 、 栽种 ： 取蜘蛛香的组培苗， 5 月中旬 6 月上旬根据幼苗生长情况进行移栽， 株距 5 8cm， 行距 15 20cm， 栽植深度 3 5cm， 定植后覆土加压， 每亩栽种 1 1.2 万株， 苗 期 6 月及 8 月及时除草， 生长期用腐熟粪水浇灌 1-2 次， 栽种 2 年， 在当年 12 月次年 1 月 采收。 2. 一种蜘蛛香繁育方法， 其特征在于采用蜘蛛香种子繁育育苗后移栽大田， 步骤如 下 ： （1） 、 种子采集 ： 3。
7、 月下旬到 4 月下旬每日上午收集落花后的花序， 连同花序一并剪下， 晒至七成干收集籽种得蜘蛛香种子 ； （2） 、 种子处理 ： 取上一步骤取得的当年鲜种， 用 0.5mg/L 赤霉酸 GA3 浸泡 4 8 小时， 浸泡后， 过滤， 稍加晾晒至松散， 按 1:10 重量比例拌入细沙 ； （3） 、 将处理好的种子， 均匀撒播在苗床上， 覆盖 0.5cm 细土， 喷淋透水， 保持大棚内湿 度大于 60%， 温度控制在 20 25之间 ； （4） 、 播种 ： 播种后 7 10 天开始发芽出苗， 保持湿度和温度， 出苗后， 喷施自配叶面肥 和 50% 多菌灵 1000 倍溶液 ： 每隔 10 天。
8、喷施一次， 共喷 2 3 次， 所述的叶面肥中 N、 P、 K 按 1:0.5:0.3 重量比例配制 ； 经 45 50 天， 当苗高 3 4cm， 移栽至大田。 权 利 要 求 书 CN 102668981 B 2 1/4 页 3 蜘蛛香繁育方法 技术领域 0001 本发明涉及一种濒危药材蜘蛛香的繁育方法。 背景技术 0002 蜘蛛香 （Valeriana jatamansi Jones) 为败酱科， 心叶缬草植物的根茎， 别名 ： 马 蹄香、 臭狗药、 连香草、 养血莲， 乌参等， 根茎入药。具有 ： 理气止痛、 消食化气、 健胃止泻、 祛 风除湿、 镇静安神等功效。 用于脘腹胀痛、 腹泻。
9、菌痢、 消化不良、 风湿痹痛、 失眠等， 是载入药 典的云南地产药材。 0003 主要分布在云南、 贵州、 广西、 四川等省区， 生长于海拔 18002800 米的山谷林中 及沟边草丛中， 喜阴湿肥沃土壤。 由于生长环境特殊， 产区局限性大， 长期无限制采挖， 丧失 了休养生机， 野生资源再生能力急剧下降， 从而导致蜘蛛香种群数量逐渐减少， 以被列入秦 巴山区重点名录和中国高等植物濒危及受威胁物种名录， 现已被我国列为国家级重点保护 植物。 0004 蜘蛛香生物学特点为 ： 开花少、 结果少、 而且花落籽落， 花开花落间隔十分短暂， 掌握不好时机， 很难收集到真正发育成熟的种子。 未成熟种子胚。
10、仍处于原胚阶段， 胚的各部 器官尚未分化， 不能用作繁育基材。 成熟的蜘蛛香种子， 种皮比较特殊， 细胞层数较多， 而且 各层细胞的细胞壁木质化程度较高， 内侧细胞细小， 排列紧密， 由于外皮质地坚硬， 不经特 殊处理， 芽胚很难萌发， 故此有关蜘蛛香野生转家种繁育技术尚未见报道。 发明内容 0005 本发明目的在于提出一种蜘蛛香繁育方法， 本发明重点解决了蜘蛛香繁育产业化 的问题， 为种植提供了可靠保障， 在保障供给的同时， 有效地保护了濒危物种， 特别是在拯 救濒危药材领域有显著进步。本发明的技术方案如下 ： 0006 一种蜘蛛香繁育方法， 其特征在于采用组织培养繁育育苗后移栽大田， 步骤。
11、如 下 ： 0007 （1） 、 采集发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体 ； 0008 （2） 、 将蜘蛛香外植体剥去外皮老叶、 冲洗后， 放入 70% 酒精中浸泡 30 60 秒消毒 10 分钟， 取出后冲洗 3 4 次 ； 0009 （3） 、 在无菌净化工作台上将外植体切成13mm小块后接种在装有愈伤组织培养 基中培养7天后转接到诱导分化培养基中， 所述的愈伤组织培养基由基本培养基MS加入蔗 糖3%和琼脂0.6%构成， 调节愈伤组织培养基pH6.0， 培养室温度2527， 光照度2000 3000Lx， 每天光照时间 10 14h ； 0010 （4） 、 诱导生长 ： 在基本培养基。
12、 MS 加入 6 BA 2.0mg/L、 IBA 0.2mg/L 和 LH800mg/ L 的诱导分化培养基中， 7 天芽孢开始萌动， 15 20 天分化出小芽， 待小芽长到 1 1.5cm 时， 切取芽茎段和愈伤组织， 无菌环境下， 接种到增殖培养基内 ； 0011 （5） 、 增殖及壮苗培养 ： 在基本培养基 MS 中加入 6 BA 1.5mg/L、 KT 0.5mg/L、 IBA 说 明 书 CN 102668981 B 3 2/4 页 4 0.2mg/L 构成的增殖壮苗培养基中， 10 15 天形成芽丛， 15 20 天分化出芽苗， 继代培养 一次 ； 0012 （6） 、 生根培养与。
13、驯化 ： 取 1/2 基本培养基加入 MS+2mg/L NAA 为生根培养基， 将芽 苗转接到生根培养基中， 30 35 天之后产生数条根丛， 打开瓶盖， 炼苗 3 4 天之后取出 洗净培养基即是组培苗 ； 驯化是将组培苗放在 50% 多菌灵 1000 倍溶液中浸泡 10 分钟， 于 18 22温度下移栽入沙和腐殖土按 1:1 重量比例配制的育苗床上， 浇透水后用 50% 多菌 灵 1000 倍溶液喷施杀菌， 隔日再喷施一次， 15 20 天长出新叶及新根 ； 0013 （7） 、 栽种 ： 取蜘蛛香的组培苗， 5 月中旬 6 月上旬根据幼苗生长情况进行移栽， 株距 5 8cm， 行距 15 。
14、20cm， 栽植深度 3 5cm， 定植后覆土加压， 每亩栽种 1 1.2 万 株， 苗期 6 月及 8 月及时除草， 生长期用腐熟粪水浇灌 1-2 次， 栽种 2 年， 在当年 12 次年 1 月采收。 0014 一种蜘蛛香繁育方法， 其特征在于采用蜘蛛香种子繁育育苗后移栽大田， 步骤如 下 ： 0015 （1） 、 种子采集 ： 3 月下旬到 4 月下旬每日上午收集落花后的花序， 连同花序一并剪 下， 晒至七成干收集籽种得蜘蛛香种子 ； 0016 （2） 、 种子处理 ： 取上一步骤取得的当年鲜种， 用 0.5mg/L 赤霉酸 GA3 浸泡 4 8 小 时， 浸泡后， 过滤， 稍加晾晒至松。
15、散， 按 1:10 重量比例拌入细沙 ； 0017 （3） 、 将处理好的种子， 均匀撒播在苗床上， 覆盖 0.5cm 细土， 喷淋透水， 保持大棚 内湿度大于 60%， 温度控制在 20 25之间 ； 0018 （4） 、 播种 ： 播种后 7 10 天开始发芽出苗， 保持湿度和温度， 出苗后， 喷施自配叶 面肥和 50% 多菌灵 1000 倍溶液 ： 每隔 10 天喷施一次， 共喷 2 3 次， 所述的叶面肥中 N、 P、 K 按 1:0.5:0.3 重量比例配制 ； 经 45 50 天， 当苗高 3 4cm， 移栽至大田。 具体实施方式 0019 蜘蛛香繁育方法， 通过组织培养繁育或种子。
16、繁育后移栽大田栽种。 0020 1、 蜘蛛香组织培养繁育育苗包括 ： 无菌系的建立， 采用培养基作愈伤培养、 增殖培 养和生根培养， 炼苗和驯化苗的处理， 栽种后苗床及幼苗防病措施。具体步骤如下 ： 0021 1.1、 外植体的采集 ： 取发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体。 0022 1.2、 消毒 ： 取蜘蛛香外植体， 经流水冲洗剥去外皮老叶、 小心割取幼芽， 蒸馏水冲 洗后立即放入消毒器皿中， 在 70% 酒精中浸泡 30 60 秒， 再将材料移入 0.1% 升汞水中消 毒 10 分钟， 取出后用无菌水冲洗 3 4 次， 完成蜘蛛香培养基材的消毒。 0023 1.3、 接种 ： 在无。
17、菌的超净化工作台上将外植体材料上的水分吸干之后， 用经消毒 的接种刀片切成 1 3mm 小块， 然后接种在装有愈伤组织培养基的 250mL 三角烧瓶中， 每 瓶接种 10 15 个外植体， 用消毒后菌种膜塞口， 在无菌室中培养 7 天。基本培养基为 MS， 愈伤组织培养基 ： MS+ 蔗糖 3% 和琼脂 0.6%， pH6.0， 培养室温度 （261）， 光照度 2000 3000Lx， 每天光照时间 10 14h。 0024 1.4、 诱导生长 ： 外植体材料置于基本培养基 MS 加入 6 BA 2.0mg/L、 IBA 0.2mg/L 和 LH800mg/L 构成的诱导分化培养基中， 7 。
18、天芽孢开始萌动， 随着生长， 茎基部膨 大， 逐渐分化出34个小芽， 1520天形成疏松的愈伤组织， 分化出小芽， 待小芽长到1 说 明 书 CN 102668981 B 4 3/4 页 5 1.5cm 时， 切取芽茎段和愈伤组织， 无菌环境下， 接种到增殖壮苗培养基内。 0025 1.5、 增殖及壮苗培养 ： 小芽在基本培养基 MS 中加入 6 BA 1.5mg/L、 KT 0.5mg/ L、 IBA 0.2mg/L 构成的增殖壮苗培养基中， 10 15 天左右形成丛芽， 15 20 天分化出芽 苗， 继代培养一次。 0026 1.6、 生根培养与驯化 ： 取1/2基本培养基加入MS+2mg。
19、/L NAA为生根培养基， 将培 养的芽苗转接到生根培养基中， 30 35 天之后产生数条根丛， 株高达 2.5 3cm， 阴凉通风 处打开瓶盖， 炼苗 3 4 天之后取出洗净培养基即组培苗， 驯化是将组培苗放在 50% 多菌灵 1000 倍溶液中浸泡 10 分钟， 于 18 22温度下移入沙和腐殖土按 1:1 重量比例配制的育 苗床上， 浇透水后喷施 50% 多菌灵 1000 倍溶液， 隔日再喷一次以利杀菌， 保持湿度 75%， 15 20 天当长出新叶及新根 , 可进行大田移栽， 成活率 80 85%。 0027 2、 蜘蛛香种子繁育育苗包括 ： 种子采集时间、 打破休眠期、 诱导芽胞分化。
20、和苗期防 病虫害措施。步骤如下 ： 0028 2.1、 种子采集 ： 3 月下旬到 4 月下旬每日上午 10 点钟以前、 选择开败花的花序 （花 序茎梗变暗） ， 连同花序一并剪下， 以免种子随风飘散。将剪下的花序置避风处晾干， 去除花 梗等杂质后， 趁鲜摘除枝干， 晒至七成干， 收集子种及时育苗。 0029 2.2、 种子处理 ： 蜘蛛香种子， 暴晒或隔年的极易失活， 降低发芽率 ； 因而应取当年 鲜种装入纱布袋内， 用 0.5mg/L 赤霉酸 GA3， 浸泡 4 8 小时， 以利于打破休眠期， 促进细胞 分裂， 诱导芽的分化， 促进侧芽萌发生长， 延缓衰老。 浸泡后， 过滤出水， 稍加晾晒。
21、至松散， 按 1:10 重量比例拌入细沙。 0030 2.3、 苗圃地整理 ： 大棚内， 深翻、 耙细， 每亩施 100kg 复合肥加 100kg 腐熟基肥， 二 次深翻， 耙平， 作育苗床。 0031 2.4、 播种 ： 将处理好的种子， 均匀撒播在苗床上， 覆盖 0.5cm 细土， 喷淋透水， 保持 大棚内湿度大于 60%， 温度控制在 20 25之间。 0032 2.5、 管理 ： 播种后 7 10 天开始发芽出苗， 保持湿度和温度， 随时清除杂草， 出苗 后， 喷施自配叶面肥和 50% 多菌灵 1000 倍液。每隔 10 天喷施一次， 共喷 2 3 次 ； 叶面肥 中 N、 P、 K 。
22、按 1:0.5:0.3 重量比例配制， 经 45 50 天， 当苗高 3 4cm， 即可移栽至大田。 0033 3、 蜘蛛香栽培 ： 0034 3.1、 选地， 整地 ： 蜘蛛香喜湿润肥沃土壤， 为较丛根性植物， 根系十分发达。因此， 选取避荫、 背风的缓坡或者平地， 选择土层肥沃、 疏松、 排灌方便和富含腐殖质的山地夹沙 土壤， 每亩施腐熟农家肥 2000kg 和普钙 100kg， 深翻、 耙细， 打成 1.5m 宽墒， 挖好排水沟。 0035 3.2、 栽种 ： 取蜘蛛香的组培苗或有性繁育苗， 5 月中旬 6 月上旬根据幼苗生长情 况进行移栽， 株距 5 8cm， 行距 15 20cm， 。
23、栽植深度 3-5cm 左右， 定植后覆细土加压， 每亩 栽种 1 1.2 万株， 苗期加强水肥管理。6 月及 8 月及时除草， 生长期用腐熟粪水浇灌 1-2 次， 栽种 2 年， 12 月 1 月采收。 0036 3.3、 病虫害防治 : 菌核病、 根腐病、 地老虎和蛴螬等， 是幼苗期常见的病虫害， 其 防治方法分别为 ： 菌核病的防治方法 ： 及时挖去病株， 松土， 提高土壤通气， 采用 50% 多菌 灵1000倍液喷雾， 每10天1次， 连续23次 ； 地老虎、 蛴螬的防治方法 ： 铲除周边杂草， 用自配生物农药， 每亩12.5Kg配水喷施， 或者用25g氯丹乳油拌炒香的麦麸5kg， 加适量 水配成毒饵， 于傍晚撒于田间或洼面诱杀。 说 明 书 CN 102668981 B 5 4/4 页 6 0037 3.4、 采收加工 ： 人工栽培的蜘蛛香在当年12次年1月采收质量好， 产量高， 采挖 后， 去净泥土， 须根与根茎分开， 晾晒至干 ； 或者每 10 株为一小捆， 用绳扭结成辫或小捆， 挂 在通风处晒干， 忌水洗。 说 明 书 CN 102668981 B 6 。