技术领域
本发明涉及一种中药免疫抑制剂的制备方法，特别涉及一种以昆明山 海棠为主要原料的中药免疫抑制剂昆明山海棠水煎醇沉的制备方法。
背景技术
昆明山海棠是一种以中草药昆明山海棠为主要原料制成的中药免疫抑 制剂，因其具有良好的抗炎，免疫抑制效应，在临床上已被广泛作为中药 免疫抑制剂治疗各种自身免疫性疾病，如：类风湿性关节炎，慢性肾炎， 红斑狼疮，血管炎，银屑病等。目前昆明山海棠的制备方法大多采用乙醇 提取法，如昆明山海棠片。但是这种方法不仅成本较高，而且制备的药剂 毒性较大，长期服用对患者的肝、肾、性腺等器官均可造成不同程度的损 害；尤其具有明显的性腺抑制作用，造成女性月经减少或闭经，男子精子 减少或消失；对骨髓的抑制作用可引起白细胞、血小板减少。
发明内容
本发明的目的是提供了一种既可以降低生产成本又可以减少毒性的昆 明山海棠水煎醇沉的制备方法，依次包括以下步骤：(1)：取昆明山海棠， 切成薄片，加水煎煮；(2)：将煎煮后的煎液合并过滤，然后加热浓缩至相 对密度为1.05～1.07的清膏；(3)：加乙醇使含醇量达50～80％，搅匀、 静置、过滤；(4)：回收乙醇并加热浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏； (5)：加入淀粉、滑石粉、硬脂酸镁，混匀，干燥，根据需要制成任何一 种药剂学上所说的剂型。
本发明所用原料昆明山海棠，淀粉，滑石粉，硬脂酸镁均可以从市面 上购得。昆明山海棠、淀粉、滑石粉、硬脂酸镁的重量配比为500～1278 ∶58∶2∶1。煎煮次数可以是3次，其中第一次煎煮时间为1.5小时，第 二、三次煎煮时间各为1小时。其中步骤(2)和步骤(4)在加热浓缩时 温度不能超过60℃，范围控制在40℃～60℃较好。
由于原料中的多种有效成分溶于水和醇，而毒性成分难溶于水易溶于 醇。采用乙醇提取法，则毒性成分也随之混入提取液中，所制昆明山海棠 制剂毒性也较大。而本发明采用水煎醇沉的方法提取有效成分，由于毒性 成分难溶于水，也就避免了毒性成分混入煎煮液中，所得昆明山海棠制剂 毒性大大降低，水煎醇沉工艺和醇提工艺制成的药剂其生物碱含量相当(单 服剂量生物碱含量均为2mg)同时，酒精的用量减少了38％以上，节约了 生产成本。
采用本发明方法可以根据需要制成任何一种药剂学上所说的剂型，如 片剂、胶囊剂、丸剂、微丸、滴丸、颗粒等。其中片剂每片重0.18克，每 片含昆明山海棠(火把花根)以表儿茶素(C35H14O6)计，不得少于0.10毫克。 口服，一次3～5片，一日3次。
使用水煎煮醇沉方法与使用乙醇提取法制得的昆明山海棠制剂的毒性 和免疫抑制效果比较，可以经过动物实验得到验证。
1.LD50值比较 提取方法 小鼠 LD50值(生药 g/kg) 昆明山海棠水煎醇沉制剂 国家标准 68 昆明山海棠50％乙醇提取物 国家标准 39.81
由上表可以看出昆明山海棠水煎醇沉剂的半数致死量(LD50)明显高于昆 明山海棠乙醇提取物，这表明昆明山海棠水煎醇沉制剂的毒性比昆明山海 棠乙醇提取物毒性小。
2.亚急性毒性试验
实验方法：按每公斤体重给药量将大鼠分组，分别连续一个月服用生 理盐水、昆明山海棠片(水煎醇沉制剂)和昆明山海棠50％乙醇提取物， 结果如下：
(1)服用昆明山海棠片(水煎醇沉制剂)、生理盐水组，试验结束时 取血测白细胞、肝肾功能，并对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠、胸腺 等脏器病检，均未见有明显病理变化。40g/kg组也未见有明显毒性反应。
(2)昆明山海棠50％乙醇提取物4g/kg组出现肝细胞浆疏松，8g/kg 出现肝细胞颗粒凝集，少数动物肾小管上皮细胞散在性坏死，20g/kg组出 现肝细胞弥漫性浊肿，核分裂增加并可见肝细胞坏死，大部分动物肾小管 上皮细胞散在性坏死，40g/kg组动物虽然仅给药4天，也引起多数动物肝 细胞弥漫性浊肿，核分裂增加及半数动物肾小管上皮细胞坏死，并可见心 肌变性，重者出现心肌坏死。
由上可见，昆明山海棠片(水煎醇沉制剂)的毒性较昆明山海棠50％ 乙醇提取物为小。
3.免疫抑制效果的比较
(1)对小鼠DNCB性皮肤迟发超敏反应的影响 制剂 剂量(g/kg/日×5) 鼠耳增重(mg) 生理盐水 -- 6.93±0.91 昆明山海棠片(水煎醇沉) 30 1.23±0.30 昆明山海棠50％乙醇提取 物 10 3.75±0.39
(2)小鼠网状内皮系统RES吞噬功能的影响 制剂 剂量(g/kg/日×4) 鼠耳增重(mg) 生理盐水 -- 0.0559±0.0128 昆明山海棠片(水煎醇沉) 30 0.0259±0.0065 昆明山海棠50％乙醇提取 物 5 0.0312±0.0065
由上二表可见：昆明山海棠片(水煎醇沉)与昆明山海棠50％乙醇提取物 对病理性免疫反应均有一定抑制作用。且在大约等毒剂量下，昆明山海棠 片(水煎醇沉制剂)的免疫抑制效果比昆明山海棠50％乙醇提取物要强。
4.昆明山海棠片(水煎醇沉制剂)与昆明山海棠片(乙醇提取法制得)在 抗炎、对肉芽增生的抑制、毛细管通透性增高的对抗、镇痛等方面的比较：
(1)对Freund’s佐剂性关节炎的影响：昆明山海棠片(水煎醇沉制 剂)(5.0g/kg、10g/kg组)对Freund’s佐剂性关节炎均有非常明显的 抑制作用，且在相同剂量下(10g/kg)，昆明山海棠片(水煎醇沉制剂)的 抑制作用略优于昆明山海棠片(乙醇提取法制得)。
(2)对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响：二者均有抑制作用，且在 相同剂量下抑制作用相当。
(3)对棉球肉芽肿的影响：昆明山海棠片(水煎醇沉制剂)对棉球肉 芽肿有非常明显的抑制作用，且在相同剂量下(10g/kg)，昆明山海棠片(水 煎醇沉制剂)的抑制作用略优于昆明山海棠片(乙醇提取法制得)。
(4)对小鼠腹腔毛细管通透性的影响：二者对小鼠腹腔毛细管通透性 的增高均有对抗作用，且在相同剂量(10g/kg)下抑制作用相当。
(5)镇痛作用：二者对0.7％醋酸所致小鼠扭体反应均有明显的对抗 作用，且在相同剂量(10g/kg)下抑制作用相当。
通过上述各项指标的比较可以得出结论：昆明山海棠(水煎醇沉制剂) 的毒性比昆明山海棠(乙醇提取物)低，而抗炎、免疫抑制、镇痛作用则 优于昆明山海棠(乙醇提取物)。
具体实施例(共3例)
实施例1
制备中药制剂昆明山海棠依次按以下步骤进行：
(1)：取昆明山海棠900克，切成薄片，加水煎煮三次，第一次1.5小 时，第二、三次煎煮1小时；
(2)：将煎煮后的煎液合并后过滤，然后加热浓缩至相对密度为1.05～ 1.07的清膏，温度控制在60℃；
(3)：加乙醇使含醇量达50％，搅匀、静置12小时后过滤；
(4)：回收乙醇并加热浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，温度控 制在60℃；
(5)：加入淀粉105克、滑石粉3.6克、硬脂酸镁1.8克，混匀，干燥， 压片制成片剂。每片重0.18克。
实施例2
制备中药制剂昆明山海棠依次按以下步骤进行：
(1)：取昆明山海棠2300克，切成薄片，加水煎煮二次，第一次1.5 小时，第二次煎煮1小时；
(2)：将煎煮后的煎液合并后过滤，然后浓缩至相对密度为1.05～1.07 的清膏，温度控制在40℃；
(3)：加乙醇使含醇量达70％，搅匀、静置12小时后过滤；
(4)：回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，温度控制在 40℃；
(5)：加入淀粉105克、滑石粉3.6克、硬脂酸镁1.8克，混匀，干燥， 制成颗粒。
实施例3
制备中药制剂昆明山海棠依次按以下步骤进行：
(1)：取昆明山海棠1620克，切成薄片，加水煎煮五次，第一次1.5 小时，第二、三、四、五次各煎煮1小时；
(2)：将煎煮后的煎液合并后过滤，然后浓缩至相对密度为1.05～1.07 的清膏，温度控制在50℃；
(3)：加乙醇使含醇量达80％，搅匀、静置12小时后过滤；
(4)：回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，温度控制在 50℃；
(5)：加入淀粉105克、滑石粉3.6克、硬脂酸镁1.8克，混匀，干燥， 制成颗粒。