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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510922037.4 (22)申请日 2015.12.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105432471 A (43)申请公布日 2016.03.30 (73)专利权人 广西壮族自治区药用植物园 地址 530023 广西壮族自治区南宁市长岗 路189号 (72)发明人 王晓峰 李刚 韦坤华 农东新 缪剑华 李林轩 李翠 王一诺 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所(普通合伙) 11369 代理人 靳浩 (51)Int.Cl. A01。
2、H 4/00(2006.01) (56)对比文件 CN 104514040A ,2015.04.15,全文. 向太和.菊花组织培养植株再生及其后代的 变异. 杭州师范学院学报 （自然科学版） .2006, 第5卷(第1期),第42-44页， 参见摘要. 谢怡青.金边虎尾兰的组织培养褐快速繁 殖. 农业科技通讯 .2007, (第6期),第56页. 娄渊祥.虎皮兰的组织培养. 山西农业科 学 .1987, (第12期),第15页， 一、 取材、 消毒与接 种， 二、 培养方法及程序. 娄渊祥.虎皮兰的组织培养育苗. 中国花卉 盆景 .1988, (第4期),第27页， 一、 取材 二、 培 养.。
3、 刘雪萍.芒果叶提取物体外抗菌作用研究. 中国药业 .2007,第16卷(第9期),第12-13页. 黄凤兰.虎尾兰的组织培养技术研究. 东北 农业大学学报 .2012,第43卷(第1期),第131- 136页. 审查员 陈佩 (54)发明名称 虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法 (57)摘要 本发明公开了一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的 快速繁殖方法， 包括以下步骤： 步骤一、 取虎皮兰 的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养， 得第一 愈伤组织； 步骤二、 将步骤一得到的第一愈伤组 织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 步骤三、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 步骤四、 将步骤。
4、二得到的植株置于生 根培养基中培养， 得到带根植株； 本发明得到的 虎皮兰组培苗繁殖系数高达30-50倍， 生根率 95以上， 成活率100， 有效解决虎皮兰工厂化 育苗的问题。 权利要求书1页 说明书7页 CN 105432471 B 2017.10.27 CN 105432471 B 1.一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 步骤一、 取虎皮兰的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其中， 所 述诱导培养基包括： MS、 0.2-2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、 0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌 呤、 30mg/L的蔗糖和5mg/。
5、L的琼脂， 调整诱导培养基的pH为5.8； 所述步骤一中， 将外植体置 于诱导培养基之前需经消毒处理， 具体为： 将外植体用2的洗洁精水溶液浸泡20分钟， 之 后用线状自来水冲洗外植体15-20分钟， 将冲洗后的外植体置于添加2-3滴吐温-20的0.1 的升汞溶液中浸泡8-10分钟， 取出后用无菌水冲洗3-5次， 最后用消毒滤纸去除外植体表面 的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水； 所述外植体在消 毒后且置于诱导培养基之前还经过了预处理， 具体为： 将外植体浸于诱导膏中， 并放入微波发生器中反应， 在输出功率为450瓦下反应5min， 随后在输出功率为350瓦。
6、下反应10min； 其中， 所述诱导膏包括以下重量份的原料混合而成： 10-15份香蕉泥、 1-5份琼脂、 3-6份芒果叶提取物、 3-6份千年健提取物和1000份水； 步骤二、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其中， 所 述分化培养基包括： MS、 0.5-2.0mg/L的玉米素、 0.2-1.0mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗糖和 5mg/L的琼脂， 调整分化培养基的pH为5.8； 步骤三、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮苗培 养基包括： MS、 0.5-2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1-0.5mg/L。
7、的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和 5mg/L的琼脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8； 步骤四、 将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述生根 培养基包括： 1/2MS、 0.1-1.0mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培养基 的pH为5.8； 步骤五： 将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25的环境中， 打开培养瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗4-7天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 洗净根部培养基 后移栽至沙床中， 在沙床中生长一个月后移栽到苗圃； 带根植株的表面角质形成后在角质 表面涂覆厚度为1-3mm的营养剂后再。
8、移栽至沙床， 所述营养剂包括： 0.0035份的麦芽硒、 0.2 份的藻朊酸、 3-5份的竹醋液、 100份的水、 1-2份的含有氮、 磷、 钾的复合肥； 其中， 在诱导培养基中培养的培养条件： 培养温度为22-26， 黑暗条件下培养25-35 天； 在分化培养基中培养的培养条件： 培养温度为22-26， 光照强度为1500lux， 光照时间 为8-10小时/天， 培养30天； 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为22-26， 光照强度为1500lux， 光照时间 为8-10小时/天， 培养30天； 在生根培养基中培养的培养条件： 培养温度为22-26， 光照强度为1500lux， 光照。
9、时间 为8-10小时/天， 天培养30天。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105432471 B 2 虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法 技术领域 0001 本发明属于一种组织培养和植物繁殖领域， 特别涉及一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的 快速繁殖方法。 背景技术 0002 虎皮兰为龙舌兰科虎皮兰属多年生草本植物， 味甘微辛， 性平， 无毒。 能清热解毒， 活血消肿， 肺热咳嗽， 疮疡肿毒， 跌打损伤， 毒蛇咬伤， 烫火伤。 虎皮兰叶中含大量麻质纤维， 可用于造纸和优质纤维品的开发。 虎皮兰能净化室内环境， 具有吸收室内甲醛， 又能增加室 内空气中的负氧浓度， 具有较高的经济价值。 虎皮兰常。
10、见的繁殖方式有扦插法， 分株法等。 繁殖系数低， 性状容易消失， 影响观赏质量采用花蕾愈伤组织分化培养能有效保留其性状， 达到快速繁殖的目的。 发明内容 0003 本发明的一个目的是提供一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法， 能够快速有 效地提高虎皮兰的繁殖速度和质量， 实现虎皮兰优质种苗的工厂化育苗， 以满足生产上的 需要。 0004 为了实现根据本发明的这些目的和其它优点， 提供了一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的 快速繁殖方法， 包括以下步骤： 0005 步骤一、 取虎皮兰的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其 中， 所述诱导培养基包括： MS、 0.2-2.0mg/L的2,4。
11、-二氯苯氧乙酸、 0.5-2.0mg/L的6-苄氨基 腺嘌呤、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整诱导培养基的pH为5.8； 0006 步骤二、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其 中， 所述分化培养基包括： MS、 0.5-2.0mg/L的玉米素、 0.2-1.0mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗 糖和5mg/L的琼脂， 调整分化培养基的pH为5.8； 0007 步骤三、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮 苗培养基包括： MS、 0.5-2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1-0.5mg/L的萘乙酸、 3。
12、0mg/L的蔗糖 和5mg/L的琼脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8； 0008 步骤四、 将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述 生根培养基包括： 1/2MS、 0.1-1.0mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培 养基的pH为5.8。 0009 优选的是， 所述步骤一中， 将外植体置于诱导培养基之前需经消毒处理， 具体为： 将外植体用2的洗洁精水溶液浸泡20分钟， 之后用线状自来水冲洗外植体15-20分钟， 将 冲洗后的外植体置于添加2-3滴吐温-20的0.1的升汞溶液中浸泡8-10分钟， 取出后用无 菌水冲洗3-5次， 最后。
13、用消毒滤纸去除外植体表面的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述 无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 0010 优选的是， 所述步骤四之后， 还包括： 说 明 书 1/7 页 3 CN 105432471 B 3 0011 步骤五： 将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25的环境中， 打开培养 瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗4-7天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 洗净根部培 养基后移栽至沙床中， 在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。 0012 优选的是， 在诱导培养基中培养的培养条件： 培养温度为22-26， 黑暗条件下培 养25-35天； 0013 在分化培养基中培养的培养条件： 。
14、培养温度为22-26， 光照强度为1500lux， 光照 时间为8-10小时/天， 培养30天； 0014 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为22-26， 光照强度为1500lux， 光照 时间为8-10小时/天， 培养30天； 0015 在生根培养基中培养的培养条件： 培养温度为22-26， 光照强度为1500lux， 光照 时间为8-10小时/天， 天培养30天。 0016 优选的是， 所述外植体在消毒后且置于诱导培养基之前还经过了预处理， 具体为： 0017 将外植体浸于诱导膏中， 并放入微波发生器中反应， 在输出功率为450瓦下反应 5min， 随后在输出功率为350瓦下反应1。
15、0min； 其中， 所述诱导膏包括以下重量份的原料混合 而成： 10-15份香蕉泥、 1-5份琼脂、 3-6份芒果叶提取物、 3-6份千年健提取物和1000份水。 0018 优选的是， 带根植株的表面角质形成后在角质表面涂覆厚度为1-3mm的营养剂后 再移栽至沙床， 所述营养剂包括： 0.0035份的麦芽硒、 0.2份的藻朊酸、 3-5份的竹醋液和100 份的水。 0019 优选的是， 所述营养剂中还加入有1-2重量份的含有氮、 磷、 钾的复合肥。 0020 本发明至少包括以下有益效果： 0021 1、 利用虎皮兰的花蕾进行愈伤组织分化， 有效保留其性状， 短时间内培育出大量 的种苗， 虎皮兰。
16、的组培采用花蕾相对于叶片来说， 其诱导率更高， 而相对于子和肧的组织培 养， 其优势是不会产生形状分离， 保持母株的优良形状。 0022 2、 在分化培养基中添加玉米素和吲哚丁酸属于化学合成物， 较便宜， 可大大降低 组织培养中的消耗， 达到降低成本的目的。 0023 3、 在壮苗培养基中添加6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸促使苗长高和叶的伸展。 0024 4、 采用本技术方案所得到的虎皮兰组培苗繁殖系数高达30-50倍， 生根率95以 上， 成活率100， 有效解决虎皮兰工厂化育苗的问题。 0025 5、 外植体的预处理为在微波发生器中反应， 同时结合诱导膏， 能进一步提高外植 体的诱导率及生根率。。
17、 微波发生器的输出功率不宜超过500瓦， 微波强度过反而会影响外植 体的诱导率。 0026 6、 在带根植株表面涂覆营养剂可加强植株根系的生命力， 使根系更加发达。 0027 本发明的其它优点、 目标和特征将部分通过下面的说明体现， 部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。 具体实施方式 0028 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明， 以令本领域技术人员参照说明书 文字能够据以实施。 0029 实施例1 说 明 书 2/7 页 4 CN 105432471 B 4 0030 一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法， 包括以下步骤： 0031 步骤一： 取虎皮兰的花蕾作。
18、外植体经消毒处理， 具体为： 将外植体用2的洗洁精 水溶液浸泡20分钟， 之后用线状自来水冲洗外植体15分钟， 将冲洗后的外植体置于添加2滴 吐温-20的0.1的升汞溶液中浸泡8分钟， 取出后用无菌水冲洗3次， 最后用消毒滤纸去除 外植体表面的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 0032 步骤二、 将消毒后的外植体置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其中， 所述 诱导培养基包括： MS、 0.2mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、 0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 30mg/L的 蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整诱导培养基的pH为5.8。 在诱导培养基中培。
19、养的培养条件： 培养温 度为22， 黑暗条件下培养25天。 0033 步骤三、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其 中， 所述分化培养基包括： MS、 0.5mg/L的玉米素、 0.2mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/ L的琼脂， 调整分化培养基的pH为5.8。 在分化培养基中培养的培养条件： 培养温度为22， 光照强度为1500lux， 光照时间为8小时/天， 培养30天。 0034 步骤四、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮 苗培养基包括： MS、 0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的萘乙。
20、酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的 琼脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8。 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为22， 光照 强度为1500lux， 光照时间为8小时/天， 培养30天。 0035 步骤五、 将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述 生根培养基包括： 1/2MS、 0.1-1.0mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培 养基的pH为5.8。 在生根培养基中培养的培养条件： 培养温度为22， 光照强度为1500lux， 光照时间为8小时/天， 天培养30天。 0036 步骤六： 将步骤四得到的带根植株连同培养瓶。
21、一起放入25的环境中， 打开培养 瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗4天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 洗净根部培养 基后移栽至沙床中， 在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。 0037 实施例2 0038 一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法， 包括以下步骤： 0039 步骤一： 取虎皮兰的花蕾作外植体经消毒处理， 具体为： 将外植体用2的洗洁精 水溶液浸泡20分钟， 之后用线状自来水冲洗外植体20分钟， 将冲洗后的外植体置于添加3滴 吐温-20的0.1的升汞溶液中浸泡10分钟， 取出后用无菌水冲洗5次， 最后用消毒滤纸去除 外植体表面的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述无菌水为经。
22、高压灭菌的蒸馏水。 0040 步骤二、 将消毒后的外植体置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其中， 所述 诱导培养基包括： MS、 2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、 2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 30mg/L的 蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整诱导培养基的pH为5.8。 在诱导培养基中培养的培养条件： 培养温 度为26， 黑暗条件下培养35天。 0041 步骤三、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其 中， 所述分化培养基包括： MS、 2.0mg/L的玉米素、 1.0mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/ L的琼脂， 调整分化培养基的。
23、pH为5.8。 在分化培养基中培养的培养条件： 培养温度为26， 光照强度为1500lux， 光照时间为10小时/天， 培养30天。 0042 步骤四、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮 说 明 书 3/7 页 5 CN 105432471 B 5 苗培养基包括： MS、 2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.5mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的 琼脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8。 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为26， 光照 强度为1500lux， 光照时间为10小时/天， 培养30天。 0043 步骤五、 将步骤二得到。
24、的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述 生根培养基包括： 1/2MS、 1.0mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培养基 的pH为5.8。 在生根培养基中培养的培养条件： 培养温度为26， 光照强度为1500lux， 光照 时间为10小时/天， 天培养30天。 0044 步骤六： 将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25的环境中， 打开培养 瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗7天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 洗净根部培养 基后移栽至沙床中， 在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。 0045 实施例3 0046 一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的。
25、快速繁殖方法， 包括以下步骤： 0047 步骤一： 取虎皮兰的花蕾作外植体经消毒处理， 具体为： 将外植体用2的洗洁精 水溶液浸泡20分钟， 之后用线状自来水冲洗外植体18分钟， 将冲洗后的外植体置于添加2滴 吐温-20的0.1的升汞溶液中浸泡9分钟， 取出后用无菌水冲洗4次， 最后用消毒滤纸去除 外植体表面的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 0048 步骤二、 将消毒后的外植体置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其中， 所述 诱导培养基包括： MS、 1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、 1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 30mg/L的蔗糖 和5mg/。
26、L的琼脂， 调整诱导培养基的pH为5.8。 在诱导培养基中培养的培养条件： 培养温度为 24， 黑暗条件下培养30天。 0049 步骤三、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其 中， 所述分化培养基包括： MS、 1mg/L的玉米素、 0.5mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L 的琼脂， 调整分化培养基的pH为5.8。 在分化培养基中培养的培养条件： 培养温度为24， 光 照强度为1500lux， 光照时间为9小时/天， 培养30天。 0050 步骤四、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮 苗培养基包括： MS、。
27、 1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.4mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的 琼脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8。 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为24， 光照 强度为1500lux， 光照时间为9小时/天， 培养30天。 0051 步骤五、 将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述 生根培养基包括： 1/2MS、 0.8mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培养基 的pH为5.8。 在生根培养基中培养的培养条件： 培养温度为24， 光照强度为1500lux， 光照 时间为9小时/天， 天培养30天。 。
28、0052 步骤六： 将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25的环境中， 打开培养 瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗5天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 洗净根部培养 基后移栽至沙床中， 在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。 0053 实施例4 0054 一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法， 包括以下步骤： 0055 步骤一、 取虎皮兰的花蕾作外植体， 将外植体消毒处理， 具体为： 将外植体用2的 洗洁精水溶液浸泡20分钟， 之后用线状自来水冲洗外植体15分钟， 将冲洗后的外植体置于 说 明 书 4/7 页 6 CN 105432471 B 6 添加2滴吐温-20的0.1的升汞溶液中浸。
29、泡8分钟， 取出后用无菌水冲洗3次， 最后用消毒滤 纸去除外植体表面的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏 水。 0056 步骤二、 所述外植体在消毒后还经过了预处理， 具体为： 0057 将外植体浸于诱导膏中， 并放入微波发生器中反应， 在输出功率为450瓦下反应 5min， 随后在输出功率为350瓦下反应10min； 其中， 所述诱导膏包括以下重量份的原料混合 而成： 10份香蕉泥、 1份琼脂、 3份芒果叶提取物、 3份千年健提取物和1000份水。 0058 步骤三、 置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其中， 所述诱导培养基包括： MS、 0.2mg/。
30、L的2,4-二氯苯氧乙酸、 0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼 脂， 调整诱导培养基的pH为5.8。 在诱导培养基中培养的培养条件： 培养温度为22， 黑暗条 件下培养25天。 0059 步骤四、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其 中， 所述分化培养基包括： MS、 0.5mg/L的玉米素、 0.2mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/ L的琼脂， 调整分化培养基的pH为5.8。 在分化培养基中培养的培养条件： 培养温度为22， 光照强度为1500lux， 光照时间为8小时/天， 培养30天。 0060 步骤五、。
31、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮 苗培养基包括： MS、 0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的 琼脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8。 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为22， 光照 强度为1500lux， 光照时间为8小时/天， 培养30天。 0061 步骤六、 将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述 生根培养基包括： 1/2MS、 0.1mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培养基 的pH为5.8。 在生根培养基中培养的培养。
32、条件： 培养温度为22， 光照强度为1500lux， 光照 时间为8小时/天， 天培养30天。 0062 步骤七： 将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25的环境中， 打开培养 瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗4天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 洗净根部培养 基， 在角质表面涂覆厚度为1mm的营养剂后再移栽至沙床， 所述营养剂包括： 0.0035份的麦 芽硒、 0.2份的藻朊酸、 3份的竹醋液和100份的水。 在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。 0063 实施例5 0064 一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法， 包括以下步骤： 0065 步骤一、 取虎皮兰的花蕾作外植体， 将外植。
33、体消毒处理， 具体为： 将外植体用2的 洗洁精水溶液浸泡20分钟， 之后用线状自来水冲洗外植体20分钟， 将冲洗后的外植体置于 添加3滴吐温-20的0.1的升汞溶液中浸泡10分钟， 取出后用无菌水冲洗5次， 最后用消毒 滤纸去除外植体表面的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏 水。 0066 步骤二、 所述外植体在消毒后还经过了预处理， 具体为： 0067 将外植体浸于诱导膏中， 并放入微波发生器中反应， 在输出功率为450瓦下反应 5min， 随后在输出功率为350瓦下反应10min； 其中， 所述诱导膏包括以下重量份的原料混合 而成： 15份香蕉泥、 5份琼脂。
34、、 6份芒果叶提取物、 6份千年健提取物和1000份水。 0068 步骤三、 置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其中， 所述诱导培养基包括： 说 明 书 5/7 页 7 CN 105432471 B 7 MS、 2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、 2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼 脂， 调整诱导培养基的pH为5.8。 在诱导培养基中培养的培养条件： 培养温度为26， 黑暗条 件下培养35天。 0069 步骤四、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其 中， 所述分化培养基包括： MS、 2.0mg/L的玉米素、 1.。
35、0mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/ L的琼脂， 调整分化培养基的pH为5.8。 在分化培养基中培养的培养条件： 培养温度为26， 光照强度为1500lux， 光照时间为10小时/天， 培养30天。 0070 步骤五、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮 苗培养基包括： MS、 2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.5mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的 琼脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8。 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为26， 光照 强度为1500lux， 光照时间为10小时/天， 培养30天。 0071 步。
36、骤六、 将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述 生根培养基包括： 1/2MS、 1.0mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培养基 的pH为5.8。 在生根培养基中培养的培养条件： 培养温度为26， 光照强度为1500lux， 光照 时间为10小时/天， 天培养30天。 0072 步骤七： 将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25的环境中， 打开培养 瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗7天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 洗净根部培养 基， 在角质表面涂覆厚度为3mm的营养剂后再移栽至沙床， 所述营养剂包括： 0.0035。
37、份的麦 芽硒、 0.2份的藻朊酸、 5份的竹醋液和100份的水。 在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。 0073 实施例6 0074 一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法， 包括以下步骤： 0075 步骤一、 取虎皮兰的花蕾作外植体， 将外植体消毒处理， 具体为： 将外植体用2的 洗洁精水溶液浸泡20分钟， 之后用线状自来水冲洗外植体18分钟， 将冲洗后的外植体置于 添加2滴吐温-20的0.1的升汞溶液中浸泡9分钟， 取出后用无菌水冲洗4次， 最后用消毒滤 纸去除外植体表面的水分， 即得消毒后的外植体； 其中， 所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏 水。 0076 步骤二、 所述外植体在消毒后还经过了预处。
38、理， 具体为： 0077 将外植体浸于诱导膏中， 并放入微波发生器中反应， 在输出功率为450瓦下反应 5min， 随后在输出功率为350瓦下反应10min； 其中， 所述诱导膏包括以下重量份的原料混合 而成： 11份香蕉泥、 4份琼脂、 4份芒果叶提取物、 4份千年健提取物和1000份水。 0078 步骤三、 置于诱导培养基中培养， 得第一愈伤组织； 其中， 所述诱导培养基包括： MS、 1.1mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、 1.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼 脂， 调整诱导培养基的pH为5.8。 在诱导培养基中培养的培养条件： 培养温度为24， 黑暗条。
39、 件下培养26天。 0079 步骤四、 将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养， 得到丛生芽； 其 中， 所述分化培养基包括： MS、 1.1mg/L的玉米素、 0.8mg/L的吲哚丁酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/ L的琼脂， 调整分化培养基的pH为5.8。 在分化培养基中培养的培养条件： 培养温度为24， 光照强度为1500lux， 光照时间为9小时/天， 培养30天。 0080 步骤五、 将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养， 得到植株； 其中， 所述壮 说 明 书 6/7 页 8 CN 105432471 B 8 苗培养基包括： MS、 2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0。
40、.4mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼 脂， 调整壮苗培养基的pH为5.8。 在壮苗培养基中培养的培养条件： 培养温度为23， 光照强 度为1500lux， 光照时间为9小时/天， 培养30天。 0081 步骤六、 将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养， 得到带根植株； 其中， 所述 生根培养基包括： 1/2MS、 0.7mg/L的萘乙酸、 30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂， 调整生根培养基 的pH为5.8。 在生根培养基中培养的培养条件： 培养温度为24， 光照强度为1500lux， 光照 时间为9小时/天， 天培养30天。 0082 步骤七： 将步骤四得到的带根植。
41、株连同培养瓶一起放入25的环境中， 打开培养 瓶盖， 向培养瓶内添加自来水， 炼苗5天， 待带根植株的表面角质形成后取出， 带根植株的表 面角质形成后， 洗净根部培养基， 在角质表面涂覆厚度为1-3mm的营养剂后再移栽至沙床， 所述营养剂包括： 0.0035份的麦芽硒、 0.2份的藻朊酸、 4份的竹醋液和100份的水。 在沙床中 生长一个月后移栽到苗圃。 0083 为了说明本发明的效果， 发明人提供比较实验如下： 0084 对比例1： 虎皮兰叶片进行培育进行组培， 其它条件与实施例6相同。 0085 实验： 0086 按照实施例1、 实施例2、 实施例3、 实施例4、 实施例5、 实施例6和对。
42、比例1进行虎皮 兰的组织培养， 考察不同条件的诱导率和生根率， 见表1。 0087 表1 0088 诱导率/生根率/ 实施例19495 实施例29495 实施例39596 实施例49797 实施例59798 实施例69899 对比例18790 0089 从表1可知， 采用花蕾相较于叶片进行组织培养虎皮兰， 采用花蕾组培诱导率和生 根率都相较于采用叶片要显著提高。 0090 尽管本发明的实施方案已公开如上， 但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域， 对于熟悉本领域的人员而言， 可容易地 实现另外的修改， 因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下， 本发明并不限 于特定的细节和这里示出与描述的实施例。 说 明 书 7/7 页 9 CN 105432471 B 9 。