相关申请的交叉参考
[0001]本申请要求2005年8月8日提交的美国专利申请序列号 11/199,350的优先权，后者是2004年2月9日提交的美国专利申请序 列号10/774,781的部分继续申请并要求其优先权，其要求保护2005 年2月9日提交的PCT申请号PCT/US05/04274的权益，其公开内容 通过引用结合到本文中。
发明背景
发明领域
[0002]本发明一般涉及用于改善动物关节健康的组合物和方法， 特别是涉及含硫氨基酸和锰减少动物关节异常的用途。
现有技术的说明
[0003]事实上所有关节都具有软骨。软骨在动物体内很重要，提 供柔韧性、受压压缩性、缓冲性、拉伸强度、运动范围和关节内活动 的光滑度。具有软骨的关节实例包括手指和脚趾、颈、膝、髋、肩等。 动物可罹患其中软骨受负面影响的多种疾病，从而导致关节柔韧性、 压缩性下降，通常引起关节和/或关节周围组织的广泛炎症。然后此类 动物的关节功能明显丧失，出现疼痛。
[0004]授予Henderson的美国专利号5,587,363提出用于保护、 治疗和修复人和动物结缔组织的组合物以及通过给予该组合物治疗 人和动物结缔组织的方法。所述组合物包括氨基糖和糖胺聚糖。授予 Henderson的美国专利号6,255,295提出用于保护、治疗和修复和减轻 哺乳动物结缔组织的炎症的组合物以及通过给予该组合物保护、治疗 和修复哺乳动物结缔组织的方法。所述组合物包括至少两种选自s-腺 苷甲硫氨酸、氨基糖和氨基葡聚糖样化合物的化合物。所述组合物任 选包含锰，该组合物还任选包含甲基供体和甲基供体辅因子。授予 Henderson的美国专利号6,271,213提出用于保护、治疗和修复和减轻 哺乳动物结缔组织的炎症的组合物以及通过给予该组合物保护、治疗 和修复哺乳动物结缔组织的方法。所述组合物包括至少两种选自s-腺 苷甲硫氨酸、氨基糖和氨基葡聚糖样化合物的化合物。所述组合物任 选包含锰，该组合物还任选包含甲基供体和甲基供体辅因子。授予Pak 的美国专利号5,952,367提出治疗由肌腱炎、关节炎等所致疼痛的方 法，所述方法包括给予有效量的非甾体抗炎药和联合摄入一定量的甲 硫氨酸和糖。
[0005]Kroger等(1999)色氨酸加甲硫氨酸-5-Azazytidine和甲氨蝶 呤对大鼠佐剂性关节炎的作用(the Effect of Tryptophan plus Methionine-5-Azazytidine and Methotrexate on Adjuvant Arthritis of Rat)； Gen.Pharm.33：195-201报道单纯用色氨酸和甲硫氨酸联合治疗刺激 关节炎反应。然而，用两种药物5-azazytidine和甲氨蝶呤联合色氨酸 和甲硫氨酸治疗明显减少佐剂性关节炎的发生，这种作用比单独用 5-azazytidine或甲氨蝶呤都强。健康保健研究和质量所(Agency for Health Care Research and Quality)(2002)证据报告技术评估第64期 (Evidence Report Technology Assessment No.64)报道已经在文献鉴定 的研究，所述研究包括对S-腺苷酰-L甲硫氨酸(SAMe)减轻骨关节炎 疼痛功效的meta分析。结果显示与非甾体抗炎药相比，用SAMe治 疗的效果无统计学显著性差异。然而，一项随机临床试验显示与安慰 剂相比有利于SAMe的有效大小为0.20，由此提示骨关节炎疼痛的减 轻。Johnston(1997)，Orthoarthritis.Veterinary Clinics of North America； Small Animal Practice 27：699-720报道骨关节炎是滑膜关节的缓慢进 展性疾病，影响约20％1岁以上犬类。这种关节疾病的特征在于关节 软骨组分合成与降解之间平衡的丧失，导致后来关节软骨的侵蚀、底 层骨重塑、骨赘形成和不同程度滑膜炎。Martinez等(1997)Acquired conditions that lead to osteoarthritis in a dog(导致犬骨关节炎的获得性 疾病).Veterinary Clinics of North America：Small Animal Practice； 27：759-775报道在伴侣动物中继发性骨关节炎的一些最常见原因是前 交叉韧带断裂、分离性骨软骨炎、冠状突碎裂和髋关节发育异常。软 骨侵袭性疾病的其它实例包括但不限于骨软骨炎、滑膜炎、细菌性化 脓性关节炎、银屑病骨关节病(osteoarthropathia psoriatica)、软骨下囊 性病变、physitis、成角肢畸形和立方骨畸形。
[0006]多数大型犬衰老时都出现关节炎。怀孕的大型犬更容易患 关节炎，因为它们体重增加和/或遗传倾向。大型犬不是面临关节炎及 其它软骨疾病危险的唯一动物。Hardie等(2002)Radiographic evidence of degenerative joint disease in geriatric cats(老年大鼠退行性关节病的 放射线证据).JAVMA 220(5)：628-632报道关节炎及其它退行性关节病 常见于犬类，已显示此类疾病在猫类流行。面临发生软骨侵袭性疾病 的其它动物包括但不限于哺乳动物如犬、猫、马、hicrine、羊、猪、 牛、人和非人灵长类，和禽类包括火鸡和鸡。
[0007]减轻动物软骨异常的已知方法功效有限。因此，需要一种 治疗、预防或改善动物此类疾病的新方法和组合物。
发明概述
[0008]本发明提供改善关节健康的组合物和方法。因此，各种实 施方案提供减轻动物软骨异常的方法，包括给予动物有效量的至少一 种含硫氨基酸和锰的组合。
[0009]各种实施方案提供预防动物软骨组织退化的方法，包括给 予动物有效量的至少一种含硫氨基酸和锰的组合。
[0010]各种实施方案提供适合全身性给予动物的组合物，所述组 合物包含有效减轻软骨异常或预防软骨异常的量的至少一种含硫氨 基酸和锰的组合。各种实施方案提供包含有效改善动物关节健康的量 的至少一种含硫氨基酸和锰的组合的食物。
[0011]从下文提供的详细描述将清楚各种实施方案的其它适用 范围。
发明详述
[0012]各种实施方案提供改善动物、特别是伴侣动物如犬和猫的 关节健康的组合物和方法。具体实施例的描述虽然提示各种实施方 案，但只用于说明的目的，并不限制各种实施方案的范围。而且，对 所述特征的多种实施方案的叙述不排除具有附加特征的其它实施方 案，或者包括所述特征不同组合的其它实施方案。
[0013]本申请引用的所有文献和类似材料，包括但不限于专利、 专利申请、文章、书籍、论文和互联网页，无论此类文献和类似材料 的形式如何，都出于法律允许范围内的任何目的特意通过引用结合到 本文中。在一种或多种结合的文献和类似材料与本申请(包括但不限于 限定的术语、术语用途、描述的技术等)不同或矛盾的情况下，以本申 请为主。
[0014]软骨由不断分解和替换的活体组织组成。然而，关节损伤、 应力和衰老过程可伤害软骨组织，通常无任何明显信号，直至已经出 现大量损伤。软骨是由65％-80％水组成的物质。其余部分由三种其它 组分(骨胶原、软骨细胞和蛋白聚糖)组成。骨胶原给予软骨减震和弹 性，而蛋白聚糖是给予软骨在活动时拉伸然后回弹的能力的大分子。 然而，如所有事物一样，骨胶原和蛋白聚糖老化。软骨细胞清除老化 的和产生新的蛋白聚糖和骨胶原。这些组分与水一起作用，保证软骨 健康、光滑和关节活动时无疼痛。当任何一种这些组分减少时，软骨 可退化，将开始出现骨关节炎。
[0015]骨关节炎主要累及关节软骨，沿关节内骨排列的光滑闪光 表面。软骨的功能是在关节滑动时提供震动吸收和减少摩擦。骨关节 炎使软骨变薄和受损，这样将分解变得粗糙和腐蚀。当关节一侧不止 与另一侧碰撞时，骨蹭在一起和变形，进一步损伤软骨和骨。当丧失 大量软骨时，使用受累关节或甚至静止时也可出现严重疼痛。
[0016]已经尝试用各种物质改善上文描述的此类疾病。此类尝试 包括用葡糖胺、软骨素和硫酸软骨素补充剂治疗关节炎。葡糖胺是蛋 白聚糖组分，维持软骨中的液体。软骨素是另一种蛋白聚糖组分。青 边贻贝提取物(Perna canaliculata)是糖胺聚糖(GAG)的丰富来源。不幸 的是，经口摄入这些GAG时吸收差。虽然青边贻贝提取物(Perna)可 有利于治疗关节炎，但从其天然抗炎作用观察到的优点可能大于糖胺 聚糖的直接吸收。肌酸在葡萄糖向肌肉能量的转化中发挥重要作用， 可具有改善肌肉强度和使老年动物感觉更有活力的价值。甲磺酰甲烷 (MSM)具有抗炎作用，其减慢关节炎的进展和缓解疼痛，当然，不仅 用于人还可用于治疗非人动物的其它药物包括阿司匹林、抗炎药如布 洛芬、COX-2抑制剂及其它医学和药用组合物。
[0017]在各种实施方案中，改善、治疗、预防和/或缓解上述疾 病的组合物和方法包括给予动物至少一种含硫氨基酸和锰的组合。
[0018]术语“含硫氨基酸”指含硫氨基酸及其衍生物。术语“控 制软骨疾病”指改善、治疗、预防和/或缓解至少一种软骨侵袭性疾病 和/或为动物提供积极的软骨作用。术语“控制软骨疾病”包括预防动 物潜伏性软骨侵袭性疾病、易感倾向(无论是遗传性或对其它软骨受影 响的疾病易感)的方法，或者在动物存活期间任何时候作为预防措施强 化软骨，预防软骨异常，改善关节健康，减少随着年龄增长关节退化 的作用，或者预防关节炎或其它关节侵袭性疾病。积极的软骨作用的 实例包括增加柔韧性，修复损伤，减轻炎症，改善活动度，强化软骨， 减少异常和/或预防任何柔韧性和/或活动度下降，软骨虚弱和/或退化， 异常和/或损伤、炎症，或者软骨侵袭性疾病等。此类软骨侵袭性疾病 的实例包括骨关节炎、类风湿性关节炎、骨软骨炎、退行性关节病、 滑膜炎、细菌性化脓性关节炎、银屑病骨关节病等。
[0019]动物可以是人或非人类。在各种实施方案中，所述动物可 以是脊椎动物，例如鱼、鸟、爬行动物或哺乳动物。在哺乳动物中， 所述动物可以是一些食肉目动物，包括但不限于犬和猫科。在各种实 施方案中，所述动物可以是伴侣动物。本文的“伴侣动物”是由人看 护者作为宠物养活的任何种类的个体动物，或者已被广泛驯化为宠物 的不同种类的任何个体动物(包括犬(家犬)和猫(家猫))，无论所述个体 动物是否全部或部分用于陪伴。因此本文“伴侣动物”包括工作犬、 养来捕鼠的家猫等，以及宠物犬和猫。
[0020]尽管有这些各种实施方案，应理解所述方法也广泛适用于 其它哺乳动物，包括非人类哺乳动物如非人类灵长类(如猴、黑猩猩 等)、伴侣和工作动物(如马等)、家畜(如山羊、绵羊、猪、牛等)以及 野生和动物园动物(如狼、熊、鹿、狮、虎、长颈鹿、象等)。各种实 施方案也广泛适用于非哺乳动物的动物，如伴侣、农场、动物园和野 生鸟类(包括例如鸣鸟、鹦鹉、鸭、鹅、鸡、火鸡、鸵鸟等)。
[0021]用于本文的术语“膳食”指动物日常摄入的食物和饮料， 可包括由看护者提供的每日定粮。每日定粮可包括为动物提供足够营 养的任何合适的食物成分，例如典型的犬食组合物可包含约10-约30％ 脂肪、约22-约44％重量的蛋白质和约10％总膳食纤维。在另一个实 例中，典型的猫食组合物可包含约10-约30％重量脂肪和约30-约45％ 重量蛋白质。然而，这些或其它营养素的比值或百分数不需要特殊限 制。营养素是帮助生命支持的任何食物组分。以下是对伴侣动物的健 康具有重要作用的营养素实例：
表1
动物膳食的代表性组分
蛋白质 机体组织如肌肉、血液、皮肤、器官、毛发和指甲的 主要成分。 碳水化合物 为机体组织提供能量。 脂肪 脂肪吸收，贮存和转运维生素，滋润皮肤和皮毛，使
健康的宠物食物可口并供应能量。 水 最关键的生存营养素。 维生素 帮助维持动物代谢。 矿物质 为皮肤和毛发健康、正确的骨骼支持和发育所必需。 宠物食物成分通常含丰富的矿物质。
[0022]在各种实施方案中，可将含硫氨基酸和锰通过多种方式如 口服、胃肠外等的至少一种(但优选口服)给予动物，优选给予需要这 样给药的动物。在各种实施方案中，可将含硫氨基酸和锰以湿或干的 食物组合物给予，例如通过喷洒或沉淀于其上而加入到其中或在任何 食物组分的表面。在各种实施方案中，膳食内的含硫氨基酸和锰可采 用点心、补充剂、犒赏零食(treats)或液体部分膳食如水或另一种液体 的方式。在各种实施方案中，给予的含硫氨基酸和锰可呈粉末、固体 或液体(包括凝胶)。在各种实施方案中，可口服给予如胶囊剂、片剂、 锭剂(caplet)、注射剂等的药用剂型的含硫氨基酸和锰，采用此类剂型 时，含硫氨基酸和锰可作为粉末或液体如凝胶存在。与含硫氨基酸和 锰一起可使用任何常用药用载体，如水、葡萄糖、蔗糖等。在各种实 施方案中，可将含硫氨基酸和锰在液体中提供，或在如胶囊剂、片剂、 丸剂、液体或甚至通过注射器胃肠外给药的药用剂型中提供。虽然一 起举例说明，但可单独给予含硫氨基酸和锰，也就是说例如一种为食 物组合物，一种为液体或单位剂量形式。通常，应至少同时、优选以 相同载体给予含硫氨基酸和锰。重要方面是为动物提供有效量的含硫 氨基酸和锰，以提供积极的软骨作用。积极的软骨作用可包括以下的 一种或多种：增加柔韧性、修复损害、减轻炎症、改善活动度、强化 软骨、减少异常和/或预防任何柔韧性和/或活动度的下降、软骨虚弱 和/或退化、异常和/或损害、炎症，或软骨侵袭性疾病等。优选的给 药途径是口服并与适合动物摄入的食物合并。
[0023]当在食物中给予时，可将含硫氨基酸和锰作为组合物给 予。例如，此类组合物可以是食物组合物、补充剂、犒赏零食或玩具， 要注意一些(并非所有)补充剂、犒赏零食和玩具本身就是食物组合物。 通过喂养将食物组合物给予动物。当动物是伴侣动物时，食物组合物 通常是在营养上适合喂养此类动物的食物组合物。在本文将这样适合 的食物组合物称为“宠物食物”。宠物食物可更特别适合犬或猫，或 其某些亚群如大型杂交犬、成年犬或猫、高级犬或猫、老龄犬或猫等 的特殊营养需求。
[0024]在各种实施方案中，含有含硫氨基酸和锰的食物组合物为 预期受体动物提供基本营养全面的膳食。“营养全面的膳食”是包含 足够营养素以便在膳食方面维持健康动物的正常健康的膳食。
[0025]在各种实施方案中，含有含硫氨基酸和锰的食物组合物可 以是补充剂，也就是与另一种食物组合物使用作为整体以改善膳食营 养平衡或性能的补充剂。此类补充剂包括作为其它食物的补充剂未稀 释地喂养的组合物，可自由选择可以单独给予动物的动物每日定粮的 其它部分，或者与动物的正式食物稀释和混合得到基本营养全面的膳 食的组合物。或者补充剂可采用非食物组合物的形式，如药物样剂型 包括例如散剂、液体、糖浆剂、胶囊剂、片剂、丸剂等。
[0026]在各种实施方案中，包含有效量含硫氨基酸和锰的补充剂 还包含有效量的至少一种选自葡糖胺、软骨素、硫酸软骨素、MSM、 肌酸、抗氧化剂、青边贻贝提取物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸及其混 合物的物质。在各种实施方案中，包含有效量的含硫氨基酸和锰的补 充剂还包含有效量的至少一种选自阿司匹林、抗炎剂如布洛芬、COX-2 抑制剂及其它医学和药用组合物的物质。在各种实施方案中，包含有 效量含硫氨基酸和锰的补充剂还包含有效量的至少一种甘氨酸和脯 氨酸。
[0027]在各种实施方案中，含有含硫氨基酸和锰的食物组合物可 以是犒赏零食。犒赏零食包括如作为奖品给予动物或者诱使动物在非 进餐时间进食的组合物。具有至少一些营养价值的食物组合物的犬用 犒赏零食包括如狗饲饼干。或者犒赏零食可以基本无营养(除非可将其 中的含硫氨基酸和锰视为营养素)。含有含硫氨基酸和锰的组合物可自 身形成犒赏零食、涂在现有犒赏零食上，或者二者兼而有之。
[0028]在各种实施方案中，含有含硫氨基酸和锰的组合物可以是 适合动物经口使用的玩具。玩具包括例如可咀嚼的玩具，如犬用人造 骨。含有含硫氨基酸和锰的组合物可在玩具表面或在玩具部件表面形 成涂层，部分掺入玩具中或者为整个玩具，或者二者兼而有之。目前 市场上有多种合适的玩具，包括可部分消耗的玩具(如含塑料部件的玩 具)和可完全消耗的玩具(如生皮和各种人造骨)。有供人和非人使用的 玩具，特别是供伴侣、农场和动物园动物使用，更特别是供狗、猫或 鸟使用。
[0029]各种含硫氨基酸及其衍生物都适用于各种实施方案，这些 氨基酸及其衍生物包括但不限于D-甲硫氨酸、L-甲硫氨酸、DL-甲硫 氨酸、D-半胱氨酸、L-半胱氨酸、DL-半胱氨酸、D-胱氨酸、L-胱氨 酸、DL-胱氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、甲硫氨酸的α和β-羟基类似物、 其外消旋混合物及所述氨基酸的混合物等。在各种实施方案中，提供 给动物的含硫氨基酸可以是其本身，或者可天然存在于膳食材料中， 如鱼粉、玉米麸质粉、禽肉粉、酪蛋白、甲硫氨酸锰(鳌合物)等。
[0030]可将各种形式的锰供应给动物，包括例如硫酸锰、氧化锰、 二氧化锰、碳酸锰、氯化锰、蛋白锰、鳌合锰、一氧化锰、甲硫氨酸 锰等。
[0031]在各种实施方案中，应当用在组合中产生效应的含硫氨基 酸和锰的量可有显著不同。在各种实施方案中，含硫氨基酸的最小量 为约1.2wt.％以上，优选约1.5wt.％以上，更优选约1.8wt.％以上。 在各种实施方案中，锰的最小量为约50ppm以上，优选约65ppm以 上，更优选约100ppm以上。在各种实施方案中，可在每日的基础上 将具体量的含硫氨基酸和锰在常用营养素食物定粮中给予，或者，可 在每日的基础上将犒赏零食或补充剂中的相同每日量给予动物。在各 种实施方案中，只要可提供有效量的含硫氨基酸和锰，可应用这些方 法或任何其它给药方式的组合。含硫氨基酸和锰的最大量是可视为安 全的最高量，如小于或等于含硫氨基酸或锰的LD50。基于相同的基 础计算，氨基酸的这样量的实例包括不超过约5.0wt.％、4.0wt.％和 3.0wt.％最小量。基于相同的基础计算，锰的这样量的实例包括不超 过约200ppm，优选不超过约175ppm，更优选不超过约150ppm最 小量。在各种实施方案中，包含有效量含硫氨基酸和锰的组合物还包 含有效量的至少一种选自下列的物质：葡糖胺、软骨素、硫酸软骨素、 MSM、肌酸、抗氧化剂、青边贻贝提取物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸 及其混合物。在各种实施方案中，包含有效量含硫氨基酸和锰的组合 物还包含有效量的至少一种选自下列的物质：阿司匹林、抗炎剂如布 洛芬、COX-2抑制剂及其它医学和药用组合物。在各种实施方案中， 包含有效量含硫氨基酸和锰的组合物还包含有效量的至少一种甘氨 酸和脯氨酸。在各种实施方案中，甘氨酸的最小量为约1.4％，优选约 1.6wt.％，更优选约2.0wt.％。在各种实施方案中，脯氨酸的最小量为 约1.45wt.％，优选约1.6wt.％，更优选约2.0wt.％。
[0032]在各种实施方案中，每日定粮包含含硫氨基酸和锰的有效 组合。在各种实施方案中，每日定粮包含至少约3.5g/Mcal含硫氨基 酸。在各种实施方案中，每日定粮包含至少约50ppm/Mcal锰。在一 些实施方案中，每日定粮包含至少约3.5g/Mcal含硫酸和至少约50 ppm/Mcal锰。在各种实施方案中，包含有效量含硫酸和锰的每日定粮 还包含有效量的至少一种甘氨酸和脯氨酸。在各种实施方案中，每日 定粮包含至少约4.0g/Mcal甘氨酸。在各种实施方案中，每日定粮包 含至少约4.0g/Mcal脯氨酸。在各种实施方案中，每日定粮包含至少 约4.0g/Mcal甘氨酸和至少约4.0g/Mcal脯氨酸。在各种实施方案中， 包含有效量含硫氨基酸和锰的每日定粮还包含有效量的至少一种选 自下列的物质：葡糖胺、软骨素、硫酸软骨素、MSM、肌酸、抗氧化 剂、青边贻贝提取物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸及其混合物。在各种 实施方案中，包含有效量含硫氨基酸和锰的每日定粮还包含有效量的 至少一种选自下列的物质：阿司匹林、抗炎剂如布洛芬、COX-2抑制 剂及其它医学和药用组合物。
[0033]各种实施方案包括改善动物软骨的方法。在各种实施方案 中，所述方法包括每天用食物组合物喂养动物，基于干燥品计算，所 述食物组合物包含至少约1.2wt.％量的含硫氨基酸和至少约50ppm 量的锰。在各种实施方案中，所述方法包括每天用食物组合物喂养动 物，基于干燥品计算，所述食物组合物包含至少约1.8wt.％量的含硫 氨基酸和至少约100ppm量的锰。在各种实施方案中，所述方法包括 每天用食物组合物喂养动物，基于干燥品计算，所述食物组合物包含 至少约1.2wt.％-3.6wt.％量的含硫氨基酸和至少约50ppm-约200ppm 量的锰。在各种实施方案中，所述方法包括用包含有效量的含硫氨基 酸和锰的食物组合物喂养动物，所述食物组合物还包含有效量的至少 一种甘氨酸和脯氨酸。在各种实施方案中，甘氨酸的最小量为约1.4％， 优选约1.6wt.％，更优选约2.0wt.％。在各种实施方案中，食物组合 物包含有效量含硫氨基酸和锰，还包含有效量的至少一种选自下列的 物质：葡糖胺、软骨素、硫酸软骨素、MSM、肌酸、抗氧化剂、青边 贻贝提取物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸及其混合物。在各种实施方案 中，包含有效量含硫氨基酸和锰的食物组合物还包含有效量的至少一 种选自下列的物质：阿司匹林、抗炎剂如布洛芬、COX-2抑制剂及其 它医学和药用组合物。
[0034]在各种实施方案中，所述方法包括用包含有效量含硫氨基 酸和锰的每日定粮喂养动物。在各种实施方案中，可将有效量的含硫 氨基酸和锰通过混料机或制造商原地或者由动物饲养员作为补充剂 加入每日定粮内。在各种实施方案中，每日定粮包含至少约3.5g/Mcal 含硫氨基酸。在各种实施方案中，每日定粮包含至少约50ppm/Mcal 锰。在一些实施方案中，每日定粮包含至少约3.5g/Mcal含硫酸和至 少约50ppm/Mcal锰。在各种实施方案中，每日定粮包含有效量的含 硫酸和锰，还包含有效量的至少一种甘氨酸和脯氨酸。在各种实施方 案中，每日定粮包含至少约4.0g/Mcal甘氨酸。在各种实施方案中， 每日定粮包含至少约4.0g/Mcal脯氨酸。在各种实施方案中，每日定 粮包含至少约4.0g/Mcal甘氨酸和至少约4.0g/Mcal脯氨酸。在各种 实施方案中，每日定粮包含有效量的含硫氨基酸和锰，还包含有效量 的至少一种选自下列的物质：葡糖胺、软骨素、硫酸软骨素、MSM、 肌酸、抗氧化剂、青边贻贝提取物、ω-e脂肪酸、ω-6脂肪酸及其混 合物。在各种实施方案中，包含有效量含硫氨基酸和锰的每日定粮还 包含有效量的至少一种选自下列的物质：阿司匹林、抗炎剂如布洛芬、 COX-2抑制剂及其它医学和药用组合物。
[0035]在各种实施方案中，每日定粮包含改善伴侣动物关节健康 的增加的含硫氨基酸和锰。在各种实施方案中，将含硫氨基酸和锰加 入动物食物中。在各种实施方案中，可将含硫氨基酸和锰通过混料机 或制造商原位加入动物食物内，或者在喂养动物前由动物饲养员加入 动物食物内。在此类实施方案中，可在加工动物食物时加入锰和含硫 氨基酸，然后将动物食物包装，供消费者使用。此类加工可包括挤压、 罐装、烘焙等或本领域已知可制备宠物食物的任何其它方法或加工过 程。在各种实施方案中，含硫氨基酸和锰可由天然来源如动物或植物 组分提供，或者含硫氨基酸和锰可由合成衍生的来源提供，或者含硫 氨基酸和锰可由天然和合成来源的混合物提供。
[0036]在制备例示性罐装或潮湿的食物组合物时，使研磨的动物 和家禽蛋白质组织与其它成分混合，包括鱼油粉、谷物、其它营养平 衡成分、特殊目的添加剂(如维生素和矿物质混合物、无机盐、纤维素 和甜菜汁、膨松剂等)；还加入足够加工量的水。可将这些成分在适合 加热的容器内混合，同时混合各组分。可将混合物以任何合适的方式 加热，例如通过直接蒸汽注射或者通过用配备热交换器的容器加热。 加入最后一种成分后，将混合物加热至约50℉-约212℉范围，如约 70℉-约140℉。虽然通常可以接受这些范围之外的温度，但不使用其 它加工助剂可能在商业上不实用。当加热至适当温度时，原料将通常 呈浓稠液体形式。将浓稠液体装入罐内。盖上盖子，将容器密闭地密 封。然后将密封罐置于设计用来消毒内容物的常规仪器内。这通常通 过加热至大于约230℉一段适当的时间完成，所述时间取决于例如所 用温度和组合物。
[0037]或者可用常规方法制备干形食物组合物。通常将包括例如 动物蛋白、植物蛋白、谷物等的干成分研磨和混合在一起。然后加入 潮湿或液体成分(包括脂肪、油、动物蛋白、水等)与干混合物混合。 接着将混合物加工成粗粉或类似的干燥种类。通常用挤压法形成粗 粉，其中在高压和高温下对干燥和潮湿成分的混合物进行机械加工， 压迫穿过小开口，用旋转刀切成粗粉。然后将潮湿的粗粉干燥，任选 用一种或多种表面涂层包衣，所述涂层可包括例如香料、脂肪、油脂、 粉末等。也可用烘焙法而不是挤压法用生面团制备粗粉，其中在干燥 加热加工之前将生面团置于模具内。
[0038]可通过例如上文关于干燥食物组合物描述的那些类似的 挤压或烘焙法制备犒赏零食。也可用其它方法将含有含硫氨基酸和锰 的组合物涂在现有犒赏零食形式的外表，或者注入现有犒赏零食形式 内。例如可通过用含有含硫氨基酸和锰的组合物涂布现有玩具制备本 文使用的玩具。
[0039]在各种实施方案中，可将有效量的含硫氨基酸和锰给予动 物。在各种实施方案中，含硫氨基酸和锰可采用将喂给动物的胶囊剂 形式。在各种实施方案中，有效量的含硫氨基酸和锰可以是散剂或晶 体，其可加入动物食物中或者直接喂给动物。在各种实施方案中，含 硫氨基酸和锰可以是加入动物食物或每日定粮中的补充剂。此类补充 剂包括作为其它食物的补充剂未稀释地喂养的组合物(可自由选择分 开给予动物的动物每日定粮的其它部分)，或者与动物的日常食物稀释 和混合得到基本营养全面的膳食。或者补充剂可采用非食物组合物的 形式，例如药物样剂型，包括如散剂、液体、糖浆剂、胶囊剂、片剂、 丸剂等。
[0040]在各种实施方案中，包含有效量含硫氨基酸和锰的补充剂 还包含有效量的至少一种选自下列的物质：葡糖胺、软骨素、硫酸软 骨素、MSM、肌酸、抗氧化剂、青边贻贝提取物、ω-3脂肪酸、ω-6 脂肪酸及其混合物。在各种实施方案中，包含有效量含硫氨基酸和锰 的补充剂还包含有效量的至少一种选自下列的物质：阿司匹林、抗炎 剂如布洛芬、COX-2抑制剂及其它医学和药用组合物。在各种实施方 案中，包含有效量含硫氨基酸和锰的补充剂还包含有效量的至少一种 甘氨酸和脯氨酸。在各种实施方案中，动物食物组合物包含有效量的 含硫氨基酸和锰及其它需要的营养组分。在各种实施方案中，可通过 注射器给予动物有效量的含硫氨基酸和锰。在各种实施方案中，剂量 包含至少约3.5g/Mcal含硫氨基酸。在各种实施方案中，剂量包含至 少约50ppm/Mcal锰。在一些实施方案中，剂量包含至少约3.5g/Mcal 含硫氨基酸和至少约50ppm/Mcal锰。
[0041]在各种实施方案中，包含有效量含硫酸和锰的剂量还包含 有效量的至少一种甘氨酸和脯氨酸。在一些实施方案中，剂量包含至 少约4.0g/Mcal甘氨酸。在各种实施方案中，剂量包含至少约4.0 g/Mcal脯氨酸。在一些实施方案中，剂量包含至少约4.0g/Mcal甘氨 酸和至少约4.0g/Mcal脯氨酸。在各种实施方案中，包含有效量含硫 氨基酸和锰的剂量还包含有效量的至少一种选自下列的物质：葡糖 胺、软骨素、硫酸软骨素、MSM、肌酸、抗氧化剂、青边贻贝提取物、 ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸及其混合物。在各种实施方案中，包含有效 量含硫氨基酸和锰的剂量还包含有效量的至少一种选自下列的物质： 阿司匹林、抗炎剂如布洛芬、COX-2抑制剂及其它医学和药用组合物。
[0042]衡量软骨健康的一种方法是在软骨上观察到异常的量。其 它观察软骨异常的方法包括MRI、计算机断层摄影和X线摄影。异常 的数量越高，整个关节削弱越严重，使其更容易患病或现有疾病更容 易恶化。这些疾病包括关节炎(骨关节炎和类风湿性关节炎)、骨软骨 炎、退行性关节病、滑膜炎、细菌性化脓性关节炎、骨关节病和银屑 病等。目测的软骨异常包括广泛损伤、侵蚀和异常生长。
[0043]另一方面，本发明提供传达有关改善或减轻动物软骨异常 或预防软骨退化的信息或指示的媒体。传达媒体包括包含所述信息或 指示的文件、数字储存媒介、光学储存媒介、音频陈述或视频显示。 优选传达系统是含有此类信息或指示的显示网站或小册子、产品标 签、包装插页、广告或视频显示。有用的信息包括一种或多种(1)给予 本发明的组合物和使用本发明方法的方法和技术，(2)关于本发明单独 或与其他药物联合使用所致副作用(如果有的话)的细节，和(3)如果使 用的患者产生关于本发明及其用途的问题时的联系方式。有用的指示 包括剂量、给药量和频率以及给药途径。传达媒体有助于介绍使用本 发明的优点以及传达经批准的使用本发明的方法。
[0044]术语“单个包装”指药剂盒的各组分在一个或多个容器内 物理地混合，并被视为制造、分配、销售或使用的单位。容器包括但 不限于袋、盒、瓶、收缩包装膜、吻合器(stapled)或其它固定组分， 或者其组合。单个包装可以是各种食物成分物理地混合在一起的容 器，以便可将它们视为制造、分配、销售或使用的单位。术语“虚拟 包装”指药剂盒的组分按照关于一种或多种物理或虚拟药剂盒的说明 书混合，所述说明书指示使用者如何获得其它组分，如在装有一种组 分的袋中，指示使用者到网站、接收记录的讯息、看视频讯息或者接 触饲养员或者指导者以获得如何使用药剂盒的说明。
[0045]在又一方面，本发明提供适合用于改善或减轻动物软骨异 常或预防软骨退化的药剂盒。药剂盒包括在单个包装内的各独立容器 或者虚拟包装内的各独立容器中的合适的药剂盒组分，第一种药剂盒 组分包含至少一种含硫氨基酸或锰，而第二种药剂盒组分包含至少一 种(1)含硫氨基酸(当含硫氨基酸不是第一种药剂盒组分时)、(2)锰(当锰 不是第一种药剂盒组分时)、(3)不同的含硫氨基酸、(4)适合动物摄入 的食物、(5)至少一种选自葡糖胺、软骨素、硫酸软骨素、MSM、肌 酸、抗氧化剂、青边贻贝提取物、ω-3脂肪酸、ω-6脂肪酸及其混合 物的物质，和(6)传达关于在动物中控制软骨侵袭性疾病、增加软骨柔 韧性、增加软骨强度或预防软骨退化的信息或指示的媒体。
[0046]在其它实施方案中，药剂盒还包括一种或多种用于控制软 骨侵袭性疾病、增加软骨柔韧性、增加软骨强度或预防软骨退化的药 物，例如有效量的至少一种选自阿司匹林、抗炎化合物如布洛芬、 COX-2抑制剂的物质和有效量的至少一种含硫氨基酸和锰。
[0047]药剂盒组分通常是独立包装，在一种其它药剂盒组分的包 装中或之上，或者在虚拟包装中，视药剂盒组分类型而定。当药剂盒 包含虚拟包装时，该药剂盒只限于与一种或多种其它物理药剂盒组分 联合的虚拟环境的介绍。
[0048]在又一方面，本发明提供包含至少一种含硫氨基酸和锰的 组合的组合物在制备药物中的用途。在另一方面，本发明提供此类组 合物在制备药物中的用途，所述药物用于减少动物的软骨异常或预防 软骨退化。通常，如下制备药物：使化合物或组合物与赋形剂、缓冲 剂、粘合剂、增塑剂、着色剂、稀释剂、压缩剂、润滑剂、调味剂、 湿润剂及本领域技术人员已知可用于制备药物的其它成分混合，配制 适合给予动物的药物。
[0049]本发明不限于本文描述的具体方法、方案和试剂，因为它 们可变化。而且，本文所用术语只用于描述具体实施方案，并非限制 本发明的范围。除非上下文清楚指明，否则在本文和附属权利要求书 使用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数对照。同样，将单词 “包含(comprise)”、“含有(comprises)”和“包括(comprising)”解释 为包括在内而非排除其它。
[0050]除非另外限定，否则本文所用全部技术和科学术语及任何 缩写具有本发明普通领域技术人员通常理解的相同含义。虽然与本文 所述相似或等同的任何组合物、方法、制造产品或其它方式或材料都 可用于实施本发明，但优选本文描述的组合物、方法、制造产品或其 它方式或材料。
[0051]本文引用或参考的所有专利、专利申请书、说明书及其它 参考文献都通过法律允许范围内的引用结合到本文中。那些参考文献 的讨论只用于概述其中提出的主张。对本发明而言，并非承认任何此 类专利、专利申请、出版物或参考文献或其任何部分是有关的现有技 术，尤其保留对此类专利、专利申请、出版物及其它参考文献的精确 性和恰当性提出疑问的权利。
实施例
[0052]通过下列实施例可进一步解释本发明，但应理解除非另外 特别指出，否则包括的这些实施例只用于解释的目的，并非意欲限制 本发明的范围。
实施例1
[0053]用生长猪(80实验单位)作为测试模型以确定甲硫氨酸和 锰对软骨异常的作用。猪最初为约35kg。将每只猪分别圈养在5.2ft2 围栏中，无限制地供应食物和水。用待测食物喂养猪60天，使终体 重接近约130kg。
[0054]在猪肉加工点，收集右股骨远端，评估肉眼损害(gross lesions)以及组织病理学鉴定。将右股骨远端保存在甲醛中，贮存在室 温下肉眼观察(gross observation)。通过关节表面出现损害的总数评估 关节(包括临床损害、软骨侵蚀和异常生长方式)。通过组织病理学鉴 定证实肉眼损害。从内股骨髁的腹侧承重段取组织切片。在2×和10× 显微照片上评估测量，确定细胞计数，证实软骨下骨内软骨的损害。
表2
实验食物组合物
对照 样品1 样品2 样品3 玉米 71.00 78.50 71.00 71.00 大豆粉 18.70 3.35 18.70 18.70 玉米淀粉 3.78 3.00 2.52 2.48 Ch白色油脂 3.00 1.00 3.00 3.00 dical 1.97 1.13 1.98 2.03 石灰石 0.62 0.28 0.77 0.74 盐 0.43 0.31 0.55 0.55 L-赖氨酸 0.15 0.08 0.15 0.15 维生素预混料 0.10 0.10 0.10 0.10 胆碱 0.10 0.10 0.10 0.10 TM预混料 0.10 0.10 0.10 0.10 硫酸锰 0.02 0.02 色氨酸 0.03 禽肉粉 12.00 DL-甲硫氨酸 0.04 1.03 1.03 总计 100 100 100 100 100％DM计 ME，Kcal/kg 3604 3634 3604 3604 Ca.％ 0.86 0.85 0.86 0.86 P，％ 0.74 0.74 0.74 0.74 Na，％ 0.22 0.22 0.22 0.22 Lys，％ 0.97 0.96 0.97 0.97 TSAA，％ 0.58 0.60 1.71 1.71 Trp，％ 0.20 0.20 0.20 0.20 Thr，％ 0.66 0.70 0.66 0.66 Iso，％ 0.65 0.65 0.65 0.65 硫，ppm 1664 2229 4147 4238 锰，ppm 41.3 107.8 41.2 127.4
表3
实验食物-第1批的解析分析
对照 样品1 样品2 样品3 粗蛋白 17.32 18.34 16.63 16.93 脂肪 7.76 7.58 7.46 7.42 纤维 2.05 1.73 2.23 2.37 甲硫氨酸+胱氨酸 锰 0.70 0.72 1.51 1.78 46.4 81.2 43.4 310.0
表4
实验食物-第2批的解析分析
对照 样品1 样品2 样品3 粗蛋白 17.38 18.43 19.30 17.94 脂肪 6.83 7.89 7.54 7.46 纤维 2.91 1.82 2.47 2.22 甲硫氨酸+胱氨酸 0.68 0.78 1.61 1.56 锰 41.8 96.8 42.2 110.1
表5
营养素对软骨异常的作用
对照 样品1 样品2 样品3 总损害 2.38 2.25 1.38 0.88
[0055]如数据显示，增加的含硫氨基酸甲硫氨酸和胱氨酸与锰的 组合在统计学上可减轻软骨异常肉眼可见的异常(如损伤或侵蚀)的数 目，如样品3显示。组合的作用大于单独甲硫氨酸和胱氨酸的作用， 单独的锰基本无作用。样品1的锰含量高，但含硫氨基酸与对照大致 相同。样品2的含硫氨基酸高，但锰与对照大致相同。
实施例2
[0056]用生长猪(80实验单位)作为测试模型以确定甲硫氨酸和 锰对软骨异常的作用。猪最初为约35kg。将每只猪分别圈养在5.2ft2 围栏中，无限制地供应食物和水。用待测食物喂养猪90天，使终体 重接近约130kg。
表6
GAGS、甲硫氨酸、锰、甘氨酸和脯氨酸对生长猪的软骨退化的作用
A.软骨构造单元对血清基质金属蛋白酶和抑制剂浓度的作用
GAGS 无 有 无 无 无 无 无 有 甲硫氨酸 0.30 0.34 1.43 0.30 0.30 0.30 1.43 1.38 锰 41 108 128 41 41 41 128 127 甘氨酸 0.79 1.29 0.78 1.68 1.68 2.58 1.68 1.68 脯氨酸 1.14 1.29 1.14 1.69 2.23 1.69 1.69 1.68 CV 酶，mg/dl MMP-3 4.65 3.98 5.43 6.61*** 5.15 4.61 4.97 4.50 45.67 MMP-8 MMP-13 2.29 0.34* 0.28* 1.38 0.49* 0.53* 0.62*** 0.70*** 238.86
*对照对比处理，(P＜.05)
**对照对比处理，(P＜.01)
***对照对比处理，(P＜.10)
B.软骨构造单元对骨胶原合成的作用
GAGS 无 有 无 无 无 无 无 有 甲硫氨酸 0.30 0.34 1.43 0.30 0.30 0.30 1.43 1.38 锰 41 108 128 41 41 41 128 127 甘氨酸 0.79 1.29 0.78 1.68 1.68 2.58 1.68 1.68 脯氨酸 1.14 1.29 1.14 1.69 2.23 1.69 1.69 1.68 CV 项目 II型骨胶原 120.43 111.62 89.76* 105.49 88.66* 118.38 91.34* 103.7 29.3 CP2 730.78 764.03 687.02 733.99 704.09 726.14 724.31 707.08 15.5
*对照对比处理，(P＜.05)
**对照对比处理，(P＜.01)
***对照对比处理，(P＜.10)
C.软骨构造单元对软骨肉眼和组织病理学的作用
GAGS 无 有 无 无 无 无 无 有 甲硫氨酸 0.30 0.34 1.43 0.30 0.30 0.30 1.43 1.38 锰 41 108 128 41 41 41 128 127 甘氨酸 0.79 1.29 0.78 1.68 1.68 2.58 1.68 1.68 脯氨酸 1.14 1.29 1.14 1.69 2.23 1.69 1.69 1.68 CV 项目 肉眼损伤数 2.38 1.29 1.86 1.50 1.00* 1.75 1.17*** 1.89 98.97 厚度，mm 1.90 1.94 2.01 1.94 2.10 1.87 2.01 1.93 12.10
*对照对比处理，(P＜.05)
**对照对比处理，(P＜.01)
***对照对比处理，(P＜.10)
[0057]这些数据显示软骨退化减少，证据是MMP-13活性减少 和II型骨胶原合成减少(软骨修复减少)。结果是软骨损伤减少。
[0058]在90天时期结束时收集血清样品，测定基质金属蛋白酶 活性(MMP-13)和2型骨胶原合成活性。如以上数据显示，含硫氨基酸 和锰增加的组合通过改善酶MMP-13和2型骨胶原合成活性改善软 骨。
实施例3
[0059]评估2月至8月龄的猫的软骨健康。将猫分组，第1组喂 养对照食物，第2组喂养富含甘氨酸和脯氨酸的食物，第3组喂养富 含甲硫氨酸和锰的食物，第4组喂养富含甘氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸 和锰的食物。表7显示在本研究猫血清中测定的不同组分的数据。
表7
氨基酸和锰对猫的软骨健康的作用
TSAA 甘氨酸 Gly/Pro 项目 对照 Mn 脯氨酸 TSAA/Mn 甘氨酸/Mcal，g/Mcal 5.8 5.8 7.6 7.7 脯氨酸/Mcal，g/Mcal 5.1 5.0 6.6 6.6 甲硫氨/Mcal，g/Mcal 1.6 3.3 1.5 3.3 锰/Mcal，ppm/Mcal 4.11 33.13 4.13 33.09 D-pyrodinoline 6.87 5.60* 6.53 6.72 Pyrodinoline 3.85 3.51 3.65 3.38** NTx 10.66 10.35 11.46 11.7 CTx 13.11 12.67 13.02 10.54*** 骨钙蛋白 0.88 1.62** 1.92*** 1.51 骨特异性碱性磷酸酶 37.66 37.42 39.79 39.25
*处理与对照之间的差异，P＜.10
**处理与对照之间的差异，P＜.17
***处理与对照之间的差异，P＜.05
实施例4
[0060]表8的数据说明研究结果，显示可减少喂养甘氨酸、脯氨 酸、甲硫氨酸和锰的幼犬的软骨损伤。
表8
氨基酸和锰对犬软骨健康的作用
甘氨酸/脯氨酸 项目 对照 TSAA/Mn P-值 甘氨酸/Mcal，g/Mcal 5.1 6.0 脯氨酸/Mcal，g/Mcal 4.2 5.0 甲硫氨酸/Mcal，g/Mcal 1.3 3.5 锰/Mcal，ppm/Mcal 7.70 33.54 CTx 初始 17.78 14.84 0.31 最终 9.43 7.9 0.10 改变 -8.82 -6.95 从开始至结束改变的P值 0.01 0.01 II型骨胶原合成 初始 458 516 0.07 最终 445 409 0.38 改变 -13.5 -107 0.09 从开始至结束改变的P值 0.72 0.01 MMP-13 初始 0.6 0.44 0.47 最终 0.32 0.51 0.18 改变 -0.28 0.08 0.17 从开始至结束改变的P值 0.14 0.65
[0061]用词“包含”、“含有”和“包括”应理解为包括在内而 并非排除其它。除非另有说明，否则本文引用的所有百分数都是基于 干燥品计算的重量百分数。短语“基于干燥品计算”指除去组合物的 任何水份之后在组合物中的组分浓度。
[0062]本文描述的实施例及其它实施方案是例示性的，并非只限 于这些实施方案描述的装置、系统、组合物、材料和方法的全部范围。 可在结果基本相似的各种实施方案的范围内对具体实施方案、装置、 系统、组合物、材料和方法进行等同改变、修饰、变更。此类改变、 修饰或变更不应视为脱离各种实施方案的精神和范围。