一种养生糊及其制备方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201110258963.8

申请日:

20110902

公开号:

CN102273632B

公开日:

20130102

当前法律状态:

有效性:

失效

法律详情:

IPC分类号:

A23L1/29

主分类号:

A23L1/29

申请人:

大连海晏堂生物有限公司

发明人:

焦健,邵俊杰

地址:

116041 辽宁省大连市旅顺口区五一路9号

优先权:

CN201110258963A

专利代理机构:

大连东方专利代理有限责任公司

代理人:

贾汉生

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内容摘要

一种养生糊及其制备方法。将黑芝麻后炒熟;山药后蒸熟;黑豆、红豆、薏苡仁和燕麦经水浸泡后加热熟化、分去水后干燥;干制大枣;红薯叶、枸杞干燥;海参清熟化、干燥;取干燥后的山药、黑豆、红豆、薏苡仁、燕麦、海参分别进行常规膨化处理,然后利用微粉技术将其进行超微粉碎;干燥后的红薯叶、枸杞子、炒熟后的黑芝麻和去核后的大枣分别进行超微粉碎;按质量配比进行充分混合均匀:黑芝麻粉9~15,山药粉15~30,黑豆粉9~15,红豆粉15~30,薏苡仁粉9~30,燕麦粉15~30,枸杞子粉6~12,大枣粉6~15,红薯叶粉15~30,海参粉2~5。产品为动、植物营养全面搭配的,食用方便的同时具有调养功能的养生糊。

权利要求书

1.一种养生糊,其特征在于为灰色至浅棕色粉状物,是如下质量份成分组成的混合物:上述原料除枸杞子粉、红薯叶粉和大枣粉外均是经过熟化粉料,所有原料均经过超微粉碎后的粉状物,其中山药、黑豆、红豆、薏苡仁、燕麦、海参分别进行常规膨化处理后再利用微粉技术进行超微粉碎。 2.根据权利要求1所述养生糊,其特征在于含有甜味剂或调味剂;其中所述甜味剂为蜂蜜或甜菊糖,含量5~20w%;调味剂为酱油、食盐,含量2~5w%。 3.如权利要求1所述养生糊的制备方法,其特征在于操作步骤为:(1)黑芝麻清洗后炒熟;山药清洗后蒸熟;黑豆、红豆、薏苡仁和燕麦经清洗、水浸泡后、加热熟化、分去水后干燥;干制大枣,去核;红薯叶、枸杞子清洗,干燥;海参清洗、熟化、干燥;(2)取干燥后的山药、黑豆、红豆、薏苡仁、燕麦、海参分别进行常规膨化处理,然后利用微粉技术将其进行超微粉碎;干燥后的红薯叶、枸杞子、炒熟后的黑芝麻和去核后的大枣分别进行超微粉碎;(3)按如下质量配比进行充分混合均匀: 4.根据权利要求3所述养生糊的制备方法,其特征在于操作步骤中加入甜味剂或调味剂混合均匀;其中所述甜味剂为蜂蜜或甜菊糖,含量5~20w%;调味剂为酱油、食盐,含量2~5w%。

说明书

技术领域

本发明属于含有谷物、豆类、薯类,以及其他植物果叶和海参的食品及其 加工方法。具体涉及部分谷物、豆类、薯类的膨化和粉碎加工。

背景技术

人们生活节奏快,生活无规律,促使人们在养生观念日益加强,在食品的 选择上,偏向于营养均衡,搭配合理,方便美味,易于消化吸收的滋补保健产 品。

目前市面上的各类养生品很多,也包括各种搭配的粉剂,但多是一些简单 搭配的营养补充剂,在功能性等方面突出不足,食材的药用化功能也没有得到 更为充分的发挥。

动物性保健食品的品种很多,如海珍品及其各种深加工产品层出不穷,甚 至达到分子生物学高度。其保健效果是可以肯定的。而植物性的保健品也不在 少数,例如植物蛋白产品,既是食物又是中药饮片的保健品,以及各种保健酒。 但是目前还是缺少各种营养搭配,特别是动物性和植物性的综合营养保健品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种动、植物营养全面搭配的,食用方便的同时具 有调养功能的养生糊及其制备方法。

本发明的养生糊为由如下质量份成分组成的混合物:

如果需要还可以含有甜味剂或调味剂;其中所述甜味剂为糖、蜂蜜或甜菊 糖等,含量5~20w%;调味剂为酱油、食盐或其它调味酱油等,含量2~5w%。

其制备方法为

(1)将黑芝麻清洗后炒熟;山药清洗后蒸熟;黑豆、红豆、薏苡仁和燕麦经 清洗、水浸泡后、加热熟化、分去水后干燥;干制大枣,去核;红薯叶、枸杞 子清洗,干燥;海参清洗、熟化、干燥;

(2)取干燥后的山药、黑豆、红豆、薏苡仁、燕麦、海参分别进行常规膨化 处理,然后利用微粉技术将其进行超微粉碎;干燥后的红薯叶、枸杞子、炒熟 后的黑芝麻和去核后的大枣分别进行超微粉碎;

(3)按上述质量配比进行充分混合均匀:为灰色至浅棕色粉状物。

如果需要还可以在操作步骤(3)中加入甜味剂或调味剂,与其它所有原料粉 混合均匀,即可干吃亦可用沸水冲泡成糊食用。

本发明产品对各项试验的试验动物体重和体重增重无明显影响,对小鼠胸 腺/体重、脾重的比值无明显影响,但能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的 能力;能增强小鼠NK细胞活性。

本发明是一种全面的营养搭配,同时加入功能活性强的海参,利用膨化技 术、超微粉碎等技术进行加工处理,使得各种食材,包括海参在内的多种活性 物质达到最佳的人体吸收效果,最终得到的是一种营养均衡,滋益五脏六腑, 同时具有调养功能的养生糊。食用方便,安全放心,是老少皆宜的养生佳品。

具体实施方式

实施例1:养生糊的制备

1、取上等芝麻,清洗后,用锅炒熟,山药清洗后蒸熟;黑豆、红豆、薏苡 仁、燕麦,进行清洗、水浸泡后、加热熟化、干燥;选择上等的干制大枣,去 核;红薯叶、枸杞子清洗,干燥;海参清洗、熟化、干燥。

2、取步骤1中干燥后的山药、黑豆、红豆、薏苡仁、燕麦、海参分别进行 常规膨化处理。再利用微粉技术进行超微粉碎。

3、取步骤1中干燥后的红薯叶、枸杞子、炒熟后的黑芝麻、去核后的大枣 进行超微粉碎。

4、将黑芝麻粉9克、山药粉15克、黑豆粉9克、红豆粉15克、薏苡仁粉9克、 燕麦粉15克、枸杞子粉6克、大枣粉6克、红薯叶粉15克、海参粉2克进行充分混 合。

5、取步骤4制作好的养生粉,加入如蜂蜜15克混合均匀,用开水冲调成为 糊状,食用时味道香甜。

实施例2:养生糊的制备

1、选择上等的黑芝麻清洗后炒熟;山药清洗后蒸熟;黑豆、红豆、薏苡仁、 燕麦,进行清洗、水浸泡后、加热熟化、干燥;选择上等的干制大枣,去核; 红薯叶、枸杞子清洗,干燥;海参清洗、熟化、干燥。

2、取步骤1中干燥后的山药、黑豆、红豆、薏苡仁、燕麦、海参分别进行 常规膨化处理。再利用微粉技术进行超微粉碎。

3、取步骤1中干燥后的红薯叶、枸杞子、炒熟后的黑芝麻、去核后的大枣 进行超微粉碎。

4、将黑芝麻粉15克、山药粉15克、黑豆粉9克、红豆粉30克、薏苡仁粉30 克、燕麦粉15克、枸杞子粉6克、大枣粉15克、红薯叶粉30克、海参粉5克进行 充分混合。

5、取步骤4制作好的养生粉,用热水冲调即可食用。

实施例3:养生粉进行免疫调节功能试验

一.样品及方法

1.1样品:实施例1制备的样品,为灰色粉末。

1.2试剂:

二硝基氟苯、丙酮、麻油、硫化钡、SRBC、鸡红细胞、YAC-1细胞、Hanka 液(pH 7.2-7.4)、RPMI1640完全培养液、乳酸锂、硝基氯化四氮唑(INT)、吩 嗪二甲酯硫酸盐(PMS)、NAD、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(p H 8.2)、2%Triton X 100。

1.3实验动物:

选用18~22g雄性昆明种小鼠,每组10只。

1.4试验条件:

动物试验室为全新风二级过滤,恒温恒湿,湿度25±2℃,湿度50%±10%, 工作照度160~280LW,噪音<60dB。

1.5试验仪器:

恒温培养箱、离心机、恒温水浴箱、电子分析天平(感量0.0001g),动物 电子天平(感量0.01g)、生物显微镜、酶标仪、自动洗板机。

1.6剂量分组:

按照5.00g/kg.bw、3.35g/kg.bw、1.65g/kg.bw三个实验组及蒸馏水对照组。 管饲法染毒,0.2ml/10g.bw。每日称体重后灌胃1次,连续30天后分别测定免疫 指标。

1.7脏器/体重比值测定:

称体重后,将小鼠断髓处死,取脾脏、胸腺称重,计算脏器/体重比值。

1.8小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞(半体内法):

每鼠腹腔注射20%(v/v)鸡红细胞悬液1ml。间隔30分钟,颈椎脱臼处死动 物,将其仰位固定在鼠板上,正中剪开腹壁皮肤,经腹腔注入生理盐水2ml, 转动鼠板1分钟。然后吸出腹腔洗液1ml,平均分滴于2片载玻片上,放入垫有 湿纱布的搪瓷盆内,移置37±1℃孵箱

温育30分钟。孵毕,于生理盐水中漂洗,以除去未贴片细胞。晾干,以1∶1丙 酮甲醇溶液固定,4%(v/v)Gimsa-磷酸缓冲液染色3分钟,再用蒸馏水漂洗晒 干。镜检,计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数。计算吞 噬百分率和吞噬指数。实验组的吞噬百分率、吞噬指数与对照组比较,差异有 显著性,即可判定该项试验结果阳性。

1.9NK细胞活性测定[乳酸脱氢酶测定法]:

(1)传代靶细胞(YAC-1细胞),试验前24h将靶细胞进行传代培养,应用前以 Hanks液洗3次,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×105个/ml。

(2)制备脾细胞(效应细胞)悬液,无菌取脾,置于盛有适量无菌Hanks液的 小平皿中用镊子轻轻将脾撕碎,制成单细胞悬液,经200目筛网过滤,用Hanks 液洗3次,每次离心10mins(1000r/min)。然后将细胞悬液于2ml的完全培养液 中,用台酚兰染色计数活细胞数(应在95%以上)。用RPMI1640完全培养液调整 细胞浓度为5×105个/ml。

(3)NK细胞活性检测,取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50∶1),加入U 型96孔培养板中,靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl,靶细胞最大释 放孔加靶细胞和2%Triton X 100各100μl,上述各项均设3个复孔,于37±1℃, 5%CO2培养箱中培养4h,然后将96孔培养板以1500r/min离心5min,每孔吸取 上清100μl置于平底96孔培养板中,同时加入LDH基质液100μl,反应3min,每 孔加入1mol/l的HCL30μl,在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。按下式及拴 NK细胞活性,试验用样品组的NK细胞活性显著高于对照组时,即可判定该项试 验结果阳性。

二.结果

2.1脏器/体重比值测定结果:

由表1可见,各实验组的胸腺/体重、脾重/体重比值与蒸馏水对照组比较, 差异不显著(P>0.05)。

表1小鼠脏器/体重比值测定结果    单位:mg/g

2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验结果(半体内法):

由表2和表3可见,各实验组体重、体重增重与蒸馏水对照组比较,差异不 显著(P>0.05);由表4可见,各实验组的吞噬百分率、吞噬指数与蒸馏水对照 组比较,差异显著(P<0.05)。

表2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验体重测量结果单位:g

表3小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验体重增重测量结果单位:g

表4小鼠腹腔巨噬吞噬鸡红细胞试验吞噬百分率、吞噬指数测定结果

2.3小鼠NK细胞活性测定结果:

由表5和表6可见,各实验组体重、体重增重与蒸馏水对照组比较,差异不 显著(P>0.05);由表7可见,5.00g/kg.bw、3.35g/kg.bw实验组的NK细胞活性 与蒸馏水对照组比较,差异显著(P<0.05);1.65g/kg.bw实验组的NK细胞活性 与蒸馏水对照组比较,差异不显著(P>0.05)。

表5小鼠NK细胞活性试验体重测量结果    单位:g

表6小鼠NK细胞活性试验体重增重测量结果单位:g

表7小鼠NK细胞活性测定结果

三.结论

试验结果表明:试验用样品对各项试验的试验动物体重和体重增重无明显影 响,对小鼠胸腺/体重、脾重的比值无明显影响,能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的能力;能增强小鼠NK细胞活性。

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1、(10)授权公告号 CN 102273632 B (45)授权公告日 2013.01.02 CN 102273632 B *CN102273632B* (21)申请号 201110258963.8 (22)申请日 2011.09.02 A23L 1/29(2006.01) (73)专利权人 大连海晏堂生物有限公司 地址 116041 辽宁省大连市旅顺口区五一路 9 号 (72)发明人 焦健 邵俊杰 (74)专利代理机构 大连东方专利代理有限责任 公司 21212 代理人 贾汉生 CN 101669601 A,2010.03.17, CN 102028881 A,2011.04.27, 南方 .。

2、 食疗的原料与搭配 .企业文 化 .2000,( 第 4 期 ), 第 47 页 . (54) 发明名称 一种养生糊及其制备方法 (57) 摘要 一种养生糊及其制备方法。 将黑芝麻后炒熟 ; 山药后蒸熟 ; 黑豆、 红豆、 薏苡仁和燕麦经水浸泡 后加热熟化、 分去水后干燥 ; 干制大枣 ; 红薯叶、 枸杞干燥 ; 海参清熟化、 干燥 ; 取干燥后的山药、 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦、 海参分别进行常规膨化 处理, 然后利用微粉技术将其进行超微粉碎 ; 干 燥后的红薯叶、 枸杞子、 炒熟后的黑芝麻和去核后 的大枣分别进行超微粉碎 ; 按质量配比进行充分 混合均匀 : 黑芝麻粉915, 山药粉。

3、1530, 黑豆 粉 9 15, 红豆粉 15 30, 薏苡仁粉 9 30, 燕 麦粉 15 30, 枸杞子粉 6 12, 大枣粉 6 15, 红薯叶粉 15 30, 海参粉 2 5。产品为动、 植物 营养全面搭配的, 食用方便的同时具有调养功能 的养生糊。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 魏秀丽 权利要求书 2 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 2 页 说明书 6 页 1/2 页 2 1. 一种养生糊, 其特征在于为灰色至浅棕色粉状物, 是如下质量份成分组成的混合 物 : 上述原料除枸杞子粉、 红薯叶粉和大枣粉外均是经过。

4、熟化粉料, 所有原料均经过超微 粉碎后的粉状物, 其中山药、 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦、 海参分别进行常规膨化处理后再利 用微粉技术进行超微粉碎。 2. 根据权利要求 1 所述养生糊, 其特征在于含有甜味剂或调味剂 ; 其中所述甜味剂为 蜂蜜或甜菊糖, 含量 5 20w% ; 调味剂为酱油、 食盐, 含量 2 5w%。 3. 如权利要求 1 所述养生糊的制备方法, 其特征在于操作步骤为 : (1) 黑芝麻清洗后炒熟 ; 山药清洗后蒸熟 ; 黑豆、 红豆、 薏苡仁和燕麦经清洗、 水浸泡 后、 加热熟化、 分去水后干燥 ; 干制大枣, 去核 ; 红薯叶、 枸杞子清洗, 干燥 ; 海参清洗、 。

5、熟化、 干燥 ; (2) 取干燥后的山药、 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦、 海参分别进行常规膨化处理, 然后利用 微粉技术将其进行超微粉碎 ; 干燥后的红薯叶、 枸杞子、 炒熟后的黑芝麻和去核后的大枣分 别进行超微粉碎 ; (3) 按如下质量配比进行充分混合均匀 : 权 利 要 求 书 CN 102273632 B 2 2/2 页 3 4. 根据权利要求 3 所述养生糊的制备方法, 其特征在于操作步骤中加入甜味剂或调味 剂混合均匀 ; 其中所述甜味剂为蜂蜜或甜菊糖, 含量 5 20w% ; 调味剂为酱油、 食盐, 含量 2 5w%。 权 利 要 求 书 CN 102273632 B 3 1/。

6、6 页 4 一种养生糊及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于含有谷物、 豆类、 薯类, 以及其他植物果叶和海参的食品及其加工方 法。具体涉及部分谷物、 豆类、 薯类的膨化和粉碎加工。 背景技术 0002 人们生活节奏快, 生活无规律, 促使人们在养生观念日益加强, 在食品的选择上, 偏向于营养均衡, 搭配合理, 方便美味, 易于消化吸收的滋补保健产品。 0003 目前市面上的各类养生品很多, 也包括各种搭配的粉剂, 但多是一些简单搭配的 营养补充剂, 在功能性等方面突出不足, 食材的药用化功能也没有得到更为充分的发挥。 0004 动物性保健食品的品种很多, 如海珍品及其各种深加工产品层出。

7、不穷, 甚至达到 分子生物学高度。其保健效果是可以肯定的。而植物性的保健品也不在少数, 例如植物蛋 白产品, 既是食物又是中药饮片的保健品, 以及各种保健酒。 但是目前还是缺少各种营养搭 配, 特别是动物性和植物性的综合营养保健品。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种动、 植物营养全面搭配的, 食用方便的同时具有调养 功能的养生糊及其制备方法。 0006 本发明的养生糊为由如下质量份成分组成的混合物 : 0007 0008 如果需要还可以含有甜味剂或调味剂 ; 其中所述甜味剂为糖、 蜂蜜或甜菊糖等, 含 量 5 20w ; 调味剂为酱油、 食盐或其它调味酱油等, 含量 2 5w。 0。

8、009 其制备方法为 0010 (1) 将黑芝麻清洗后炒熟 ; 山药清洗后蒸熟 ; 黑豆、 红豆、 薏苡仁和燕麦经清洗、 水 浸泡后、 加热熟化、 分去水后干燥 ; 干制大枣, 去核 ; 红薯叶、 枸杞子清洗, 干燥 ; 海参清洗、 说 明 书 CN 102273632 B 4 2/6 页 5 熟化、 干燥 ; 0011 (2) 取干燥后的山药、 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦、 海参分别进行常规膨化处理, 然后 利用微粉技术将其进行超微粉碎 ; 干燥后的红薯叶、 枸杞子、 炒熟后的黑芝麻和去核后的大 枣分别进行超微粉碎 ; 0012 (3) 按上述质量配比进行充分混合均匀 : 为灰色至浅棕色。

9、粉状物。 0013 如果需要还可以在操作步骤 (3) 中加入甜味剂或调味剂, 与其它所有原料粉混合 均匀, 即可干吃亦可用沸水冲泡成糊食用。 0014 本发明产品对各项试验的试验动物体重和体重增重无明显影响, 对小鼠胸腺 / 体 重、 脾重的比值无明显影响, 但能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力 ; 能增强小鼠 NK 细胞活性。 0015 本发明是一种全面的营养搭配, 同时加入功能活性强的海参, 利用膨化技术、 超微 粉碎等技术进行加工处理, 使得各种食材, 包括海参在内的多种活性物质达到最佳的人体 吸收效果, 最终得到的是一种营养均衡, 滋益五脏六腑, 同时具有调养功能的养生糊。食用 。

10、方便, 安全放心, 是老少皆宜的养生佳品。 具体实施方式 0016 实施例 1 : 养生糊的制备 0017 1、 取上等芝麻, 清洗后, 用锅炒熟, 山药清洗后蒸熟 ; 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦, 进 行清洗、 水浸泡后、 加热熟化、 干燥 ; 选择上等的干制大枣, 去核 ; 红薯叶、 枸杞子清洗, 干 燥 ; 海参清洗、 熟化、 干燥。 0018 2、 取步骤 1 中干燥后的山药、 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦、 海参分别进行常规膨化处 理。再利用微粉技术进行超微粉碎。 0019 3、 取步骤 1 中干燥后的红薯叶、 枸杞子、 炒熟后的黑芝麻、 去核后的大枣进行超微 粉碎。 0020。

11、 4、 将黑芝麻粉 9 克、 山药粉 15 克、 黑豆粉 9 克、 红豆粉 15 克、 薏苡仁粉 9 克、 燕麦 粉 15 克、 枸杞子粉 6 克、 大枣粉 6 克、 红薯叶粉 15 克、 海参粉 2 克进行充分混合。 0021 5、 取步骤4制作好的养生粉, 加入如蜂蜜15克混合均匀, 用开水冲调成为糊状, 食 用时味道香甜。 0022 实施例 2 : 养生糊的制备 0023 1、 选择上等的黑芝麻清洗后炒熟 ; 山药清洗后蒸熟 ; 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦, 进 行清洗、 水浸泡后、 加热熟化、 干燥 ; 选择上等的干制大枣, 去核 ; 红薯叶、 枸杞子清洗, 干 燥 ; 海参清洗、。

12、 熟化、 干燥。 0024 2、 取步骤 1 中干燥后的山药、 黑豆、 红豆、 薏苡仁、 燕麦、 海参分别进行常规膨化处 理。再利用微粉技术进行超微粉碎。 0025 3、 取步骤 1 中干燥后的红薯叶、 枸杞子、 炒熟后的黑芝麻、 去核后的大枣进行超微 粉碎。 0026 4、 将黑芝麻粉 15 克、 山药粉 15 克、 黑豆粉 9 克、 红豆粉 30 克、 薏苡仁粉 30 克、 燕 麦粉 15 克、 枸杞子粉 6 克、 大枣粉 15 克、 红薯叶粉 30 克、 海参粉 5 克进行充分混合。 0027 5、 取步骤 4 制作好的养生粉, 用热水冲调即可食用。 说 明 书 CN 102273632。

13、 B 5 3/6 页 6 0028 实施例 3 : 养生粉进行免疫调节功能试验 0029 一 . 样品及方法 0030 1.1 样品 : 实施例 1 制备的样品, 为灰色粉末。 0031 1.2 试剂 : 0032 二硝基氟苯、 丙酮、 麻油、 硫化钡、 SRBC、 鸡红细胞、 YAC-1 细胞、 Hanka 液 (pH 7.2-7.4)、 RPMI1640 完全培养液、 乳酸锂、 硝基氯化四氮唑 (INT)、 吩嗪二甲酯硫酸盐 (PMS)、 NAD、 0.2mol/L 的 Tris-HCl 缓冲液 (p H 8.2)、 2 TritonX 100。 0033 1.3 实验动物 : 0034 。

14、选用 18 22g 雄性昆明种小鼠, 每组 10 只。 0035 1.4 试验条件 : 0036 动物试验室为全新风二级过滤, 恒温恒湿, 湿度 252, 湿度 50 10, 工作 照度 160 280LW, 噪音 60dB。 0037 1.5 试验仪器 : 0038 恒温培养箱、 离心机、 恒温水浴箱、 电子分析天平 ( 感量 0.0001g), 动物电子天平 ( 感量 0.01g)、 生物显微镜、 酶标仪、 自动洗板机。 0039 1.6 剂量分组 : 0040 按照 5.00g/kg.bw、 3.35g/kg.bw、 1.65g/kg.bw 三个实验组及蒸馏水对照组。管饲 法染毒, 0.。

15、2ml/10g.bw。每日称体重后灌胃 1 次, 连续 30 天后分别测定免疫指标。 0041 1.7 脏器 / 体重比值测定 : 0042 称体重后, 将小鼠断髓处死, 取脾脏、 胸腺称重, 计算脏器 / 体重比值。 0043 1.8 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞 ( 半体内法 ) : 0044 每鼠腹腔注射 20 (v/v) 鸡红细胞悬液 1ml。间隔 30 分钟, 颈椎脱臼处死动物, 将其仰位固定在鼠板上, 正中剪开腹壁皮肤, 经腹腔注入生理盐水2ml, 转动鼠板1分钟。 然 后吸出腹腔洗液1ml, 平均分滴于2片载玻片上, 放入垫有湿纱布的搪瓷盆内, 移置371 孵箱 0045 温育 。

16、30 分钟。孵毕, 于生理盐水中漂洗, 以除去未贴片细胞。晾干, 以 1 1 丙酮 甲醇溶液固定, 4 (v/v)Gimsa- 磷酸缓冲液染色 3 分钟, 再用蒸馏水漂洗晒干。镜检, 计数 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数。计算吞噬百分率和吞噬指数。实验 组的吞噬百分率、 吞噬指数与对照组比较, 差异有显著性, 即可判定该项试验结果阳性。 0046 0047 0048 1.9NK 细胞活性测定 乳酸脱氢酶测定法 : 0049 (1) 传代靶细胞 (YAC-1 细胞 ), 试验前 24h 将靶细胞进行传代培养, 应用前以 Hanks 液洗 3 次, 用 RPMI1640 完全培养液。

17、调整细胞浓度为 1105个 /ml。 说 明 书 CN 102273632 B 6 4/6 页 7 0050 (2) 制备脾细胞 ( 效应细胞 ) 悬液, 无菌取脾, 置于盛有适量无菌 Hanks 液的小平 皿中用镊子轻轻将脾撕碎, 制成单细胞悬液, 经 200 目筛网过滤, 用 Hanks 液洗 3 次, 每次离 心10mins(1000r/min)。 然后将细胞悬液于2ml的完全培养液中, 用台酚兰染色计数活细胞 数 ( 应在 95以上 )。用 RPMI1640 完全培养液调整细胞浓度为 5105个 /ml。 0051 (3)NK 细胞活性检测, 取靶细胞和效应细胞各 100l( 效靶比 。

18、50 1), 加入 U 型 96 孔培养板中, 靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各 100l, 靶细胞最大释放孔加靶细 胞和2Triton X 100各100l, 上述各项均设3个复孔, 于371, 5CO2培养箱中培 养 4h, 然后将 96 孔培养板以 1500r/min 离心 5min, 每孔吸取上清 100l 置于平底 96 孔培 养板中, 同时加入 LDH 基质液 100l, 反应 3min, 每孔加入 1mol/l 的 HCL30l, 在酶标仪 490nm 处测定光密度值 (OD)。按下式及拴 NK 细胞活性, 试验用样品组的 NK 细胞活性显著 高于对照组时, 即可判定该项试验结。

19、果阳性。 0052 0053 二 . 结果 0054 2.1 脏器 / 体重比值测定结果 : 0055 由表 1 可见, 各实验组的胸腺 / 体重、 脾重 / 体重比值与蒸馏水对照组比较, 差异 不显著 (P 0.05)。 0056 表 1 小鼠脏器 / 体重比值测定结果 单位 : mg/g 0057 0058 2.2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验结果 ( 半体内法 ) : 0059 由表 2 和表 3 可见, 各实验组体重、 体重增重与蒸馏水对照组比较, 差异不显著 (P 0.05) ; 由表4可见, 各实验组的吞噬百分率、 吞噬指数与蒸馏水对照组比较, 差异显著(P 0.05)。 00。

20、60 表 2 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验体重测量结果单位 : g 0061 说 明 书 CN 102273632 B 7 5/6 页 8 0062 表 3 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验体重增重测量结果单位 : g 0063 0064 表 4 小鼠腹腔巨噬吞噬鸡红细胞试验吞噬百分率、 吞噬指数测定结果 0065 0066 2.3 小鼠 NK 细胞活性测定结果 : 0067 由表 5 和表 6 可见, 各实验组体重、 体重增重与蒸馏水对照组比较, 差异不显著 (P 0.05) ; 由表7可见, 5.00g/kg.bw、 3.35g/kg.bw实验组的NK细胞活性与蒸馏水对照组比 较, 差。

21、异显著(P0.05) ; 1.65g/kg.bw实验组的NK细胞活性与蒸馏水对照组比较, 差异不 显著 (P 0.05)。 0068 表 5 小鼠 NK 细胞活性试验体重测量结果 单位 : g 0069 0070 表 6 小鼠 NK 细胞活性试验体重增重测量结果单位 : g 0071 0072 表 7 小鼠 NK 细胞活性测定结果 说 明 书 CN 102273632 B 8 6/6 页 9 0073 0074 三 . 结论 0075 试验结果表明 : 试验用样品对各项试验的试验动物体重和体重增重无明显影响, 对小鼠胸腺 / 体重、 脾重的比值无明显影响, 能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能 力 ; 能增强小鼠 NK 细胞活性。 说 明 书 CN 102273632 B 9 。

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