技术领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和用途，具体地说涉及 一种以中药复方为原料制备的药物组合物及其制备方法和用途，属中 药领域。
背景技术
随着人们生活水平的提高和人口老龄化，高脂血症(主要表现为 血清胆固醇TC、甘油三酯TG升高，高密度脂蛋白胆固醇HDL-C降低) 的发病率逐年上升，因脂质代谢紊乱引起的高脂血症，已成为脂肪肝、 冠心病和动脉粥样硬化等常见病的重要发病因素。
高脂血症，属中医“痰浊”、“血瘀”等范畴，病机多为脾脏运化 功能受损，津液运行不利，终致湿聚脂积，气血阻滞而成。长期大量 的临床实践表明，中医药治疗高脂血症具有副作用小，疗效好的良好 优势。
目前中医药治疗高脂血症的报道较多，针对不同的病因病机，辨 证不同，组方也不同。杨军等报道，降脂冲剂(处方由葛根、泽泻、 当归、何首乌、山楂等组成)对实验性高脂血症模型动物具有显著降 脂作用，以其制成的冲剂用于治疗各型高脂血症具有肯定疗效【中草 药，1997，28(4)：225-228】；董福云等报道，降脂保肝胶囊(处方 何首乌、生山楂、枸杞子、泽泻、菊花等)可显著降低实验性高脂血症 动物血脂【时珍国医国药，2000，18(11)：4】；李魁等报道，由糯米 为发酵原料，加入泽泻、山楂、橘红、枸杞子、丹参、干姜、川芎研 制而成的保健降脂米醋，具有良好降脂作用【食品工业，2000，(5)： 27-28】；崔春黎等报道，复方红曲胶囊(处方由红曲、银杏、丹参等 组成)临床用于高脂血症的治疗，具有可靠的临床疗效【中成药，2002， 24(2)：107-110】；中国专利CN1398632公开了一种具有调节血脂的 药物组合物，由绞股蓝总苷粉、红曲酶菌粉、栀子组成。陈文慧等报 道了由白术、白芍、三七、青皮、山楂等9味药物组成的福而肝脂消 丸临床治疗脂肪肝疗效明显【云南中医学院学报，2002，25，(30)：4-6】； 赵颖等报道口服健脾消积汤(白术15g，茯苓15g，泽泻20g，山楂30g， 枳壳15g，厚朴12g，姜半夏9g，石菖蒲6g，白芍10g，丹参15g)临 床治疗脂肪肝疗效显著【上海中医药杂志，2002，(1)：25】。2000版 《中国药典》记载了山楂的使用剂量为9～12g，白术的使用剂量为6～ 12g，泽泻的使用剂量为6～9g，未记载红曲及其使用剂量。成都地奥九 泓制药厂生产的中药产品-“脂必妥胶囊”药品说明书中公开了其“主 要药味为山楂、白术、红曲等”，即该说明书公开了与本发明组合物原 料组成相近似的处方，但未公开其处方药物使用剂量及其药物制备方 法(包括原料分离提取工艺、制剂加工方法)。需要进一步说明的是， 复方中药处方中，各原料药物的配伍比例及使用剂量极为重要，是影 响和决定复方中药疗效的主要因素。其他公开的复方中药中，未见与 本发明组合物原料组成相同或类似的复方中药。
发明内容
本发明所要解决的技术方案是提供一种以中药复方为原料制备的 具有调节血脂作用的药物组合物，本发明还提供了该药物组合物的制 备方法和用途。
本发明提供了一种具有调节血脂作用的药物组合物，它是由下 述重量配比的原料药制成的药剂：山楂4份，白术3份，泽泻3份， 红曲2份。
进一步地，本发明提供一种具有调节血脂作用的药物组合物， 它是由下述重量配比的原料药制成的满足成人临床用量/日的药剂：山 楂4g，白术3g，泽泻3g，红曲2g，可分2～3次口服使用。
其中所述的药剂是口服制剂，优选的是胶囊剂。
其中所述的药剂的每制剂单位中含有熊果酸不少于2.2mg。其 中熊果酸和齐墩果酸按熊果酸计，熊果酸作为指标性成分，通过对熊 果酸的质量控制达到对整个药剂质量控制的目的。
本发明还提供了该药物组合物的制备方法，其步骤包括：
a、称取下列中药材为原料：
山楂4份，白术3份，泽泻3份，红曲2份；
b、用醇或含水乙醇共同提取以上药材，滤过，得滤液A；
c、滤液A回收乙醇，减压浓缩得浸膏B；
d、浸膏B加入适量水，静置，离心，得上清液C和沉淀D，将沉 淀D干燥，作为活性成份I；
e、上清液C通过预处理好的树脂柱，水洗至无色，再用乙醇洗至 无色，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥得稠膏E，作为活性成份 II；
f、活性成份I、II加上药学上可接受的辅料混合，制成各种剂型。
上述方法中，步骤b所用乙醇浓度为30-95％的乙醇，优选80％乙 醇，提取方法为加热回流提取，提取次数为1～3次，提取时间为0.5～ 1.5小时；步骤d加水量为3～7倍；步骤e所用乙醇浓度为50～80％， 优选70％乙醇；步骤f中，活性成份I和II混合后再加入药学上可接 受的辅料，制成各种剂型；或先在活性成份I中加入药学上可接受的 辅料，再将其与活性成分II混合制成药物制剂。
为了提高除杂率，进一步达到降低给药剂量的目的，需降低其出 膏率，同时最大限度保留其有效成分。本发明组合物制备方法步骤b 有关提取工艺研究中，发明人对提取溶剂的选择进行了筛选研究，由 于山楂、白术、泽泻、红曲四味药物的主要有效成分多为脂溶性成分 (如熊果酸、白术内酯、泽泻醇等)，同时考虑中药传统用药习惯为水 煎汤剂，故分别对水、50％乙醇、60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇几 种提取溶剂进行了筛选，并同时以浸出物得率及浸出物中熊果酸和总 黄酮含量作为评价指标，筛选结果如下：
提取溶剂 熊果酸(mg/g) 总黄酮(mg/g) 浸出物(g/g)
水 未检出 0.525 0.395
50％乙醇 0.290 0.695 0.284
60％乙醇 0.439 0.695 0.264
70％乙醇 0.500 0.705 0.254
80％乙醇 0.540 0.705 0.226
根据以上筛选结果，选择乙醇提取优于水提取，以80％乙醇为提 取溶剂所得浸出物量最少，而有效成分熊果酸、总黄酮的含量最高。
根据本发明复方中药物所含有的成分的性质及有关实验研究，本 发明组合物制备方法采用水沉-树脂吸附法进行纯化除杂(见步骤d和 步骤e)，以提高有效成分含量，缩小药物服用量。通过实验研究发现， 若步骤d中采用常规过滤法除杂，水沉后需静置10小时，待沉淀完全 沉降后才能过滤分限沉淀，操作时间长，难度大，沉淀损失大。而采 用离心分离法，只需静置0.5-1小时即可进行离心，操作时间短，难 度小，沉淀易分取且损失很小。提取物经水沉离心后，分为沉淀及上 清液两部分，经检测，沉淀中主含熊果酸及水不溶性黄酮类成分，上 清液中主要含水溶性黄酮。针对上清液中水溶性黄酮类成分，再采用 大孔树脂吸附法进行分离。大孔树脂分离后所得浸膏，经检测，基本 保留了黄酮类成分，除去了小分子多糖及单糖类杂质。
本发明提供的该组合物制备方法，通过合理的分离提取工艺和纯 化除杂工艺，有效地除去了杂质而保留了有效成分。
本发明还提供了重量配比的各原料在制备治疗高脂血症的药物中 的用途。
本发明还提供了重量配比的各原料在制备治疗脂肪肝的药物中的 用途。
本发明人基于长期临床治疗高脂血症的用药经验，并经过系统的 实验研究和临床研究，提供一种治疗高脂血症和脂肪肝的有效中药组 合物，该药物组合物的原料药少而精(由山楂、白术、泽泻、红曲四 味药物组成)，具有消痰化瘀，健脾和胃的功能，用于高脂血症和脂肪 肝的治疗，其每天的临床剂量仅为：山楂4g，白术3g，泽泻3g，红曲 2g，可按常规方法煎煮，分2～3次口服使用；而按本发明方法制备的 胶囊，则药效更好，服用更方便，该剂量为经长期临床用药总结的最 适宜的成人一日有效量。中医学认为，高脂血症的基本病机为本虚标 实，本虚多为脾虚或肾虚，标实多为痰浊与瘀血。处方中以山楂为君 药，化食消瘀，健脾和胃；白术、泽泻、红曲为臣，与山楂相辅，共 奏健脾和胃，消痰化瘀之功，切中高脂血症的中医基本病机。
本发明药物组合物具有以下显著优势特点：其一，药物配伍科学 精当，药物使用剂量小，原料成本降低。全方仅由四味药物组成，四 味药物配伍，相互协同增效，其使用剂量(按成人每日口服用量计) 均明显低于其中现有公开文献中的使用剂量。其二，制备工艺科学合 理，最大限度保留了药物的活性成分，同时大大缩小了服用药物体积， 使药物制剂达到了疗效可靠，服用量小，服用方便。其三，临床疗效 显著，毒副作用小。其四，制剂质量稳定、可控，通过对药剂中的熊 果酸的质量控制达到整个制剂质量控制的目的。本发明药物组合物的 使用为临床治疗高脂血症和脂肪肝提供了一种新的用药选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯 用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它 多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作 进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于 以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范 围。
具体实施方式
实施例1：本发明药物组合物胶囊剂的制备：
山楂2000g 泽泻1500g 白术1500g 红曲1000g
以上四味药材，加80％乙醇6倍量，共同回流提取三次，每次1.5 小时。滤过，滤液回收乙醇至相对密度为1.00～1.03(60℃)，减压浓 缩至相对密度为1.20～1.25(60℃)，加4～5倍量水，静置，离心，分 取沉淀，干燥。上清液通过预处理好的大孔树脂柱，水洗至无色，再 用70％乙醇洗至无色，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，干燥，与 上述干燥的离心沉淀合并，粉碎，过筛，加微粉硅胶适量，混匀，分 装，制成胶囊1000粒。每粒胶囊规格240mg，相当于原生药6g，即每 克胶囊药粉相当于原生药25克。按照本制备方法制成的胶囊制剂，临 床用于治疗高脂血症或治疗脂肪肝，每日2粒，早晚各1粒，服用量 小，服用方便。
按照以上制备工艺，经检测，熊果酸转移率为94.5％，总黄酮转移 率为99.7％，白术、泽泻、红曲脂溶性成分薄层层析图谱均为强阳性， 而出膏率由27.9％降为3.45％，表明该制备工艺科学合理，保留了中药 的主要有效成分，同时大大减少了服用药物的体积，达到了除杂的目 的。
实施例2 本发明药物组合物质量控制指标性成分的含量测定：
取本品10粒的内容物，混匀，取0.2g，精密称定，置100ml锥形 瓶中，加乙醚20ml，超声处理10分钟(冷水浴)，滤过，用乙醚洗涤 沉淀二次，每次20ml，滤液合并，蒸干，残渣加无水乙醇使溶解并转 移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，作为供试品溶液。另取熊果酸对照 品，加无水乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄 层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液 5μl，对照品溶液5μl与10μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上， 以氯仿-甲醇-甲酸(38.5∶1.5∶4滴)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘5-7分钟，至斑点色清晰，取出，在 薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中 国药典2000年版一部附录VIB薄层扫描法)进行扫描，波长λS＝537nm， λR＝700nm，测量供试品吸收度与对照品吸收度积分值，计算，即得。
本品每粒含熊果酸和齐墩果酸以熊果酸(C30H48O3)计，不得少于 2.2mg。
以下通过药效学试验、毒理学试验证明本发明的有益效果。
试验例1 本发明药物组合物对大鼠食物性高脂血症的影响
发明人通过对该中药复方组合物与单味红曲药物的药理试验对比 研究证实，该组合物用于高脂血症的治疗具有更加显著的药理活性。
1、实验材料：
药品：中药复方组合物胶囊：按实施例1方法制备，以下简称ZHHW 胶囊，240mg/粒，相当于6.0g原生药，即每克胶囊药粉相当于原生药 25克。
单味红曲药物：参照实施例1方法制备，以下简称DHQ，每克胶囊 药粉相当于原生药35克。
试剂：血清总胆固醇(TC)试剂盒；甘油三酯(TG)试剂盒，高 密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒，由上海荣盛生物技术有限公司生 产。低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒，由北京中生生物高技术公 司生产。
动物：Wistar大鼠，雄性，体重150-200g，由山东省实验动物中 心提供，仪器：721型分光光度计：上海申化仪表白控公司生产。离 心沉淀机：LXJ-II型，上海第二分析仪器厂生产。
2、实验方法
高脂血症造模：体重150-200g的Wistar大鼠60只，分为普饲组 (10只，雌雄各半)和高脂造模组(50只)，分别给予普通饲料和高 脂饲料(胆固醇2％、胆盐1％、猪油5％、基础饲料92％)饲养，连续四 周，第28日晚禁食，次日晨剪尾取血，分离血清。酶法测定血清TC、 TG；PVS一步沉淀法测血清LDL-C；聚乙二醇法测血清HDL-C。
试验治疗：将高脂造模动物根据血脂TC水平随机分为：普饲组、 模型组、本发明的中药复方组合物(以下简称ZHHW，为实施例1所得 胶囊)高剂量组(按原生药计，4g/kg)、中剂量组(按原生药计，2g/kg)、 低剂量组(按原生药计，1g/kg)，及单味红曲药物组(以下简称DHQ， 按原生药计，4g/kg)，每组10只，雌雄各半，第29日各组同时给予 0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，ZHHW 4、2、1g/kg，DHQ 4mg/kg，。 给药时各药均用0.5％CMC-Na配成混悬液，每日灌胃一次，给药容积 为1ml/100g，同时继续给予高脂饲料。于给药后第2、4周取血测各项 指标。
3、试验结果
结果见表1-4，各表中符合含义表示如下：
*与模型组相比；▲与给药前相比
*P＜0.05 ▲P＜0.05 **P＜0.01 ▲▲P＜0.01
表1对高脂血症大鼠血清TC(mmol/L)的影响
药物 剂量(g/kg) 药前 药后两周 药后四周
普饲组 / 1.929±0.501** 2.080±0.605** 2.033±0.552**
模型组 Veh 3.994±0.625 5.148±1.082▲▲ 6.045±1.429▲▲
1 3.994±0.671 4.136±0.747*▲▲ 4.483±1.395*▲
ZHHW组 2 4.010±0.732 3.339±0.935**▲ 3.290±0.769**▲
4 4.055±0.783 2.675±0.655**▲▲ 2.628±0.475**▲▲
DHQ组 4 4.130±0.916 3.336±0.856**▲ 3.148±0.524**▲▲
表2对高脂血症大鼠血清LDL-C(mmol/L)的影响
药物 剂量(g/kg) 药前 药后两周 药后四周
普饲组 / 0.849±0.395** 0.823±0.741** 0.793±0.310**
模型组 Veh 2.769±0.597 4.201±1.308▲▲ 4.031±0.966▲▲
1 2.788±0.653 3.272±0.969* 2.930±0.409**
ZHHW组 2 2.771±0.711 1.925±0.749**▲▲ 1.801±0.275**▲▲
4 2.832±0.824 1.302±0.492**▲▲ 1.101±0.290**▲▲
DHQ组 4 2.743±0.653 2.322±0.661**▲ 2.184±0.253**▲
表3对高脂血症大鼠血清HDL-C(mm0l/L)的影响
药物 剂量(g/kg) 药前 药后两周 药后四周
普饲组 / 0.908±0.226** 0.947±0.191** 0.891±0.310**
模型组 Veh 0.584±0.201 0.358±0.195▲ 0.348±0.196▲▲
1 0.565±0.161 0.518±0.263 0.468±0.113
ZHHW组 2 0.546±0.138 0.958±0.205**▲▲ 0.941±0.477**▲▲
4 0.572±0.148 1. 034±0.149**▲▲ 1.138±0.439**▲▲
DHQ组 4 0.549±0.161 0.742±0.170*▲ 0.764±0.365*▲
表4对高脂血症大鼠血清TG(mmol/L)的影响
药物 剂量(g/kg) 药前 药后两周 药后四周
普饲组 / 0.786±0.244 0.925±0.260* 0.790±0.146**
模型组 Veh 1.307±0.588 1.533±0.321 1.923±0.426▲▲
1 1.332±0.371 1.308±0.274 1.481±0.451*
ZHHW组 2 1.303±0.290 1.073±0.402** 1.165±0.324**
4 1.309±0.439 0.926±0.278**▲ 0.886±0.330**▲
DHQ组 4 1.297±0.372 1.421±0.380 1.799±0.439
表1-4结果表明，高脂饲料饲养2-4周后，高脂血症形成，造模成 功。本发明的中药复方组合物ZHHW各剂量组(4g/kg、2g/kf、1g/kg) 灌胃给药2-4周后，对大鼠食物性高脂血症有明显的治疗作用，表现 为呈剂量依赖性抑制高脂造型大鼠血清TC、LDL-C、TG的升高，对血 清HDL-C则有升高或抑制其继续降低作用。单味红曲药物DHQ组 (4g/kg)具有抑制高脂造型大鼠血清TC、LDL-C升高的作用，但对大 鼠血清TG和HDL-G无明显影响。在相同给药剂量下(均按相当于4g 原生药/kg计)，本发明的中药复方组合物降脂作用明显优于单味红曲 药物，说明本发明药物组合物，通过四味不同中药的相互配伍，符合 中医药理论，发挥了协同增效作用，获得了更为理想的降脂效果。
试验例2 治疗脂肪肝的临床试验
收集20例脂肪肝患者(诊断标准：B超检查诊断脂肪肝，参照《实 用消化病学》；实验室检查参照《中药新药临床指导原则》，甘油三酯 (TG)＞1.7mmmol/L，胆固醇(TC)＞5.7mmol/L，血清谷丙转氨酶 (ALT)＞60IU/L。)，服用实施例1的胶囊剂，用法为一次1粒，一日2 次，4周为一疗程，连续治疗3个疗程。
疗效判定标准：参照《中药新药临床指导原则》、《实用消化病学》 及相关文献制定标准：痊愈：自觉症状消失、TC≤5.7mmol/L、TG≤ 1.7mmol/L/L，ALT≤60IU/L，B超显示肝脏征象肝脏光点、其后场回声 恢复正常。显效：症状明显好转、TC下降＞20％，TG下降＞40％，ALT下 降≥50％或正常，B超肝脏光点密度明显好转，其后回声衰减明显减轻。 有效：症状有好转、TC下降10％-20％，TG下降20％-40％，ALT下降＜50％ 或正常，B超肝脏征象较前好转。无效或恶化：自觉症状仍存在或加重， TC和(或)TG和(或)ALT和(或)B超声检查无变化或加重。
治疗结果：治疗20例，痊愈3例，显效7例，有效6例，无效4 例，总有效率80％。
临床试验说明，本发明药物组合物具有治疗脂肪肝的作用。
试验例3 本发明药物组合物胶囊剂的急性毒性实验
1、实验材料：
受试药物：实施例1所得胶囊，240mg/粒，相当于6.0g原生药。
动物：NIH小鼠，体重18～22g，华西医科大学实验动物中心提 供。
2、实验方法
取实施例1所得胶囊药粉8g加蒸馏水22ml(刚好能灌胃的浓度)， 8g本发明药物药粉相当于200g生药，每1ml药液相当于9.1g生药。 取体重20±1g健康小鼠20只，雌雄各半，停食8小时后用药液按 0.4ml/10g(相当于生药364g/kg)一次灌胃给药。认真观察动物给药 后的毒性反应情况并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲、 大、小便其颜色、被毛、皮肤、呼吸、鼻、眼、口腔等有无异常分泌 物，体重变化以及死亡等情况。如有死亡，及时进行尸检，如有病变 做病理检查，连续观察七天。
3、实验结果
按可以灌胃的最高浓度(每ml相当于生药9.1g)给小鼠灌胃 (0.4ml/10g)剂量为364g/kg，按公斤体重折算相当于成人(60kg)每 日常用量的1820倍，20只小鼠七日内无一中毒及死亡，说明实施例1 所得本发明药物胶囊剂口服的安全性良好。
通过上述药效学试验和毒理试验，充分说明本发明药物的四味原 料药少而精，并非随意选择，而是在中医药理论指导下，科学配伍， 相互协同增效，对所属领域的技术人员，并非显而易见。本发明药物 组合物制剂工艺科学合理，采用本发明药物组合物的制备方法所得的 药物使用剂量小，原料成本低，临床疗效显著，毒副作用小，使用方 便，质量稳定，可控，为临床提供了一种新的用药选择。