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1、(10)授权公告号 CN 102526667 B (45)授权公告日 2013.07.24 CN 102526667 B *CN102526667B* (21)申请号 201210014642.8 (22)申请日 2012.01.10 201110079464.2 2011.03.31 CN A61K 36/9068(2006.01) A61P 1/08(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 31/122(2006.01) A61K 31/56(2006.01) (73)专利权人 青岛大学 地址 266071 山东省青岛市市南区宁夏路 308 号 (72)发明人 。
2、石振艳 岳旺 王双燕 倪贝贝 JP 2008307012 A,2008.12.25, 全文 . CN 101954022 A,2011.01.26, 全文 . 相延英 . 枇杷叶中熊果酸的醇提取工艺 . 医 药导报 .2005,第24卷(第2期),第144页-145 页 . 刘伟等 . 超声波萃取姜辣素工艺研究 .中 成药 .2007, 第 29 卷 ( 第 7 期 ), 第 1071-1073 页 . 王心慧等 . 生姜与辣椒提取物联合抗呕吐作 用研究 .医药导报 .2008, 第 27 卷 ( 第 3 期 ), 第 274-277 页 . (54) 发明名称 用于减少癌症化疗引起的呕吐并对。
3、化疗增效 的枇杷叶与生姜组合物及其制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种天然药物组合物、 其制备方 法及其在制备癌症化疗中减毒增效药物中的用 途， 该天然药物组合物由枇杷叶生姜水煎浓缩 提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与熊果酸按 3-8 1-5 3-9 1-3 的比例组成， 该组合物对 由癌症化疗引起的呕吐等副作用有极好的疗效并 能同时起到抑制肿瘤的作用。 (66)本国优先权数据 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 张桢 权利要求书 2 页 说明书 9 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书9页 (10)授权公告号 CN 1025。
4、26667 B CN 102526667 B *CN102526667B* 1/2 页 2 1. 一种减少癌症化疗引起的呕吐反应并对治疗癌症起增效作用的天然药物组合物， 其 特征在于该组合物由枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与熊果酸以 重量计按 3-8 1-5 3-9 1-3 的比例组成， 其中枇杷叶生姜水煎浓缩提取物的制备方法是 ： 按照配伍比例为1-101取枇杷叶、 生姜， 加10倍量蒸馏水， 浸泡1h， 于加石棉网的电 炉上加热煎煮20分钟， 绢布过滤， 保存滤液， 药渣再加6倍蒸馏水， 同法浸泡、 煎煮、 过滤， 将 两次滤液混合， 冷冻干燥得干浸膏， 粉碎， 过。
5、筛， 即得 ； 其中姜辣素的制备方法是 ： 将生姜切成薄片， 自然干燥， 用高速万能粉碎机打成粉末， 过 30 目筛， 再将过筛细粉放 入 5000mL 大磨口瓶中， 以 6 倍量丙酮常温下浸泡 72h ； 在 40， 40KHz 的超声波频率下超声 提取 15min， 离心得到上清液， 残渣弃去 ； 将上清液再减压抽滤， 滤液置于旋转蒸发仪中真 空浓缩得姜油状混合物， 再将该混合物进行多次浓缩干燥纯化得到姜辣素 ； 其中枇杷叶乙醇提取物的制备方法是 ： 将干燥的枇杷叶粉碎， 过20-40目筛， 加12倍量无水乙醇， 90下用索氏提取器回流提 取 3 次， 每次 10 小时， 合并溶剂并减压回。
6、收得浸膏， 干燥， 粉碎， 过筛， 即得 ； 其中熊果酸的制备方法是 ： 将上述制得枇杷叶乙醇提取物分别用石油醚、 1氢氧化钠溶液和水洗至洗出液无色， 再用无水乙醇加热溶解， 加活性炭回流脱色 15min， 滤过， 用热乙醇反复洗涤残渣， 放冷， 静 置， 得白色片状结晶， 用热甲醇重结晶， 即得熊果酸。 2. 如权利要求 1 所述的天然药物组合物， 其特征在于其中枇杷叶生姜水煎浓缩提取 物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与熊果酸的用量比例是 8 5 9 3。 3. 如权利要求 1 或 2 的天然药物组合物的制备方法， 其特征在于该方法包括 ： (1) 枇杷叶生姜水煎浓缩提取物的制备 按照配伍比。
7、例为1-101取枇杷叶、 生姜， 加10倍量蒸馏水， 浸泡1h， 于加石棉网的电 炉上加热煎煮20分钟， 绢布过滤， 保存滤液， 药渣再加6倍蒸馏水， 同法浸泡、 煎煮、 过滤， 将 两次滤液混合， 冷冻干燥得干浸膏， 粉碎， 过筛， 即得 ； (2) 姜辣素的制备 将生姜切成薄片， 自然干燥， 用高速万能粉碎机打成粉末， 过 30 目筛， 再将过筛细粉放 入 5000mL 大磨口瓶中， 以 6 倍量丙酮常温下浸泡 72h ； 在 40， 40KHz 的超声波频率下超声 提取 15min， 离心得到上清液， 残渣弃去 ； 将上清液再减压抽滤， 滤液置于旋转蒸发仪中真 空浓缩得姜油状混合物， 再。
8、将该混合物进行多次浓缩干燥纯化得到姜辣素 ； (3) 枇杷叶乙醇提取物制备 将干燥的枇杷叶粉碎， 过20-40目筛， 加12倍量无水乙醇， 90下用索氏提取器回流提 取 3 次， 每次 10 小时， 合并溶剂并减压回收得浸膏， 干燥， 粉碎， 过筛， 即得 ； (4) 熊果酸制备 将步骤 (3) 制得的枇杷叶乙醇提取物分别用石油醚、 1氢氧化钠溶液和水洗至洗出 液无色， 再用无水乙醇加热溶解， 加活性炭回流脱色 15min， 滤过， 用热乙醇反复洗涤残渣， 放冷， 静置， 得白色片状结晶， 用热甲醇重结晶， 即得熊果酸 ； (5) 按比例选取枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取。
9、物与熊果酸均匀 权 利 要 求 书 CN 102526667 B 2 2/2 页 3 混合， 即得。 4. 如权利要求 3 所述的天然药物组合物的制备方法， 其特征在于还包括 ： 将步骤 (5) 制得的产品进一步通过常规的制药手段制成含有天然药物组合物100mg或200mg规格的胶 囊， 或将按湿法制粒工艺制成含天然药物组合物 100mg 或 200mg 规格的片剂。 5. 如权利要求 1-2 任一项所述的天然药物组合物在制备减少癌症化疗引起的呕吐反 应并对治疗癌症起增效作用的药物中的用途。 权 利 要 求 书 CN 102526667 B 3 1/9 页 4 用于减少癌症化疗引起的呕吐并对化。
10、疗增效的枇杷叶与生 姜组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种天然药物组合物， 更具体地涉及一种由枇杷叶生姜水煎浓缩提取 物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与熊果酸组成的天然药物组合物， 该天然药物组合物的制备 方法以及该天然药物组合物在用于制备减少癌症化疗引起的呕吐副作用并对治疗癌症起 增效作用的药物中的用途。 背景技术 0002 癌症目前已成为人类面临的一大杀手， 死亡率仅次于心血管疾病， 而且呈逐年上 升的趋势。 我国每年有180万恶性肿瘤患者， 其中2/3的病人接受化疗， 虽然有一定的疗效， 但化疗后大部分患者会出现不同程度的副作用， 其中最常见的副作用是恶心、 呕吐等胃肠。
11、 道反应。频繁的呕吐可导致消化液大量丢失， 水、 电解质、 酸碱平衡紊乱， 使病人痛苦不堪， 严重影响病人的生存质量， 不仅会影响到疗效， 甚至使病人难以忍受而中断治疗。 0003 目前， 临床常用的止吐药主要有组胺 (H2)、 乙酰胆碱 (M) 及多巴胺 (DA) 受体拮抗 药和大麻类药物等， 但这些药物对化疗后呕吐的疗效差， 而且毒副作用强， 应用上受到很大 限制。 新型止吐药， 如NK1受体拮抗剂和5-HT3受体拮抗类药物， 虽然对化疗后呕吐止吐效果 好， 但价格昂贵， 使用范围窄， 而且毒副反应大， 临床多需联合用药， 且未见抗癌增效作用， 因此期待着天然抗癌减毒增效药物的研制。 00。
12、04 中医药对于癌症化疗减毒增效的研究， 令人瞩目。目前尚无对抗癌症化疗具有减 轻呕吐副作用及增效作用的中成药。因此， 研发一种高效低毒、 价格低廉， 易于推广的可用 于减轻癌症化疗呕吐副作用并起增效减毒作用的天然中药成为临床亟待解决的问题。 0005 中药姜 (zingiber) 被誉为 “呕吐圣药” 。姜辣素是从姜中提取的活性成份， 本发明 人观察到姜辣素可对抗无机及有机毒物硫酸铜和顺铂所致呕吐， 并抑制肠道嗜铬细胞释放 致吐因子5-HT和P物质， 姜辣素作用于化疗呕吐最相关的NK1和5-HT3等受体， 为多靶点、 天 然低毒止吐药。枇杷叶为蔷薇科常绿小乔木植物枇杷 Eriobotrya 。
13、japonica(Thunb)Lindl 的干燥叶。 本草纲目 曰 ：“和胃降气， 清热解暑毒。 ” 具有润肺止咳、 降逆止呕之功效， 常用 于治肺热咳嗽， 胃热逆呕等疾病。近年来， 枇杷叶和生姜抗癌作用得到证实， 尤其是生姜辛 辣成分及枇杷叶中的熊果酸。 研究表明枇杷叶中的熊果酸对多种致癌、 促癌物有抵抗作用， 且对多种恶性肿瘤细胞有明显细胞毒作用和诱导分化作用及抗血管形成作用， 其防癌抗癌 作用已引起重视， 有望成为低毒有效的新型抗癌药。本发明人经过大量的各配方比例的研 究和实验以及临床实践， 最后获得了本发明的最佳药物比例组合物， 是与多受体靶点比例 相契合的创新性的组合物， 并证明了其。
14、对癌症化疗引起的呕吐等副作用有极好的疗效并能 同时起到辅助抑制肿瘤的效果， 由此完成了本发明。 发明内容 0006 本发明第一个目的在于提供一种天然药物组合物， 该组合物低毒高效， 疗效确切、 说 明 书 CN 102526667 B 4 2/9 页 5 便于应用及推广， 既可以抗肿瘤， 又能对抗化疗后呕吐等副作用。 0007 本发明第二个目的在于提供上述天然药物组合物的制备方法。 0008 本发明第三个目的在于提供上述天然药物组合物在制备减少癌症化疗副作用并 对治疗癌症起增效减毒作用的药物中的用途。 0009 本发明提供的一种天然药物组合物， 由枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷 叶。
15、乙醇提取物与熊果酸以重量计按 3-8 1-5 3-9 1-3 的比例组成。 0010 上述天然药物组合物， 其中枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取 物与熊果酸的用量比例是 8 5 9 3。 0011 其中， 枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与熊果酸可通过本 领域技术人员公知的常规方法进行提纯获得， 姜辣素可以商业购得， 采用常规方法获得的 这些成分或采用商业购得的成分组成的本发明的天然药物均能获得相同的疗效。 以下列出 的方法仅仅是发明人认为更优选的方法， 并不意在对该天然药物组合物中各成分的提取方 法作出特别的限制。 0012 优选地， 上述天然药物组。
16、合物中枇杷叶生姜水煎浓缩提取物的制备方法是 ： 0013 按照配伍比例为 1 1 或 1-10 1 其他比例取枇杷叶、 生姜， 加 10 倍量蒸馏水， 浸泡1h， 于加石棉网的电炉上加热煎煮20分钟， 绢布过滤， 保存滤液， 药渣再加6倍蒸馏水， 同法浸泡、 煎煮、 过滤， 将两次滤液混合， 冷冻干燥得干浸膏， 粉碎， 过筛， 即得。 0014 上述天然药物组合物中姜辣素的制备方法是 ： 0015 将生姜切成薄片， 自然干燥， 用高速万能粉碎机打成粉末， 过 30 目筛， 再将过筛细 粉放入 5000mL 大磨口瓶中， 以 6 倍量丙酮常温下浸泡 72h ； 在 40， 40KHz 的超声波频。
17、率下 超声提取 15min， 离心得到上清液， 残渣弃去 ； 将上清液再减压抽滤， 滤液置于旋转蒸发仪 中真空浓缩得姜油状混合物， 再将该混合物进行多次浓缩干燥纯化得到姜辣素。 0016 上述天然药物组合物中枇杷叶乙醇提取物制备方法是 ： 0017 将干燥的枇杷叶粉碎， 过20-40目筛， 加12倍量无水乙醇， 90下用索氏提取器回 流提取 3 次， 每次 10 小时， 合并溶剂并减压回收得浸膏， 干燥， 粉碎， 过筛， 即得。 0018 上述天然药物组合物中熊果酸制备方法是 ： 0019 将上述所得浸膏分别用石油醚、 1氢氧化钠溶液和水洗至洗出液无色， 再用无水 乙醇加热溶解， 加活性炭回流。
18、脱色 15min， 滤过 . 用热乙醇反复洗涤残渣， 放冷， 静置， 得白 色片状结晶， 用热甲醇重结晶， 即得熊果酸。 0020 本发明还提供了该天然药物组合物的优选的制备方法， 包括 ： 0021 (1) 枇杷叶生姜水煎浓缩提取物的制备 0022 按照配伍比例为 1 1 或 1-10 1 其他比例取枇杷叶、 生姜， 加 10 倍量蒸馏水， 浸泡1h， 于加石棉网的电炉上加热煎煮20分钟， 绢布过滤， 保存滤液， 药渣再加6倍蒸馏水， 同法浸泡、 煎煮、 过滤， 将两次 滤液混合， 冷冻干燥得干浸膏， 粉碎， 过筛， 即得。 0023 (2) 姜辣素的制备 0024 将生姜切成薄片， 自然干。
19、燥， 用高速万能粉碎机打成粉末， 过 30 目筛， 再将过筛细 粉放入 5000mL 大磨口瓶中， 以 6 倍量丙酮常温下浸泡 72h ； 在 40， 40KHz 的超声波频率下 超声提取 15min ； 离心得到上清液， 残渣弃去 ； 将上清液再减压抽滤， 滤液置于旋转蒸发仪 中真空浓缩得姜油状混合物， 再将该混合物进行多次浓缩干燥纯化得到姜辣素。 说 明 书 CN 102526667 B 5 3/9 页 6 0025 (3) 枇杷叶乙醇提取物制备 0026 将干燥的枇杷叶粉碎， 过20-40目筛， 加12倍量无水乙醇， 90下用索氏提取器回 流提取 3 次， 每次 10 小时， 合并溶剂并。
20、减压回收得浸膏， 干燥， 粉碎， 过筛， 即得。 0027 (4) 熊果酸制备 0028 将上述所得浸膏分别用石油醚、 1氢氧化钠溶液和水洗至洗出液无色， 再用无水 乙醇加热溶解， 加活性炭回流脱色 15min， 滤过 . 用热乙醇反复洗涤残渣， 放冷， 静置， 得白 色片状结晶， 用热甲醇重结晶， 即得熊果酸。 0029 (5) 按比例选取枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与熊果 酸， 均匀混合， 即得。 0030 上述天然药物组合物的制备方法， 还包括 ： 将步骤 (5) 制得的产品进一步通过常 规的制药手段制成含有天然药物组合物 100mg 或 200mg 规格的胶囊。
21、， 或将按湿法制粒工艺 制成含天然药物组合物 100mg 或 200mg 规格的片剂。 0031 本发明还包括天然药物组合物在制备减少癌症化疗副作用并对治疗癌症起增效 作用的药物中的用途， 以及在制备减少癌症化疗引起的呕吐反应并对治疗癌症起增效作用 的药物中的用途。 0032 本发明天然药物组合物的服用方法 ： 治疗癌症化疗后呕吐可用胶囊剂或片剂， 每 人每天 600mg， 分三次饭后服用。 0033 本发明天然药物组合物在抗呕吐及抑制肿瘤方面的有益效果如下 ： 0034 1、 本发明天然药物组合物具有良好的抗呕吐作用， 现已完成临床前在水貂呕吐模 型的药理学研究。采用我们首创的水貂呕吐模型，。
22、 观察该天然药物组合物对顺铂导致水貂 呕吐模型在一定时期内的对抗作用。研究表明 ： 该天然药物组合物对于顺铂所致水貂的呕 吐反应有明显的对抗作用， 其作用优于单独应用枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷 叶乙醇提取物。同时， 其降低致呕率方面， 其作用与西药昂丹司琼媲美。 0035 2、 本发明天然药物组合物具有抑制肿瘤的作用， 现已完成临床前在小鼠肿瘤模型 上的药理学研究。 采用了小鼠肿瘤模型， 观察天然药物组合物对小鼠体内肿瘤的抑制作用。 研究表明 ： 该天然药物组合物对于小鼠体内肿瘤有明显的抑制作用。 0036 3、 另外证明了本天然药物组合物能增强化疗药物对肿瘤的抑制作用， 现已。
23、完成临 床前在小鼠肿瘤细胞模型上的药理学研究。采用了小鼠肿瘤模型， 观察该天然药物组合物 与环磷酰胺联合对小鼠体内肿瘤的抑制作用。研究表明 ： 该天然药物组合物能明显增加环 磷酰胺对于肿瘤的抑制作用。 0037 4、 同时完成了在小鼠的急性毒理研究， 研究表明 ： 该天然药物组合物对进食及行 为活动等无影响， 脏器及病理学观察也未见异常。说明该天然药物组合物毒性很小。 0038 5、 本发明人独创地将枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与 熊果酸进行组合， 并通过大量实验确定这些组分之间的用量配比， 使该组合物发挥了很好 的协同作用， 获得意外的效果。 经过我们反复实验研究，。
24、 令发明人惊讶的是本发明的天然药 物组合物各组分之间的比例在 3-8 1-5 3-9 1-3 时产生了出乎意料的协同作用， 增 效明显， 对副作用起到非常好的效果， 尤其在各组分的用量比例是 8 5 9 3 时尤其明 显， 这是本发明人在之前发表的论文基础上通过继续努力付出大量创造性劳动而获得的， 本领域普通技术人员仅仅通过公开的内容无法简单获得这种配比范围以及最佳用量比例。 说 明 书 CN 102526667 B 6 4/9 页 7 0039 6、 该天然药物组合物枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提取物与 熊果酸各组分均可通过常规手段获得， 其中一些组分例如姜辣素还可通过商。
25、业购得， 这样 的组合物本身具有获得方便、 成本较低的效果， 这也是发明人通过大量创造性劳动方获得 的兼具极佳疗效和较高工业实用性的产品。 具体实施方式 0040 下面通过实施例和试验例进一步阐述本发明天然药物组合物的制备， 以及其在抗 呕吐和抗肿瘤中应用的有益效果。 0041 实施方案 0042 第一步 ： 各种提取物的制备 0043 (1) 枇杷叶生姜水煎浓缩提取物的制备 0044 按照配伍比例为 1 1 或 1-10 1 其他比例取枇杷叶、 生姜， 加 10 倍量蒸馏水， 浸泡1h， 于加石棉网的电炉上加热煎煮20分钟， 绢布过滤， 保存滤液， 药渣再加6倍蒸馏水， 同法浸泡、 煎煮、 。
26、过滤， 将两次滤液混合， 冷冻干燥得干浸膏， 粉碎， 过筛， 即得。 0045 (2) 姜辣素的制备 0046 将生姜切成薄片， 自然干燥， 用高速万能粉碎机打成粉末， 过 30 目筛， 再将过筛细 粉放入 5000mL 大磨口瓶中， 以 6 倍量丙酮常温下浸泡 72h ； 在 40， 40KHz 的超声波频率下 超声提取 15min ； 离心得到上清液， 残渣弃去 ； 将上清液再减压抽滤， 滤液置于旋转蒸发仪 中真空浓缩得姜油状混合物， 再将该混合物进行多次浓缩干燥纯化得到姜辣素。 0047 (3) 枇杷叶乙醇提取物制备 0048 将干燥的枇杷叶粉碎， 过20-40目筛， 加12倍量无水乙醇。
27、， 90下用索氏提取器回 流提取 3 次， 每次 10 小时， 合并溶剂并减压回收得浸膏， 干燥， 粉碎， 过筛， 即得。 0049 (4) 熊果酸制备 0050 将上述所得浸膏分别用石油醚、 1氢氧化钠溶液和水洗至洗出液无色， 再用无水 乙醇加热溶解， 加活性炭回流脱色 15min， 滤过 . 用热乙醇反复洗涤残渣， 放冷， 静置， 得白 色片状结晶， 用热甲醇重结晶， 即得熊果酸。 0051 第二步 ： 制剂的制备 0052 (1) 本发明天然药物组合物胶囊制剂的制备 0053 分别称取上述步骤制备的枇杷叶生姜水煎浓缩提取物 32mg、 姜辣素 20mg、 枇杷叶 乙醇提取物 36mg 与。
28、熊果酸 12mg， 同时称取淀粉 395mg、 硬脂酸镁 5mg， 均匀混合， 填充胶囊， 制成每个纯重 500mg 的胶囊剂。 0054 (2) 本发明天然药物组合物片剂的制备 0055 分别称取上述步骤制备的枇杷叶生姜水煎浓缩提取物 32mg、 姜辣素 20mg、 枇杷叶 乙醇提取物 36mg 与熊果酸 12mg， 同时称取淀粉 295mg、 乳糖 100mg， 均匀混合， 用湿法制粒、 干燥， 整粒后与 5mg 硬脂酸镁混合， 压片， 制成每片纯重 500mg 的片剂。 0056 药效及药理学资料 ： 0057 在下述试验例子中组合物为 ： 枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙。
29、 醇提取物与熊果酸的用量比例为 8 5 9 3。发明人对上述各成分用量比例在 3-81-53-91-3之间时的多种配比组合获得的组合物进行了与上相同的实验， 均发 说 明 书 CN 102526667 B 7 5/9 页 8 现在这种用量范围内的天然药物组合物能获得很好的协同作用， 对癌症化疗副作用能起到 很好的效果并对癌症的治疗有增效作用。 并且， 发明人发现枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜 辣素、 枇杷叶乙醇提取物与熊果酸还可以是以常规手段获得的成分， 而不仅仅是用上述的 方法获得的成分， 由常规手段制得的或商业购得的上述四种成分组成的组合物具有与上述 方法制得的组合物相同的效果， 其实验资。
30、料这里不再列举， 本领域技术人员对此能够认可。 以下是优选的实施方式获得的药效及药理学资料 ： 0058 试验例 1 ： 天然药物组合物治疗呕吐作用的药效学研究 0059 1、 试验材料 0060 (1) 枇杷叶， 由北京同仁堂大药房购买， 生姜， 购于山东平度， 由本学院技术室主任 鉴定为蔷薇科植物枇杷干燥叶和姜科植物姜的块茎。 0061 (2) 顺铂 (cisplatin)， 山东齐鲁制药厂生产， 批号 ： 903005CE， 20mg/ 支。 0062 (3) 盐酸昂丹司琼注射液， 奥赛康制药， 批号 ： 090102， 2ml 4mg. 0063 (4) 健康成年水貂， 体重 1.3-。
31、1.8kg， 雄性， 由青岛特种养殖动物饲养中心提供， 每 只动物单独置于 75cm50cm50cm 的铁笼中， 24h 自然光照射， 实验前自由进食饮水。 0064 2、 试验方法 ： 0065 将水貂随机分为 7 组， 每组 6 只， A 组为姜辣素组， B 组为枇杷叶乙醇提取物组， C 组为姜辣素与枇杷叶乙醇提取物配伍组 ( 比例为 5 9)， D 组为枇杷叶生姜水煎浓缩提取 物， E 组为本发明的天然药物组合物 ( 枇杷叶生姜水煎浓缩提取物、 姜辣素、 枇杷叶乙醇提 取物与熊果酸按 8 5 9 3 比例混合 )， F 组为顺铂阳性对照组， G 组为昂丹司琼组。A 组先以姜辣素 10g.。
32、kg-1( 相当于含生药量 )ig 预处理， 30min 给予顺铂 7.5mg.kg-1ip ； B 组给 予枇杷叶乙醇提取物10g.kg-1(相当于含生药量)ig预处理， 30min给予顺铂7.5mg.kg-1ip ； C组给予姜辣素与枇杷叶乙醇提取物配伍药物10g.kg-1(相当于含生药量)ig预处理， 30min 给予顺铂 7.5mg.kg-1ip ； D 组给予枇杷叶生姜水煎浓缩提取物 10g.kg-1( 相当于含生药量 ) ig 预处理， 30min 给予顺铂 7.5mg.kg-1ip ； E 组给予本发明的天然药物组合物 10g.kg-1( 相 当于含生药量 )ig 预处理， 30。
33、min 给予顺铂 7.5mg.kg-1ip ； F 组给予生理盐水， 30min 给予顺 铂 7.5mg.kg-1ip ； G 组先以昂丹司琼组 7.5g.kg-1预处理， 30min 给予顺铂 7.5mg.kg1ip。为 观察水貂在给药后 6h 内的呕吐反应， 记录其呕吐潜伏期， 干呕及呕吐次数。 0066 3、 实验结果 0067 与对照组比较， 各治疗组均能明显减轻干呕及呕吐次数并有效延长呕吐潜伏期 (P 0.01)。 各治疗组均能降低致呕率， 枇杷叶生姜水煎浓缩提取物组致呕率与昂丹司琼组相 同 ； 而本发明的天然药物组合物组致呕率低于昂丹司琼组。结果见表 1. 0068 表 1 提取物。
34、配伍对顺铂 (7.5mg/kg， ip) 致呕作用的影响 ( n 6) 0069 说 明 书 CN 102526667 B 8 6/9 页 9 0070 注 ： a 相当于含生药量， 与对照组比较， cP 0.01 0071 试验例 2 ： 本发明天然药物组合物抗肿瘤作用的药效学研究 0072 1、 实验材料 0073 (1) 昆明种小鼠， 体重 202g， 由青岛市药检所实验动物中心提供。实验前自由进 食饮水， 24h 自然光照射。 0074 (2) 环磷酰胺， 江苏恒瑞医药制药股份有限公司产品。 0075 2、 试验方法 ： 0076 (1) 对小鼠 S180肉瘤生长的抑制试验 0077 。
35、采用传代 5-7 天， 生长良好的乳白色腹水， 以适量无菌生理盐水稀释成瘤细胞悬 液， 细胞数为 107/mL， 每组 12 只， 每鼠右腋窝皮下接种 0.2mL( 含瘤细胞 2106个 )。接种 次日随机分组， 实验组将本发明的天然药物组合物分为 (400， 200， 100mg/mL) 三个剂量组， 每鼠灌胃 0.5ml ； 阴性对照组给予 0.5mL 蒸馏水 ； 阳性药物组给予环磷酰胺 20gkg-1d-1， 连续给药 10 天。常规饲养， 饮水， 食物不限。停药次日， 小鼠全部脱颈椎处死， 剥取皮下实 体瘤瘤块， 称重， 按下列公式计算肿瘤抑制率 ( ) ： 0078 肿瘤抑制率 对照。
36、组平均瘤重 (C)- 实验组平均瘤重 (T) / 对照组平均瘤重 (C) 0079 (2) 对小鼠肝癌 H22生长的抑制试验 0080 分组、 剂量、 给药方式、 实验时间与 S180肉瘤株相同。 0081 (3) 对小鼠艾氏腹水瘤 ( 实体瘤 ) 的抑制试验 0082 分组、 剂量、 给药方式、 实验时间与 S180肉瘤株相同。 0083 3、 试验结果 0084 本发明天然药物组合物三个剂量组对S180、 H22、 EAC与阴性对照组比较， 均有不同程 度抑制作用， 尤其以高剂量组对肿瘤的抑制率最高。( 如表 2、 3、 4) 0085 表 2 胶囊剂对 S180小鼠的肿瘤抑制作用 ( n。
37、 12) 0086 说 明 书 CN 102526667 B 9 7/9 页 10 0087 与阴性对照组比较， bP 0.05 0088 表 3 胶囊剂对 H22小鼠的肿瘤抑制作用 ( n 12) 0089 0090 与阴性对照组比较， cP 0.05 0091 表 4 胶囊剂对 EAC 小鼠的肿瘤抑制作用 ( n 12) 0092 0093 与阴性对照组比较， bP 0.05，cP 0.01 0094 试验例 3 ： 本发明天然药物组合物对于化疗药物抗肿瘤增效作用的药效学研究 0095 1、 实验材料 0096 (1) 昆明种小鼠， 体重 202g， 由青岛市药检所实验动物中心提供。实验前。
38、自由进 食饮水， 24h 自然光照射。 0097 (2) 环磷酰胺， 江苏恒瑞医药制药股份有限公司产品。 0098 2、 试验方法 ： 0099 (1) 对小鼠 S180肉瘤生长的抑制试验 说 明 书 CN 102526667 B 10 8/9 页 11 0100 采用传代 5-7 天， 生长良好的乳白色腹水， 以适量无菌生理盐水稀释成瘤细胞恳 液， 细胞数为 107/mL， 每组 12 只， 每鼠右腋窝皮下接种 0.2ml( 含瘤细胞 2106个 )。接种 次日随机分组， 实验组将本发明的天然药物组合物分为 (10， 5， 2.5gkg-1) 三个剂量组， 每 鼠灌胃 0.5ml， 同时给予。
39、环磷酰胺 10gkg-1d-1； 阴性对照组给予 0.5ml 蒸馏水 ； 阳性药物 组给予环磷酰胺 20gkg-1d1， 连续给药 10 天。常规饲养， 饮水， 食物不限。停药次日， 小 鼠全部脱颈椎处死， 剥取皮下实体瘤瘤块， 称重， 按下列公式计算肿瘤抑制率 ( ) ： 0101 肿瘤抑制率 对照组平均瘤重 (C)- 实验组平均瘤重 (T) / 对照组平均瘤重 (C) 0102 (2) 对小鼠肝癌 H22生长的抑制试验 0103 分组、 剂量、 给药方式、 实验时间与 S180肉瘤株相同。 0104 (3) 对小鼠艾氏腹水瘤 ( 实体瘤 ) 的抑制试验 0105 分组、 剂量、 给药方式、。
40、 实验时间与 S180肉瘤株相同。 0106 3、 试验结果 0107 在降低环磷酰胺用药剂量的情况下， 本发明天然药物组合物三个剂量与环磷酰胺 联合用药组对 S180、 H22、 EAC 与阴性对照组比较， 均有不同程度抑制作用， 尤其以高剂量组对 肿瘤的抑制率最高。( 如表 5、 6、 7) 0108 表 5 胶囊剂对 S180小鼠的肿瘤抑制作用 ( n 12) 0109 0110 0111 与阴性对照组比较， bP 0.05，cP 0.01 0112 配伍药组高 ： 环磷酰胺 10gkg-1+ 组合物 10gkg-1； 配伍药组中 ： 环磷酰胺 10gkg-1+ 组合物 5gkg-1； 。
41、配伍药组低 ： 环磷酰胺 10gkg-1+ 组合物 2.5gkg-1， 下同 0113 表 6 胶囊剂对 H22小鼠的肿瘤抑制作用 ( n 12) 0114 说 明 书 CN 102526667 B 11 9/9 页 12 0115 与阴性对照组比较， bP 0.05 0116 表 7 胶囊剂对 EAC 小鼠的肿瘤抑制作用 ( n 12) 0117 0118 与阴性对照组比较， bP 0.05，cP 0.01 0119 试验例 4 ： 本发明天然药物组合物的急性毒性试验 0120 1、 试验动物 ： 0121 昆明种小鼠， 体重 202g， 由青岛市药检所实验动物中心提供 0122 2、 药物。
42、 ： 0123 本发明的天然药物组合物、 西黄蓍胶 0124 3、 试验方法 ： 0125 根据国家药品监督管理局一九九九年十一月十二日颁布修订的 “中药新药研究 技术要求” ， 对本发明的天然药物进行急性毒性实验。因受药物浓度及体积限制， 无法测定 LD50， 故进行最大给药量实验。 取昆明种小鼠30只， 雌性各半， ig， 给予胶囊剂中药物1g/mL， 每只 0.8mL， 即小鼠的最大灌胃体积， 用药后观察小鼠活动状态、 饮食、 粪便、 呼吸、 体重及死 亡情况， 连续观察 14d. 0126 4、 试验结果 ： 0127 各组小鼠灌胃给药后生长良好， 体重增加， 行为正常， 均未见死亡及明显反应。将 动物处死后， 肉眼观察各主要脏器无异常现象。 0128 结果表明， 本发明的天然药物组合物最大剂量口服应用， 对动物无明显损害， 未发 现对机体产生的毒性反应， 是一种安全可靠的药物。 说 明 书 CN 102526667 B 12 。