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1、(10)申请公布号 CN 102145027 A (43)申请公布日 2011.08.10 CN 102145027 A *CN102145027A* (21)申请号 201010607395.3 (22)申请日 2010.12.28 A61K 36/15(2006.01) A61P 5/24(2006.01) (71)申请人 烟台新时代健康产业有限公司 地址 264006 山东省烟台市开发区淮河路 6 号 申请人 新时代健康产业 （集团） 有限公司 (72)发明人 周斌 刘志河 石丽花 叶满红 王桐 于建伟 鞠东 尹利端 李明 乔强 (74)专利代理机构 扬州市锦江专利事务所 32106 代。
2、理人 江平 (54) 发明名称 用于治疗儿童性早熟的松花粉水提取物及其 制备方法、 用途 (57) 摘要 用于治疗儿童性早熟的松花粉水提取物及其 制备方法、 用途， 涉及从松花粉中提取有效物质工 艺技术领域。将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁 处理1020分钟 ； 以常压常温水浸泡1015分 钟后， 再以超声波处理 20 40 分钟 ； 离心法除去 固体杂质， 取上清液 ； 将上清在 1 5的环境温 度下以分子筛超滤分离， 取得分子量为 4000D 以 下的松花粉水溶性物质。可将松花粉提取物用于 制备治疗儿童性早熟口服制剂， 吸收效果好、 价格 低廉， 可预防儿童性早熟的发生。 还可将松花粉提 取。
3、物用于制备治疗儿童性早熟的注射制剂， 吸收 迅速、 治疗针对性强。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 8 页 CN 102145028 A1/1 页 2 1. 用于治疗儿童性早熟的松花粉水提取物， 其特征在于所述提取物为从松花粉中提取 的分子量小于 4000D 的水溶性物质。 2. 一种如权利要求 1 所述用于治疗儿童性早熟的松花粉提取物的制备方法， 其特征在 于包括以下步骤 ： 1） 将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理 10 20 分钟 ； 2） 以常压常温水浸泡 10 15 分钟后， 再以超声波处理。
4、 20 40 分钟 ； 3） 离心法除去固体杂质， 取上清液 ； 4） 将所述上清在 1 5的环境温度下以分子筛超滤分离， 取得分子量为 4000D 以下 的裸子植物松花粉水溶性物质。 3. 根据权利要求 2 所述制备方法， 其特征在于步骤 3）中所述离心法是在转速为 8000 10000 转的冷冻离心机中离心 10 15 分钟。 4. 如权利要求 1 所述用于治疗儿童性早熟的松花粉提取物用于制备治疗儿童性早熟 的口服制剂。 5. 如权利要求 1 所述用于治疗儿童性早熟的松花粉提取物用于制备治疗儿童性早熟 的注射制剂。 权 利 要 求 书 CN 102145027 A CN 102145028。
5、 A1/5 页 3 用于治疗儿童性早熟的松花粉水提取物及其制备方法、 用 途 技术领域 0001 本发明涉及从裸子植物， 特别是从松花粉中提取有效物质工艺技术领域。 背景技术 0002 性早熟是指儿童性成熟的年龄明显提前， 主要表现为儿童的性腺 （即男性的睾丸、 女性的卵巢） 功能过早发育、 生殖器官发育提前和出现第二性征。医学上将性早熟的年龄 界定为女孩 8 岁以前、 男孩 9 岁以前， 出现与年龄不相应的第二性征就叫性早熟。女孩身体 出现周期性阴道流血、 乳房增大、 臀部变宽、 阴毛腋毛生长、 月经来潮等， 并伴有体格发育， 如身高、 体重、 骨骼的增长的现象。男孩 9 岁以前出现睾丸阴囊。
6、增大， 阴茎增长变粗， 出现阴 毛、 胡须、 腋毛， 声音变粗且低沉， 喉结变大， 身材长高， 甚至出现阴茎勃起、 排精现象等。性 早熟常伴随身体发育加速， 如身体增高、 肌肉发育加快、 骨骺提前闭合， 以及较早地生长停 止。如果女孩在长大的过程中， 过早地出现了男性性征， 如长胡须、 长喉结， 说话声音变粗 等， 而男孩则出现乳房增大等女性特征， 则叫异性性早熟。 0003 性早熟分为真性性早熟和假性性早熟。真性性早熟又叫完全性早熟， 它是指青春 期提前建立在 “下丘脑垂体” 成熟的基础上， 有第二性征出现， 并且男孩有遗精、 女孩有排卵 现象。 假性性早熟又叫不完全性早熟， 性早熟的孩子只。
7、有乳房发育、 阴毛发育或者月经来潮 现象， 并无性腺发育， 无排卵现象， 无生育功能。儿童性早熟易导致个矮、 早恋和性格怪异。 性早熟的孩子几乎个个成年后都矮小， 身体越早成熟也就意味着身高增长停止得越早。发 育提早一年， 往往会损失 5 厘米左右的身高， 而女孩月经来潮 1 2 年或男孩遗精后基本上 就丧失了增高的机会。 不少家长误以为月经来潮是青春期开始的标志， 其实医学认为， 月经 来潮往往意味青春期发育已接近尾声， 此时再不治疗就晚了。性早熟的女孩很多成年后身 高达不到150厘米、 男孩不超过160厘米， 继而会给他们将来的升学、 就业、 成家等带来一系 列困难。 性早熟的儿童由于缺乏。
8、必要的知识， 往往会背负不必要的精神负担， 使他们觉得自 己是和同学们不一样， 存在自卑心理， 性格逐渐变得怪异。此外， 生理上的巨大改变也可能 引发性早熟儿童对性产生强烈兴趣和好奇， 从而对学习无法集中注意力， 甚至会引发早恋 等社会问题。 0004 儿童性早熟问题已经成为一个亟需重视和解决的社会问题， 我们急需研究出能控 制我国少年儿童性早熟的良药 , 这是关系子孙后代的大事。 0005 松花粉是裸子植物松树的雄性生殖细胞， 担负着松树繁衍的重任， 包含着孕育新 生命所必需的全部营养物质， 其营养丰富、 均衡、 搭配合理， 是纯天然的营养宝库。 松花粉是 松科植物马尾松、 油松或同属树种的。
9、花粉， 产生于雄蕊的花芯中是松树体精华之所在。 松花 粉是中国医学宝库中的药食兼用花粉品种， 作为中国传统药材， 其药食兼用的历史已逾数 千年， 从 2400 年前的 神农本草经 到今天的 中华人民共和国药典 等历代医药典籍中都 有记载， 明代的 本草纲目 中记载 “松花， 甘、 温、 无毒。润心肺， 益气， 除风止血。 ” 在民间 更是以其神奇的功效被奉为 “仙药” 。 人工采集的松花粉具有品质纯净、 无污染、 无异体花粉 说 明 书 CN 102145027 A CN 102145028 A2/5 页 4 或有毒花粉掺杂、 无动物激素的特点， 是纯天然的绿色食品。松花粉中含有丰富的蛋白质、。
10、 氨基酸、 不饱和脂肪酸、 多糖、 维生素、 膳食纤维、 酶类、 黄酮、 核酸、 天然激素等多种营养成 分和生物活性物质， 众多研究表明其具有调节内分泌， 改善生殖机能、 促进新陈代谢， 提高 机体免疫力等功效， 是大自然赐予人类的天然营养库。 过去人们对松花粉存在错误的认识， 没有经过必要的研究就认为服用松花粉及其制品是造成我国少年儿童性早熟的罪魁祸首， 几乎全国有关少年儿童性早熟的专家都这么认为， 殊不知松花粉可能成为防治我国少年儿 童性早熟的良药。 发明内容 0006 本发明第一目的在于发明一种从根本上高效治疗儿童性早熟的裸子植物松花粉 提取物。 0007 本发明所述提取物为从裸子植物松。
11、花粉中提取的分子量为 4000D 以下的水溶性 物质。 0008 本发明的第二个目的在于发明上述松花粉水溶性物质的制备方法。 0009 包括以下步骤 ： 1） 将裸子植物松花粉经气流粉碎破壁处理 10 20 分钟 ； 2） 以常压常温水浸泡 10 15 分钟后， 再以超声波处理 20 40 分钟 ； 3） 离心法除去固体杂质， 取上清液 ； 4） 将上清在 1 5的环境温度下以分子筛超滤分离， 取得分子量为 4000D 以下的松 花粉水溶性物质。 0010 本发明所述步骤 1） 的气流粉碎破壁时间为 10 20 分钟， 目的是破坏松花粉的细 胞壁， 便于松花粉中有效成份的提取和保持活性。 00。
12、11 本发明步骤2） 中先经浸泡时间为1015分钟， 然后再超声波处理2040分钟， 目的是便于松花粉中有效成份充分溶解、 分离。 0012 本发明步骤 3） 中除去固体杂质的方法是在转速为 8000 10000 转的冷冻离心机 中离心 10 15 分钟。目的是有效去除松花粉中固体杂质， 使提取液澄清、 透明， 使提取液 得到进一步提纯。 0013 经试验， 利用松花粉治疗儿童性早熟效果显著， 且无副作用， 而且费用低廉， 简单 易行， 便于生产。松花粉是裸子植物雄蕊花药， 是松树的雄性生殖细胞。松花粉内含各种丰 富的营养物质， 具有多种的生物学活性。 松花粉能够在激素的受体水平上发挥抗雌激素。
13、、 抗 雄激素的药理作用， 抑制二氢睾丸酮的生物效应 , 使发育的腺体逆转近似正常， 但对松花 粉中是何物质起作用目前研究不多。 本发明就是利用水提的方法从松花粉分离出对儿童性 早熟有治疗效果的成份。 0014 本发明再一目的在于发明上述松花粉水提物的应用方法。 0015 一种应用方法是 ： 用于治疗儿童性早熟的裸子植物松花粉提取物用于制备治疗儿 童性早熟口服制剂。 0016 作为口服制剂的优点是使用方便、 吸收效果好、 价格低廉， 可作为儿童一般保健使 用， 预防儿童性早熟的发生。 第二种应用方法是 ： 用于治疗儿童性早熟的裸子植物松花粉提取物用于制备治疗儿童 说 明 书 CN 102145。
14、027 A CN 102145028 A3/5 页 5 性早熟的注射制剂。 0017 作为注射制剂的优点是吸收迅速、 治疗针对性强。 附图说明 0018 图 1 为自然健康组睾丸组织切片图。 0019 图 2 为图 1 的局部放大图。 0020 图 3 为注射丙酸睾丸酮模型对照组睾丸组织切片图。 0021 图 4 为图 3 的局部放大图。 0022 图 5 为灌胃松花粉水提液组睾丸组织切片图。 0023 图 6 为图 5 的局部放大图。 0024 图 7 为注射松花粉水提液组睾丸组织切片图。 0025 图 8 为图 7 的局部放大图。 具体实施方式 0026 一、 制备裸子植物松花粉治疗儿童性。
15、早熟的水提物 ： 1、 分检松花粉 ： 在常温下去除松花粉杂质。 0027 2、 破壁处理 ： 将除杂的松花粉经气流粉碎破壁处理 10 20 分钟。 0028 3、 浸泡、 超声处理 ： 以常压常温水浸泡破壁处理后的松花粉 10 15 分钟， 然后再 超声波处理 20 40 分钟。 0029 4、 离心除去固体杂质， 取水溶液 ： 在转速为 8000 10000 转的冷冻离心机中离心 10 15 分钟， 取上清。 0030 5、 超滤 ： 将所取的上清在 1 5的环境温度下采用 4000D 的分子筛超滤， 分离 出分子量为 4000D 以下的松花粉水提物， 即为用于治疗儿童性早熟的裸子植物松花。
16、粉水提 物。 0031 二、 制备口服制剂和注射制剂 ： 1、 制备口服制剂 A ： 将治疗儿童性早熟的裸子植物松花粉水提物与蜂蜜或其他食品添加剂调匀， 经超滤和 巴氏消毒灭菌后， 灌装， 即成。 2、 制备注射制剂 B ： 将治疗儿童性早熟的裸子植物松花粉水提物巴氏消毒灭菌后与注射生理盐水以 1 1 2 的体积比混和， 均匀溶解后抽真空密封， 即成。 0032 三、 应用 ： （一） 试验对象 ： 大鼠 （体重 200 300 克） （二） 使用剂量 ： 1、 口服制剂 ： 口服 4-6 毫升 / 天， 连接服用 40 60 天。 0033 2、 注射 ： 肌肉或腹腔注射 2-4 毫升 / 。
17、天连续 20-30 天。 0034 （三） 对比结果 ： 试验组二月龄 SD 大鼠睾丸组织切片结果比较 ： 说 明 书 CN 102145027 A CN 102145028 A4/5 页 6 1、 从自然健康组睾丸组织切片图 1、 2 可见 ： 雄性大白鼠睾丸生精上皮细胞层数多， 各 级生精细胞界限明显， 生精小管管腔内有大量精子存在。 0035 2、 从注射丙酸睾丸酮模型组睾丸组织切片图 3、 4 可见 ： 睾丸生精上皮细胞层数 少， 细胞排列稀疏， 精原细胞少。 0036 3、 从灌胃松花粉水提液组睾丸组织切片图 5、 6 可见 ： 睾丸生精上皮细胞层数又增 多， 细胞排列整齐， 细密。。
18、 0037 4、 从注射松花粉水提液组睾丸组织切片图 7、 8 可见 ： 睾丸生精上皮细胞层数多， 各级生精细胞界限明显。 0038 睾丸是产生精子和分泌雄性激素的器官， 左右各一， 多呈卵圆形。外面有两层被 膜， 即鞘膜和白膜。 其内部实质被结缔组织的中隔分为许多睾丸小叶， 每个睾丸小叶内含有 迂回盘旋的曲精小管， 每一曲精小管内有大量不同发育阶段的精细胞。幼稚阶段的靠近基 膜， 发育愈成熟的愈靠近管腔， 依次为精原细胞、 精母细胞、 精子细胞和精子。 从睾丸组织切 片可以发现花粉水提液对大鼠睾丸发育是有影响的， 不管是灌胃， 还是腹腔注射都能显著 影响睾丸的组织结构和发育状态， 但不同种类。
19、、 剂量和使用方法对睾丸发育影响很大， 从睾 丸组织切片来看注茶组在调控睾丸发育方面效果最好， 证明了花粉水提液能够抵抗外源性 雄激素的不利影响， 对睾丸起到保护作用。 0039 松花粉水提液对各实验组血清性激素和促性腺激素的影响， 见下表 ： 各实验组血清性激素、 促性腺激素平均数统计表 雌二醇 (pmol/l) 睾酮 (nmol/l) LH(mIu/ml) FSH(mIu/ml) 对照组 64.2233.05 22.7613.16 2.650.88 3.560.60 模型组 66.333.48 30.0222.10 2.880.70 3.400.54 灌松组 75.337.07 7.433。
20、.23 2.420.77 2.121.07 腹注松组 93.224.94 16.3718.33 2.600.53 3.041.05 经统计分析， 腹注松组的血清雌二醇含量与对照组、 模型组显著高 ； 灌松组血 清睾酮含量与模型组极显著低， 灌松组血清睾酮含量与对照组显著低。灌松组血清 FSH 含 量与对照组、 模型组极显著低， 灌松组血清 FSH 含量与腹注松组显著低。血清 LH 含量差异 不显著。 0040 性机能开始成熟并排出成熟精子， 是雄性青春期发育的显著特点。性成熟有赖于 脑垂体前叶分泌出来的促性腺激素。FSH 和 LH 均由垂体前叶同一细胞所合成， 但分别储存 在不同的小泡 （ve。
21、sieles） 中。 两者均为糖蛋白 （glyeoproteins） 激素， 分子量分别是33000 和 28000。FSH、 LH、 T 和 E2 都与睾丸及其生精过程有关， 前两种激素都是通过提高局部雄激 素浓度而影响生精过程， LH 可促进间质细胞发育并分泌 T， FSH 可刺激支持细胞分泌雄激素 结合蛋白， 这些有助于提高曲细精管局部雄激素浓度， 从而促进生精上皮的发育和精子生 成。精子生成和成熟需要 FSH 与 T 共同作用， FSH 主要作用于精子成熟最后阶段， 促进次级 精母细胞发育为精子细胞和精子。经统计分析， 灌松组血清 FSH 含量与对照组、 模型组比极 显著低， 灌松组血。
22、清 FSH 含量与腹注松组比显著低。灌松组血清睾酮含量与模型组比极显 著低, 灌松组血清睾酮含量与对照组比显著低。 这表明灌喂松花粉水提取液能显著降低血 清 FSH、 T 含量， 精子的生成和成熟又与这二种激素密切相关， 这二种激素水平的下降势必 会影响到精子成熟。所以松花粉水提液可以通过降低血清性激素 , 促性腺激素的水平影响 雄性大鼠的性成熟。 说 明 书 CN 102145027 A CN 102145028 A5/5 页 7 0041 总之， 通过以上试验表明 ： 本发明产品能有效防治性早熟， 且注射制剂的疗效好于 口服制剂。 说 明 书 CN 102145027 A CN 10214。
23、5028 A1/8 页 8 图 1 说 明 书 附 图 CN 102145027 A CN 102145028 A2/8 页 9 图 2 说 明 书 附 图 CN 102145027 A CN 102145028 A3/8 页 10 图 3 说 明 书 附 图 CN 102145027 A CN 102145028 A4/8 页 11 图 4 说 明 书 附 图 CN 102145027 A CN 102145028 A5/8 页 12 图 5 说 明 书 附 图 CN 102145027 A CN 102145028 A6/8 页 13 图 6 说 明 书 附 图 CN 102145027 A CN 102145028 A7/8 页 14 图 7 说 明 书 附 图 CN 102145027 A CN 102145028 A8/8 页 15 图 8 说 明 书 附 图 CN 102145027 A 。