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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201410550358.1 (22)申请日 2014.10.17 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 南京帝道农业科技有限公司 地址 211225 江苏省南京市溧水区白马镇工 业集中区 (72)发明人 刘东锋 杨成东 (54) 发明名称 一种绿叶五味子植株再生的快速繁殖方法 (57) 摘要 本发明研究了一种绿叶五味子植株再生的快 速繁殖方法， 包括无菌外植体的获得， 愈伤组织的 诱导， 愈伤组织的分化， 生根诱导等步骤。本研 究采用组织培养的方法对绿叶五味子进行快速繁 殖， 组织培养时间短， 增殖率高和全能生产等优 点。
2、， 比大田生产快得多， 能保持母本的遗传性状和 生物特性， 在短时内种植于田间， 可以加强对种质 资源的保护。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书2页 (10)申请公布号 CN 104381129 A (43)申请公布日 2015.03.04 CN 104381129 A 1/1 页 2 1. 本发明研究了一种绿叶五味子植株再生的快速繁殖方法， 包括无菌外植体的获得， 愈伤组织的诱导， 愈伤组织的分化， 生根诱导等， 其主要步骤如下 ： （1） 取绿叶五味子的幼嫩叶片， 对其进行消毒处理 ； （2）将步骤 （1）消毒处理过。
3、的绿叶五味子叶片接入培养基为 1/2MN+2， 4-D0.5mg/ L+TDZ0.5mg/L+5mg/L 硝酸银进行愈伤组织诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 暗光 照， 温度 232 ； （3）取 步 骤 （2）诱导出来的愈伤组织放入分化培养基 1/2MN+6-BA0.8-1.0mg/ L+CM25-30%+CH500mg/L， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 光照 1200lx， 温度 232 ； （4） 取步骤 （3） 分化培养出来的绿叶五味子芽苗进行生根诱导。 2. 按照权利要求 1 所述的一种绿叶五味子植株再生的快速繁殖方法。
4、， 其特征在于 ： 步 骤 （1） 中所述绿叶五味子无菌叶片的获得为， 取绿叶五味子新抽出的幼嫩叶片， 用 10% 的过 氧化氢处理 8min， 无菌水冲洗 5 次。 3. 按照权利要求 1 所述的一种绿叶五味子植株再生的快速繁殖方法， 其特征在于 ： 步 骤 （4） 绿叶五味子生根诱导的方法为将绿叶五味子分化出来的芽苗放入恒温 28的智能 人工气候培养柜内培养， 培养条件为光照时间 24h/d， 光照强度 2000lx。 权 利 要 求 书 CN 104381129 A 2 1/2 页 3 一种绿叶五味子植株再生的快速繁殖方法 技术领域 0001 本发明涉及植物组织培养的快繁方法， 属于植物。
5、技术领域。 背景技术 0002 绿叶五味子，Schisandra viridis A. C. Smith， 五味子科， 别名内风消、 小血藤、 过山风、 落叶木质藤本， 全株无毛， 小枝具稀疏细纵条纹， 当年生枝紫褐色， 短枝间疏离， 二 年生枝变灰褐色， 叶纸质， 卵状椭圆形， 通常最宽处在中部以下， 长 4-16 厘米， 宽 2-4（7） 厘 米， 先端渐尖， 基部钝或阔楔形， 中上部边缘有胼胝质齿尖的粗锯齿或波状疏齿， 上面绿色， 下面浅绿色， 干时榄绿色， 侧脉每边 3-6 条， 网脉稀疏而明显。分布于安徽、 浙江、 江西、 福 建、 湖南、 广东、 广西、 贵州等地， 生于 250-。
6、1200m 的林中、 山坡路旁及山沟溪边。功效 ： 祛风 活血 ； 行气止痛， 主治 ： 风湿骨痛 ； 胃痛 ； 疝气痛 ； 月经不调 ； 荨麻疹 ； 带状疱疹。 发明内容 0003 本发明所要解决的技术问题是提供假地蓝植株再生的快速繁殖方法， 本研究采用 组织培养的方法对绿叶五味子进行快速繁殖， 组织培养时间短， 增殖率高和全能生产等优 点， 比大田生产快得多， 能保持母本的遗传性状和生物特性， 在短时内种植于田间， 可以加 强对种质资源的保护。 0004 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的 ： 取绿叶五味子新抽出的幼嫩叶片， 用 10% 的过氧化氢处理 8min， 无菌水冲洗 。
7、5 次， 消 毒处理过的绿叶五味子叶片接入培养基为 1/2MN+2， 4-D0.5mg/L+TDZ0.5mg/L+5mg/L 硝酸 银进行愈伤组织诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 暗光照， 温度 232， 诱导出 来的愈伤组织放入分化培养基 1/2MN+6-BA0.8-1.0mg/L+CM25-30%+CH500mg/L， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 光照 1200lx， 温度 232， 将绿叶五味子分化出来的芽苗放入 恒温 28的智能人工气候培养柜内培养， 培养条件为光照时间 24h/d， 光照强度 2000lx。 0005 。
8、采用本发明制备的绿叶五味子成活率高， 周期短， 产量大， 能耗少， 利于大规模种 植。 0006 下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述， 但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。 具体实施方式 0007 实施例 1 取绿叶五味子新抽出的幼嫩叶片， 用 10% 的过氧化氢处理 8min， 无菌水冲洗 5 次， 消毒 处理过的绿叶五味子叶片接入培养基为 1/2MN+2， 4-D0.5mg/L+TDZ0.5mg/L+5mg/L 硝酸银 进行愈伤组织诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 暗光照， 温度 232， 诱导出来 的愈伤组织放入分化培养基 1/2MN。
9、+6-BA0.8mg/L+CM25%+CH500mg/L， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 光照 1200lx， 温度 232， 将绿叶五味子分化出来的芽苗放入恒温 28的 说 明 书 CN 104381129 A 3 2/2 页 4 智能人工气候培养柜内培养， 培养条件为光照时间 24h/d， 光照强度 2000lx， 生根率 92%。 0008 实施例 2 取绿叶五味子新抽出的幼嫩叶片， 用 10% 的过氧化氢处理 8min， 无菌水冲洗 5 次， 消毒 处理过的绿叶五味子叶片接入培养基为 1/2MN+2， 4-D0.5mg/L+TDZ0.5mg/L+5mg/L。
10、 硝酸银 进行愈伤组织诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 暗光照， 温度 232， 诱导出来 的愈伤组织放入分化培养基 1/2MN+6-BA1.0mg/L+CM30%+CH500mg/L， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 光照 1200lx， 温度 232， 将绿叶五味子分化出来的芽苗放入恒温 28的 智能人工气候培养柜内培养， 培养条件为光照时间 24h/d， 光照强度 2000lx， 生根率 93%。 0009 实施例 3 取绿叶五味子新抽出的幼嫩叶片， 用 10% 的过氧化氢处理 8min， 无菌水冲洗 5 次， 消毒 处理过的。
11、绿叶五味子叶片接入培养基为 1/2MN+2， 4-D0.5mg/L+TDZ0.5mg/L+5mg/L 硝酸银 进行愈伤组织诱导， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 暗光照， 温度 232， 诱导出来 的愈伤组织放入分化培养基 1/2MN+6-BA1.0mg/L+CM25%+CH500mg/L， 附加蔗糖 30g/L， 琼脂 6.5g/L， pH5.8， 光照 1200lx， 温度 232， 将绿叶五味子分化出来的芽苗放入恒温 28的 智能人工气候培养柜内培养， 培养条件为光照时间 24h/d， 光照强度 2000lx， 生根率 94%。 说 明 书 CN 104381129 A 4 。