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1、10申请公布号CN104116726A43申请公布日20141029CN104116726A21申请号201310140642722申请日20130423A61K31/198200601A61P15/0020060171申请人南开大学地址300071天津市南开区卫津路94号72发明人叶孝颖刘金苗刘林54发明名称用N乙酰半胱氨酸NAC抗卵巢衰老57摘要本发明是一种抗卵巢衰老的方法。该方法是将N乙酰半胱氨酸NAC以1MM和01MM的浓度加入到小鼠的日常饮用水当中，并使小鼠自由进水进食。本发明的方法能使小鼠的卵巢衰老发生时间延缓，维持卵子数量和质量，因此对抵抗雌鼠的卵巢衰老具有重要意义。并且，人类的。
2、雌性生殖衰老与小鼠相似，该发明的实验结果也可用于人类的抗卵巢衰老、延长女性生殖年龄中，对于制药提供直接证据。此外，除直接用药外，在保健品中加入N乙酰半胱氨酸，也可以对抵抗卵巢衰老、延长生殖年龄具有重要帮助。51INTCL权利要求书1页说明书3页附图3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图3页10申请公布号CN104116726ACN104116726A1/1页21一种延缓雌鼠卵巢衰老的方法，即将N乙酰半胱氨酸NAC加入到雌鼠的饮用水中，使其长期并自由地饮用这样的水。2因为人的生殖衰老与小鼠相似，该发明也适用于抗人的卵巢衰老，只是在用量上不同。3该发明除应。
3、用于直接用药外，在保健药品中加入N乙酰半胱氨酸NAC以期获得抗小鼠及人类的卵巢生殖衰老的作用。权利要求书CN104116726A1/3页3用N乙酰半胱氨酸NAC抗卵巢衰老技术领域0001本发明涉及用N乙酰半胱氨酸NAC抗卵巢衰老的方法，属于生物与新医药领域。背景技术0002N乙酰半胱氨酸NACETYLCYSTEINE，简称NAC，是谷胱甘肽的前体，分子中含有活性巯基SH，可对抗不同原因所致的组织氧化损伤。NAC是一种具有研究价值的用途广泛的药物，在呼吸、心血管、神经系统和AIDS的治疗等方面均能发挥一定的作用。NAC作为一种巯基供给体，除具有上述作用外，主要还是一种抗氧化剂，对体内氧自由基超氧。
4、阴离子、过氧化氢、羟自由基等具有明显的拮抗作用，可清除已生成的自由基，调节细胞的代谢活性，预防DNA的损伤，调整基因的表达和信号转导系统，抗细胞凋亡，抗血管生成，抑制恶性肿瘤发展，抑制新生物的生成和转移等作用，而且在临床和实验中都得到了广泛的应用。0003在将NAC作为抗氧化剂进行研究的例子中，有几个效果比较明显的实验。2003年，LINLIU和KEEF等人便发现NAC可以通过降低胚胎内氧化应激水平来防止由环境污染物砷引起的端粒损耗、染色体末端融合以及细胞坏死的发生。2005年，SABLINAAA利用NAC成功延缓了抑癌基因P53敲除掉的老鼠模型中的肿瘤发生。2007年，TOTHOVAZ等人在。
5、对重要转录因子FOXO的研究中，发现NAC可以减缓由于FOXO表达降低造成的病理性变化。2009年，ROMANV等人也发现了NAC可以缓解由BMAL1表达降低诱发的卵巢早衰的相关症状。0004本研究发现，通过口服NAC的方法可以抵抗雌鼠增龄过程中发生的卵巢衰老，利用NAC可以有效清除机体内氧化物这一功能，减少体内的ROS，可以减轻卵巢中DNA受损程度，提高卵子的质量，从而使受孕成功率大大增加，由此延长雌性小鼠的生殖年龄，由于人类和小鼠的雌性生殖衰老过程相似，该发明的结果也适用于延缓人类女性的卵巢衰老，只是在NAC用量上会有所不同。除直接用药外，在保健品中加入一定量的NAC，也可以对延缓女性衰老。
6、、延长生殖年龄具有重要作用。因此，本发明为延缓雌性生殖衰老的制药提供直接的根据。发明内容0005本发明是一种通过口服NAC抗卵巢衰老的方法。实验中采用昆明雌鼠，对实验组采取口服1MM、01MM高低两种浓度NAC的方法，来检测NAC在延缓昆明雌鼠卵巢衰老方面的作用。研究结果表明，在持续喂药7至12个月后，01MMNAC喂药组雌鼠所产后代总数高于同龄对照组雌鼠。对于各组雌鼠进行超排并进行纺锤体免疫荧光染色的结果表明NAC可以在一定程度上维持卵子的数量和质量。同时，喂药12个月的雌鼠卵巢中的衰老相关基因SIRT1、SIRT2、细胞增殖相关基因CMYC表达量及端粒酶活性、端粒长度均高于同龄对照组雌鼠，。
7、更接近于年轻对照组。说明书CN104116726A2/3页4附图说明0006图1为用NAC喂药不同时间后KM雌鼠的生仔数目。A用1MM和01MMNAC喂药3257周后每只小鼠见栓后生仔数目分布趋势图，与没有喂药0MMNAC的同龄小鼠进行比较；B78月龄、910月龄、1112月龄喂药小鼠的平均生仔数量，与没有喂药同龄小鼠进行比较，以68周龄年前KM雌鼠作为对照。从图中可以看到，在78月龄时01MMNAC喂药小鼠生仔数量显著多于同龄未喂药组小鼠。在910月龄和1112月龄时NAC喂药组平均生仔数较未喂药组有少量增加，但无显著性差异。0007图2为用NAC喂药6个月和12个月后各组KM雌鼠超排得到卵。
8、子的数量。对两个年龄段的各组小鼠施以一定量的激素使其超数排卵，将输卵管划破后释放出卵泡，此时记录每只雌鼠取到的卵子数量及碎裂卵子数量。统计结果发现，与68周龄未喂药年轻KM雌鼠相比随着小鼠年龄的增加小鼠的排卵数量明显减少，而且NAC喂药6个月并没有明显减少老年小鼠产生的碎裂卵子比率，但是与同龄未喂药小鼠相比NAC喂药12个月则显著地降低了碎裂卵子的比率。0008图3为喂药6个月和12个月时各组小鼠超排后取得的卵子的质量。纺锤体形态比较A、异常率比较B。A图中显示的是NAC喂药12个月后小鼠MII期的卵子经过微管染色绿色和核酸蓝色染色后，用荧光显微镜照相后的形态。纺锤体的正常形态和染色体的正常排。
9、列是卵子进行下一步分裂至关重要的条件。在未喂药年老对照组中，染色体排列异常的情况增多如图A白色箭头所示，标志着卵子质量的下降。进一步的统计结果显示，喂药1MM和01MMNAC6个月并未降低纺锤体与染色体排列异常的卵子比例，而在喂药12个月时，NAC喂药组小鼠纺锤体和染色体排列异常的卵子比例较同龄未喂药老年小鼠却有所降低，说明NAC的摄入可以缓解卵巢衰老过程中发生的卵子质量的下降。0009图4为用NAC喂药12个月后各组小鼠卵巢中的衰老相关基因SIRT1、SIRT2，凋亡相关基因BCL2、BAX，增殖相关基因CMYC和DNA损伤修复相关基因M1H1的表达情况。SIRT1、SIRT2的表达在68周。
10、年轻小鼠和12个月年老小鼠中无明显差异，然而在NAC喂药12个月的小鼠中却比同龄对照小鼠显著升高。BC12、BAX、MLH1的表达量在各组之间无明显差异。但喂药组CMYC的表达量却显著高于同龄未喂药组，更接近于年轻对照组。这说明NAC的摄入提高了小鼠卵巢中抗衰老基因及增殖基因的表达，从而对延缓卵巢衰老起到一定的作用。0010图5为用NAC喂药12个月后各组小鼠卵巢中的端粒酶活性B和端粒长度C。端粒酶活性和端粒长度对于维持生物体的寿命有重要作用，端粒酶活性会随年龄增加而降低，而端粒长度也会因机体内积累下来活性氧化物对端粒DNA造成的损伤而变短。从图中我们可以看到，端粒酶活性在喂药组中相对于未喂药。
11、年老对照组有显著的提升，更接近于年轻对照组。喂药组端粒长度较未喂药年老对照组也更长，尤其是01MMNAC喂药组端粒长度显著长于年老对照组。0012星号表示两组之间存在显著性差异，“”代表P005，“”代表P001，“”代表P0001。“YOUNG”代表68周龄的年轻对照组，“0”代表与喂药组同龄的喂正常饮用水的年老对照组，“01MM”代表饮用水中添加了01MM的NAC的喂药组，“1MM”代表饮用水中添加了1MM的NAC的喂药组。说明书CN104116726A3/3页5具体实施方式0013将NAC以01MM和1MM的浓度加入到小鼠的日常饮用水中，让其自由进水进食。说明书CN104116726A1/3页6图1图2说明书附图CN104116726A2/3页7图3说明书附图CN104116726A3/3页8图4图5说明书附图CN104116726A。