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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610913853.3 (22)申请日 2016.10.20 (71)申请人 江苏省中医药研究院 地址 210028 江苏省南京市栖霞区红山路 十字街100号 (72)发明人 胡灿红 霍介格 方志军 魏国利 李灵常 李检阅 张利 (51)Int.Cl. A61K 36/8945(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 15/12(2006.01) (54)发明名称 一种具有调整脑内单胺类神经递质表达功 效的。
2、中药组合物 (57)摘要 本发明属于传统中医药用于肿瘤治疗方面 的领域， 尤其是在改善乳腺癌内分泌治疗后引起 的不良反应方面。 一种具有调整脑内单胺类神经 递质表达功效的中药组合物， 由以下配比的中药 成分组成： 生地黄400-600份， 山茱萸100-300份， 山药100-300份， 泽泻150-250份， 牡丹皮150-250 份， 茯苓150-250份， 柴胡100-150份， 白芍100- 300份， 栀子150-250份， 酸枣仁100-300份， 当归 150-250份。 进一步优选， 本发明的中药组合物由 以下配比的中药成分组成： 生地黄480份， 山茱萸 240份， 山药24。
3、0份， 泽泻180份， 牡丹皮180份， 茯 苓180份， 柴胡120份， 白芍240份， 栀子180份， 酸 枣仁240份， 当归180份。 动物实验和临床疗效观 察都显示有明显的调整脑内单胺类神经递质表 达的功效。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 106474308 A 2017.03.08 CN 106474308 A 1.一种具有调整脑内单胺类神经递质表达功效的中药组合物， 其特征在于所述中药组 合物由以下配比的中药成分组成： 生地黄400-600份， 山茱萸100-300份， 山药100-300份， 泽 泻150-250份， 牡丹皮150-250份， 茯苓150-250份。
4、， 柴胡100-150份， 白芍100-300份， 栀子 150-250份， 酸枣仁100-300份， 当归150-250份。 2.如权利要求1所述的一种具有调整脑内单胺类神经递质表达功效的中药组合物， 其 特征在于所述中药组合物由以下配比的中药成分组成： 生地黄480份， 山茱萸240份， 山药 240份， 泽泻180份， 牡丹皮180份， 茯苓180份， 柴胡120份， 白芍240份， 栀子180份， 酸枣仁240 份， 当归180份。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106474308 A 2 一种具有调整脑内单胺类神经递质表达功效的中药组合物 技术领域 0001 本发明属于传。
5、统中医药用于肿瘤治疗方面的领域， 尤其是在改善乳腺癌内分泌治 疗后引起的不良反应方面。 背景技术 0002 乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤,内分泌治疗是乳腺癌的重要治疗手段之 一， 其目的在于降低雌激素水平或阻断雌激素作用， 从而抑制乳腺癌细胞生长， 可以延长生 存， 减少复发， 在乳腺癌综合治疗中占有重要地位。 但内分泌治疗后由于体内雌激素水平的 下降， 导致机体内分泌失调、 植物神经功能紊乱， 出现一系列类似于绝经期综合征的症状， 主要表现为:神经心理症候群： 潮热汗出、 抑郁、 烦躁易怒、 月经失调、 头晕耳鸣及心悸失 眠等。 骨质疏松： 体内雌激素水平下降， 成骨细胞活性降低， 破骨。
6、细胞重吸收功能增强， 两 者之间的动态平衡遭到破坏， 导致骨量减少， 骨密度降低。 肝脏损害及脂肪变性： 抗雌激 素治疗使雌激素在肝脏表达减少， 从而抑制雌激素对脂蛋白的分解作用， 导致脂肪在肝细 胞内的大量堆积诱发脂肪肝。 0003 乳腺癌采用西药内分泌治疗后， 由于其导致了体内雌激素水平下降， 而致机体内 分泌失调、 植物神经功能紊乱， 出现一系列类似于绝经期综合征的症状， 主要表现为神经 心理症候群： 潮热汗出、 抑郁、 烦躁易怒、 月经失调、 头晕耳鸣及心悸失眠等。 骨质疏松： 体 内雌激素水平下降， 成骨细胞活性降低， 破骨细胞重吸收功能增强， 两者之间的动态平衡遭 到破坏， 导致骨。
7、量减少， 骨密度降低。 肝脏损害及脂肪变性： 抗雌激素治疗使雌激素在肝 脏表达减少， 从而抑制雌激素对脂蛋白的分解作用， 导致脂肪在肝细胞内的大量堆积诱发 脂肪肝。 0004 现阶段治疗乳腺癌内分泌治疗后不良反应的方法主要有： 神经心理症候群的防 治： 主要建议针灸治疗或调整生活方式， 严重者需停止内分泌治疗， 停药不利于乳腺癌的治 疗。 骨质疏松的防治： 补充钙剂和维生素D； 根据多项随机、 多中心、 大型临床研究结果显 示可应用唑来磷酸治疗或选用抑制破骨细胞活性的地诺单抗治疗， 这些治疗有效， 但在治 疗同时亦会产生相应的副作用， 如唑来磷酸治疗会出现发热、 肌肉酸痛及肾脏损害等不良 反应。
8、， 且价格昂贵， 增加了患者经济负担。 发明内容 0005 解决的技术问题 0006 本发明采用传统的中医药治疗乳腺癌内分泌治疗后的烦躁、 潮热、 多汗、 腰酸等脑 内缺乏单胺类神经递质引起的神经心理症候群， 根据此类症候群主症及舌苔脉象， 辨证为 肝肾阴虚、 阴虚火旺型。 0007 采用的技术方案 0008 一种具有调整脑内单胺类神经递质表达功效的中药组合物， 具体由以下配比的中 药成分组成： 生地黄400-600份， 山茱萸100-300份， 山药100-300份， 泽泻150-250份， 牡丹皮 说 明 书 1/5 页 3 CN 106474308 A 3 150-250份， 茯苓150。
9、-250份， 柴胡100-150份， 白芍100-300份， 山栀150-250份， 酸枣仁100- 300份， 当归150-250份。 0009 进一步优选， 本发明的中药组合物由以下配比的中药成分组成： 生地黄480份， 山 茱萸240份， 山药240份， 泽泻180份， 牡丹皮180份， 茯苓180份， 柴胡120份， 白芍240份， 栀子 180份， 酸枣仁240份， 当归180份。 0010 有益效果 0011 本发明针对内分泌治疗后扰乱了肾-天葵-冲任-胞宫生殖轴的平衡状态， 肾精不 足、 阴虚火旺是本病的主要病机， 因此本发明的技术方案集中于清肝补肾、 滋阴降火。 0012 本发。
10、明的中药组合物由生地黄、 山茱萸、 山药、 泽泻、 牡丹皮、 茯苓、 柴胡、 白芍、 栀 子、 酸枣仁、 当归组成。 方中生地黄、 山茱萸、 山药、 泽泻、 茯苓滋阴补肾， 牡丹皮、 柴胡、 栀子 疏肝降火， 酸枣仁、 白芍、 当归滋阴养血安神。 诸药合用， 使肾阴充养， 肝气畅达， 虚火得降。 附图说明 0013 图1 ER、 PR荧光免疫测定阳性证实小鼠乳腺癌4T1细胞为激素依赖性乳腺癌细胞 株。 0014 图2小鼠阴道细胞涂片出现外底层细胞提示去卵巢手术成功。 0015 图3绝经后乳腺癌移植小鼠下丘脑5-HT1AR与5-HT2AR蛋白表达水平成对应反比关 系。 具体实施方式 0016 实。
11、施方式一： 本发明中药组合物对去卵巢的乳腺癌移植小鼠单胺类神经递质表达 的影响 0017 1.制备本发明中药组合物汤剂 0018 称取本发明中药组合物中各组分的生药材， 生地黄24g， 山茱萸12g， 山药12g， 泽泻 9g， 牡丹皮9g， 茯苓9g， 柴胡6g， 白芍12g， 山栀9g， 酸枣仁12g， 当归9g， 将上述11味中药加适 量蒸馏水浸泡2h， 大火加热煮沸， 之后小火煎煮30min， 过滤， 再用双蒸水按前法重复煎煮一 次， 过滤， 将2次煎煮的滤液混合后按所需浓度进行浓缩(含生药1.88g/mL)， 制成本发明中 药组合物浓缩液， 置-80冰箱保存备。 0019 2.建立绝。
12、经后的乳腺癌小鼠模型 0020 1)取对数生长期的小鼠乳腺癌4T1细胞株， 1.0104个/孔接种于96孔培养板， 37 ， 5CO2培养箱培养24h， 免疫荧光测定ER、 PR表达， 证实为激素依赖性乳腺癌细胞株(图 1)。 选用46周的雌性BALB/c小鼠， 体重1822g， 共50只， 腹部脱毛， 用异氟烷吸入式麻醉， 仰卧固定， 在小鼠右侧倒数第二对乳腺脂肪垫下接种5105个4T1细胞， 建立小鼠乳腺癌移 植模型。 接种48h后， 观察肿瘤生长状况。 0021 2)乳腺癌移植小鼠去卵巢手术： 小鼠接种2周后行去卵巢手术， 1戊巴比妥钠 (40ml/kg)腹腔注射麻醉后， 仰卧固定， 剪。
13、去腹部长毛， 碘伏、 70乙醇消毒腹部皮肤。 腹部 正中做23cm长切口， 钝性分离腹部肌肉。 进入腹腔后轻轻将乳白色脂肪组织提出腹腔。 分 离后找到Y型子宫。 在两侧子宫末端可见卵巢。 钳夹、 细线结扎子宫， 剪去卵巢， 同法处理对 侧卵巢， 检查无渗血后将脂肪组织和子宫送回腹腔内。 用3/0线间断二次缝合， 关闭腹腔， 缝 说 明 书 2/5 页 4 CN 106474308 A 4 合皮肤， 消毒创面。 所有小鼠术后第3天开始行阴道细胞涂片观察手术效果。 连续5d出现外 底层细胞证明小鼠体内雌激素水平降低， 卵巢摘除手术成功(图2)。 0022 3.动物实验疗效观察 0023 1)药物处。
14、理： 40只去卵巢的乳腺模型小鼠随机分为4组： 实验组1(来曲唑+中药组 合物低剂量组)、 实验组2(来曲唑+中药组合物高剂量组)、 模型组(蒸馏水)、 阳性对照组(来 曲唑组)， 共4组， 每组10只。 来曲唑组剂量0.379mg/kg/d， 本发明中药组合物低剂量组为 11.28g/Kg/d， 高剂量为45.1g/Kg/d， 模型组予以等剂量蒸馏水灌胃， 1次/日。 0024 2)检测指标 0025 a)给药第4周， 各组小鼠用10的水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔麻醉， 腹主动脉取 血2ml， 离心机3000r/min， 离心20分钟取上清液， -20冰箱贮存， 检测E2、 FSH。
15、、 LH水平。 0026 b)第4周， 各组小鼠腹主动脉采血后， 用1戊巴比妥钠(40mL/kg)麻醉小鼠， 开胸 暴露心脏， 剪开右心耳， 经左心室插管至升主动脉， 200mL生理盐水冲洗血液， 然后用含4 多聚甲醛的0.1mol/L的磷酸盐缓冲液(phosp-hate buffer solution， PBS， pH7.4， 4， 300mL灌注固定， 先快后慢， 灌毕， 立即取脑， 在冰冷的金属平台上迅速分离出海马区， 保存 于-86的冰箱备测。 Elisa法测定小鼠5-HT、 NE水平。 Western Blot方法检测小鼠下丘脑组 织中5-HT1AR、 5-HT2AR蛋白的表达。 0。
16、027 4.实验结果 0028 1)高剂量本发明中药组合物联合来曲唑治疗绝经后的乳腺癌移植小鼠， 能增加小 鼠脑内5-HT、 NE的表达， 且不增加E2水平， 与阳性对照组(来曲唑组)比， 有统计学意义(P0.05)。 表明本发明中 药组合物能通过调整脑内单胺类神经递质表达从而发挥作用(表1、 表2) 0029表1本发明中药组合物对E2、 FSH、 LH的影响() 0030 0031 *与阳性对照组相比无统计学意义， P0.05。 *与阳性对照组相比有统计学意义， P 0.05； *与阳性对照组比， 有统计学意 义P0.05. 0035 2)本发明中药组合物不论低剂量还是高剂量均能提高绝经后乳。
17、腺癌移植小鼠下 丘脑5-HT1AR蛋白表达水平、 降低绝经后乳腺癌移植小鼠下丘脑5-HT2AR蛋白表达水平。 (表 3) 0036表3本发明中药组合物对5-HT1AR、 5-HT2AR蛋白表达的影响() 0037 0038 0039 *与阳性对照组相比有统计学意义， P0.05。 *与阳性对照组相比有统计学意义， P 0.05； #与模型组 0040 相比有统计学意义， P0.05； 0041 3)Western Blot检测结果显示： 绝经后乳腺癌移植小鼠下丘脑5-HT1AR与5-HT2AR 蛋白表达水平成对应反比关系， 结果见图3。 0042 4)以上动物实验结果显示， 本发明中药组合物确。
18、实存在提高5-HT1AR蛋白表达水 平、 降低绝5-HT2AR蛋白表达水平的功效， 从而具有改善乳腺癌内分泌治疗后引起的不良反 应的效果。 0043 实施方式二： 本发明中药组合物的临床疗效观察 0044 1.一般资料： 0045 45例乳腺癌内分泌治疗后出现潮热盗汗、 腰膝酸软及烦躁易怒等类绝经期综合征 的患者， 年龄3478岁， 平均48.6岁； 乳腺癌病程最短13月， 最长121月， 平均56.6月； 发生不 良反应最短时间为内分泌治疗后6月， 最长时间为内分泌治疗后15月， 平均8.2月； 乳腺癌根 治术,后13例， 复发转移32例； 绝经前18例， 绝经后27例； 8例接受非药物内分。
19、泌治疗。 予以本 发明中药组合物滋肾清肝、 滋阴降火治疗。 0046 2.治疗方法 0047 取本发明中药组合物生地黄15g， 山茱萸7.5g， 山药7.5g， 泽泻5.5g， 牡丹皮5.5g， 说 明 书 4/5 页 6 CN 106474308 A 6 茯苓5.5g， 柴胡3.5g， 白芍7.5g， 栀子5.5g， 酸枣仁7.5g， 当归5.5g水煎服， 日1剂， 水煎2次， 早晚分服。 0048 3.疗效评价标准 0049 参照 中医病证诊断疗效标准 ， 治愈： 症状消失， 停药半年后随访无复发； 好转： 症 状减轻， 或部分症状消失， 或停药半年后随访偶有复发； 无效： 症状均无改善， 或停药半年后 诸症又复发。 0050 4.治疗结果 0051 治愈l5例(症状消失， 占33.3)； 好转26例(症状减轻， 占57.8)； 无效4例(症状 无减轻， 占8.9)， 总有效率为91.1。 以上临床疗效观察结果显示， 本发明中药组合物确 实存在提高5-HT1AR蛋白表达水平、 降低绝5-HT2AR蛋白表达水平的功效， 从而得以用来治 疗由于乳腺癌内分泌治疗引起的不良反应如类绝经期综合征。 说 明 书 5/5 页 7 CN 106474308 A 7 图1 图2 图3 说 明 书 附 图 1/1 页 8 CN 106474308 A 8 。