技术领域
本发明涉及保健品领域，具体涉及一种增加骨密度的保健品及其制备方 法。
背景技术
随着人类寿命的延长，人口老龄化给人类健康带来新的问题，骨质疏松 引起的骨折在当前常见疾病中位于第七位，严重威胁着中老年人的健康。我 国是世界上人口最多的国家，且已进入老龄化社会，由骨质疏松引起的沉重 的医疗和社会负担，已成为我国最主要的公共卫生问题。
目前临床用于治疗骨质疏松症的药物有钙剂、维生素D类、雌激素及其 类似物降钙素、双磷酸盐类等。临床用的补钙剂有几十种，主要分为无机钙、 有机钙、生物钙三类。
无机钙制剂包括碳酸钙、磷酸钙等，缺点是溶解度较低，吸收率的个体 差异很大，且与胃酸量有关，患有胃酸缺乏症的病人仅吸收0-2％，正常人吸 收9-16％。另外，无机钙对胃肠道刺激性大，胃酸分泌少的人，服用后胃肠 会出现不良的反应。Recket认为，老年人普遍胃酸缺乏，无机钙不宜作为老 年人的钙补充剂。
有机钙制剂包括葡萄糖酸钙、乳酸钙等，葡萄糖酸钙的刺激性较小，但 在水中溶解缓慢，含钙量低(仅为9％左右)，必须大量服用才能达到补钙的 要求，生物利用率不高。乳酸钙是我国传统的钙补充剂之一，其优点是容易 溶解，缺点是钙含量低，制成片剂后含量更低，要达到每日补充量，需服用 几十片，且人体吸收缓慢，乳酸钙长期服用可使体内乳酸含量增高，使人有 疲劳感，运动员、重体力劳动者、老年人或酸性体质者不宜长期使用。
生物钙制剂类主要是海洋生物钙，生物钙特点是钙、磷比例较为适合， 易被人体有效吸收，其吸收率一般为60％～80％，少数可达90％以上；溶解性 好，对胃肠道刺激小，是目前较理想的补钙制剂。但海洋生物钙制剂中含有对 机体的有害的元素，如镉、铋、铅等，长期服用会产生潜在的重金属中毒的可 能。
骨是胶原蛋白等有机物形成的纤维上沉积钙、磷等无机盐而形成的，在 钙的沉积过程中，硫酸软骨素起着极其重要的作用。骨的生长处于溶出、沉 积的动态平衡状态，即钙一方面从骨中溶解进血液，一方面吸收血液中的钙 并沉积形成新骨，使骨始终处在一种动态平衡中，若硫酸软骨素不足，血液 中的钙在骨上的沉积就会受到一定的影响。
由于骨质疏松症的病理生理机制涉及钙流失和钙沉积两个方面，因此治 疗骨质疏松必需两者兼顾。而市场上治疗骨质疏松的制剂多为单一钙制剂， 治疗效果欠佳。
发明内容
本发明针对现有技术治疗骨质疏松的钙制剂成分单一、效果欠佳的不足， 提供一种增加骨密度的保健品，所述保健品由多种成分复配，吸收率高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种增加骨密度的保健品，由牛骨粉、硫酸软骨素及维生素D3组成。
所述组分的重量百分比优选为：牛骨粉74％-75％、硫酸软骨素24％-25％， 维生素D3 0.1％-1％。
本发明所述的保健品中，所述牛骨粉中的钙含量为所述保健品重量的 15％-35％。
硫酸软骨素可和胶原蛋白形成一种高分子，固定器官结构，它还可调节 体内的水分，促进骨的形成，保护关节软骨，抗关节炎，改善血脂，保护神 经元等作用。越来越多的证据表明，硫酸软骨素能促进成骨细胞的增生，诱 导新骨生成，从而增加骨密度，改善骨质疏松。
维生素D的主要功能是调节体内钙、磷代谢，维持血钙和血磷的水平， 促进人体钙的吸收，减少破骨活动，抑制骨钙迁移，促进骨骼生长。
牛骨粉来源丰富，本发明所述保健品中牛骨粉的钙含量为所述保健品重 量的15％-35％，钙源廉价，无副作用。
本发明所述保健品在补充钙质的基础上，补充促进成骨活动的硫酸软骨 素以及促进钙吸收的维生素D 3，可有效促进促进钙的吸收，保证了钙在骨 中的沉积，促进骨的形成，使血浆钙和血浆磷的水平达到饱和程度，防止骨 质疏松的发生。
经动物试验证实，经口给予大鼠本发明所述保健品三个月，终重与增重 高于基础饲料组和碳酸钙对照组，且差异有统计学意义。本发明所述保健品 钙的表观吸收率高于碳酸钙对照组；本发明所述保健品组股骨干重、股骨远 心端密度显著高于基础饲料组和碳酸钙对照组，且差异有统计学意义。说明 本发明所述保健品具有比碳酸钙更优的增加骨密度功能。
本发明还提供一种所述保健品的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：取牛骨在0.1-0.2MPa、100℃-120℃条件下蒸煮4-5小时，在 70℃-80℃加水洗3次后，将牛骨粉碎得骨泥，加水匀浆，取匀浆液离心，取 沉淀烘干后粉碎即得牛骨粉；
步骤2：将维生素D3溶于乙醇，得溶液备用；
步骤3：取步骤1所得牛骨粉、步骤2所得溶液与硫酸软骨素混合，干 燥后即得本发明所述保健品。
步骤1中所述烘干步骤优选为100℃烘烤6小时。
步骤1中所述离心优选为在2800-3000r/min离心15-20分钟。
步骤1中沉淀烘干后优选还进行过100目筛处理。
步骤2中所述乙醇优选为为重量百分比为75％的乙醇。
步骤3中所述牛骨粉、硫酸软骨素与步骤2中所述维生素D3的重量比为 74-75∶24-25∶0.1-1。
本发明所述方法可以解决肉牛屠宰带来的近万吨无法储存的副产品-牛 骨的综合利用问题，且工艺简单，原料丰富，制备过程无污染，适合大工业生 产。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明。以下仅是本发明的优选实施方式， 应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前 提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护 范围。
实施例1：制备本发明所述保健品
制备方法：
步骤1：取牛骨，在0.1MPa、120℃条件下蒸煮4小时以去除油及有机物， 在80℃加3倍量水洗以去除去脂肪及有机物，弃去上清，重复以上水洗步骤 2次，取牛骨粉碎得骨泥，加1倍量的水，上胶体磨匀浆，取匀浆液在2800r/min 离心15min，沉淀在100℃烘烤6小时后粉碎后，过100目筛即得牛骨粉；
步骤2：将0.1g维生素D3溶于75％的乙醇，得溶液备用；
步骤3：取步骤1所得牛骨粉75g、步骤2所得溶液与硫酸软骨素24.9g 与混合，干燥后即得本发明所述保健品。
按照GB/T 5009.92-2003《食品中钙的测定》测定方法，对所制备的保健 品中的钙进行测定，结果表明，保健品中钙含量为24％。
实施例2：制备本发明所述保健品
制备方法：
步骤1：取牛骨，在0.2MPa、100℃条件下蒸煮5小时以去除油及有机物， 在70℃加2倍量水洗以去除去脂肪及有机物，弃去上清，重复以上水洗步骤 2次，取牛骨粉碎得骨泥，加2倍量的水，上胶体磨匀浆，取匀浆液在3000r/min 离心10min，沉淀在100℃烘烤4小时后粉碎后即得牛骨粉；
步骤2：将1g维生素D3溶于75％的乙醇，得溶液备用；
步骤3：取步骤1所得牛骨粉74g、步骤2所得溶液与硫酸软骨素25g与 混合，干燥后即得本发明所述保健品。
按照GB/T 5009.92-2003《食品中钙的测定》测定方法，对所制备的保健 品中的钙进行测定，结果表明，保健品中钙含量为15％。
实施例3：制备本发明所述保健品
制备方法：
步骤1：取牛骨，在0.15MPa、110℃条件下蒸煮4.5小时以去除油及有 机物，在75℃加4倍量水洗以去除去脂肪及有机物，弃去上清，重复以上水 洗步骤2次，取牛骨粉碎得骨泥，加3倍量的水，上胶体磨匀浆，取匀浆液 在2900r/min离心15min，沉淀在100℃烘烤6小时后粉碎后即得牛骨粉；
步骤2：将0.5g维生素D3溶于75％的乙醇，得溶液备用；
步骤3：取步骤1所得牛骨粉75g、步骤2所得溶液与硫酸软骨素24.5g 与混合，干燥后即得本发明所述保健品。
按照GB/T 5009.92-2003《食品中钙的测定》测定方法，对所制备的保健 品中的钙进行测定，结果表明，保健品中钙含量为35％。
实施例4：制备本发明所述保健品的胶囊剂
取实施例1-3所制备的本发明所述保健品100g，常规制粒，过20目筛， 混匀，按照每粒0.4g充填入空心胶囊，生产过程严格按照GMP的要求，即得 本发明所述保健品的胶囊剂。
实施例5：本发明所述保健品的效果测评
1、试验方法
出生4周的断乳大鼠经适应期一周后，禁食12小时称体重，按体重随 即分组，每组10只，分笼饲养。应用去离子水以避免从饮水中获得钙。各组 按计量设计给予样品3个月。每周记录各组动物体重和体长。
2、剂量选择：
厂家推荐成人(体重以60kg计)摄入定型产品量为每日2次，每次3 粒，0.4g/粒，即2.4g/60kg BW。参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》， 按照人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值6.17，本实验设剂量为 0.24g/kg BW，另设基础饲料组，与碳酸钙对照组(碳酸钙剂量与实验组含钙 水平相同)。
3、样品配制：
根据本实验剂量设计要求，分别取实施例1-3制备的本发明所述保健品 溶于蒸馏水至100ml/100g BW，根据保健品的钙含量调整各组灌胃量。基础 饲料组给予基础饲料同时每日给予蒸馏水灌胃；碳酸钙对照组为碳酸钙溶于 蒸馏水至100ml制成混悬液，采用经口灌胃方式给予受试物，每周称重调整 灌胃量。
4、钙代谢试验：第三周做钙吸收实验，然后继续喂养。
5、钙吸收实验：出生四周的断乳大鼠分笼饲养4周。每周测量身长、体重一 次。实验3周后进行3天钙代谢实验。记录3天进食量，收集72小时粪便， 测定饲料及粪便中的钙含量。饲料样品经均匀混合并过20目筛；鼠粪样品在 105℃烘箱中烘干，置干燥器中冷却后磨细。注意防止在样品制备过程中的污 染。准确称取烘干磨细的一定量样品，置于150mL三角瓶中，上盖小漏斗， 加入混合酸(硝酸∶高氯酸＝4∶1)15mL，在电热板上加热消化至冒白烟并透 明无色。酸液不够时可以再加入少量混合酸。消化液透明无色后加数毫升去 离子水，煮沸以赶除剩余的酸，重复两次，最后消化液的体积不超过1mL。 消化样品时应同时作空白试验，加入与样品消化时相同体积的混合酸，在相 同条件下消化。按照原子吸收分光光度计仪器说明书的步骤进行。测定液、 标准溶液和空白均用0.5％氧化镧溶液稀释，定容。按下列公式计算：
钙的表观吸收率％＝(摄入钙-粪钙)/摄入钙×100％
6、股骨骨密度测定：
解剖大鼠，剖离左侧股骨，应用吉林大学中日联谊医院法国产双能X骨 密度仪，型号为LEXXOSDEXA型骨密度仪测量大鼠股骨中点及股骨远点端骨密 度。将股骨烤干至恒熏，秤骨干重。
7、骨钙含量测定：
采用原子吸收法测量，原子吸收仪为AA6401F型。去取大鼠一侧股骨在 105℃烘箱中烘干至恒重，准确称取一定量样品，置于150mL三角瓶中，上盖 小漏斗，加入混合酸(硝酸∶高氯酸体积比为4∶1)15mL，在电热板上加热 消化至冒白烟并透明无色。酸液不够时可以再加入少量混合酸。消化液透明 无色后加数毫升去离子水，煮沸以赶除剩余的酸，重复两次，最后消化液的 体积不超过1mL。消化样品时应同时作空白试验，加入与样品消化时相同体 积的混合酸，在相同条件下消化。按照原子吸收分光光度计仪器说明书的步 骤进行。测定液、标准溶液和空白均用0.5％氧化镧溶液稀释，定容。
计算公式：
X：试样中元素的含量(mg/g)；C：测定试样液中元素浓度(μg/mL)；
V：定容体积，V＝25mL；f：稀释倍数，f＝250；m：取样量(g).
8、统计方法
数据的统计处理采用SPSS10.0统计软件中单因素方差分析进行均值比 较，方差齐时，各组间两两比较用LSD法；方差不齐时，各组间两两比较采 用Tamhane法。实验结果见表1-4。
表1.本发明所述保健品对大鼠体重的影响
P1值：各实验组与基础饲料组比较；P2值：各实验组与碳酸钙对照组比较。
*：与基础饲料组和碳酸钙对照组比较P＜0.05
由表1可见，各实验组与碳酸钙对照组、基础饲料组比较大鼠始重无显 著性差异(P＞0.05)。经口给予大鼠本发明所述保健品3个月后，各实验组 终重与增重高于基础饲料组与碳酸钙对照组，且差异有显著性(P＜0.05)。
表2本发明所述保健品对大鼠身长的影响
P1值：各实验组与基础饲料组比较。P2值：各实验组与碳酸钙对照组比较。
由表2可见，各实验组与基础饲料组、碳酸钙对照组比较无显著性差异 (P＞0.05)。
表3本发明所述保健品对大鼠钙代谢的影响
P1值：各实验组与基础饲料组比较。P2值：各实验组与碳酸钙对照组比较。
*：与基础饲料组或碳酸钙对照组比较P＜0.05。
由表3可见，经口给予大鼠本发明所述保健品3个月后，实施例1-3组 的表观吸收率明显高于碳酸钙对照组，且差异有显著性(P＜0.05)。说明本 发明所述保健品钙的表观吸收率优于碳酸钙对照组。
表4本发明所述保健品对大鼠股骨的重量、骨钙及股骨骨密度的影响
P1值：各实验组与基础饲料组比较。P2值：各实验组与碳酸钙对照组比 较。
*：与基础饲料组或碳酸钙对照组比较P＜0.05
由表4可见，经口给予大鼠本发明所述保健品3个月后，实施例1-3组 的股骨干重、股骨远心端骨密度明显高于基础饲料住和碳酸钙对照组，且差 异有显著性(p＜0.05)。实施例1-3组骨钙含量与基础饲料组、碳酸钙对照 组比较，明显较高且具有统计学显著性差异(p＜0.05)。说明实施例1-3制 备的保健品的补钙效果明显，优于碳酸钙对照组。
综上，经口给予大鼠实施例1-3制备的本发明所述保健品2.4g/kg BW三 个月，终重与增重高于基础饲料组和碳酸钙对照组，且差异有显著性(p＜ 0.05)。实施例1-3组钙的表观吸收率高于碳酸钙对照组(p＜0.05)；实施例 1-3组股骨干重、股骨远心端密度显著高于基础饲料组和碳酸钙对照组，且 差异有显著性(p＜0.05)。说明本发明所述保健品具有比碳酸钙更优的增加 骨密度功能。