技术领域：
本发明涉及一种微米薄纸在线虫永久玻片制作中的应用，属标本制作技术领域
背景技术：
植物病原物玻片标本是植物病理学教学与科研中重要的实验材料植物病原物玻片标本分永久玻片和半永久玻片标本等永久玻片标本可永久保存，永久使用。半永久玻片标本保存期短，使用年限3年左右。关于线虫永久玻片标本制作方法，在专著(植病研究方法)及教科书(实验指导书)中均有详细介绍。长期以来，线虫永久玻片的制作一直采用制蜡环和放置支撑物的传统方法。但在实际操作中，传统方法里的制蜡环，放置支撑物，控制目标视野范围三个步骤难度高，又费时，往往某一小小的失误就会造成前功尽弃。因此多年来线虫永久玻片标本的制作成了许多研究者回避的问题。
经文献检索，未见与本发明相同的公开报道
发明内容：
本发明目的在于克服现有玻片标本制作方法之不足，根据目的标本的大小，选择微米薄纸替代常规永久玻片制作中的制蜡环和放置支撑物，用于线虫及其他病原物永久玻片的制作。
选择微米薄纸替代常规永久玻片制作中的制蜡环和支撑物，用于制作线虫永久玻片的具体步骤如下：
(1)、清洗载玻片与盖玻片；
(2)、选用28.5微米厚的薄纸，用直径为15毫米圆形打孔器切取微米薄纸片；
(3)、用直径5毫米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔；
(4)、将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5)、将打好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小气泡；
(6)、用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻片正中位置；
(7)、将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平台上，室温冷却；
(8)、向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴成圆形；
(9)、将已脱水的线虫挑入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10)、将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纸片正上方，整体放于恒温电热板上80℃-90℃加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者间无气泡为止；
(11)、将(10)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻片，贴标签，制作完成。
本发明简化了常规线虫永久玻片制作中的复杂的制作程序，降低了制作难度，大大提高了制片质量和成功率，为制作线虫永久玻片标本提供了一种操作简便、成本低、效率高的新方法。
本发明不仅用于线虫永久玻片标本的制作，也可用于多种标本的制作。
具体实施方式：
本发明按照常规方法制备。本发明不仅局限于实施例所限，也可选择微米的薄纸替代常规永久玻片中的制蜡环和支撑物，用于多种标本的制作。
实施例1：
松材线虫永久玻片标本的制作步骤：
(1)、清洗载玻片与盖玻片；
(2)、选用28.5微米厚的薄纸，用直径为15毫米圆形打孔器切取微米薄纸片；
(3)、用直径5毫米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔；
(4)、将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5)、将打好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小气泡；
(6)、用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻片正中位置；
(7)、将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平台上，室温冷却；
(8)、向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴成圆形；
(9)、将已脱水的松材线虫挑入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10)、将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纸片正上方，整体放于恒温电热板上80℃-90℃加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者间无气泡为止；
(11)、将(10)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻片，贴标签，制作完成。
实施例2：
根结线虫2龄幼虫永久玻片标本的制作步骤：
(1)、清洗载玻片与盖玻片；
(2)、选用28.5微米厚的薄纸，用直径为15毫米圆形打孔器切取微米薄纸片；
(3)、用直径5毫米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔；
(4)、将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5)、将打好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小气泡；
(6)、用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻片正中位置；
(7)、将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平台上，室温冷却；
(8)、向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴成圆形；
(9)、将已脱水的根结线虫挑入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10)、将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纸片正上方，整体放于恒温电热板上80℃-90℃加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者间无气泡为止；
(11)、将(10)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻片，贴标签，制作完成。
实施例3：
瓜果腐霉有性世代永久标本的制作步骤：
(1)、清洗载玻片与盖玻片；
(2)、选用50微米厚的薄纸，用直径为15毫米圆形打孔器切取微米薄纸片；
(3)、用直径5毫米的圆形打孔器在(2)薄纸正中打孔；
(4)、将固体石蜡置于培养皿中，放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热至固体石蜡完全熔化，保持温度，使蜡液不凝固，不沸腾；
(5)、将打好孔的圆纸片浸于培养皿的蜡液中，充分浸透，并排其表面小气泡；
(6)、用小镊子将充分浸透蜡液的圆纸片取出，迅速放于清洗干净的载玻片正中位置；
(7)、将其上放有浸蜡圆纸片的载玻片放在恒温电热板上，在80℃-90℃温度下加热，至圆纸片与载玻片完全紧密接触，两者间无气泡后取下，放于水平台上，室温冷却；
(8)、向浸蜡圆纸片中间小圆中滴入2毫升浮载剂甘油，尽可能使其液滴成圆形；
(9)、将已脱水的菌丝及卵孢子移入(8)圆形液滴中，排列位置；
(10)、将(1)清洗干净的盖玻片盖于(8)浸蜡圆纸片正上方，整体放于恒温电热板上80℃-90℃加热，用挑针轻压盖玻片与载玻片紧密接触，至两者间无气泡为止；
(11)、将(10)中玻片取下放于水平台上室温冷却至蜡液凝固，封固盖玻片，贴标签，制作完成。